目的:探讨血清微小RNA（miR）-29c-3p和miR-378a-3p表达与脓毒症心肌损伤患者血清炎性因子、心肌损伤指标和超声心动图指标的相关性，分析其对预后的评估价值。方法:采用前瞻性的研究方法。选择2019年2月至2021年10月邯郸市中心医院脓毒症患者286例，采用聚合酶链反应检测血清miR-29c-3p和miR-378a-3p水平，并检测血清肌钙蛋白I（TnI）、肌酸激酶同工酶MB（CK-MB）、肌红蛋白（Mb）、B型脑钠肽（BNP）、肿瘤坏死因子α（TNF-α）、白细胞介素6（IL-6）、白细胞介素1β（IL-1β）和降钙素原（PCT）水平；采用超声检测左心室舒张末期内径（LVEDD）、左心室收缩末期内径（LVESD）、左心室射血分数（LVEF）、每搏输出量（SV）、心输出量（CO）和二尖瓣口舒张早期最大流速与心房收缩期最大流速比值（E/A）。将血清TnI≥0.15 μg/L定义为心肌损伤，记录心肌损伤患者住院28 d内生存情况，并评估急性生理学和慢性健康状况Ⅱ评分（APACHE Ⅱ）和序贯器官衰竭评分（SOFA）。采用Pearson法进行相关性分析；采用多因素Logistic回归分析影响脓毒症心肌损伤患者住院28 d内死亡的独立危险因素；绘制受试者工作特征（ROC）曲线，分析miR-29c-3p和miR-378a-3p预测脓毒症心肌损伤患者住院28 d内死亡的效能。结果:286例脓毒症患者中，发生心肌损伤131例（心肌损伤组），未发生心肌损伤155例（无心肌损伤组）。心肌损伤组miR-29c-3p、Mb、CK-MB、BNP、TnI、TNF-α、IL-6、IL-1β、PCT、CRP、LVEDD和LVESD明显高于无心肌损伤组[5.02 ± 1.69比2.01 ± 0.57、（102.35 ± 23.56） μg/L比（32.15 ± 9.12） μg/L、（25.01 ± 6.09） U/L比（13.02 ± 4.16） U/L、（905.23 ± 135.49） ng/L比（92.31 ± 26.35）ng/L、（0.23 ± 0.05）μg/L比（0.12 ± 0.02）μg/L、（13.41 ± 3.71）μg/L比（3.26 ± 0.95）μg/L、（9.02 ± 2.46）ng/L比（4.18 ± 1.03）ng/L、（71.45 ± 15.29）ng/L比（30.02 ± 6.39）ng/L、（1.05 ± 0.21）μg/L比（0.72 ± 0.13）μg/L、（21.35 ± 6.13）mg/L比（16.23 ± 4.57）mg/L、（37.45 ± 3.39）mm比（34.01 ± 2.15）mm和（50.12 ± 3.49）mm比（44.17 ± 3.02）mm]，miR-378a-3p、LVEF、SV、CO和E/A明显低于无心肌损伤组[1.67 ± 0.36比3.02 ± 0.79、（46.32 ± 3.26）%比（56.24 ± 4.98）%、（48.21 ± 2.81）ml比（56.02 ± 3.49）ml、（3.11 ± 0.29）L/min比（4.15 ± 0.31）L/min和0.98 ± 0.21比1.19 ± 0.32]，差异有统计学意义（ P<0.01）。Pearson相关分析结果显示，脓毒症心肌损伤患者miR-29c-3p与TNF-α、IL-6、IL-1β、PCT、CRP、Mb、CK-MB、BNP、TnI、LVEDD、LVESD呈正相关（ P<0.01或<0.05），与LVEF、SV、CO和E/A呈负相关（ P<0.01）；miR-378a-3p与TNF-α、IL-6、IL-1β、PCT、CRP、Mb、CK-MB、BNP、TnI、LVEDD和LVESD呈负相关（ P<0.01或<0.05），与LVEF、SV、CO和E/A呈正相关（ P<0.01）。131例脓毒症心肌损伤患者住院28 d内死亡55例（死亡亚组），存活76例（存活亚组）。死亡亚组机械通气率、连续性肾脏替代治疗率、APACHE Ⅱ、SOFA、miR-29c-3p、Mb、CK-MB、TnI、BNP、TNF-α、IL-6、IL-1β、PCT、CRP、LVEDD和LVESD明显高于存活亚组，miR-378a-3p、LVEF、SV、CO和E/A明显低于存活亚组，差异有统计学意义（ P<0.05或<0.01）。多因素Logistic回归分析结果显示，APACHE Ⅱ、TnI、miR-29c-3p是影响脓毒症心肌损伤患者住院28 d内死亡的独立危险因素（ OR = 1.203、2.451和1.394，95% CI 1.085~1.334、1.498~4.008和1.141~1.702， P<0.01），miR-378a-3p是影响脓毒症心肌损伤患者住院28 d内死亡的独立保护因素（ OR = 0.367，95% CI 0.217~0.622， P<0.01）。ROC曲线分析结果显示，miR-29c-3p和miR-378a-3p预测脓毒症心肌损伤患者住院28 d内死亡的最佳截断值分别为5.00和1.65，miR-29c-3p联合miR-378a-3p预测脓毒症心肌损伤患者住院28 d内死亡的曲线下面积明显大于两项指标单独应用（0.890比0.695和0.732），灵敏度为87.0%，特异度为87.3%，准确度为86.8%。 结论:脓毒症心肌损伤患者血清miR-29c-3p表达水平升高、miR-378a-3p表达水平降低，miR-29c-3p和miR-378a-3p表达与心肌损伤程度、超声心动图指标、炎性因子水平以及预后均有关，miR-29c-3p和miR-378a-3p可作为评估脓毒症心肌损伤患者预后的潜在指标。

目的 探讨微小RNA-378a-3p(miR-378a-3p)影响乳腺癌细胞发展的机制.方法 基于TCGA数据库分析miR-378a-3p在乳腺癌细胞中的表达情况;利用starBase、miRDB、miRWalk数据库对miR-378a-3p进行靶基因预测,双荧光素酶报告实验验证miR-378a-3p对NUAK家族激酶2(NUAK2)的靶向调控;qRT-PCR和Western blot检测miR-378a-3p和NUAK2在乳腺癌细胞中mRNA和蛋白的表达情况;细胞增殖实验检测乳腺癌细胞的增殖能力;细胞划痕实验和侵袭实验分别检测乳腺癌细胞的迁移和侵袭能力.凋亡和周期实验检测乳腺癌细胞的凋亡率和细胞周期分布.结果 miR-378a-3p在乳腺癌细胞中显著下调,过表达miR-378a-3p抑制了乳腺癌细胞的增殖,迁移和侵袭.miR-378a-3p靶向下调NUAK2的表达.结论 miR-378a-3p通过靶向抑制NUAK2的表达,从而抑制乳腺癌细胞的增殖、迁移和侵袭.

目的:探讨长链非编码RNA NORAD(LncRNA NORAD)是否通过调控微小RNA-378a-3p(miR-378a-3p)表达影响脂多糖(LPS)诱导的心肌细胞炎症反应及细胞凋亡.方法:体外培养大鼠心肌细胞H9C2,并将细胞分为6组:对照组、LPS组(10 μg/mL LPS)、LPS+阴性序列组(10 μg/mL LPS+转染阴性序列si-NC)、LPS+干扰NORAD组(10 μg/mL LPS+转染干扰NORAD)、LPS+干扰NORAD+miR阴性对照组(10 g/mL LPS+共转染干扰NORAD和 miR 阴性对照)、LPS+干扰 NORAD+miR-378a-3p 抑制剂组(10 μg/mLLPS+共转染干扰 NORAD 和 miR-378a-3p抑制剂),除对照组细胞外,其余组细胞LPS刺激24 h.用实时荧光定量聚合酶链反应检测各组NORAD、miR-378a-3p相对表达量;用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测白介素(IL)-6、肿瘤坏死因子(TNF)-α水平;以流式细胞术检测细胞凋亡率;以双荧光素酶报告实验验证NORAD与miR-378a-3p靶向结合关系.结果:与对照组比较,LPS组心肌细胞中NORAD的表达量、TNF-α、IL-6水平、细胞凋亡率升高,miR-378a-3p的表达量降低(P均＜0.05);与LPS+阴性序列组比较,LPS+干扰NORAD组心肌细胞中TNF-α、IL-6水平降低及细胞凋亡率降低(P均＜0.05);双荧光素酶报告实验证实NORAD可靶向结合miR-378a-3p;与LPS+干扰NORAD+miR阴性对照组比较,LPS+干扰NORAD+miR-378a-3p抑制剂组心肌细胞中TNF-α、IL-6水平及细胞凋亡率升高(P均＜0.05).结论:NORAD可通过调控miR-378a-3p减轻LPS诱导的心肌细胞炎症反应及细胞凋亡.

目的 分析多囊卵巢综合征(PCOS)患者血清外泌体中差异表达microRNAs(miRNAs),并进一步分析血清外泌体中差异表达miRNAs的功能.方法 PCOS患者30例为实验组,因单纯输卵管因素不孕患者30例为对照组.分别于月经周期第2～4天抽取两组外周血,提取、纯化血清外泌体,高通量测序定性、定量检测外泌体miR-NAs,分析两组差异表达(差异表达倍数≥2且P<0.01)血清外泌体miRNAs.生物信息学分析差异表达外泌体miRNAs的功能.取两组外周血,qRT-PCR法定量检测两组差异表达外泌体miRNAs.结果 PCOS患者血清外泌体中差异表达miRNAs共有243条,其中hsa-miR-378d、hsa-miR-378b、hsa-miR-4772-3p等表达上调115条、hsa-miR-5090、hsa-miR-3680-3p、hsa-miR-6836-5p等表达下调128条.PCOS患者差异表达血清外泌体miRNAs与类固醇激素的合成有关,可能参与调节胰岛素信号受体通路.与对照组比较,实验血清外泌体miR-146a-5p、miR-25-5p、miR-27a-3p、miR-93-5p、miR-23a-3p、miR-223-5p、miR-25-3p、miR-483-5p、miR-383-5p相对表达量升高(P均<0.05).结论 PCOS患者血清外泌体hsa-miR-378d、hsa-miR-378b、hsa-miR-4772-3p等表达上调,hsa-miR-5090、hsa-miR-3680-3p、hsa-miR-6836-5p等表达下调.PCOS患者差异表达血清外泌体miRNAs与类固醇激素的合成有关,可参与调节胰岛素信号受体通路.

目的 探讨微小RNA-378a(miR-378a)对皮肤鳞癌(CSCC)细胞侵袭、迁移和CD226表达的影响.方法 采用实时荧光定量PCR(QPCR)检测CSCC细胞A431和人角质形成细胞HaCaT的miR-378a水平;将体外常规培养的A431细胞进行转染,根据转染物不同分为增强转染组(转染miR-378a mimics)、抑制转染组(转染miR-378a inhibitor)和空白转染组(无转染).采用QPCR、活细胞计数( CCK)-8、Annexin V-FITC／PI 双染流式细胞术、 Transwell 细胞迁移和侵袭实验以及Western blotting检测miR-378a水平、增殖活力、凋亡率、穿膜细胞数和CD226水平;构建荧光素酶报告质粒psiCHECK-2,并采用双荧光素酶报告基因实验验证miR-378a与CD226基因的靶向关系.结果 与HaCaT细胞(1. 089±0. 197)相比,A431细胞的miR-378a水平升高至4. 435±0. 807(P＜0. 05).与空白转染组的1. 031± 0. 173相比,增强转染组的miR-378a水平升高至11. 846±2. 179,而抑制转染组则降低至0. 162±0. 040;与空白转染组相比,增强转染组转染48、72 h后的增殖活力升高,而抑制转染组则降低;与空白转染组的(7. 464±1. 281)%相比,增强转染组的凋亡率降低至(3. 799±1. 279)%,而抑制转染组则升高至(15. 435±2. 112)%;细胞侵袭实验中,与空白转染组的(62. 704±5. 639)个相比,增强转染组的穿膜细胞数升高至(89. 401± 6. 358)个,而抑制转染组则降低至(17. 346±2. 954)个;细胞迁移实验中,与空白转染组的(84. 227±5. 478)个相比,增强转染组的穿膜细胞数升高至(102. 139±7. 930)个,而抑制转染组则降低至(54. 448±13. 068)个;与空白转染组的0. 428±0. 033相比,增强转染组的CD226水平降低至0. 173±0. 056,而抑制转染组则升高至0. 695±0. 020.以上组间差异均有统计学意义( P＜0. 05). miR-378a mimics和携带CD226野生型3'端非翻译区(3'UTR)质粒共转染时,荧光素酶活性显著下降( P＜0. 05);而当miR-378a mimics与携带CD226突变型3'UTR质粒共转染时,荧光素酶活性无显著变化( P＞0. 05).结论 CSCC细胞中miR-378a高表达并发挥促癌作用,下调该miRNA水平可抑制CSCC细胞增殖、迁移和侵袭能力并诱导凋亡,可能通过靶向CD226来发挥促癌作用,在CSCC靶向治疗中有一定的应用前景.

目的 探讨微小RNA-378a-3p(miR-378a-3p)与PKM2基因的关系,以及miR-378a-3p对食管鳞癌细胞Eca-109凋亡及能量代谢的影响. 方法 采用Eca-109细胞系,后续实验分为空白对照组、阴性对照组(转染 negative control)和实验组(miR-378a-3p基因转染24 h与48 h).利用流式细胞技术检测miR-378a-3p转染后24 h和48 h对Eca-109细胞凋亡的影响;用紫外分光光度法检测miR-378a-3p转染后24 h和48 h对Eca-109细胞能量代谢的影响;用蛋白免疫印迹法(Western blot-ting)检测miR-378a-3p干预后PKM2蛋白水平的变化. 结果 与空白对照组和阴性对照组相比,实验组miR-378a-3p转染24 h和48 h时PKM2蛋白的表达水平降低(P＜0. 05),且48 h较24 h时PKM2蛋白的表达水平降低更明显.与空白对照组和阴性对照组相比,实验组转染miR-378a-3p后24 h和48 h,紫外分光光度法检测ATP含量明显降低(P＜0. 01),代谢减少,且48 h较24 h的ATP产量降低更明显.与空白对照组和阴性对照组相比,实验组miR-378a-3p转染后24 h和48 h Eca-109细胞的凋亡率显著增高(P＜0. 001),48 h较24 h时细胞凋亡率增高更明显. 结论 miR-378a-3p通过抑制有氧酵解关键酶PKM2来干预食管癌细胞的能量代谢,进而增加细胞的凋亡.

目的 探讨微小RNA-378a-3p(miR-378a-3p)对血管瘤内皮细胞(HemECs)增殖、侵袭、迁移的影响以及可能的作用机制.方法 HemECs细胞随机分为对照组、miR-NC组及miR-378a-3p组;对照组为常规培养HemECs细胞,miR-NC组和miR-378a-3p组HemECs细胞分别在脂质体(Lipofectamine RNAIMAX)的介导下转染阴性对照以及miR-378a-3p模拟物.荧光定量PCR (qPCR)检测miR-378a-3p的表达量,细胞计数(CCK-8)检测各组细胞的增殖,Transwell实验检测细胞的侵袭、迁移;在线数据库TargetScan预测以及双荧光素酶报告基因验证miR-378a-3p与驱动蛋白超家族2A(KIF2A)的靶向关系.结果 与对照组相比,miR-378a-3p模拟物能明显上调HemECs细胞中miR-378a-3p的表达量(P＜0.05);上调miR-378a-3p的表达量抑制HemECs细胞增殖,降低其侵袭、迁移的能力(P＜0.05);KIF2A是miR-378a-3p下游靶基因之一.结论 miR-378a-3p可能通过靶向KIF2A抑制HemECs细胞的增殖、侵袭及迁移.

目的 探讨微小RNA对高血压相关性脑出血(HRICH)患者脑血管组织的影响.方法 回顾性连续纳入2018年9月至2019年12月四川绵阳四〇四医院神经外科自发性高血压脑出血住院患者9例为观察组,回顾性连续纳入同期四川绵阳四〇四医院神经外科因颅脑外伤需行颅内减压术且伴高血压病史的住院患者9例为对照组.术中取两组患者术区皮质造瘘口的少量脑血管标本,通过Trizol法提取标本总RNA,筛选差异表达的微小RNA.从微小RNA差异表达谱中随机选择3种微小RNA,用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(PCR)技术验证结果的可靠性.采用TargetScan、miRDB、miRanda三种在线分析工具预测差异表达微小RNA的靶基因,并对靶基因进行京都基因与基因组百科全书(KEGG)分析,富集程度越高,相应的P值越小.结果 (1)与对照组标本比较,观察组患者脑血管组织细胞中有35种差异表达的微小RNA,其中15种微小RNA表达下调,即hsa-let-7g-3p、hsa-miR-103a-2-5p、hsa-miR-126-5p、hsa-miR-130a-3p、hsa-miR-210-3p、hsa-miR-214-3p、hsa-miR-28-5p、hsa-miR-34a-5p、hsa-miR-378a-3p、hsa-miR-145-5p、hsa-miR-4785、hsa-miR-549a-5p、hsa-miR-574-3p、hsa-miR-590-3p、hsa-miR-660-3pg表达降低(均P<0.05);20种微小RNA表达上调,即hsa-miR-1180-3p、hsa-miR-1224-3p、hsa-miR-128-2-5p、hsa-miR-1298-3p、hsa-miR-137-5p、hsa-miR-139-3p、hsa-miR-139-5p、hsa-miR-2682-5p、hsa-miR-370-3p、hsa-miR-433-3p、hsa-miR-485-5p、hsa-miR-541-3p、hsa-miR-543、hsa-miR-598-5p、hsa-miR-6505-5p、hsa-miR-668-3p、hsa-miR-7-5p、hsa-miR-744-5p、hsa-miR-873-3p、hsa-miR-942-3p表达升高(均P<0.05).(2)对已知的差异表达微小RNA采用TargetScan、miRDB、miRanda三种在线分析工具进行基因预测,结果显示,共同交集预测得到的靶基因有87个交集.(3)随机抽取3种差异表达的微小RNA进行荧光定量逆转录PCR验证,结果显示,与对照组(颅脑外伤伴高血压病史者)比较,观察组(自发性高血压脑出血者)hsa-miR-145-5p、hsa-miR-28-5p表达降低(0.22±0.17比1.00±0.29,t=0.153;0.13±0.03比1.00±0.62,t=0.421),hsa-miR-139-3p表达升高(1.95±0.29比1.00±0.52,t=0.492),组间差异均有统计学意义(均P<0.05).(4)交集靶基因的KEGG富集分析结果显示,主要涉及Ras相关蛋白1信号通路、黏附斑激酶、肿瘤微小RNA、环磷酸鸟苷-环磷酸鸟苷依赖性蛋白激酶信号通路、磷脂酰肌醇3激酶-蛋白激酶B信号通路、丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路、人乳头状瘤病毒、肿瘤蛋白聚糖、肿瘤通道蛋白,其中MAPK信号通路的富集程度较高(P<0.01).结论 微小RNA可能在调控HRICH的相关生物学功能中具有重要作用.

背景:近年来利用微小RNA(miRNA)调节干细胞的功能和分化是再生医学的一个极具吸引力的治疗模式,因此将miRNA负载于干细胞膜片增强其成骨及成血管相关性能,对骨缺损的修复研发一种新型修复材料具有重要意义.目的:探讨过表达miR-378a基因对骨髓间充质干细胞膜片成骨及成血管分化能力的影响.方法:分离培养SD大鼠骨髓间充质干细胞,选用合适滴度的miR-378a慢病毒载体、阴性对照病毒分别感染骨髓间充质干细胞,依次记为LV-miR-378a-BMMSCs组、LV-BMMSCs组,以未转染病毒载体的细胞为空白组.将3组细胞分别接种于6孔板内,加入膜片诱导液培养6 d,镜下观察膜片形态.膜片形成后更换为成骨诱导液培养,培养3,7,14 d时,采用RT-PCR检测miR-378a、成骨基因RUNX2、Ⅰ型胶原蛋白及成血管基因血管内皮生长因子、血小板生长因子mRNA的表达;培养14 d时,采用Western blot法检测RUNX2、血管内皮生长因子蛋白表达.结果与结论:①成膜诱导第2天,LV-miR-378a-BMMSCs组、LV-BMMSCs组镜下均可见膜片中央梭形细胞间有少量基质相连,膜片边缘呈毛边状褶皱,不连续;第6天时,膜片中央细胞重叠密集,大量细胞基质网状交叉相连,膜片边缘呈连续且增宽的褶皱并向中央卷起,与空白组形态变化无明显差异;②LV-miR-378a-BMMSCs组各时间点的miR-378a、RUNX2、Ⅰ型胶原蛋白、血管内皮生长因子、血小板生长因子的mRNA表达均高于LV-BMMSCs组、空白组(P<0.001),RUNX2、血管内皮生长因子蛋白表达均高于LV-BMMSCs组(P<0.001)、空白组(P<0.01);③结果表明,过表达miR-378a基因可促进骨髓间充质干细胞膜片的体外成骨与成血管能力.

目的 探讨血清miR?199a?5p、miR?378a?3p水平与婴幼儿增殖期面部血管瘤普萘洛尔停药后复发的关系.方法 增殖期面部血管瘤患儿93例,均接受普萘洛尔治疗,随访治疗后血管瘤复发情况,并将患儿分为复发组(23例)和无复发组(70例).治疗前、后采集静脉血,qRT?PCR检测血清miR?199a?5p、miR?378a?3p表达,分析血清miR?199a?5p、miR?378a?3p表达与增殖期面部血管瘤婴幼儿普萘洛尔停药后复发的关系.结果 无复发组治疗后血清miR?199a?5p、miR?378a?3p表达较治疗前增高(P<0.05),复发组治疗后血清miR?199a?5p、miR?378a?3p表达与治疗前比较差异无统计学意义(P>0.05).复发组治疗后血清miR?199a?5p、miR?378a?3p表达低于无复发组(P<0.05).治疗后瘤体分级Ⅲ～Ⅳ级患儿血清miR?199a?5p、miR?378a?3p表达高于Ⅰ～Ⅱ级患儿(P<0.05).Logistic回归分析结果显示miR?199a?5p低表达、miR?378a?3p低表达、治疗后瘤体分级Ⅰ～Ⅱ级是增殖期面部血管瘤婴幼儿普萘洛尔停药后复发的危险因素(P<0.05).结论 血清miR?199a?5p、miR?378a?3p低表达与增殖期面部血管瘤婴幼儿普萘洛尔停药后血管瘤复发有关.