目的:探讨circ-0026462靶向miR-361-3p调控前列腺癌细胞对恩杂鲁胺耐药性的机制研究。方法:体外培养人前列腺癌细胞DU-145，建立前列腺癌恩杂鲁胺耐药性细胞DU-145/Enz，使用恩杂鲁胺处理DU-145、DU-145/Enz细胞，将其分为si-NC组、si-circ-0026462组、si-circ-0026462+anti-miR-NC组及si-circ-0026462+anti-miR-361-3p组。采用MTT法检测细胞的增殖能力；采用流式细胞术检测细胞凋亡率；采用qRT-PCR检测circ-0026462、miR-361-3p的表达量；采用双荧光素酶报告检测circ-0026462与miR-361-3p的靶向关系；采用Western blot法检测雄激素受体变异体(AR-V7)、细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)、细胞周期蛋白依赖性抑制剂(P21)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关蛋白(Bax)蛋白的表达量。结果:与DU-145/Enz细胞比较，DU-145细胞的OD值及Cyclin D1、Bcl-2蛋白水平降低(均 P<0.001)，细胞凋亡率及P21、Bax蛋白水平升高(均 P<0.001)；与DU-145细胞比较，DU-145/Enz细胞中circ-0026462的表达水平升高( P<0.001)，miR-361-3p的表达水平降低( P<0.001)；转染si-circ-0026462可明显降低OD值、AR-V7、Cyclin D1及Bcl-2的表达水平(均 P<0.001)，提高细胞凋亡率及P21、Bax的表达水平( P<0.001)；双荧光素酶报告实验证实circ-0026462可靶向结合miR-361-3p；抑制miR-361-3p表达可明显逆转沉默circ-0026462对DU-145/Enz细胞增殖、凋亡及耐药性的作用。 结论:沉默circ-0026462可通过上调miR-361-3p的表达而抑制细胞增殖及促进细胞凋亡，从而降低前列腺癌细胞对恩杂鲁胺的耐药性。

目的:检测膀胱癌组织中微小RNA-361-5p(miR-361-5p)、通用转录因子3(BTF3)的表达水平，并探讨其临床意义。方法:选取2015年3月至2017年6月本院收治的74例膀胱癌患者为研究对象，所有患者均行根治性膀胱全切术，收集癌组织及癌旁正常组织，采用荧光定量PCR技术检测miR-361-5p、BTF3 mRNA的相对表达量，采用免疫组化法检测BTF3蛋白的表达情况，根据细胞染色强度和阳性细胞比例进行定量分析，将患者分为miR-361-5p高表达组和低表达组、BTF3高表达组和低表达组，分析miR-361-5p、BTF3表达水平与膀胱癌患者临床病理参数的关系，分析患者的3年生存情况。结果:膀胱癌组织中miR-361-5p水平明显低于癌旁组织( P<0.05)，BTF3 mRNA水平明显高于癌旁组织( P<0.05)；膀胱癌组织中BTF3蛋白的阳性表达率为62.16%(46/74)，癌旁组织中BTF3蛋白的阳性表达率为17.57%(13/74)，差异有统计学意义( χ2＝30.694， P<0.001)；miR-361-5p、BTF3表达水平与肿瘤分化程度、病理分期、淋巴结转移均有显著相关性(均 P<0.05)；miR-361-5p高表达组和低表达组患者的中位生存时间分别为24、16个月，高表达组患者的3年累积生存率明显高于低表达组( χ2＝7.516， P＝0.006)；BTF3高表达组和低表达组患者的中位生存时间分别为15.0、23.5个月，BTF3高表达组患者的3年累积生存率明显低于低表达组( χ2＝5.217， P＝0.022)。 结论:膀胱癌组织中miR-361-5p表达降低，BTF3表达升高，其水平变化与肿瘤分期、分化程度、淋巴结转移有关，可能参与肿瘤增殖分化、转移侵袭过程，并可作为反映膀胱癌患者预后的生物指标。

目的:探讨胶质瘤细胞中长非编码RNA 00467(LINC00467)通过竞争性内源RNA(ceRNA)机制调控丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶3基因(RIPK3)与肿瘤微环境(TME)及药敏性的关系及其机制。方法:对癌症基因组图谱(TCGA)数据库和基因型-组织表达(GTEx)数据库胶质瘤及正常脑组织基因表达进行分析，筛选差异表达基因(DEGs)( P<0.01且表达变化大于2倍的基因)，确定有意义的长链非编码RNA(lncRNA)-mRNA关系对，进行生存分析。在Starbase v3.0数据库中筛选微小RNA(miRNA，miR)-lncRNA关系对，确定ceRNA。在metascape、TISCH、CancerSEA数据库进行分析。取25例新鲜胶质瘤组织及25例正常脑组织，应用荧光实时定量反转录聚合酶链反应(qRT-PCR)检测基因表达。应用R软件包及SPSS统计分析软件对结果进行处理。 结果:对TCGA和GTEx表达谱进行差异表达分析，发现6 095个差异表达的lncRNA(3 083上调，3 012下调)和10 164个差异表达的mRNA(6 803上调，3 361下调)。对胶质瘤中的319 795对候选lncRNA-mRNA对进行筛选，确定LINC00467-RIPK3为研究对象，发现LINC00467、RIPK3在胶质瘤组织高表达，且呈正相关( r＝0.66， P<0.01)。数据库分析发现RIPK3可能通过海绵吸附miR-3612与LINC00467形成ceRNA。生存分析显示LINC00467-RIPK3高表达的患者预后较差( P<0.05)。胶质瘤单细胞数据集分析发现RIPK3在巨噬细胞中高表达，bulk数据集分析发现RIPK3与巨噬细胞表面分子表达正相关( P<0.01)。应用使用表达数据估计恶性肿瘤中的间质和免疫细胞算法计算胶质瘤患者的免疫得分，分析发现RIPK3与Estimate、基质计分、免疫计分以及肿瘤纯度显著相关( P<0.01)。药敏数据分析显示，RIPK3的表达与多种药物的半数抑制浓度(IC 50)值有关( P<0.01)。qRT-PCR结果显示，胶质瘤组织中LINC00467、RIPK3的表达水平高于正常组织(0.74±0.28、0.34±0.20， t＝8.94、9.38， P<0.01)，而胶质瘤组织miR-3612的表达水平(0.57±0.27)低于正常组织(0.79±0.33， t＝－2.17， P<0.01)。 结论:LINC00467可能通过ceRNA机制促进RIPK3表达而参与胶质瘤TME和药敏性调控。

目的 探讨长链非编码RNA(lncRNA)AC092718.4对人类表皮生长因子受体2(HER2)阳性乳腺癌耐药性的影响及其可能机制.方法 (1)获取曲妥珠单抗非耐药及耐药HER2阳性乳腺癌患者的乳腺癌组织(设为非耐药组、耐药组),检测其lncRNA AC092718.4、miR-135a-5p、S100钙结合蛋白P(S100P)mRNA和蛋白的表达水平.(2)以对曲妥珠单抗不敏感的HER2阳性乳腺癌细胞系MDA-MB-361细胞作为原发耐药细胞模型,以乳腺癌细胞株BT-474细胞为亲本,构建对曲妥珠单抗继发耐药的细胞模型(BT-474/TRA细胞).检测3种细胞中lncRNA AC092718.4、miR-135a-5p、S100P mRNA和蛋白的表达水平.经同一浓度曲妥珠单抗干预48 h后,检测3种细胞的活力.(3)取MDA-MB-361细胞分为sh-AC092718.4组、sh-NC组、对照组进行实验,其中sh-AC092718.4组细胞和sh-NC组分别转染sh-AC092718.4和sh-NC,对照组细胞未经任何处理.经同一浓度曲妥珠单抗干预48 h后,检测3组细胞的活力.(4)采用starBase和TargetScan分别预测lncRNA AC092718.4和miR-135a-5p的潜在靶标.通过双荧光素酶报告基因实验验证lncRNA AC092718.4与miR-135a-5p之间、miR-135a-5p与S100P之间的靶向结合情况.结果 (1)与非耐药组相比,耐药组lncRNA AC092718.4、S100P mRNA、S100P蛋白表达水平升高,miR-135a-5p表达水平降低(P<0.05).(2)与BT-474细胞相比,BT-474/TRA细胞及MDA-MB-361细胞的lncRNA AC092718.4、S100P mRNA、S100P蛋白表达水平升高,miR-135a-5p表达水平降低,曲妥珠单抗干预48 h后的细胞活力更大(P<0.05).(3)与对照组和sh-NC组比较,sh-AC092718.4组MDA-MB-361细胞活力降低(P<0.05).(4)starBase预测结果显示,lncRNA AC092718.4与miR-135a-5p有靶向结合位点;TargetScan预测结果显示,miR-135a-5p与S100P有靶向结合位点.荧光素酶报告基因实验结果提示,lncRNA AC092718.4可与miR-135a-5p直接结合,S100P是miR-135a-5p的靶基因.结论 LncRNA AC092718.4促进乳腺癌细胞对曲妥珠单抗产生耐药性,下调lncRNA AC092718.4 表达可减轻MDA-MB-361细胞对曲妥珠单抗的耐药性,其机制可能涉及lncRNA AC092718.4作为竞争性内源RNA竞争性结合miR-135a-5p,从而上调S100P的表达.

目的 筛选高原肺水肿大鼠肺组织差异表达microRNA(miRNA),并分析其生物学功能.方法 将大鼠随机分为对照组和低氧24、48、72 h组,每组6只.低氧组建立大鼠高原肺水肿模型.各组处死后提取大鼠肺组织.利用miRNA 4.0-Rat芯片筛选出低氧组与对照组大鼠肺组织差异表达miRNA,采用miRanda和TargetScan两个数据库对筛选出的差异表达miRNA进行靶基因预测,并对其进行基因本体功能分析和信号通路分析.实时荧光定量PCR检测四组高原肺水肿大鼠肺组织中筛选出来相对表达强度上调、下调最为明显基因.结果 以差异表达倍数(FC值)>2.0为准,高原肺水肿大鼠肺组织差异表达miRNA 14种,上调的5种,下调的9种,其中持续上调的有rno-miR-344g、rno-miR-541-5p,下调的有rno-miR-3556b、rno-miR-101a-5p、rno-miR-361-3p.14种差异miRNA之间存在多个相互关联的靶基因如Med22、Plekhh2、Parg、Rora、Lrch1、Slcla2等.在生物学过程方面,差异表达miRNA主要参与核酸的调控、蛋白泛素化、信号通路、血管生理功能以及生物进程等;在细胞成分方面,差异表达miRNA主要影响细胞内组成如核浆、胞质、细胞器、细胞膜和细胞功能如神经元投射等;在基因分子功能方面,差异表达miRNA主要涉及生物分子有关的结合如蛋白结合等.涉及的信号通路主要有PI3K-Akt信号通路、癌症通路、细胞外基质受体相互作用通路等.与对照组相比,在各低氧组rno-miR-541-5p相对表达量升高,rno-miR-101a-5p相对表达量下降(P均<0.05).结论 在高原肺水肿大鼠的肺组织中差异表达miRNA有14种,它们之间存在许多交互作用靶基因.这些差异表达miRNA参与多种生物学功能和信号通路调控,如血管新生、血管发育、细胞黏附连接、转录因子结合、PI3K-Akt信号通路等,可能参与高原肺水肿的发病机制.

目的 探讨蒙古族高血压病人和汉族高血压病人血管内皮细胞微小RNA(miRNA)表达谱之间的差异关系.方法 将2017年9月—2018年9月赤峰市医院、锡林郭勒盟医院、海拉尔区人民医院就诊的128例蒙古族高血压病人作为观察组,将136例汉族高血压病人作为对照组.比较蒙古族和汉族高血压病人血管内皮细胞miRNA表达谱.结果 ①蒙古族高血压病人血液中hsa-miR-132、hsa-miR-192、hsa-miR-212、hsa-miR-361-5p、hsa-miR-17、hsa-miR-30、hsa-miR-72、hsa-miR-144、hsa-miR-150、hsa-miR-638、hsa-miR-1249和hsa-miR-185表达上调,hsa-miR-155、hsa-miR-27b、hsa-miR-149、hsa-miR-296-5p、hsa-miR-133b、hsa-miR-1825、hsa-miR-1280、hsa-miR-150表达明显下调.②miRNA差异表达量与高血压分级有关,即高血压分级越高,上调或下调越大,3级高血压最明显.③miRNA-132、miRNA-192、miRNA-212、miRNA-361-5p、miRNA-17、miRNA-155、miRNA-27b的特异度和敏感度较高,可作为蒙古族高血压病人与汉族高血压病人差异的标记物.结论 蒙古族与汉族高血压病人血液中miRNA表达存在差异,miRNA-132、miRNA-192、miRNA-212、miRNA-361-5p、miRNA-17、miRNA-155、miRNA-27b的特异度和敏感度较高,可作为蒙古族高血压病人与汉族高血压病人差异的标记物.

目的 探究微小RNA361-5p(miR-361-5p)在肺结核病人血清中水平及意义.方法 选取2017年3月至2019年1月开封市结核病防治所诊治的肺结核病人136例为肺结核组;并选择同时间段内同一医院142例健康体检者为健康对照组.比较两组一般临床资料;以实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测两组血清miR-361-5p水平;检测血管内皮生长因子(VEGF)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、γ-干扰素(IFN-γ)水平;分析肺结核病人血清miR-361-5p水平与VEGF、TNF-α、IFN-γ的关系;回归分析肺结核发生的影响因素;分析血清miR-361-5p对肺结核的诊断价值.结果 肺结核组血清miR-361-5p[(1.58±0.45)比(1.06±0.31)]、VEGF[(389.39±46.85)pg/mL比(327.62±41.76)pg/mL]、TNF-α[(22.48±5.06)ng/L比(11.36±3.17)ng/L]水平均明显高于健康对照组,IFN-γ水平[(15.58±3.36)ng/L比(26.72±4.78)ng/L]明显低于健康对照组(均P<0.05);肺结核病人血清miR-361-5p与VEGF、TNF-α水平呈正相关,与IFN-γ水平呈负相关(均P<0.05);miR-361-5p、VEGF、TNF-α是影响肺结核发生的危险因素,IFN-γ是影响肺结核发生的保护因素(均P<0.05);血清miR-361-5p水平对肺结核发生诊断的AUC为0.898,截断值为1.44,其灵敏度为83.8％,特异度为88.0％.结论 肺结核病人血清miR-361-5p呈高表达,与炎症相关因子密切相关,miR-361-5p可能与炎症相关因子相互作用,进而共同调节肺结核发生、发展.

目的:分析牙周炎患者外周血微小RNA(microRNA,miRNA)表达谱,筛选出具有潜在牙周炎诊断价值的外周血miRNA,为牙周炎特异性诊断方式的探寻提供参考.方法:从基因表达综合数据库(Gene Expression Om-nibus,GEO)获取受试者外周血miRNA表达谱数据集(GSE61741),并进行GEO2R在线工具分析.Logistic回归分析进行差异表达miRNA自变量筛选,依据接受者操作特征(receiver operating characteristic,ROC)曲线下面积(area under the curve,AUC)确定miRNA的诊断价值.结果:与健康对照组相比,牙周炎患者外周血123个miRNA表达水平显著下调,109个miRNA表达水平显著上调;Logistic回归分析筛选出3个与牙周炎发病相关的外周血miRNA,即hsa-miR-361-5p、hsa-miR-663和hsa-miR-744;ROC曲线显示,hsa-miR-361-5p、hsa-miR-663、hsa-miR-744以及三者联合诊断牙周炎的AUC值分别为0.871、0.899、0.925和0.981,均具有统计学意义(P<0.01).结论:牙周炎患者外周血miRNA表达谱与健康对照组存在明显差异,hsa-miR-361-5p、hsa-miR-744和hsa-miR-663与牙周炎发病风险相关,对于牙周炎的诊疗具有一定价值.

目的 筛选骨细胞分泌因子相关力学响应微小RNA(microRNA,miRNA).方法 分别向体外培养骨细胞和成骨细胞施加周期性张应变(ε=2.5,f=0.5 Hz),采用miRNA芯片筛选出仅在骨细胞中差异表达的miRNA.通过生物信息学技术,从这些miRNA中进一步筛选出靶基因为胰岛素样生长因子1(insulin-like growth factor-1)、NO合成酶(nitric oxide synthesase,NOS)、成纤维细胞生长因子23(fibroblast growth factor 23,FGF23)和硬骨素(sclerostin,SOST)等分泌因子的miRNA,与小鼠跑台锻炼后芯片检测出的小鼠股骨组织差异表达miRNA进行比较,然后随机选4个miRNA进行定量PCR验证.结果 仅在体外经力学刺激的骨细胞中差异表达的77个miRNA中,筛选出22个靶基因为4种分泌因子(IGF-1、NOS、FGF23、SOST)的miRNA,并进一步筛选出11个在跑台锻炼后的小鼠骨组织中以同样趋势差异表达的miRNA,其中随机选出的miR-361-3p、miR-3082-5p、miR-6348和miR-706,也在骨细胞和骨组织中以同样趋势同样差异表达.结论 诸如miR-361-3p、miR-3082-5p、miR-6348和miR-706仅在骨细胞中差异表达的力学响应miRNA,很可能通过调节分泌因子影响成骨分化或骨代谢.

目的 探讨环状RNA 0041795(circ_0041795)靶向微小RNA(miR)-361-3p对高糖诱导的人肾小管上皮细胞(HK-2)损伤的影响.方法 用30.0 mmol/L葡萄糖处理HK-2细胞48 h建立体外细胞损伤模型.实时定量PCR(RT-qPCR)检测circ_0041795和miR-361-3p表达.细胞计数试剂盒(CCK-8)法和流式细胞测量术检测细胞存活率和凋亡率.商品试剂盒测定超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)含量以及乳酸盐脱氢酶(LDH)释放量.分别转染circ_0041795小干扰RNA、miR-361-3p模拟物、miR-361-3p抑制物至HK-2,观察沉默circ_0041795或过表达miR-361-3p或抑制miR-361-3p对高糖诱导的HK-2细胞损伤的影响.结果 高糖处理显著降低HK-2细胞存活率、SOD活性、miR-361-3p表达量(P<0.05),增加凋亡率、MDA含量、LDH释放量以及circ_0041795表达量(P<0.05).沉默circ_0041795显著增加HK-2细胞存活率、SOD活性、miR-361-3p表达量(P<0.05),降低凋亡率、MDA含量、LDH释放量(P<0.05).过表达miR-361-3p显著增加HK-2细胞存活率、SOD活性(P<0.05),降低凋亡率、MDA含量、LDH释放量(P<0.05).抑制miR-361-3p表达显著降低HK-2细胞存活率、SOD活性(P<0.05),增加凋亡率、MDA含量、LDH释放量(P<0.05).circ_0041795与miR-361-3p直接结合.抑制miR-361-3p表达能够减弱沉默circ_0041795对高糖诱导的HK-2细胞损伤的影响(P<0.05).结论 沉默circ_0041795通过靶向上调miR-361-3p可减弱高糖诱导的人肾小管上皮细胞凋亡和氧化应激损伤.