目的:研究长链非编码RNA(LncRNA)肺癌相关转录产物1(LUCAT1)靶向微小RNA(miR)-502-5p对人视网膜母细胞瘤(RB)细胞增生、迁移和侵袭的影响。方法:收集2019年5月至2021年1月在河南省立眼科医院确诊并行眼球摘除术的27例RB患者的RB组织样本，正常视网膜组织标本(12例眼球破裂伤、7例眼球萎缩、8例眼球穿通伤合并有色素膜嵌顿)取自同期在河南省立眼科医院行眼球摘除术的27例患者。采用实时荧光定量PCR检测LncRNA LUCAT1和miR-502-5p在RB组织、细胞系(Y-79、WERI-Rb-1、HXO-RB44)及人视网膜上皮细胞(ARPE-19)中的表达。将RB细胞Y-79分为对照组、小干扰RNA(si)-LncRNA LUCAT1组、si-对照(con)组、pcDNA组、pcDNA-LncRNA LUCAT1组、miR-con组、miR-502-5p组、si-LncRNA LUCAT1+anti-miR-con组和si-LncRNA LUCAT1+anti-miR-502-5p组，分别转染相应试剂。采用Western blot法检测MMP2和MMP9蛋白表达；采用细胞计数试剂盒8法检测细胞增生活力；采用克隆形成实验检测细胞增生能力；采用Transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力。采用双荧光素酶报告实验和实时荧光定量PCR验证LncRNA LUCAT1对miR-502-5p的靶向调控作用。结果:RB组织中LncRNA LUCAT1表达量为2.73±0.34，明显高于正常视网膜组织的1.00±0.15；miR-502-5p表达量为0.42±0.06，明显低于正常视网膜组织的1.00±0.13，差异均有统计学意义( t＝24.190、21.049，均 P<0.001)。人RB细胞系Y-79、WERI-Rb-1和HXO-RB44中LncRNA LUCAT1表达水平明显高于ARPE-19细胞，miR-502-5p表达水平明显低于ARPE-19细胞，差异均有统计学意义(均 P<0.05)。si-LncRNA LUCAT1组LncRNA LUCAT1表达量，MMP2、MMP9蛋白相对表达量，吸光度( A)值，细胞增生、迁移、侵袭数量较对照组均明显减少，差异均有统计学意义(均 P<0.05)。miR-502-5p组miR-502-5p表达量高于miR-con组，MMP2、MMP9蛋白相对表达量，细胞活力 A值，细胞增生、迁移、侵袭数量少于miR-con组，差异均有统计学意义( t＝20.274、14.884、14.181、12.692、17.749、20.889、21.913，均 P<0.001)。si-LncRNA LUCAT1+anti-miR-502-5p组miR-502-5p表达量低于si-LncRNA LUCAT1+anti-miR-con组，MMP2、MMP9蛋白相对表达量，细胞活力 A值，细胞增生、迁移、侵袭数量高于si-LncRNA LUCAT1+anti-miR-con组，差异均有统计学意义( t＝14.097、15.839、15.757、11.860、16.235、16.565、16.487，均 P<0.001)。与LncRNA LUCAT1-野生型共转染时，miR-502-5p组相对荧光素酶活性值低于miR-con组，差异有统计学意义( t＝16.379， P<0.001)。pcDNA-LncRNA LUCAT1组LncRNA LUCAT1表达量高于pcDNA组，miR-502-5p表达量低于pcDNA组，si-LncRNA LUCAT1组LncRNA LUCAT1表达量低于si-con组，miR-502-5p表达量高于si-con组，差异均有统计学意义(均 P<0.05)。 结论:抑制LncRNA LUCAT1表达通过靶向上调miR-502-5p可减弱人RB细胞的增生、迁移和侵袭能力。

目的 探讨连翘脂苷A是否通过微小RNA-502-3p(miR-502-3p)/细胞分裂周期相关蛋白5(CDCA5)通路调控结肠癌细胞HCT 116增殖、迁移和侵袭.方法 将对数期的HCT 116细胞用80、160、320 mg/L连翘脂苷A处理,分别记为低剂量组、中剂量组、高剂量组,同时将未处理的细胞设为对照(NC)组.将正常人正常结肠上皮NCM460细胞用320 mg/L连翘脂苷A处理,计为NCM460高剂量组,将未处理的细胞设为对照,计为NCM460组.48 h后收集HCT 116细胞、进行增殖、迁移、侵袭、基质金属蛋白酶(MMP)2、MMP9、CDCA5蛋白表达和miR-502-3p表达测定,收集NCM460细胞进行增殖、迁移、侵袭测定.根据转染靶标将HCT 116细胞分为NC组(未行转染)、si-NC组(转染 si-NC)、si-CDCA5 组(转染 si-CDCA5)、miR-NC 组(转染 miR-NC)、miR-502-3p 组(转染 miR-502-3p)、anti-miR-NC 组(转染 anti-miR-NC)、anti-miR-502-3p 组(转染 anti-miR-502-3p)、anti-miR-NC+高剂量组(转染 anti-miR-NC+320 mg/L 连翘脂苷 A)、anti-miR-502-3p+高剂量组(转染 anti-miR-502-3p+320 mg/L连翘脂苷A),检测HCT 116细胞的增殖、迁移和侵袭.双荧光素酶活性检测分析miR-502-3p与CDCA5的靶向结合.结果 低、中、高剂量连翘脂苷A作用后结肠癌HCT 116细胞的增殖能力、细胞迁移数量、细胞侵袭数量、MMP2、MMP9、CDCA5蛋白表达量均逐渐降低,miR-502-3p表达量逐渐升高,呈剂量依赖性,差异均有统计学意义(P＜0.05).NCM460组与NCM460高剂量组的NCM460细胞增殖、迁移及侵袭数量比较,差异无统计学意义(P＞0.05).CDCA5低表达或miR-502-3p高表达可减弱HCT 116细胞MMP2及MMP9蛋白表达、细胞增殖、迁移及侵袭能力,差异均有统计学意义(P＜0.05),而miR-502-3p低表达的结果相反.miR-502-3p靶向调控CDCA5的表达.连翘脂苷A抑制HCT 116细胞CDCA5、MMP2、MMP9蛋白表达、增殖能力、细胞迁移和细胞侵袭的作用被miR-502-3p低表达所逆转.结论 连翘脂苷A通过上调miR-502-3p靶向调控CDCA5的表达,抑制结肠癌细胞HCT 116细胞的增殖、迁移和侵袭.

目的:通过生物信息学与网络药理学方法探求麦门冬汤治疗特发性肺纤维化(idiopathic pulmonary fibrosis,IPF)的微小RNA和相关作用机制.方法:通过在线数据库查检麦门冬汤的有效活性成分及其相关靶基因与IPF的疾病靶点,GEO数据库下载GSE53845基因芯片,筛选GSE53845与疾病共同表达的基因.取药物和疾病交集靶点上传至miRNA在线数据库预测关键基因靶点相关微小RNA,运用DAVID数据库对关键靶基因进行GO和KEGG分析,采用iGEMDOCK进行分子对接分析,结合相关文献分析麦门冬汤防治IPF的作用机制.结果:麦门冬汤共含有502个活性化合物及1039个预测靶点;43个共同表达的IPF疾病基因靶点;关键靶点MMP3与化合物β-胡萝卜素结合性能最佳.结论:麦门冬汤主要通过miR-29家族、let-7家族、miR-26a-5p等微小RNA调节靶基因,干预IPF进程;主要作用于胶原分解过程、细胞外基质组织、细胞外基质分解等生物学过程;参与NF-κB信号通路、ECM-受体相互作用、TNF信号通路等关键信号通路.

目的:探究微小RNA-502-5p(miR-502-5p)对白细胞介素-1β(IL-1β)诱导的骨关节炎(OA)软骨细胞损伤的影响.方法:Western blot和RT-qPCR检测骨关节炎患者软骨组织和IL-1β诱导的软骨细胞中p53和miR-502-5p的表达;分离培养软骨,并分组处理细胞,分别用MTT法检测细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot检测炎性因子和细胞外基质(ECM)相关蛋白的表达,另外,萤光素酶报告实验检测miR-502-5p对p53及肿瘤坏死因子受体相关因子2(TRAF2)的调控作用.结果:与正常软骨组织相比,OA患者软骨组织中miR-502-5p的水平显著降低,p53和TRAF2水平则明显升高(P<0.05).IL-1β处理软骨细胞后,细胞活力下降、细胞凋亡率增加、IL-6、IL-8和TNF-α的蛋白表达水平显著上升;II型胶原和蛋白聚糖的蛋白表达显著下调,基质金属蛋白酶(MMP)-3、MMP-9和MMP-13等的蛋白表达显著上调,miR-502-5p mimic转染反转了IL-1β对软骨细胞的这些作用.此外,p53与miR-502-5p之间存在负反馈调节,同时miR-502-5p能够靶向抑制TRAF2的水平.TRAF2沉默同样反转了IL-1β对软骨细胞增殖、凋亡、炎症反应以及ECM相关蛋白表达的影响.结论:调节p53/miR-502-5p/TRAF2通路能够减轻IL-1β诱导的骨关节软骨细胞损伤.

目的 探讨循环微小RNA-155(miR-155)和外周血CD4 +调节性T细胞( Treg)在冠心病(CAD)患者的表达水平及与冠状动脉不稳定斑块的关系. 方法 连续入选2016年1月至2018年1月在广州市第一人民医院心内科住院的CAD患者120例,均接受冠状动脉造影和血管内超声检查,通过虚拟组织学技术判断患者冠状动脉内是否具有不稳定斑块,并将患者分为稳定斑块组( SP组)50例和不稳定斑块组(UP组)70例,另外选择同期在体检中心进行健康体检的50名健康者作为对照组.采用实时荧光定量聚合酶链式反应技术测定研究对象的静脉血浆miR-155的相对表达量,并用流式细胞仪采用直接免疫荧光法检测静脉血浆CD4 +CD25 +Foxp3 +Treg细胞占CD4 +Treg细胞的比例. 结果 UP组患者的血浆miR-155 相对表达量显著低于SP组和对照组(0. 57 ± 0. 10 比0. 71 ± 0. 09和0. 83 ± 0. 11,P<0. 05);UP组患者的CD4 +CD25 +Foxp3 +Treg细胞占CD4 +Treg细胞的比例明显低于SP组和对照组(5. 92 ± 1. 34比8. 05 ± 1. 39和12. 68 ± 1. 56,P<0. 01). UP组CAD患者的miR-155相对表达量与CD4 +CD25 +Foxp3 +Treg细胞水平呈正相关(r=0. 476,P=0. 013).多因素logistic回归分析显示,血浆miR-155和CD4 +CD25 +Foxp3 +Treg细胞水平均是CAD患者斑块稳定的独立保护因子(OR=0. 662,95% CI:0. 472~0. 819,P=0. 011;OR=0. 502,95% CI:0. 376~0. 765, P=0. 019). 结论 MiR-155通过调节CD4 +Treg细胞表达和功能,可能是影响冠状动脉斑块稳定性的重要机制之一.

目的 观察微小RNA(miRNA,miR)-502-5p对结肠癌细胞DLD-1功能的影响.方法 选取结肠癌细胞DLD-1分别转染miR-502-5p mimic(5 μl)、control mimic(5μl)、miR-502-5p inhibitor (10μl)与control inhibitor(10μl).实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)检测miR-502-5p的表达;细胞计数试剂盒(CCK-8)实验检测细胞的增殖能力;平板克隆实验检测细胞集落形成能力;Transwell实验检测细胞迁移与侵袭能力.结果 转染miR-502-5p mimic与NC mimic后,DLD-1细胞中miR-502-5p的相对表达量分别为319.31±33.16和1.08±0.22,DLD-1细胞中miR-502-5p提高显著(P＜0.05);转染miR-502-5p inhibitor与NC inhibitor后DLD-1细胞中miR-502-5p的相对表达量分别为0.28 ±0.04和0.99 ±0.11,DLD-1细胞中miR-502-5p显著降低(P＜0.05);转染miR-502-5p mimic后DLD-1细胞的增殖能力:miR-502-5p mimic实验组[(125±9)个]与controlmimic组[(112±14)个]之间差异无统计学意义(P＞0.05),而迁移[(621±90)个比(174±32)个]与侵袭[(531±45)个比(132 ±34)个]能力显著提高(P＜0.05);转染miR-502-5p inhibitor后DLD-1细胞的增殖能力:miR-502-5p inhibitor实验组[(118±22)个]与control inhibitor组[(100±15)个]之间差异无统计学意义(P＞0.05),而迁移[(133±50)个比(543±84)个]与侵袭[(119±45)个比(458 ±57)个]能力显著降低(P＜0.05).结论 miR-502-5p可促进DLD-1细胞的迁移与侵袭能力,但是不影响增殖功能.

目的:探讨miR-502对替莫唑胺化疗敏感性的影响及其作用机制.方法:用200 μmol·L-1的替莫唑胺处理细胞A549作为替莫唑胺组,不作任何处理的细胞作为对照(Con)组;将miR-NC、miR-502、anti-miR-NC、anti-miR-502质粒分别转染至A549细胞中,分别记为miR-NC组、miR-502组、anti-miR-NC组、anti-miR-502组;miR-502转染至A549细胞后再用200 μmol·L-1的替莫唑胺处理作为替莫唑胺+miR-502组;将miR-502质粒分别与pcDNA3.1、pcDNA3.1-ERCC1共转染至A549细胞中再用200 μmol·L-1的替莫唑胺处理,分别记为替莫唑胺+miR-502+ pcDNA3.1组、替莫唑胺+miR-502+pcDNA3.1-ERCC1组;转染均采用脂质体法.实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测miR-502表达水平;蛋白质印迹(Western Blot)法检测p21、细胞周期素D1(CyclinD1)、B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、切除修复交叉互补基因1(ERCC1)表达;四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)检测细胞活性;流式细胞术检测细胞凋亡;双荧光素酶报告实验检测miR-502和ERCC1的靶向关系.结果:与人胚肺成纤维细胞MRC5相比,肺癌细胞A549中miR-502表达水平显著降低.过表达miR-502、替莫唑胺处理以及替莫唑胺处理同时过表达miR-502,肺癌细胞A549中p21、Bax表达水平均显著升高,Cyclin D1、Bcl-2表达水平均显著降低,细胞活性均显著降低,细胞凋亡率均显著升高(P＜0.05).结论:过表达miR-502和替莫唑胺均可抑制细胞A549增殖,促进细胞凋亡,过表达miR-502可增强替莫唑胺对细胞A549增殖抑制和凋亡促进作用,其机制可能与ERCC1有关,将可为提高肺癌化疗效果提供新途径.

目的:探讨环状RNA(circRNA)circ_0000144是否靶向微小RNA(miRNA)-502-5p调控人视网膜母细胞瘤Y79细胞增殖、凋亡、迁移侵袭.方法:将Y79细胞分为si-NC组(转染si-NC)、si-circ_0000144组(转染si-circ_0000144)、miR-NC组(转染miR-NC)、miR-502-5p组(转染miR-502-5p mimic)、pcDNA组(转染pcDNA)、pcDNA-circ_0000144组(转染pcDNA-circ_0000144)、si-circ_0000144+anti-miR-NC组(转染si-circ_0000144+anti-miR-NC)、si-circ_0000144+anti-miR-502-5p组(转染si-circ_0000144+anti-miR-502-5p).实时定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测视网膜母细胞瘤组织和细胞中circ_0000144和miR-502-5p表达,溴化噻唑蓝四氮唑(MTT)检测细胞增殖,免疫印迹实验(western blot)测定细胞核相关抗原Ki-67(Ki-67)、B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9蛋白表达,流式细胞术分析细胞凋亡,Transwell测定细胞迁移、侵袭.生物信息学预测与双荧光素酶报告实验分析circ_0000144是否靶向miR-502-5p.结果:31例视网膜母细胞瘤组织中circ_0000144表达量比瘤旁组织高,miR-502-5p表达量比瘤旁组织低(P<0.05).与si-NC组比较,si-circ_0000144组Y79细胞中circ_0000144表达量、OD值、Ki-67、Bcl-2、MMP-2、MMP-9蛋白表达量、迁移、侵袭细胞数减少,Bax蛋白表达量、凋亡率增加(P<0.05).circ_0000144靶向负调控miR-502-5p的表达.miR-502-5p组较miR-NC组增加Y79细胞凋亡率、Bax蛋白表达量,减少OD值、迁移及侵袭细胞数、Ki-67、Bcl-2、MMP-2、MMP-9蛋白表达量(P<0.05).与si-circ_0000144+anti-miR-NC组比较,si-circ_0000144+anti-miR-502-5p组Y79细胞凋亡率、Bax蛋白表达量降低,OD值、迁移及侵袭细胞数、Ki-67、Bcl-2、MMP-2、MMP-9蛋白表达量升高.结论:视网膜母细胞瘤组织中circ_0000144高表达,通过负调控miR-502-5p抑制其表达降低视网膜母细胞瘤Y79细胞增殖、迁移侵袭,促进凋亡.