目的:探讨2型糖尿病（type 2 diabetes mellitus，T2DM）患者尿外泌体微小RNA（exosomal microRNA，exo-miR）-155与糖尿病肾疾病（diabetic kidney disease，DKD）发病及严重程度的关系。方法:于2019年1—5月从上海健康医学院崇明医院内分泌与代谢科招募5例T2DM正常白蛋白尿患者和5例2型DKD患者作为微小RNA筛选队列，采集患者尿液样本提取尿外泌体，并利用miRCURY LNA阵列检测尿exo-miR特征谱。随后于2019年6月至2022年10月通过该院内分泌与代谢科纳入符合入组标准且年龄、性别相匹配的351例T2DM患者作为验证队列。根据尿白蛋白/肌酐比值（urinary albumin/creatinine ratio，UACR）分为3组：正常白蛋白尿组（UACR<30 mg/g， n=143）、微量白蛋白尿组（30 mg/g≤UACR≤300 mg/g， n=171）和大量白蛋白尿组（UACR>300 mg/g， n=37）。根据DKD诊断指南，将微量白蛋白尿和大量白蛋白尿患者归为DKD组。采用实时荧光定量PCR法检测尿exo-miR-155表达水平。 结果:透射电镜、纳米颗粒跟踪分析和Western印迹观察分析结果均显示尿外泌体提取成功。在筛选队列中，按照 P<0.05且变化倍数（FC）>1.5的筛选标准，与T2DM患者尿液样本相比，DKD组尿外泌体样本中筛出226个差异表达miRNA，其中miR-155上调倍数最高（FC=32.75， P<0.001）。在验证队列中，与正常白蛋白尿组［0.76（0.55，0.95）］相比，大量白蛋白尿组［1.84（1.18，2.42）］尿exo-miR-155水平升高最明显（ Z=-7.411， P<0.001），微量白蛋白尿组［0.86（0.69，1.25）］次之（ Z=-4.092， P<0.001），而且大量白蛋白尿组尿exo-miR-155水平也明显高于微量白蛋白尿组（ Z=-5.841， P<0.001）。相关分析显示，尿exo-miR-155水平与UACR呈正相关（ r s=0.329， P<0.001），与估算肾小球滤过率呈负相关（ r s=-0.249， P=0.015）。受试者工作特征曲线分析显示，尿exo-miR-155水平预测T2DM患者进展为DKD的曲线下面积为0.892（95% CI 0.859～0.925），对应截断值为0.982，灵敏度和特异度分别为71.9%和87.7%。多因素Logistic回归分析结果显示尿exo-miR-155≥0.982是T2DM患者进展为DKD的独立危险因素（ OR=3.310，95% CI 1.981～5.530， P<0.001）。 结论:尿exo-miR-155在微量白蛋白尿和大量白蛋白尿T2DM患者中表达水平较高，其与白蛋白尿程度相关，可作为识别有潜在DKD的预测标志物。

目的 探讨微小RNA-351(miR-351)、微小RNA-29b(miR-29b)评估2型糖尿病(type 2 diabetes mellitus,T2DM)合并心力衰竭(heart failure,HF)患者预后的价值.方法 选取2020年2月至2022年1月期间收治的145例T2DM合并HF患者作为观察组,并选取同期141例健康体检者作为对照组.治疗3个月后进行随访,依照预后情况将观察组分为2组:预后良好组(n=90)、预后不良组(n=55).比较观察组和对照组 miR-351、miR-29b、N 末端 B 型钠尿肽前体(N-terminal precursor B-type natriuretic peptide,NT-proBNP)、糖化血红蛋白(glycosylated hemoglobin,HbA1C)、左心室射血分数(left ventricular ejection frac-tion,LVEF)、左心室舒张末期内径(left ventricular end-diastolic dimension,LVEDD)水平,预后良好组和预后不良组临床资料、心功能指标及HbA1C、NT-proBNP、miR-351、miR-29b水平,并分析以上因子水平与预后的相关性及对预后不良的预测价值.结果 观察组HbA1C、NT-proBNP、miR-351、LVEDD水平高于对照组,miR-29b、LVEF水平低于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05).预后不良组HbA1C、NT-proBNP、miR-351、LVEDD水平高于预后良好组,miR-29b、LVEF水平低于预后良好组,差异有统计学意义(P＜0.05),两组用药情况与合并基础疾病情况比较差异无统计学意义(P＞0.05).Logistic多元回归分析结果显示,miR-351、miR-29b与T2DM合并HF患者预后显著相关(P＜0.05).经受试者工作特征(receiver oper-ating characteristic,ROC)曲线分析可知,miR-351、miR-29b 预测预后的曲线下面积(areas under the curve,AUC)分别为0.632、0.642,联合预测的AUC最大,为0.829.结论 miR-351、miR-29b水平在T2DM合并HF患者中表达异常,且与该类型患者预后相关,联合检测在预后评估中具有重要价值,故临床应加强对上述因子水平的控制,以改善患者预后.

目的 探讨微小RNA(miRNA)在右归丸对激素型肾阳虚证肾组织与正常肾组织中的表达差异,并用生物信息学方法分析其意义,为右归丸干预肾阳虚证的进一步机制研究奠定基础.方法 15只SD大鼠随机分为正常组(5只)和造模组(10只),正常组注射2 mL生理盐水,造模组后肢肌注氢化可的松注射液.成模后将造模组随机分为模型组和右归丸组,每组5只.右归丸组给予右归丸汤剂灌胃,模型组和正常组给予生理盐水灌胃.麻醉处死后使用TRIzol法提取肾组织中RNA,使用NanoDrop ND-1000对总RNA进行质量检测,用标记后的RNA与Agilent Rat 8 ×60k miRNA芯片进行杂交.收集原始数据进行标准化处理,进行聚类分析和火山图分析.利用生物信息学方法,预测差异miRNA富集的基因本体论(GO)功能和京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路.结果 筛选出右归丸干预肾阳虚证相关差异表达miRNA 18 条(|log2FC|≥ 1.5,P≤0.05),其中包括 5 条上调 miRNA,分别是 rno-miR-149-3p、rno-miR-188-5p、rno-miR-221-5p、rno-miR-762、rno-miR-877;13 条下调 miRNA,分别是 rno-miR-101b-5p、rno-miR-125a-3p、rno-miR-125b-2-3p、rno-miR-3085、rno-miR-344a-5p、rno-miR-347、rno-miR-34b-3p、rno-miR-351-3p、rno-miR-3573-3、rno-miR-370-3p、rno-miR-409a-3p、rno-miR-448-3p、rno-miR-503-3p.GO分析显示差异表达miRNA主要参与DNA、RNA转录的正调控进程且与ATP的结合显著相关.KEGG分析显示差异表达miRNA显著富集于cAMP通路和FoxO信号通路,这两条通路与线粒体功能密切相关.结论 右归丸通过干预miRNA的表达,改善肾阳虚证大鼠线粒体功能,调节能量代谢异常,进一步为右归丸干预肾阳虚证的机制研究提供理论依据.

目的 研究微小RNA-22(microRNA-22,miR-22)对造血干细胞TF-1糖代谢的调控作用及其分子机制.方法 低氧条件培养TF-1细胞2 h,通过实时定量PCR(quantitative real-time PCR,qRT-PCR)检测miR-22、葡萄糖转运因子4(glucose transporter 4,G1ut4)和过氧化物酶体增殖剂激活受体 γ(peroxisome prolifera-tors-activated receptor-γ,PPAR-γ)表达水平.构建miR-22基因的小向导RNA(small guide RNA,sgRNA)载体,利用成簇规律间隔的短回文重复序列(clustered regularly interspaced short palindromic repeats,CRISPR)/CRISPR结合核酸内切酶(CRISPR-associated endonumclease,Cas9)CRISPR/Cas9技术对TF-1细胞进行基因敲除.构建过表达载体,导入miR-22基因敲除的细胞后,诱导miR-22过表达,qRT-PCR检测miR-22、Glut4和PPAR-γ的mRNA水平,蛋白质免疫印迹(Western blot)检测Glut4和PPAR-γ蛋白表达水平,以鉴定miR-22表达水平对糖代谢的影响,及其作用机制.结果 与对照组比较,低氧培养2 h后TF-1细胞miR-22的表达量降低(0.015±0.000比0.056±0.001),Glut4(0.351±0.038比0.152±0.005)和PPAR-γ(0.421±0.017比0.248±0.008)表达升高,差异均有统计学意义(均P<0.05).与对照组比较,miR-22基因敲除后Glut4(0.019±0.000比0.008±0.000)和PPAR-γ(0.038±0.001比0.019±0.000)的表达水平均升高,差异均有统计学意义(均P<0.05),过表达miR-22后Glut4(0.005±0.000比0.008±0.000)和PPAR-γ(0.137±0.000比0.019±0.000)的表达水平,差异均有统计学意义降低(均P<0.05).结论 miR-22可通过下调PPAR-γ的表达对造血细胞TF-1的糖代谢发挥负调控作用.

目的 探讨变应性鼻炎(AR)患者鼻黏膜微小RNAs(miRNAs)的表达谱特点,阐明miRNAs在AR的发病、诊断及治疗中的作用.方法 研究设AR组及非变应性鼻炎患者(对照组),对其鼻黏膜进行总RNA抽提,应用RNA-seq技术对鼻黏膜miRNA进行差异表达谱的分析.利用芯片技术,对miRNA进行二级结构的预测,从而判断和预测新的miRNA.比较2组新预测的miRNA的异常表达,筛选其miRNA,构建AR的新预测miRNA异常表达谱.结果 将所有序列与rfam数据库进行比对,得到其中miRNA的具体分布情况.通过miRNA芯片,检测共有172个新预测的miRNA在2组鼻黏膜组织中表达,而AR组标本中表达的miRNA共有351个,有84个预测的miRNA在AR组共同表达.在对照组样品中表达的有342个,有85个预测的miRNA在对照组共同表达.本研究数据得到的6个新预测的miRNA在样本间差异表达(P＜0.05).对于得到的新预测的miRNA,使用软件miRand、RNAhybrid预测其靶基因.以新预测的12_8883为例,其对应的miRNA靶基因为34个.差异表达miRNA靶基因富集,得到差异表达新的miRNA与8条通路有关,分别是轴突指导、突触小泡循环、急性髓性白血病、胞吞作用、ErbB信号通路、Ras信号通路、黑色素瘤和赖氨酸降解.结论 变应性鼻炎患者涉及多个新预测的miR-NA,以及不同的信号通路,可能为AR患者的发病机制的研究提供新的思路.

目的 采用生物信息学方法分析术后认知功能障碍(POCD)小鼠海马组织中差异表达miRNA(DEMs)及其靶基因(DEGs),并构建POCD小鼠海马组织中差异表达miRNA-mRNA的调控网络图,探讨其机制.方法 在GEO数据库中搜索下载POCD小鼠海马组织与正常小鼠海马组织基因表达谱芯片数据GSE95070,采用R软件lim?ma函数包筛选出差异表达的miRNA,即DEMs.将DEMs分别输入到miRTarBase、TargetScan、miRDB数据库中,三个数据库中皆存在的靶基因为差异表达的DEMs靶基因,即DEGs.使用R软件中的ggplot2、enrichplot函数包对DEGs进行了基因本体(GO)功能富集分析和KEGG信号通路分析.通过STRING在线工具构建DEGs蛋白互作网络(PPI),将蛋白间相互作用得分>0.4的节点输入到可视化工具Cytoscape软件中,利用cytoHubba插件筛选出节点度值排名前10的节点,即为可能参与小鼠POCD发生发展的枢纽基因.选取枢纽基因及其相应的DEMs,利用Cyto?scape软件构建POCD小鼠海马组织中差异表达miRNA-mRNA调控网络图.结果 共筛选出19个显著差异表达的DEMs,得到448个DEGs.GO功能富集分析结果显示,DEGs在DNA结合的转录因子激活活性、特异性RNA聚合酶Ⅱ、微小GTP酶结合等分子功能中显著富集,在树突的形成以及调节、促进神经胶质细胞的增殖等生物学过程中显著富集,在突触膜的有机组成成分、细胞边缘以及囊泡运输等细胞组分中显著富集.KEGG信号通路分析结果显示,DEGs在Cushing综合征相关通路、cGMP-PKG信号通路、Hepatitis C信号通路、Apelin信号通路等通路中显著富集.小鼠POCD发生发展的10个枢纽基因分别为Gsk3β、Igf1、Cd34、Ubxn7、Smad2、Smarca4、Stat1、Grb2、Sin3a、Ncam1,相应的6个DEMs分别为mmu-miR-362-3p、mmu-miR-3065-5p、mmu-miR-592-3p、mmu-miR-28a-3p、mmu-miR-181c-5p、mmu-miR-351-5p,成功构建了POCD小鼠海马组织中差异表达miRNA-mRNA调控网络图,其中mmu-miR-362-3p调控Gsk3β的关系对、mmu-miR-3065-5p调控Igf1的关系对在调控网络中节点度最高.结论 与正常小鼠海马组织相比,POCD小鼠海马组织中有19个差异表达的DEMs和448个DEGs;DEGs与树突的形成以及调节等有关,参与介导Cushing综合征相关通路、cGMP-PKG信号通路等.mmu-miR-362-3p、mmu-miR-3065-5p等差异表达的miRNA可能是通过调节Gsk3β、Igf1等靶基因的表达,影响POCD的发生发展.

目的 检测微小RNA-137(miR-137)、微小RNA-351(miR-351)在妊娠期糖尿病(GDM)患者血清中的表达情况,探讨其对妊娠结局的影响.方法 选取2017年2月至2019年8月产检并分娩的GDM孕妇138例(观察组)为研究对象,根据妊娠结局分为良好组(70例)和不良组(68例);选取同期健康孕妇140例(对照组)为对照.采用化学发光法检测空腹血糖(FPG)、空腹血清胰岛素(FINS)水平,计算胰岛素抵抗指数(HOMA-IR);用全自动生化分析仪检测血清总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)水平;采用qRT-PCR法检测血清miR-137、miR-351水平;采用Pearson法分析GDM孕妇血清miR-137、miR-351水平与其他临床指标的相关性;采用COX回归分析影响GDM孕妇妊娠结局的因素.结果 观察组孕妇FINS、FPG、HOMA-IR、血清TC、TG、LDL-C、miR-137、miR-351水平较对照组均显著升高(P<0.05);不良组GDM孕妇FINS、FPG、HOMA-IR、血清TC、TG、LDL-C、miR-137、miR-351水平较良好组均显著升高(P<0.05);血清miR-137水平与FINS、FPG、HOMA-IR、血清TC、TG、LDL-C水平,血清miR-351水平与FINS、血清TC、TG、LDL-C水平均显著正相关(P<0.05);FPG、血清TG、miR-137水平为影响GDM孕妇妊娠结局的独立危险因素(P<0.05).结论 血清miR-137、miR-351参与GDM发生发展,可影响孕妇体内糖脂代谢,其中,血清miR-137水平可能影响GDM孕妇妊娠结局.

目的 探讨高龄妊娠期糖尿病(gestational diabetes mellitus,GDM)患者微小核糖核酸(micro RNA,miR)-351,纤维细胞生长因子19(fibroblast growth factor 19,FGF19),脂蛋白相关磷脂酶A2(lipoprotein-associated phospholipase A2,LP-PLA2)表达及与产后糖代谢异常的相关性.方法 选取2019年1月～2022年1月唐山市妇幼保健院高龄GDM患者86例为观察组,同期选取产检的正常高龄孕妇52例为对照组.比较两组血清miR-351,FGF19和LP-PLA2表达,分析高龄GDM患者miR-351,FGF19和LP-PLA2与产后糖脂代谢指标相关性,Logistic回归分析高龄GDM患者产后糖代谢异常影响因素,受试者工作特征(ROC)分析miR-351,FGF19和LP-PLA2对产后糖代谢异常预测价值.结果 观察组血清空腹血糖(FPG)(5.93±0.61mmol/L),空腹胰岛素(FINS)(15.82±4.19mU/L),胰岛素抵抗指数(MOHA-IR)(4.31±0.64),三酰甘油(TG)(1.46±0.28mmol/L),低密度酯蛋白-胆固醇(LDL-C)(2.93±0.66mmol/L),miR-351(6.42±1.76),LP-PLA2活性(33.09±6.51nmol/min·ml)高于对照组(4.48±0.76mmol/L,11.65±3.90m/U/L,2.45±0.57,1.32±0.24mmol/L,2.58±0.59mmol/L,3.79±1.14,24.52±5.83nmol/min·ml),而FGF19(91.18±8.64ng/L)水平低于对照组(122.63±10.29ng/L),差异均有统计学意义(t=2.999～17.226,均P<0.05);高龄GDM患者血清miR-351水平、LP-PLA2活性与空腹血糖(fasting plasma glucose,FPG)、空腹胰岛素(fasting insulin,FINS)、胰岛素抵抗指数(insulin resistance index,HOMA-IR)、三酰甘油(triglyceride,TG)和低密度脂蛋白-胆固醇(low density lipoprotein,LDL-C)呈正相关(r=0.408～0.584,均P<0.05),血清FGF19水平与FPG,FINS和HOMA-IR呈负相关(r=-0.614～-0.386,均P<0.05);高龄GDM患者miR-351与FGF19呈负相关(r=-0.531,P<0.001),与LP-PLA2呈正相关(r=0.549,P<0.001),FGF19与LP-PLA2呈负相关(r=-0.614,P<0.001).Logistic回归模型分析显示,miR-351,LP-PLA2活性升高及FGF19降低均为高龄GDM患者产后糖代谢异常独立危险因素(P<0.05);ROC曲线显示,miR-351,LP-PLA2和FGF19对GDM患者产后糖代谢异常均有一定预测价值,且联合预测的AUC达0.854,对应的敏感度和特异度分别为90.16％和68.35％.结论 血清miR-351,FGF19和LP-PLA2参与GDM发生发展,可对患者体内糖脂代谢产生影响,且可有效预测产后糖代谢异常发生风险,为临床干预提供依据.