目的:探究高迁移率蛋白A2基因(HMGA2)调控微小RNA(miRNA，miR)-497-5p对膀胱癌细胞增殖和侵袭的机制。方法:实时荧光定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)和免疫印迹实验(Western blot)测定5种膀胱癌细胞系、膀胱永生化上皮细胞SV-HUC-1和正常膀胱尿路上皮细胞中的HMGA2表达。构建HMGA2过表达和si-HMGA2质粒转染EJ细胞，不做任何处理作为对照，检测各组EJ细胞miR-497-5p和p65、p-p65表达水平。EJ细胞转染不同质粒后，克隆形成实验检测增殖能力，Transwell实验测定侵袭能力。两组间比较采用独立样本 t检验。 结果:5种膀胱癌细胞系的HMGA2表达(10.31±0.86、138.38±19.32、34.55±3.95、10.88±0.56、220.55±15.32)高于SV-HUC-1(2.02±0.32， t＝15.648、12.223、14.218、23.793、24.701， P<0.01)。HMGA2组克隆数和侵袭细胞个数[(254.33±7.64)、(380.67±7.10个)]高于Blank组[(170.67±14.79)、(267±11.37)个， t＝9.768、17.168， P<0.01]；miR-497-5p mimic组克隆数和侵袭细胞个数[(174.00±1.73)、(109±3.46)个]低于miR-NC组[(189.00±7.55)、(219.00±16.64)个， t＝3.354、11.207， P<0.01)]；si-HMGA2+miR-497-5p inhibitor组克隆数和侵袭细胞个数[(203.00±13.08)、(305.00±3.46)个]高于si-HMGA2组[(138.67±19.04)、(170.33±24.99)个， t＝4.825、9.247， P<0.01]。HMGA2转染组p-p65/p65水平的比值(254.33±7.64)高于对照组(254.33±7.64， t＝18.557， P<0.01)。 结论:HMGA2基因负向调控miR-497-5p促进膀胱癌细胞的增殖和侵袭。

目的:探讨miR-497对糖尿病小鼠角膜上皮愈合的抑制作用及其可能机制。方法:取40只健康清洁级野生型C57BL/J6小鼠，采用随机数字表法平均分为空白对照组和模型对照组，另取CRISPR/Cas9介导的miR-497敲除小鼠和miR-497过表达小鼠各20只，分别作为miR-497敲除组和miR-497过表达组。对模型对照组、miR-497敲除组、miR-497过表达组小鼠连续腹腔注射链脲佐菌素(STZ)构建糖尿病模型，空白对照组小鼠注射等量枸橼酸钠缓冲液，正常饲养8周。糖尿病模型建立成功后通过刮除角膜中央直径2 mm上皮，进一步构建角膜上皮损伤模型。采用角膜荧光素钠染色观察角膜上皮损伤后0、12、24和36 h各组小鼠角膜上皮缺损面积。采用Western blot法检测各组小鼠角膜组织中wnt3a、β-catenin蛋白表达；采用实时荧光定量PCR法检测各组小鼠角膜组织miR-497以及细胞增生相关基因 CyclinD1、 c-Myc、 Ki-67 mRNA水平表达。采用双荧光素酶报告基因实验检测miR-497与wnt3a的靶向性关系。体外培养人角膜上皮细胞(HCEC)，通过Lipo8000分别转染miR-497 mimics、miR-497 mimics阴性对照、miR-497 inhibitor、miR-497 inhibitor阴性对照，作为miR-497 mimics组、mimics阴性对照组、miR-497 inhibitor组、inhibitor阴性对照组，并在含25%葡萄糖的高糖培养基中培养；另取2个组HCEC分别置于含5%及25%葡萄糖的培养基进行培养，作为正常对照组及高糖组。采用CCK8检测各组细胞增生活力。 结果:注射STZ后8周，各糖尿病模型组小鼠血糖浓度明显高于空白对照组，体质量明显低于空白对照组，差异均有统计学意义(均 P<0.05)。模型对照组损伤角膜上皮后12、24和36 h角膜上皮缺损面积百分比明显高于相应时间点空白对照组和miR-497敲除组，低于miR-497过表达组，差异均有统计学意义(均 P<0.05)。模型对照组角膜组织中wnt3a、β-catenin蛋白相对表达量明显低于空白对照组和miR-497敲除组，高于miR-497过表达组，差异均有统计学意义(均 P<0.05)。模型对照组CyclinD1、c-Myc和Ki-67 mRNA相对表达量均低于miR-497敲除组，高于miR-497过表达组，差异均有统计学意义(均 P<0.05)。模型对照组、miR-497敲除组和miR-497过表达组miR-497相对表达量分别为1.00±0.02、0.63±0.06和1.48±0.03，总体比较差异均有统计学意义( F＝19.62， P<0.01)。野生型Wnt3a转染细胞中miR-497-5p mimics组荧光素酶活性低于miR-497-5p阴性对照组和空载体组，差异均有统计学意义(均 P<0.05)；突变型wnt3a转染细胞中，各组荧光素酶活性比较差异无统计学意义( F＝0.73， P＝0.59)。高糖组细胞增生 A值为0.59±0.03，明显低于正常对照组的0.59±0.03和miR-497 inhibitor组的0.88±0.08，明显高于miR-497 mimics组的0.48±0.11，差异均有统计学意义(均 P<0.05)。 结论:沉默miR-497表达可能通过靶向激活wnt/β-catenin通路促进糖尿病小鼠角膜上皮缺损修复。

目的 检测妊娠期糖尿病(GDM)患者血清微小RNA(miR)-142-3p、miR-497-5p表达水平,分析其对GDM的诊断价值.方法 选取2019年6月-2022年6月在河南中医药大学第五临床医学院妇产科行产前检查的142例GDM孕妇作为GDM组,另外随机选择一般资料与GDM组匹配的142名正常糖耐量孕妇作为对照组.比较两组孕妇血清miR-142-3p、miR-497-5p水平,使用受试者工作特征(ROC)曲线分析血清miR-142-3p、miR-497-5p水平对孕妇发生GDM的评估价值.结果 与对照组比较,GDM组患者miR-142-3p水平、有糖尿病史占比、经产妇占比、空腹血糖(FPG)、餐后2h血糖(2hPG)、空腹胰岛素(FINS)、糖化血红蛋白(HbA1c)、胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)升高,血清miR-497-5p水平显著降低,差异均有统计学意义(t=8.303、6.818、9.551、8.781、9.054、6.464、9.475、11.671、7.883,P均＜0.05).miR-142-3p、miR-497-5p联合检测预测孕妇发生GDM的ROC曲线下面积(AUC)为0.838,敏感性为73.24％,特异性为82.39％,优于各自单独诊断(Z=4.379、3.170,P均＜0.01).结论 GDM患者血清miR-142-3p表达显著上调、miR-497-5p表达显著下调,二者联合对孕妇是否发生GDM有较好的预测价值.

目的:研究慢性阻塞性肺疾病(COPD)合并肺癌患者血清长链非编码核糖核酸-人浆细胞瘤转化迁移基因1(LncR-NA-PVT1)、微小核糖核酸-497-5p(miR-497-5p)表达与肺功能和预后的关系.方法:选择临沂市肿瘤医院2018年3月-2020年3月收治的116例COPD合并肺癌并行手术治疗的患者纳入观察组,同期单纯COPD患者50例纳入对照组.比较两组血清LncRNA-PVT1、miR-497-5p相对表达水平以及肺功能指标[第1秒用力呼气容积(FEV1)、用力肺活量(FVC)、FEV1/FVC、第1秒用力呼气容积占预计值百分比(FEV1％pred)].采用Pearson检验分析COPD合并肺癌患者血清LncRNA-PVT1、miR-497-5p表达与肺功能指标的相关性.COPD合并肺癌患者术后进行3年随访,采用多因素Cox回归模型分析COPD合并肺癌患者预后影响因素.绘制Kaplan-Meier生存曲线分析LncRNA-PVT1、miR-497-5p低表达和高表达患者3年总生存率情况.结果:与对照组比较,观察组血清LncRNA-PVT1表达水平显著升高(P＜0.05),miR-497-5p表达水平显著降低(P＜0.05).与对照组比较,观察组FEV1、FEV1％pred、FEV1/FVC 显著降低(P＜0.05)o Pearson 检验结果显示,COPD 合并肺癌患者血清 LncRNA-PVT1 与 FEV1、FEV1％pred、FEV1/FVC 呈负相关(P＜0.05);血清 miR-497-5p 与 FEV1、FEV1％pred、FEV1/FVC 呈正相关(P＜0.05)o Kplan-Meier 生存曲线显示,LncRNA-PVT1高表达组3年总生存率为29.23％明显低于LncRNA-PVT1低表达组的47.73％(P＜0.05);miR-497-5p高表达组3年总生存率为46.77％明显高于miR-497-5p低表达组的23.40％(P＜0.05).多因素Cox回归分析显示,淋巴结转移、TNM分期Ⅲa期、肿瘤组织低分化、LncRNA-PVT1高表达、miR-497-5p低表达是COPD合并肺癌患者预后的危险因素(P＜0.05).结论:COPD合并肺癌患者血清中LncRNA-PVT1呈高表达、miR-497-5p呈低表达,其表达水平与肺功能指标相关,且LncRNA-PVT1表达水平越高、miR-497-5p表达水平越低者的3年总生存率越低.

目的:探究长非编码RNA(long non-coding RNA,LncRNA)GA结合蛋白转录因子β亚基 1的反义RNA(antisense RNA of GA binding protein transcription factor β subunit 1,GABPB1-AS1)靶向微小 RNA-497-5p/热休克蛋白 8(microRNA-497-5p/heat shock protein 8,miR-497-5p/HSPA8)轴调控急性髓系白血病(acute myeloid leukemia,AML)细胞增殖、侵袭迁移及凋亡的作用和机制.方法:HL-60细胞分为正常对照组、si-NC组、si-GABPB1-AS1组、si-GABPB1-AS1+NC inhibitor组、si-GABPB1-AS1+miR-497-5p inhibitor组.qRT-PCR检测LncRNA GABPB1-AS1、miR-497-5p和HSPA8表达;双荧光素酶报告基因实验验证LncRNA GABPB1-AS1、miR-497-5p和HSPA8的靶向关系;MTT检测细胞活力;Edu检测细胞增殖;Transwell小室实验检测侵袭和迁移;流式细胞仪检测细胞凋亡;Western blot检测增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)、HSPA8、肿瘤转移相关蛋白 2(metastasis-associated proteins,MTA2)、酵母Atg6同系物(homolog of yeast Atg6,Beclin-1)和Caspase-3蛋白水平;建立小鼠移植瘤模型验证LncRNA GABPB1-AS1对AML移植瘤生长的影响.结果:与人骨髓单核细胞相比,不同AML细胞系 THP-1、NB4、U-937、HL-60中 LncRNA GABPB1-AS1高表达[(1.29±0.10)、(1.58±0.12)、(2.02±0.17)、(3.17±0.24)vs.(1.02±0.07)]、miR-497-5p低表达[(0.94±0.07)、(0.75±0.03)、(0.57±0.03)、(0.25±0.01)vs.(1.05±0.09)].由于HL-60细胞中LncRNA GABPB1-AS1表达最高,故选择该细胞系进行功能验证实验.敲低LncRNA GABPB1-AS1能降低HL-60细胞活力、Edu阳性率、细胞侵袭数、迁移数、HSPA8 mRNA及HSPA8、PCNA和MTA2蛋白表达,增加凋亡率、miR-497-5p及Caspase-3和Beclin-1蛋白表达(P<0.05).miR-497-5p与LncRNA GABPB1-AS1、HSPA8之间分别存在靶向关系;抑制miR-497-5p表达能逆转LncRNA GABPB1-AS1敲低对HL-60细胞恶性生物学行为的抑制作用;抑制LncRNA GABPB1-AS1表达可抑制移植瘤生长.结论:LncRNA GABPB1-AS1敲低对AML细胞进展抑制作用,可能与上调miR-497-5p表达,下调HSPA8表达有关.

目的:探讨长链非编码RNA(lncRNA)RP11-497E19.1对胃癌细胞增殖和侵袭的影响及其机制.方法:实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测胃癌HS-746T、BGC823、NCI-N87、SGC7901、AGS细胞和永生化胃上皮细胞GES-1中RP11-497E19.1表达水平,筛选表达最高的细胞进行后续实验.将HS-746T细胞分为si-NC组和si-RP11-497E19.1组,分别转染阴性对照寡核苷酸或RP11-497E19.1小干扰RNA.集落形成实验和Transwell实验分析转染HS-746T细胞的增殖、侵袭能力.双荧光素酶报告基因实验验证RP11-497E19.1与微小RNA(miR)-545-5p的靶向关系.RT-qPCR检测转染HS-746T细胞miR-545-5p的表达.Western blot检测转染HS-746T细胞间质表皮转化因子(c-Met)/胆绿素还原酶(BVR)/活化复制因子2(ATF-2)分子通路相关蛋白的表达.结果:与GES-1 细胞比较,HS-746T、BGC823、NCI-N87、SGC7901、AGS 细胞中 RP11-497E19.1 表达水平均上升,且HS-746T细胞 RP11-497E19.1 表达水平最高(均 P＜0.05).与 si-NC 组比较,si-RP11-497E19.1 组 HS-746T 细胞活力和细胞侵袭数降低(均P＜0.05).双荧光素酶报告基因实验证实RP11-497E19.1靶向结合miR-545-5p,可负向调控 miR-545-5p 表达(P＜0.05).与 si-NC 组比较,si-RP11-497E19.1 组 HS-746T 细胞 c-Met/BVR/ATF-2 分子通路蛋白c-Met、BVR、p-ATF-2、锌指蛋白1(Snail1)、锌指蛋白2(Snail2)表达降低(均P＜0.05).结论:胃癌细胞中RP11-497E19.1呈高表达,沉默RP11-497E19.1通过靶向miR-545-5p/c-Met/BVR/ATF-2分子通路抑制胃癌HS-746T细胞的增殖及侵袭.

目的 探究2型糖尿病(type 2 diabetes mellitus,T2DM)患者血清微小RNA-103a(miR-103a),微小RNA-497(miR-497)水平表达与微血管病变(micro vascular disease,MVD)发生的相关性.方法 选取2022年5月～2023年4月在唐山市协和医院确诊的T2DM患者作为研究组(n=113),根据是否并发MVD分为2型糖尿病微血管病变(type 2 diabetes microangiopathy,DMAP)组(n=51)和 T2DM(n=62)组,选取同期体检健康人员作为对照组(n=105).收集患者临床资料,实时荧光聚合酶链反应(real-time fluorescence polymerase chain reaction,qRT-PCR)检测血清miR-103a和miR-497水平,采用Logistic回归分析T2DM并发MVD的影响因素,绘制受试者工作特征(receiver operating characteristic,ROC)曲线分析血清miR-103a和miR-497水平对T2DM并发MVD的诊断价值.结果 研究组血清miR-103a(0.62±0.13)和 miR-497(0.79±0.14)水平显著低于对照组(0.96±0.16,1.03±0.18),差异具有统计学意义(t=17.273,11.031,均 P＜0.05).DMAP 组血清 miR-103a(0.53±0.08)和 miR-497(0.69±0.10)水平显著低于 T2DM 组(0.69±0.10,0.87±0.13),差异具有统计学意义(t=9.247,8.108,均 P＜0.05).DMAP 组病程≥ 8 年、并发高血脂患者比例、空腹血糖(FBG)、总胆固醇(TC)、血肌酐(Scr)和尿素氮(BUN)水平显著高于T2DM组,差异具有统计学意义(t/x2=8.294,15.342,-2.855,-5.659,-8.951,-3.880,均 P＜0.05).血清 miR-103a,miR-497及二者联合诊断T2DM并发MVD的曲线下面积(area under curve,AUC)分别为0.899,0.897和0.970,二者联合诊断效果优于各自单独诊断(Z=2.268,2.267,均P＜0.05).Logistic多因素回归分析结果显示FBG(OR=1.879,95％CI:1.262～2.797),TC(OR=2.141,95％CI:1.348～3.400)和 Scr(OR=3.417,95％CI:1.569～7.440)是 T2DM并发 MVD 的独立风险因素(均 P＜0.05),miR-103a(OR=0.784,95％CI:0.648～0.948)和 miR-497(OR=0.839,95％CI:0.750～0.938)是T2DM并发MVD的保护因素(均P＜0.05).结论 T2DM并发MVD患者血清miR-103a和miR-497低表达,其可能成为诊断T2DM并发MVD的潜在标志物.

目的 探讨 miR-497-5p 在肝细胞癌组织中的表达水平及其对肝癌细胞增殖的影响.方法 (1)选取46 例肝细胞癌患者的肝细胞癌组织和癌旁组织,以及正常肝细胞株(THLE-3 细胞)、人肝癌细胞株(SMCC7721 细胞、MHCC97H细胞、LM3 细胞、HepG2 细胞、Hep3B细胞),检测miR-497-5p表达水平;取上述组织,检测胰岛素样生长因子1 受体(IGF-1R)mRNA表达水平.比较不同miR-497-5p表达水平的肝细胞癌患者的临床病理特征.(2)将LM3 细胞和HepG2 细胞分为阴性对照组、miR-497-5p模拟物组和miR-497-5p+IGF-1R组进行实验.将miR-497-5p对照物、miR-497-5p模拟物分别转染至阴性对照组、miR-497-5p模拟物组细胞,将过表达IGF-1R慢病毒、miR-497-5p模拟物先后转染至miR-497-5p+IGF-1R组细胞.转染后48 h,检测3 组细胞增殖情况,以及阴性对照组、miR-497-5p模拟物组细胞的IGF-1R mRNA表达水平.(3)应用TargetScan在线预测软件和双荧光素酶报告实验分析miR-497-5p与IGF-1R的关系.分析肝细胞癌组织中miR-497-5p表达水平与IFG-1R mRNA表达水平的相关性.结果 (1)肝细胞癌组织中miR-497-5p表达水平低于癌旁组织,且各人肝癌细胞株的miR-497-5p表达水平均低于正常肝细胞株(均P<0.05).相比于miR-497-5p高表达组,低表达组肿瘤大小>5cm 的患者比例、静脉侵犯的患者比例、TNM 分期为Ⅱ～Ⅲ期的患者比例更高(均P<0.05).(2)miR-497-5p模拟物组LM3 细胞培养 48 h、72 h、96 h后的吸光度值均小于阴性对照组,HepG2 细胞培养24 h、48 h、72 h、96 h后的吸光度值均小于阴性对照组(均P<0.05).无论是LM3 细胞还是HepG2 细胞,miR-497-5p模拟物组的IGF-1R mRNA表达水平均低于阴性对照组(均P<0.05).miR-497-5p+IGF-1R 组LM3 细胞培养48 h、72 h、96 h后的吸光度值均大于miR-497-5p模拟物组,miR-497-5p+IGF-1R组HepG2 细胞培养72 h、96 h后的吸光度值均大于miR-497-5p模拟物组(均P<0.05).(3)生物信息学预测和双荧光素酶报告实验结果提示IGF-1R是miR-497-5p的直接作用靶基因.肝细胞癌组织中IGF-1R mRNA表达水平高于癌旁组织,且与miR-497-5p表达水平呈负相关(均P<0.05).结论 miR-497-5p在肝细胞癌组织和人肝癌细胞系中表达下调,过表达miR-497-5p可以抑制肝癌细胞的增殖能力.miR-497-5p可能通过靶向调节IGF-1R抑制肝癌细胞的增殖,miR-497-5p可能是一种潜在的治疗肝癌的新靶点.

目的 血管新生在肿瘤、糖尿病等血管异常增生性疾病和冠心病、心肌梗死、脑梗死等缺血性心脑血管病的发生、发展及治疗中具有重要作用.微小RNA(miRNAs)与血管新生之间联系紧密,miRNAs对血管新生的作用包括促进血管新生和抑制血管新生两个方面,促进血管新生的miRNAs包括miR-126、miR-378、miR-132、miR-146a、miRNA-31、miR-425-5p、let-7f等,抑制血管新生的miRNAs包括miR-195、miR-140-5p、miR-150、miR-497、miR-214、miR-221/miR-222、miR-29b、miR-29c等.miRNAs在血管新生信号通路上具有同时调控多个基因的潜力,并且体积小、物种间序列保守性强、相对稳定,可作为一种很有前景的调控血管新生的治疗靶点.

目的 观察微小RNA(miRNA,miR)-497在膀胱癌细胞株中的表达,探讨miR-497对膀胱癌上皮-间充质转化(EMT)过程的影响.方法 采用实时定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测miR-497在膀胱细胞株和正常膀胱黏膜组织中的表达.将miR-497 mimics/inhibitor分别瞬时转染至膀胱癌EJ细胞中,通过显微镜细胞形态学观察、细胞划痕实验、Transwell侵袭实验,分析过表达或下调内源性miR-497的表达对EJ细胞形态、迁移和侵袭的影响;Western blot法检测EMT标志物相关蛋白表达的变化.结果 与膀胱永生化上皮细胞(SV-HUC-1),miR-497在5株膀胱癌细胞株中均呈低表达状态(P =0.000).过表达miR-497后,EJ细胞表现为上皮样细胞形态,EJ细胞的迁移率为(25.33 ±6.11)％,较其阴性对照组(74.00±3.61)％降低2.96倍,侵袭细胞个数为(109 ±3)个,较其阴性对照组[(219±17)个]降低2倍;而抑制miR-497表达后,EJ细胞表现为间质样细胞形态,EJ细胞的迁移率为(74.00±3.61)％,较其阴性对照组[(51.33±6.51)％]增加1.45倍,侵袭细胞个数为(320±14)个,较其阴性对照组[(248±16)个]增加1.29倍.Westem blot结果显示:与阴性对照组比较,过表达miR-497可使EJ细胞的E-钙黏素(E-cadherin)表达增加(P =0.000),N-钙黏素(N-cadherin)和波形蛋白(Vimentin)表达减少(P=0.001,P=0.000).结论 miR-497可能参与膀胱癌EMT过程的调节.