目的:探讨circ-0026462靶向miR-361-3p调控前列腺癌细胞对恩杂鲁胺耐药性的机制研究。方法:体外培养人前列腺癌细胞DU-145，建立前列腺癌恩杂鲁胺耐药性细胞DU-145/Enz，使用恩杂鲁胺处理DU-145、DU-145/Enz细胞，将其分为si-NC组、si-circ-0026462组、si-circ-0026462+anti-miR-NC组及si-circ-0026462+anti-miR-361-3p组。采用MTT法检测细胞的增殖能力；采用流式细胞术检测细胞凋亡率；采用qRT-PCR检测circ-0026462、miR-361-3p的表达量；采用双荧光素酶报告检测circ-0026462与miR-361-3p的靶向关系；采用Western blot法检测雄激素受体变异体(AR-V7)、细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)、细胞周期蛋白依赖性抑制剂(P21)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关蛋白(Bax)蛋白的表达量。结果:与DU-145/Enz细胞比较，DU-145细胞的OD值及Cyclin D1、Bcl-2蛋白水平降低(均 P<0.001)，细胞凋亡率及P21、Bax蛋白水平升高(均 P<0.001)；与DU-145细胞比较，DU-145/Enz细胞中circ-0026462的表达水平升高( P<0.001)，miR-361-3p的表达水平降低( P<0.001)；转染si-circ-0026462可明显降低OD值、AR-V7、Cyclin D1及Bcl-2的表达水平(均 P<0.001)，提高细胞凋亡率及P21、Bax的表达水平( P<0.001)；双荧光素酶报告实验证实circ-0026462可靶向结合miR-361-3p；抑制miR-361-3p表达可明显逆转沉默circ-0026462对DU-145/Enz细胞增殖、凋亡及耐药性的作用。 结论:沉默circ-0026462可通过上调miR-361-3p的表达而抑制细胞增殖及促进细胞凋亡，从而降低前列腺癌细胞对恩杂鲁胺的耐药性。

目的:探讨帕博利珠单抗联合恩杂鲁胺治疗转移性去势抵抗性前列腺癌(mCRPC)的疗效和安全性。方法:选取2019年1月至2020年1月在本院收治的104例mCRPC患者的临床资料，按照数字表法分为对照组(51例)和观察组(53例)。对照组采用多西他赛静脉滴注联合口服泼尼松龙；观察组采用帕博利珠单抗静滴联合口服恩杂鲁胺片。观察并分析两组的客观有效率(ORR)、疾病控制率(DCR)、前列腺特异性抗原(PSA)反应率、骨痛缓解率、无进展生存时间、总体生存时间以及不良反应。结果:两组中均无完全缓解(CR)患者，观察组和对照组的ORR、DCR比较，差异均无统计学意义[2(22.22%)vs.1(9.09%)、5(55.56%)vs.3(27.27%)， P＝0.850、0.409]。观察组的PSA反应率、骨痛缓解率均高于对照组[29(54.72%)vs.18(35.29%)、33(62.26%)vs.21(41.18%)， P＝0.047、0.031]。观察组的无进展生存时间、总生存时间均高于对照组，差异均有统计学意义(均 P<0.001)。两组的Ⅲ度不良反应发生率比较，差异无统计学意义( P>0.05)。 结论:帕博利珠单抗联合恩杂鲁胺治疗mCRPC均可提高PSA反应率和骨痛缓解率，延长中位生存时间。

目的:探讨双极雄激素治疗(BAT)治疗的机制和探索未来联合免疫治疗的可能性。方法:以庚酸睾酮为实验药物，RM1细胞荷瘤后进行阉割和恩杂鲁胺治疗后进展的雄性C57小鼠为恩杂鲁胺抵抗的去势抵抗性前列腺癌(CRPC)动物模型，通过设立阴性对照组(对照组、去势+恩杂鲁胺组)、空白对照组(空白注射组、空植入体组)和实验组(雄激素注射组、雄激素植入体组)观察小鼠存活情况并应用酶联免疫吸附实验(ELISA)检测小鼠血清中的雄激素含量来确认安全性和释放效率。以腹腔注射法和植入体法为BAT给药方式，治疗荷瘤恩杂鲁胺抵抗小鼠模型，检测体内肿瘤的大小和重量，蛋白质印迹法(Western blot)检测肿瘤组织磷酸化组蛋白(γH2AX)的变化，流式细胞仪和免疫组织化学法检测组织中CD3 +T细胞变化，GraphPad软件进行统计分析，两组间比较采用 t检验，多组间比较采用单因素方差分析，多组间两两比较用LSD- t检验。 结果:注射法和植入体法均是有效的给药方式，并且能够显著提高血液中雄激素水平[(31.97±2.90)、(20.70±0.92) ng/ml比(1.14±0.43)、(1.21±0.34) ng/ml， F＝149.653、40.399， P<0.01]和降低小鼠荷瘤大小[(907.60±55.95)、(894.71±100.65) mm 3比(1 685.82±12.37)、(1 642.83±8.30) mm 3， F＝3.744、2.938， P<0.01]，差异有统计学意义，相较于植入体法，注射法高浓度雄激素维持时间短但降低肿瘤大小效果好，能引起更多的DNA损伤( F＝14.855， P<0.01)，且能够部分提高CD3 +T细胞的浸润( F＝9.782， P<0.01)，差异有统计学意义，但安全程度欠佳。 结论:植入体法与注射法给予BAT均有效，注射法效果稍好于植入体法，注射法DNA损伤程度更大且造成更多的免疫细胞浸润，未来联合免疫治疗可能具有更好的效果。

目的:探讨Alpha-2A肾上腺素能受体(ADRA2A)在去势抵抗性前列腺癌患者外周血的表达及临床意义。方法:采用蛋白印迹法和实时定量反转录聚合酶链反应，检测经长期恩杂鲁胺(ENZ)药物处理的耐药人前列腺癌细胞LNCaP-ENZ和本身抵抗ENZ的人前列腺癌细胞22Rv1的ADRA2A表达量变化；瞬时转染ADRA2A后测定上述耐药细胞存活率；采用酶联免疫吸附试(ELISA)验测定来源于江南大学附属医院的20例正常人(N)、20例前列腺增生(BPH)、30例原发性前列腺癌(LPCa)及10例去势抵抗性前列腺癌(CRPC)患者的外周血中ADRA2A含量变化；GEPIA数据库中针对PCa患者数据分析ADRA2A对生存能力的影响。多样本比较采用单因素方差分析，两样本比较采用 t检验。 结果:本研究结果显示在mRNA水平，耐药ENZ的LNCaP-ENZ细胞ADRA2A表达量(14.44±0.629)高于正常前列腺癌LNCaP细胞(1±0)，差异有统计学意义( t＝21.370， P<0.05)；在蛋白水平，LNCaP-ENZ细胞ADRA2A表达量(4.243±0.217)高于正常前列腺癌LNCaP细胞(1±0)，差异有统计学意义( t＝14.970， P<0.05)；LNCaP-ENZ细胞中敲低ADRA2A，si-ADRA2A组细胞存活率[(60.650±2.451)%]明显低于对照组[(100±0)%]及si-neg组[(100.300±0.633)%]，差异有统计学意义( F＝243.800， P<0.05)；ELISA结果显示LPCa组(3.084±0.196)和CRPC组表达量(4.364±0.306)均显著高于BPH组(2.203±0.202)和N组(2.192±0.227)，差异有统计学意义( F＝13.640， P<0.05)，CRPC组比较LPCa组，ADRA2A表达量显著升高，差异有统计学意义( P<0.05)；GEPIA分析发现在PCa中，ADRA2A高表达使患者生存率降低，但其差异无统计学意义( P>0.05)。 结论:ADRA2A在CRPC患者中表达量最高，有助于CRPC患者诊断和监测。

目的 探索前列腺癌获得去势抵抗性转移能力的分子机制.方法 采集、分离和测定健康志愿者(Control组)、原位前列腺癌(Local PC组)和去势抵抗性前列腺癌(mCRPC组)患者外周静脉血外泌体中微小RNA(miR)-130a的水平.收集上述前列腺患者癌组织,流式细胞术测定癌组织浸润M2样巨噬细胞比例.Western blot测定癌组织单核细胞趋化蛋白诱导蛋白3(MCPIP3)表达水平.酶联免疫吸附试验法测定癌组织中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白介素-17A(IL-17A)水平.体外建立小鼠巨噬细胞RAW264.7细胞和人前列腺癌LNCaP细胞共培养体系.添加脂多糖(LPS)和白介素-4(IL-4)分别诱导RAW264.7细胞发生M1和M2极化.测定共培养体系中LNCaP细胞在有/无恩杂鲁胺情况下的增殖能力.结果 与Control组比较,mCRPC组血浆外泌体中miR-130a相对表达水平显著升高(P＜0.05),Local PC组差异无统计学意义(P＞0.05).与Local PC组比较,mCRPC组血浆外泌体中miR-130a相对表达水平显著升高,癌组织中浸润的M2样巨噬细胞数量所占百分比增多,癌组织中MCPIP3的相对表达水平降低,IL-17A水平上调(P＜0.05),TNF-α水平差异无统计学意义(P＞0.05).与M2样巨噬细胞共培养的LNCaP细胞增殖和去势抵抗性增殖能力高于与M1样巨噬细胞共培养的LNCaP细胞.结论 前列腺癌细胞通过外泌体释放高水平的miR-130a改变肿瘤微环境,引起巨噬细胞M2样极化并大量浸润癌组织,同时释放高水平IL-17A,形成促前列腺癌获得去势抵抗性生长和转移的肿瘤免疫微环境.

前列腺癌是男性泌尿生殖系统最常见的恶性肿瘤,我国前列腺癌新发病例临床分期偏晚,Gleason级别较高,临床上多表现为进展期前列腺癌,已失去手术机会[1].雄激素剥夺治疗(androgen deprivation therapy,ADT)是进展期前列腺癌的主要治疗手段,可显著抑制前列腺癌的进展,但是几乎所有患者在治疗12～18个月后进展为更具侵袭性的去势抵抗性前列腺癌(castration resistant prostate cancer,CRPC)[2].新一代强效雄激素受体(androgen receptor,AR)信号通路抑制剂,如恩杂鲁胺(enzalutamide)和阿帕他胺(apalutamide)等,可有效缓解CRPC的进展并延长患者的生存期,但是部分患者会在较短时间内就发生耐药.目前研究普遍认为,CRPC患者发生的由腺癌向神经内分泌前列腺癌(neuroendocrine prostate cancer,NEPC)转化是疾病进展的重要原因.

目的 探索前列腺癌神经内分泌分化(neuroendocrine differentiation,NED)进展中单胺氧化酶 A(monoamine oxidase A,MAOA)和叉头框蛋白A1(forkhead box A1,FOXA1)的动态变化特征,为临床神经内分泌型前列腺癌(neuroendocrine prostate cancer,NEPC)的治疗提供新的策略.方法 通过恩杂鲁胺(enzalutamide,ENZ)长期持续诱导的方式建立NED的细胞模型和小鼠移植模型;采用Western Blot和Real-time PCR方法检测MAOA、FOXA1 在NED中的动态表达;选用GEO数据库分析在多种NED模型中MAOA与FOXA1 的动态变化趋势;构建前列腺癌细胞系小鼠移植模型,通过免疫组化分析体内模型中MAOA、FOXA1 在NED中的动态表达;通过慢病毒转染干预MAOA,检测MAOA对FOXA1 的调控作用.结果 MAOA与FOXA1 在NED过程中均呈现先升高后降低的动态变化特征;敲低前列腺癌细胞中MAOA可以导致FOXA1 的表达降低,这可能是MAOA通过FOXA1 在NED的不同阶段发挥不同作用.结论 MAOA和FOXA1 在NED过程中呈先升高后降低的趋势,MAOA的表达能影响FOXA1 的水平,MAOA/FOXA1 可能在NED过程中发挥动态调控的作用.

目的:探讨N-myc下游调节基因1(NDRG1)对去势抵抗性前列腺癌(CRPC)恩杂鲁胺(ENZA)耐药的影响,并阐明其作用机制.方法:体外培养人CRPC C4-2细胞和ENZA耐药株C4-2/ENZA细胞,采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测C4-2/ENZA细胞及其亲本C4-2细胞中NDRG1 mRNA表达水平,Western blotting法检测C4-2/ENZA细胞及其亲本C4-2细胞中NDRG1、雄激素受体(AR)和前列腺特异性抗原(PSA)蛋白表达水平,以验证细胞转染效率.将C4-2/ENZA细胞分为空白组(正常培养不进行处理)、阴性对照慢病毒(Lv-NC)组(转染Lv-NC)、Lv-NDRG1 组(转染 Lv-NDRG1)、Lv-NC+ENZA 组(转染 Lv-NC 后加入 ENZA 处理)、Lv-NDRG1+ENZA组(转染Lv-NDRG1后加入ENZA处理)、Lv-NDRG1+表皮生长因子(EGF)组(转染Lv-NDRG1后加入EGF处理)和Lv-NDRG1+EGF+ENZA组(转染Lv-NDRG1后加入EGF和ENZA处理).采用噻唑蓝(MTT)法检测各组细胞半数抑制浓度(IC50)、耐药指数(RI)和细胞增殖活性,流式细胞术检测各组细胞凋亡率,RT-qPCR法检测各组细胞中NDRG1 mRNA表达水平,Western blotting法检测各组细胞中NDRG1、AR、第 213位丝氨酸磷酸化雄激素受体(p-ARSer213)、第 81 位丝氨酸磷酸化雄激素受体(p-ARSer81)和PSA蛋白表达水平.结果:与C4-2 细胞比较,C4-2/ENZA细胞中NDRG1 mRNA和蛋白表达水平均明显降低(P<0.01),AR和PSA蛋白表达水平明显升高(P<0.01),提示ENZA耐药株C4-2/ENZA中NDRG1低表达;与Lv-NC组比较,Lv-NDRG1组细胞中NDRG1 mRNA和蛋白表达水平均明显升高(P<0.01),提示成功构建NDRG1基因过表达C4-2/ENZA耐药细胞株.MTT法,与C4-2细胞比较,C4-2/ENZA细胞IC50明显升高(P<0.01),RI为 17.78;与Lv-NC组比较,Lv-NDRG1 组C4-2/ENZA细胞IC50 明显降低(P<0.01).EGF处理 24 h,与Lv-NC组比较,Lv-NC+EGF组C4-2/ENZA细胞IC50明显升高(P<0.01);与Lv-NDRG1组比较,Lv-NDRG1+EGF组C4-2/ENZA细胞IC50明显升高(P<0.01).与ENZA处理前比较,不同浓度ENZA处理24 h,C4-2和C4-2/ENZA细胞增殖活性均逐渐降低(F=223.80,P<0.01;F=81.46,P<0.01).ENZA处理24 h,与Lv-NC组比较,Lv-NDRG1组C4-2/ENZA细胞增殖活性明显降低(P<0.01).EGF处理 24 h,与Lv-NC组比较,Lv-NC+EGF组 C4-2/ENZA细胞增殖活性明显升高(P<0.01),Lv-NDRG1+EGF组C4-2/ENZA细胞增殖活性明显降低(P<0.01).选择10.000 μmol·L-1 ENZA和干预24 h作为后续检测浓度及时间点.流式细胞术,ENZA处理24 h,与Lv-NC组比较,Lv-NDRG1 组细胞凋亡率明显升高(P<0.01);与 Lv-NC+ENZA组比较,Lv-NDRG1+ENZA组细胞凋亡率明显升高(P<0.01).EGF处理 24 h,与 Lv-NDRG1 组比较,Lv-NDRG1+EGF组细胞凋亡率明显降低(P<0.01),Lv-NDRG1+ENZA组细胞凋亡率明显升高(P<0.01);与Lv-NDRG1+ENZA组比较,Lv-NDRG1+EGF+ENZA组细胞凋亡率明显降低(P<0.01).Western blotting法,ENZA处理24 h,与Lv-NC组比较,Lv-NDRG1组细胞中AR和PSA蛋白表达水平及p-ARSer213/AR和p-ARSer81/AR比值均明显降低(P<0.05 或P<0.01).EGF处理24 h,与Lv-NC组比较,Lv-NC+EGF组细胞中AR和PSA 蛋白表达水平及 p-ARSer213/AR 和p-ARSer81/AR比值均明显升高(P<0.05或P<0.01);与Lv-NDRG1 组比较,Lv-NDRG1+EGF组细胞中 AR 和 PSA 蛋白表达水平及 p-ARSer213/AR 和 p-ARSer81/AR比值均明显升高(P<0.01).结论:NDRG1过表达可降低CRPC对ENZA的耐药性,其作用机制可能与抑制AR信号转导有关.

目的:探讨线粒体离子肽酶1(lon peptidase 1,mitochondrial,LONP1)在去势抵抗性前列腺癌(castration-resistant prostate cancer,CRPC)进展中的作用机制.方法:采用蛋白质印迹法检测前列腺增生细胞BPH-1、雄激素依赖性前列腺癌细胞LNCaP和雄激素非依赖性前列腺癌细胞(即CRPC细胞)PC3中LONP1、N-myc 下游调节基因 1(N-Myc downstream-regulated gene 1,NDRG1)和雄激素受体(androgen receptor,AR)蛋白的表达水平.采用慢病毒感染的方法将携带有LONP1全基因的重组载体转入LNCaP细胞,构建稳定过表达LONP1(overexpression LONP1,OE-LONP1)的 LNCaP 细胞(以 OE-NC 作为阴性对照);将特异性针对LONP1基因的shRNA(shLONP1)转入PC3细胞,构建稳定沉默LONP1表达的PC3细胞(shNC作为阴性对照);分别通过CCK-8法、集落形成实验和Transwell小室侵袭实验检测细胞的增殖和侵袭能力.通过免疫共沉淀和染色质免疫沉淀法检测LONP1对AR/NDRG1信号轴的影响,并采用CCK-8法和Transwell小室实验检测在沉默LONP1表达的PC3细胞中进一步沉默NDRG1表达对PC3细胞增殖及侵袭能力的影响.将沉默LONP1表达的PC3细胞及其阴性对照(PC3-shNC细胞)接种于BALB/c裸鼠皮下构建移植瘤模型,并分别采用DMSO和AR拮抗剂恩杂鲁胺(enzalutamide,ENZ)进行治疗;最后,分别采用免疫组织化学法检测肿瘤组织中Ki-67的表达水平,TUNEL法评估肿瘤组织中肿瘤细胞的凋亡情况.结果:相较于前列腺增生细胞BPH-1细胞,LNCaP细胞中LONP1的蛋白表达水平相对较低(P＜0.05),PC3细胞中LONP1蛋白的表达水平相对较高(P＜0.05)o LNCaP细胞中LONP1过表达抑制了 AR和NDRG1的表达水平(P均＜0.05),而PC3细胞中下调LONP1的表达水平可上调AR和NDRG1的表达水平(P均＜0.05).LNCaP细胞中LONP1过表达促进了细胞的增殖和侵袭能力(P均＜0.05),PC3细胞中敲低LONP1表达抑制了细胞的增殖和侵袭能力(P均＜0.05)oLONP1直接与AR结合并识别NDRG1中的雄激素反应元件(androgen response element,ARE),并且其通过抑制AR/NDRG1信号通路促进前列腺癌的进展.小鼠移植瘤治疗实验结果显示,沉默LONP1表达和ENZ治疗都可以抑制肿瘤的生长,以沉默LONP1表达联合ENZ治疗作用最好;免疫组织化学法和TUNEL法检测结果提示,shLONP1+ENZ组肿瘤组织中表现出更低水平的Ki-67染色和更高水平的细胞凋亡(P均＜0.001).结论:LONP1在雄激素非依赖性细胞PC3中高表达,并通过抑制AR/NDRG1信号转导促进前列腺癌的进展.

目的 确定转移性激素敏感性前列腺癌(mHSPC)的最佳治疗方案,为临床决策提供依据.方法 系统检索Medline、Em-base、BIOSIS preview、the Cochrane Library和ClinicalTrials.gov数据库,收集关于mHSPC药物治疗,且疗效结局为总生存期(OS)和放射学无进展生存期(rPFS)、安全性结局为严重不良事件(SAEs)发生率的随机对照试验.检索时限为建库至2022年3月.由2名研究人员独立筛选文献、提取资料并评价纳入研究的偏倚风险后,进行贝叶斯网状Meta分析.结果 最终纳入8项研究,共计9 437例患者,比较了7种治疗方案[醋酸阿比特龙、阿帕他胺、达罗他胺+多西他赛、多西他赛、恩杂鲁胺、标准非甾体抗雄激素(SNA)分别联合雄激素剥夺疗法(ADT)和单用ADT]的有效性和安全性.疗效指标中,能使患者OS获益最多的方案(除ADT+ SNA外)是ADT+达罗他胺+多西他赛(HR=0.54,95%CI为0.44～0.66),随后为ADT+醋酸阿比特龙(HR=0.64,95%CI为0.57～0.71)、阿帕他胺(HR=0.65,95%CI为0.53～0.79)或恩杂鲁胺(HR=0.66,95%CI为0.53～0.82),最后是ADT+多西他赛(HR= 0.79,95%CI为0.71～0.88).能使患者rPFS获益最多的方案(除ADT+SNA外)为ADT+恩杂鲁胺(HR=0.39,95%CI为0.30～0.50),随后是ADT+阿帕他胺(HR=0.48,95%CI为0.39～0.60)、醋酸阿比特龙(HR=0.57,95%CI为0.51～0.64)或多西他赛(HR=0.62,95%CI为0.56～0.69);肿瘤负荷亚组分析的结果相同.在安全性方面,ADT+达罗他胺+多西他赛(OR=25.86,95%CI为14.08～51.33)和ADT+多西他赛(OR=23.35,95%CI为13.26～44.81)与SAEs发生率显著升高相关,ADT+醋酸阿比特龙(OR=1.42,95%CI为1.10～1.82)的SAEs发生率稍有增高,其他治疗方案的SAEs发生率无明显差异.结论 与仅行ADT相比,ADT+达罗他胺+多西他赛三联疗法的OS获益最多,但其SAEs发生率大幅增高;与ADT+多西他赛相比,ADT+醋酸阿比特龙、阿帕他胺或恩杂鲁胺具有更多的OS获益.ADT+恩杂鲁胺在不提高患者SAEs发生率的前提下,提供了较多的rPFS获益.