目的:研究长链非编码RNA(LncRNA)肺癌相关转录产物1(LUCAT1)靶向微小RNA(miR)-502-5p对人视网膜母细胞瘤(RB)细胞增生、迁移和侵袭的影响。方法:收集2019年5月至2021年1月在河南省立眼科医院确诊并行眼球摘除术的27例RB患者的RB组织样本，正常视网膜组织标本(12例眼球破裂伤、7例眼球萎缩、8例眼球穿通伤合并有色素膜嵌顿)取自同期在河南省立眼科医院行眼球摘除术的27例患者。采用实时荧光定量PCR检测LncRNA LUCAT1和miR-502-5p在RB组织、细胞系(Y-79、WERI-Rb-1、HXO-RB44)及人视网膜上皮细胞(ARPE-19)中的表达。将RB细胞Y-79分为对照组、小干扰RNA(si)-LncRNA LUCAT1组、si-对照(con)组、pcDNA组、pcDNA-LncRNA LUCAT1组、miR-con组、miR-502-5p组、si-LncRNA LUCAT1+anti-miR-con组和si-LncRNA LUCAT1+anti-miR-502-5p组，分别转染相应试剂。采用Western blot法检测MMP2和MMP9蛋白表达；采用细胞计数试剂盒8法检测细胞增生活力；采用克隆形成实验检测细胞增生能力；采用Transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力。采用双荧光素酶报告实验和实时荧光定量PCR验证LncRNA LUCAT1对miR-502-5p的靶向调控作用。结果:RB组织中LncRNA LUCAT1表达量为2.73±0.34，明显高于正常视网膜组织的1.00±0.15；miR-502-5p表达量为0.42±0.06，明显低于正常视网膜组织的1.00±0.13，差异均有统计学意义( t＝24.190、21.049，均 P<0.001)。人RB细胞系Y-79、WERI-Rb-1和HXO-RB44中LncRNA LUCAT1表达水平明显高于ARPE-19细胞，miR-502-5p表达水平明显低于ARPE-19细胞，差异均有统计学意义(均 P<0.05)。si-LncRNA LUCAT1组LncRNA LUCAT1表达量，MMP2、MMP9蛋白相对表达量，吸光度( A)值，细胞增生、迁移、侵袭数量较对照组均明显减少，差异均有统计学意义(均 P<0.05)。miR-502-5p组miR-502-5p表达量高于miR-con组，MMP2、MMP9蛋白相对表达量，细胞活力 A值，细胞增生、迁移、侵袭数量少于miR-con组，差异均有统计学意义( t＝20.274、14.884、14.181、12.692、17.749、20.889、21.913，均 P<0.001)。si-LncRNA LUCAT1+anti-miR-502-5p组miR-502-5p表达量低于si-LncRNA LUCAT1+anti-miR-con组，MMP2、MMP9蛋白相对表达量，细胞活力 A值，细胞增生、迁移、侵袭数量高于si-LncRNA LUCAT1+anti-miR-con组，差异均有统计学意义( t＝14.097、15.839、15.757、11.860、16.235、16.565、16.487，均 P<0.001)。与LncRNA LUCAT1-野生型共转染时，miR-502-5p组相对荧光素酶活性值低于miR-con组，差异有统计学意义( t＝16.379， P<0.001)。pcDNA-LncRNA LUCAT1组LncRNA LUCAT1表达量高于pcDNA组，miR-502-5p表达量低于pcDNA组，si-LncRNA LUCAT1组LncRNA LUCAT1表达量低于si-con组，miR-502-5p表达量高于si-con组，差异均有统计学意义(均 P<0.05)。 结论:抑制LncRNA LUCAT1表达通过靶向上调miR-502-5p可减弱人RB细胞的增生、迁移和侵袭能力。

目的 探讨连翘脂苷A是否通过微小RNA-502-3p(miR-502-3p)/细胞分裂周期相关蛋白5(CDCA5)通路调控结肠癌细胞HCT 116增殖、迁移和侵袭.方法 将对数期的HCT 116细胞用80、160、320 mg/L连翘脂苷A处理,分别记为低剂量组、中剂量组、高剂量组,同时将未处理的细胞设为对照(NC)组.将正常人正常结肠上皮NCM460细胞用320 mg/L连翘脂苷A处理,计为NCM460高剂量组,将未处理的细胞设为对照,计为NCM460组.48 h后收集HCT 116细胞、进行增殖、迁移、侵袭、基质金属蛋白酶(MMP)2、MMP9、CDCA5蛋白表达和miR-502-3p表达测定,收集NCM460细胞进行增殖、迁移、侵袭测定.根据转染靶标将HCT 116细胞分为NC组(未行转染)、si-NC组(转染 si-NC)、si-CDCA5 组(转染 si-CDCA5)、miR-NC 组(转染 miR-NC)、miR-502-3p 组(转染 miR-502-3p)、anti-miR-NC 组(转染 anti-miR-NC)、anti-miR-502-3p 组(转染 anti-miR-502-3p)、anti-miR-NC+高剂量组(转染 anti-miR-NC+320 mg/L 连翘脂苷 A)、anti-miR-502-3p+高剂量组(转染 anti-miR-502-3p+320 mg/L连翘脂苷A),检测HCT 116细胞的增殖、迁移和侵袭.双荧光素酶活性检测分析miR-502-3p与CDCA5的靶向结合.结果 低、中、高剂量连翘脂苷A作用后结肠癌HCT 116细胞的增殖能力、细胞迁移数量、细胞侵袭数量、MMP2、MMP9、CDCA5蛋白表达量均逐渐降低,miR-502-3p表达量逐渐升高,呈剂量依赖性,差异均有统计学意义(P＜0.05).NCM460组与NCM460高剂量组的NCM460细胞增殖、迁移及侵袭数量比较,差异无统计学意义(P＞0.05).CDCA5低表达或miR-502-3p高表达可减弱HCT 116细胞MMP2及MMP9蛋白表达、细胞增殖、迁移及侵袭能力,差异均有统计学意义(P＜0.05),而miR-502-3p低表达的结果相反.miR-502-3p靶向调控CDCA5的表达.连翘脂苷A抑制HCT 116细胞CDCA5、MMP2、MMP9蛋白表达、增殖能力、细胞迁移和细胞侵袭的作用被miR-502-3p低表达所逆转.结论 连翘脂苷A通过上调miR-502-3p靶向调控CDCA5的表达,抑制结肠癌细胞HCT 116细胞的增殖、迁移和侵袭.

目的:通过生物信息学与网络药理学方法探求麦门冬汤治疗特发性肺纤维化(idiopathic pulmonary fibrosis,IPF)的微小RNA和相关作用机制.方法:通过在线数据库查检麦门冬汤的有效活性成分及其相关靶基因与IPF的疾病靶点,GEO数据库下载GSE53845基因芯片,筛选GSE53845与疾病共同表达的基因.取药物和疾病交集靶点上传至miRNA在线数据库预测关键基因靶点相关微小RNA,运用DAVID数据库对关键靶基因进行GO和KEGG分析,采用iGEMDOCK进行分子对接分析,结合相关文献分析麦门冬汤防治IPF的作用机制.结果:麦门冬汤共含有502个活性化合物及1039个预测靶点;43个共同表达的IPF疾病基因靶点;关键靶点MMP3与化合物β-胡萝卜素结合性能最佳.结论:麦门冬汤主要通过miR-29家族、let-7家族、miR-26a-5p等微小RNA调节靶基因,干预IPF进程;主要作用于胶原分解过程、细胞外基质组织、细胞外基质分解等生物学过程;参与NF-κB信号通路、ECM-受体相互作用、TNF信号通路等关键信号通路.

目的 通过观察异体输血对创伤性失血患者外泌体miRNA的差异表达,筛选出差异表达的外泌体miRNA,为后续靶基因和通路的研究奠定基础.方法 分别采集外伤患者在输异体血前和输血后外周血标本各3例,通过对血浆标本分离收获后的外泌体miRNA高通量测序,分析比较输血前后两组外泌体miRNA差异表达情况,同时以荧光定量PCR法进一步验证差异基因表达情况.结果 通过高通量测序分析,共测序到1 570个miRNA存在差异表达,实验组比较对照组,上调的有1 189个,下调的有381个,以倍数变化Fold change≥2.0,P-value ≤0.05作为差异miRNA筛选的阈值,筛选出显著变化的差异表达miRNA有 14个,其中显著上调的miRNA有5个,分别为miR-499a-5p、miR-200a-3p、miR-372-3p、miR-novel-chr12_5583、miR-novel-chr22_24253;显著下调的miRNA有9个,分别为miR-6852-5p、miR-452-5p、miR-1287-5p、miR-204-3p、miR-375-3p、miR-502-3p、miR-345-5p、miR-novel-chr7_38986、miR-451a.结论 输注同种异体血液对创伤性失血患者的外泌体miRNA存在差异表达.其发生机制可能通过不同信号通路对患者机体免疫系统调节产生影响.然而,对患者机体免疫调节程度、与肿瘤的相关性有待于扩大样本量进一步研究.

目的 探讨增加miR-502表达对大肠癌细胞功能的影响.方法 将大肠癌细胞HCT116分为实验组、对照组.实验组细胞转染miR-502 mimics,对照组未转染miR-502mimics,采用MTT方法检测miR-502对HCT116增殖的影响;平板克隆形成实验观察转染miR-502后HCT116细胞集落形成情况,Transwell实验检测miR-502对大肠癌细胞迁移和侵袭的影响.结果 MTT实验结果显示,与对照组相比,转染miR-502 mimics的HCT116第1～5天的吸光度值减低,差异有统计学意义(P＜0.001).在HCT116细胞的克隆实验中,实验组和对照组间细胞集落数差异有统计学意义(P＜0.001),实验组细胞集落形成数量较对照组少,集落体积明显小于对照组.Transwell实验结果显示,与对照组相比,转染miR-502 mimics后,HCT116细胞的迁移及侵袭能力明显下降(P ＜0.001).结论 miR-502表达上调可抑制HCT116生长、迁移及侵袭能力,miR-502有潜在抑癌作用.

目的:探究微小RNA-502-5p(miR-502-5p)对白细胞介素-1β(IL-1β)诱导的骨关节炎(OA)软骨细胞损伤的影响.方法:Western blot和RT-qPCR检测骨关节炎患者软骨组织和IL-1β诱导的软骨细胞中p53和miR-502-5p的表达;分离培养软骨,并分组处理细胞,分别用MTT法检测细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot检测炎性因子和细胞外基质(ECM)相关蛋白的表达,另外,萤光素酶报告实验检测miR-502-5p对p53及肿瘤坏死因子受体相关因子2(TRAF2)的调控作用.结果:与正常软骨组织相比,OA患者软骨组织中miR-502-5p的水平显著降低,p53和TRAF2水平则明显升高(P<0.05).IL-1β处理软骨细胞后,细胞活力下降、细胞凋亡率增加、IL-6、IL-8和TNF-α的蛋白表达水平显著上升;II型胶原和蛋白聚糖的蛋白表达显著下调,基质金属蛋白酶(MMP)-3、MMP-9和MMP-13等的蛋白表达显著上调,miR-502-5p mimic转染反转了IL-1β对软骨细胞的这些作用.此外,p53与miR-502-5p之间存在负反馈调节,同时miR-502-5p能够靶向抑制TRAF2的水平.TRAF2沉默同样反转了IL-1β对软骨细胞增殖、凋亡、炎症反应以及ECM相关蛋白表达的影响.结论:调节p53/miR-502-5p/TRAF2通路能够减轻IL-1β诱导的骨关节软骨细胞损伤.

目的 探讨循环微小RNA-155(miR-155)和外周血CD4 +调节性T细胞( Treg)在冠心病(CAD)患者的表达水平及与冠状动脉不稳定斑块的关系. 方法 连续入选2016年1月至2018年1月在广州市第一人民医院心内科住院的CAD患者120例,均接受冠状动脉造影和血管内超声检查,通过虚拟组织学技术判断患者冠状动脉内是否具有不稳定斑块,并将患者分为稳定斑块组( SP组)50例和不稳定斑块组(UP组)70例,另外选择同期在体检中心进行健康体检的50名健康者作为对照组.采用实时荧光定量聚合酶链式反应技术测定研究对象的静脉血浆miR-155的相对表达量,并用流式细胞仪采用直接免疫荧光法检测静脉血浆CD4 +CD25 +Foxp3 +Treg细胞占CD4 +Treg细胞的比例. 结果 UP组患者的血浆miR-155 相对表达量显著低于SP组和对照组(0. 57 ± 0. 10 比0. 71 ± 0. 09和0. 83 ± 0. 11,P<0. 05);UP组患者的CD4 +CD25 +Foxp3 +Treg细胞占CD4 +Treg细胞的比例明显低于SP组和对照组(5. 92 ± 1. 34比8. 05 ± 1. 39和12. 68 ± 1. 56,P<0. 01). UP组CAD患者的miR-155相对表达量与CD4 +CD25 +Foxp3 +Treg细胞水平呈正相关(r=0. 476,P=0. 013).多因素logistic回归分析显示,血浆miR-155和CD4 +CD25 +Foxp3 +Treg细胞水平均是CAD患者斑块稳定的独立保护因子(OR=0. 662,95% CI:0. 472~0. 819,P=0. 011;OR=0. 502,95% CI:0. 376~0. 765, P=0. 019). 结论 MiR-155通过调节CD4 +Treg细胞表达和功能,可能是影响冠状动脉斑块稳定性的重要机制之一.

目的 观察微小RNA(miRNA,miR)-502-5p对结肠癌细胞DLD-1功能的影响.方法 选取结肠癌细胞DLD-1分别转染miR-502-5p mimic(5 μl)、control mimic(5μl)、miR-502-5p inhibitor (10μl)与control inhibitor(10μl).实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)检测miR-502-5p的表达;细胞计数试剂盒(CCK-8)实验检测细胞的增殖能力;平板克隆实验检测细胞集落形成能力;Transwell实验检测细胞迁移与侵袭能力.结果 转染miR-502-5p mimic与NC mimic后,DLD-1细胞中miR-502-5p的相对表达量分别为319.31±33.16和1.08±0.22,DLD-1细胞中miR-502-5p提高显著(P＜0.05);转染miR-502-5p inhibitor与NC inhibitor后DLD-1细胞中miR-502-5p的相对表达量分别为0.28 ±0.04和0.99 ±0.11,DLD-1细胞中miR-502-5p显著降低(P＜0.05);转染miR-502-5p mimic后DLD-1细胞的增殖能力:miR-502-5p mimic实验组[(125±9)个]与controlmimic组[(112±14)个]之间差异无统计学意义(P＞0.05),而迁移[(621±90)个比(174±32)个]与侵袭[(531±45)个比(132 ±34)个]能力显著提高(P＜0.05);转染miR-502-5p inhibitor后DLD-1细胞的增殖能力:miR-502-5p inhibitor实验组[(118±22)个]与control inhibitor组[(100±15)个]之间差异无统计学意义(P＞0.05),而迁移[(133±50)个比(543±84)个]与侵袭[(119±45)个比(458 ±57)个]能力显著降低(P＜0.05).结论 miR-502-5p可促进DLD-1细胞的迁移与侵袭能力,但是不影响增殖功能.

目的:观察通络止痛凝胶制剂对膝骨关节炎(knee osteoarthritis,KOA)滑膜组织中p53、miR-502-5p、NF-κBp65的影响,探讨通络止痛凝胶制剂治疗KOA的作用机制.方法:选取8周龄Wistar大鼠36只,体重200～220 g,平均208 g,采用随机数字表法分为正常组、模型组、中药组,每组12只.采用改良Hulth法建立KOA模型,造模4周后,中药组给予通络止痛凝胶制剂外擦,3次/天,共2周;正常组和模型组正常饲养、不干预.治疗结束后,观察各组标本形态学变化;采用qPCR检测滑膜组织miR-502-5p的变化,再分别采用qPCR、Western Blot法检测滑膜组织p53、NF-κBp65、IL-1β、TNF-α、MMP-13的含量.结果:(1)标本形态学观察结果,模型组关节软骨透明度下降、表面不平整,滑膜肥厚增生并有大量炎性细胞浸润,关节液质地较黏稠;中药组关节软骨透亮度下降不明显,关节面较平整,滑膜轻度增生并有少量炎性细胞浸润,关节液质地较清晰.(2)与正常组比较,模型组、中药组滑膜组织miR-502-5p含量升高(P<0.05),p53的mRNA及蛋白表达下降(P<0.05),NF-κBp65、IL-1β、TNF-α、MMP-13的mRNA及蛋白表达升高(P<0.05).(3)与模型组比较,中药组滑膜组织miR-502-5p含量降低(P<0.05),p53的mRNA及蛋白表达升高(P<0.05),NF-κBp65、IL-1β、TNF-α、MMP-13的mRNA及蛋白表达降低(P<0.05).结论:滑膜组织中p53、miR-502-5p、NF-kBp65的表达与滑膜的增生及炎症反应密切相关,通络止痛凝胶制剂可能是通过调控滑膜组织中p53、miR-502-5p、NF-κBp65的表达,从而减轻KOA滑膜的增生及炎症反应.

目的 应用生物信息学方法分析miRNAs在慢性乙型肝炎(CHB)肝组织中的表达变化及生物学功能.方法 在GEO数据库中获取GSE110217芯片数据,使用R语言筛选差异表达的miRNAs;使用miRDB、miRTarBase、Tar-getScan数据库预测其靶基因,进一步采用DAVID软件对目的 基因进行生物学功能(GO)分析,利用京都基因与基因组百科全书(KEGG)数据库对基因进行生物通路富集分析,筛选靶基因所涉及的有意义的生物学功能和通路靶基因;采用String和Cytoscape软件进行靶基因蛋白相互作用(PPI)网络分析,筛选关键靶基因;使用Transmir数据库在线预测和富集分析,筛选miRNAs的转录因子;以富集在乙型肝炎(hsa05161)通路上的靶基因为基础,构建转录因子-miRNAs-靶基因调控关系网络.结果 在CHB肝组织中共筛出33个差异性表达的miRNAs,其中10个上调、23个下调.这些miRNAs的靶基因主要参与转录调控、细胞分裂、凋亡过程负调控及细胞黏附等生物过程,涉及通路主要有乙型肝炎通路及PI3K/AKT、FoxO、Hippo信号通路等.经PPI网络分析筛选出16个核心靶基因,其中PRKCA、SMAD4、YWHAB、NRAS、MAPK8富集在乙型肝炎通路中.转录因子-miRNAs-靶基因调控关系网络显示,共有21个靶基因涉及乙型肝炎通路,涉及的miRNAs分别为hsa-miR-218、-363、-30b、-513a-5p、-3652、-1、-214?、-145、-542-3p、-502-3p,这10个miRNAs的富集转录因子共25个.结论 在CHB患者肝组织中存在差异性表达的miRNAs,与乙型肝炎通路相关的hsa-miR-218等10个miRNAs可能在CHB的发生发展中发挥重要作用.