Gamma-aminobutyric acid(GABA)ergic neurons,the most abundant inhibitory neurons in the human brain,have been found to be reduced in many neurological disorders,including Alzheimer's disease and Alzheimer's disease-related dementia.Our previous study identified the upregulation of microRNA-502-3p(miR-502-3p)and downregulation of GABA type A receptor subunit α-1 in Alzheimer's disease synapses.This study investigated a new molecular relationship between miR-502-3p and GABAergic synapse function.In vitro studies were performed using the mouse hippocampal neuronal cell line HT22 and miR-502-3p agomiRs and antagomiRs.In silico analysis identified multiple binding sites of miR-502-3p at GABA type A receptor subunit α-1 mRNA.Luciferase assay confirmed that miR-502-3p targets the GABA type A receptor subunit α-1 gene and suppresses the luciferase activity.Furthermore,quantitative reverse transcription-polymerase chain reaction,miRNA in situ hybridization,immunoblotting,and immunostaining analysis confirmed that overexpression of miR-502-3p reduced the GABA type A receptor subunit α-1 level,while suppression of miR-502-3p increased the level of GABA type A receptor subunit α-1 protein.Notably,as a result of the overexpression of miR-502-3p,cell viability was found to be reduced,and the population of necrotic cells was found to be increased.The whole cell patch-clamp analysis of human-GABA receptor A-α1/β3/γ2L human embryonic kidney(HEK)recombinant cell line also showed that overexpression of miR-502-3p reduced the GABA current and overall GABA function,suggesting a negative correlation between miR-502-3p levels and GABAergic synapse function.Additionally,the levels of proteins associated with Alzheimer's disease were high with miR-502-3p overexpression and reduced with miR-502-3p suppression.The present study provides insight into the molecular mechanism of regulation of GABAergic synapses by miR-502-3p.We propose that micro-RNA,in particular miR-502-3p,could be a potential therapeutic target to modulate GABAergic synapse function in neurological disorders,including Alzheimer's disease and Alzheimer's disease-related dementia.

目的 探讨连翘脂苷A是否通过微小RNA-502-3p(miR-502-3p)/细胞分裂周期相关蛋白5(CDCA5)通路调控结肠癌细胞HCT 116增殖、迁移和侵袭.方法 将对数期的HCT 116细胞用80、160、320 mg/L连翘脂苷A处理,分别记为低剂量组、中剂量组、高剂量组,同时将未处理的细胞设为对照(NC)组.将正常人正常结肠上皮NCM460细胞用320 mg/L连翘脂苷A处理,计为NCM460高剂量组,将未处理的细胞设为对照,计为NCM460组.48 h后收集HCT 116细胞、进行增殖、迁移、侵袭、基质金属蛋白酶(MMP)2、MMP9、CDCA5蛋白表达和miR-502-3p表达测定,收集NCM460细胞进行增殖、迁移、侵袭测定.根据转染靶标将HCT 116细胞分为NC组(未行转染)、si-NC组(转染 si-NC)、si-CDCA5 组(转染 si-CDCA5)、miR-NC 组(转染 miR-NC)、miR-502-3p 组(转染 miR-502-3p)、anti-miR-NC 组(转染 anti-miR-NC)、anti-miR-502-3p 组(转染 anti-miR-502-3p)、anti-miR-NC+高剂量组(转染 anti-miR-NC+320 mg/L 连翘脂苷 A)、anti-miR-502-3p+高剂量组(转染 anti-miR-502-3p+320 mg/L连翘脂苷A),检测HCT 116细胞的增殖、迁移和侵袭.双荧光素酶活性检测分析miR-502-3p与CDCA5的靶向结合.结果 低、中、高剂量连翘脂苷A作用后结肠癌HCT 116细胞的增殖能力、细胞迁移数量、细胞侵袭数量、MMP2、MMP9、CDCA5蛋白表达量均逐渐降低,miR-502-3p表达量逐渐升高,呈剂量依赖性,差异均有统计学意义(P＜0.05).NCM460组与NCM460高剂量组的NCM460细胞增殖、迁移及侵袭数量比较,差异无统计学意义(P＞0.05).CDCA5低表达或miR-502-3p高表达可减弱HCT 116细胞MMP2及MMP9蛋白表达、细胞增殖、迁移及侵袭能力,差异均有统计学意义(P＜0.05),而miR-502-3p低表达的结果相反.miR-502-3p靶向调控CDCA5的表达.连翘脂苷A抑制HCT 116细胞CDCA5、MMP2、MMP9蛋白表达、增殖能力、细胞迁移和细胞侵袭的作用被miR-502-3p低表达所逆转.结论 连翘脂苷A通过上调miR-502-3p靶向调控CDCA5的表达,抑制结肠癌细胞HCT 116细胞的增殖、迁移和侵袭.

目的:通过生物信息学与网络药理学方法探求麦门冬汤治疗特发性肺纤维化(idiopathic pulmonary fibrosis,IPF)的微小RNA和相关作用机制.方法:通过在线数据库查检麦门冬汤的有效活性成分及其相关靶基因与IPF的疾病靶点,GEO数据库下载GSE53845基因芯片,筛选GSE53845与疾病共同表达的基因.取药物和疾病交集靶点上传至miRNA在线数据库预测关键基因靶点相关微小RNA,运用DAVID数据库对关键靶基因进行GO和KEGG分析,采用iGEMDOCK进行分子对接分析,结合相关文献分析麦门冬汤防治IPF的作用机制.结果:麦门冬汤共含有502个活性化合物及1039个预测靶点;43个共同表达的IPF疾病基因靶点;关键靶点MMP3与化合物β-胡萝卜素结合性能最佳.结论:麦门冬汤主要通过miR-29家族、let-7家族、miR-26a-5p等微小RNA调节靶基因,干预IPF进程;主要作用于胶原分解过程、细胞外基质组织、细胞外基质分解等生物学过程;参与NF-κB信号通路、ECM-受体相互作用、TNF信号通路等关键信号通路.

目的 通过观察异体输血对创伤性失血患者外泌体miRNA的差异表达,筛选出差异表达的外泌体miRNA,为后续靶基因和通路的研究奠定基础.方法 分别采集外伤患者在输异体血前和输血后外周血标本各3例,通过对血浆标本分离收获后的外泌体miRNA高通量测序,分析比较输血前后两组外泌体miRNA差异表达情况,同时以荧光定量PCR法进一步验证差异基因表达情况.结果 通过高通量测序分析,共测序到1 570个miRNA存在差异表达,实验组比较对照组,上调的有1 189个,下调的有381个,以倍数变化Fold change≥2.0,P-value ≤0.05作为差异miRNA筛选的阈值,筛选出显著变化的差异表达miRNA有 14个,其中显著上调的miRNA有5个,分别为miR-499a-5p、miR-200a-3p、miR-372-3p、miR-novel-chr12_5583、miR-novel-chr22_24253;显著下调的miRNA有9个,分别为miR-6852-5p、miR-452-5p、miR-1287-5p、miR-204-3p、miR-375-3p、miR-502-3p、miR-345-5p、miR-novel-chr7_38986、miR-451a.结论 输注同种异体血液对创伤性失血患者的外泌体miRNA存在差异表达.其发生机制可能通过不同信号通路对患者机体免疫系统调节产生影响.然而,对患者机体免疫调节程度、与肿瘤的相关性有待于扩大样本量进一步研究.

目的:探究微小RNA-502-5p(miR-502-5p)对白细胞介素-1β(IL-1β)诱导的骨关节炎(OA)软骨细胞损伤的影响.方法:Western blot和RT-qPCR检测骨关节炎患者软骨组织和IL-1β诱导的软骨细胞中p53和miR-502-5p的表达;分离培养软骨,并分组处理细胞,分别用MTT法检测细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot检测炎性因子和细胞外基质(ECM)相关蛋白的表达,另外,萤光素酶报告实验检测miR-502-5p对p53及肿瘤坏死因子受体相关因子2(TRAF2)的调控作用.结果:与正常软骨组织相比,OA患者软骨组织中miR-502-5p的水平显著降低,p53和TRAF2水平则明显升高(P<0.05).IL-1β处理软骨细胞后,细胞活力下降、细胞凋亡率增加、IL-6、IL-8和TNF-α的蛋白表达水平显著上升;II型胶原和蛋白聚糖的蛋白表达显著下调,基质金属蛋白酶(MMP)-3、MMP-9和MMP-13等的蛋白表达显著上调,miR-502-5p mimic转染反转了IL-1β对软骨细胞的这些作用.此外,p53与miR-502-5p之间存在负反馈调节,同时miR-502-5p能够靶向抑制TRAF2的水平.TRAF2沉默同样反转了IL-1β对软骨细胞增殖、凋亡、炎症反应以及ECM相关蛋白表达的影响.结论:调节p53/miR-502-5p/TRAF2通路能够减轻IL-1β诱导的骨关节软骨细胞损伤.

目的 探讨微小RNA-502-3p (miR-502-3p)在肾癌组织中的表达及对肾癌细胞迁移、增殖的影响.方法 采用荧光定量PCR检测30例肾癌及癌旁正常组织中miR-502-3p的表达,分析其与患者临床病理特征的关系.培养786-O肾癌细胞,采用miR-502-3p抑制剂(下调组)、功能类似物(过表达组)或乱序(对照组)转染细胞,Transwell实验以及划痕实验检测肾癌细胞迁移能力,CCK-8实验检测肾癌细胞增殖能力.结果 肾癌组织miR-502-3p表达低于癌旁组织(P＜0.01).miR-502-3p表达水平与患者年龄、性别、病理类型和临床分期无关(P＞0.05).与对照组相比,下调组细胞迁移细胞数增加,过表达组迁移细胞数量减少(P＜0.01或P＜0.05).与对照组相比,下调组肾癌细胞增殖能力增强,过表达组增殖能力降低(P＜0.01).结论 miR-502-3p在肾癌组织中低表达.miR-502-3p能抑制肾癌细胞的迁移和增殖,可能与肾癌的发生和发展有关.

目的 探讨miR-502对宫颈癌患者预后及其对宫颈癌Hela细胞增殖和转移的影响.方法 通过数据库分析miR-502表达与宫颈癌患者临床病理特征的关系及其对预后的影响.在Hela细胞中过表达miR-502-3p后,采用CCK-8检测细胞增殖情况,Transwell实验检测细胞迁移和侵袭情况.结果 数据库分析结果显示,高表达miR-502的宫颈癌患者总生存期更长,但与TNM分期无明显相关性.CCK-8检测结果显示,miR-502-3p类似物组细胞增殖率低于miR-502-3p抑制剂组[(78.82±1.41)％ vs(124.06±7.72)％,P＜0.05];Transwell实验检测结果显示,miR-502-3p类似物组细胞迁移率较miR-502-3p抑制剂组低[(85.39±7.19)％ vs (121.17±8.20)％,P＜0.05],细胞侵袭率亦较低[(85.32±7.12)％ vs (117.13±7.37)％,P＜0.05].结论 高表达miR-502的宫颈癌患者预后较好,可能与其抑制宫颈癌细胞增殖和转移有关.

目的 探讨循环微小RNA-155(miR-155)和外周血CD4 +调节性T细胞( Treg)在冠心病(CAD)患者的表达水平及与冠状动脉不稳定斑块的关系. 方法 连续入选2016年1月至2018年1月在广州市第一人民医院心内科住院的CAD患者120例,均接受冠状动脉造影和血管内超声检查,通过虚拟组织学技术判断患者冠状动脉内是否具有不稳定斑块,并将患者分为稳定斑块组( SP组)50例和不稳定斑块组(UP组)70例,另外选择同期在体检中心进行健康体检的50名健康者作为对照组.采用实时荧光定量聚合酶链式反应技术测定研究对象的静脉血浆miR-155的相对表达量,并用流式细胞仪采用直接免疫荧光法检测静脉血浆CD4 +CD25 +Foxp3 +Treg细胞占CD4 +Treg细胞的比例. 结果 UP组患者的血浆miR-155 相对表达量显著低于SP组和对照组(0. 57 ± 0. 10 比0. 71 ± 0. 09和0. 83 ± 0. 11,P<0. 05);UP组患者的CD4 +CD25 +Foxp3 +Treg细胞占CD4 +Treg细胞的比例明显低于SP组和对照组(5. 92 ± 1. 34比8. 05 ± 1. 39和12. 68 ± 1. 56,P<0. 01). UP组CAD患者的miR-155相对表达量与CD4 +CD25 +Foxp3 +Treg细胞水平呈正相关(r=0. 476,P=0. 013).多因素logistic回归分析显示,血浆miR-155和CD4 +CD25 +Foxp3 +Treg细胞水平均是CAD患者斑块稳定的独立保护因子(OR=0. 662,95% CI:0. 472~0. 819,P=0. 011;OR=0. 502,95% CI:0. 376~0. 765, P=0. 019). 结论 MiR-155通过调节CD4 +Treg细胞表达和功能,可能是影响冠状动脉斑块稳定性的重要机制之一.

目的 探讨非小细胞肺癌(NSCLC)组织中微小RNA-423-3p(miR-423-3p)的拷贝数变异( CNV)和rs6505162位点单核苷酸多态性( SNP).方法 采用cBioPortal在线分析癌症基因组图谱TCGA数据库中NSCLC组织 miR-423-3p的CNV表现及与临床病理特征的关系;收集本院2017年1月至2018年12月经病理确诊的146例NSCLC患者( NSCLC组)和151例健康体检者(对照组)的外周血标本,采用聚合酶链式反应限制性片段长度多态性( PCR-RFLP)检测rs6505162位点SNP的基因分型并进行Hardy-Weinberg平衡检验,分析rs6505162等位基因A在不同遗传模型[等位基因模型(A vs. C)、纯合子模型(AA vs. CC)、杂合子模型(CA vs. CC)、显性遗传模型( CA+AA vs. CC)和隐性遗传模型( AA vs. CC+CA)]下与NSCLC易感性的关系.结果 经cBioPortal在线分析发现1144例组织的miR-423-3p CNV表现:缺失209例(Deep Deletion 1例+Shal-low Deletion 208例)、正常(Diploid)543例和扩增392例(Gain 384例+Amplification 8例). NSCLC组织中CNV分布与病理类型、性别和N分期有关(P＜0. 05),而与TNM分期、T分期、M分期和生存状况无关( P＞0. 05).两组rs6505162基因型的分布符合Hardy-Weinberg平衡. NSCLC 组携带基因型 CA、 AA 的频率高于对照组( 56. 16%、17. 81% vs. 49. 67%、11. 26%, P＜0. 05),携带等位基因A的频率高于对照组(45. 89% vs. 36. 09%,P＜0. 05). rs6505162位点的等位基因A在隐性遗传模型下与NSCLC的易感性无关(P＞0. 05),而在等位基因模型(OR＝1. 502, 95%CI: 1. 081～2. 087)、纯合子模型( OR＝2. 375, 95%CI: 1. 139～4. 952)、杂合子模型(OR＝1. 698, 95%CI: 1. 015～2. 839)和显性遗传模型( OR＝1. 823, 95%CI: 1. 113～2. 986)下可升高NSCLC的发病风险.结论 miR-423-3p CNV可能参与了NSCLC的发生发展且其rs6505162与NSCLC易感性有关,其中携带突变等位基因A的NSCLC发生风险升高,在肺癌易感人群筛查中有一定价值.

目的 预测并初步验证乳腺癌中靶向抑制8号染色体开放阅读框33(C8orf33)基因表达的微小RNA(miRNA).方法 使用癌症基因组图谱(TCGA)高通量数据进行泛癌症分析,首次发现包括乳腺癌在内的多种肿瘤组织中C8orf33基因较正常组织高表达,使用该数据库进一步分析发现C8orf33基因在不同肿瘤组织中表达也有差异性.使用Oncomine对上述结果进行验证,Oncomine分析结果与TCGA高通量数据分析结果相一致.进一步通过starBase V2.0中PITA、clipExpNum和miRmap 3种软件预测可靶向抑制C8orf33基因表达的miRNA,分析结果取交集.使用TCGA RNAseq数据库对分析交集结果进行验证,进一步确定miR-NA与C8orf33基因表达的相关性.结果 TCGA数据分析结果发现C8orf33基因在膀胱癌、乳腺癌、卵巢癌和肺鳞癌组织中表达水平均高于正常组织.Oncomine验证结果发现C8orf33基因在包括乳腺癌在内的多种肿瘤组织中表达水平与正常组织不同,且在多种肿瘤组织中表达水平有差异.PITA、clipExpNum和miRmap软件进行预测并取交集获得9个miRNA,分别为:hsa-miR-370、hsa-miR-501、hsa-miR-502、hsa-miR-6131、hsa-miR-1294、hsa-miR-206、hsa-miR-328、hsa-miR-1321和hsa-miR-1-2.使用LinkedOmics网站访问TCGA数据库,分别验证预测所得的9个miRNA在乳腺癌组织中与C8orf33基因表达的相关性.分析结果发现hsa-miR-370与C8orf33基因表达呈负相关(r=-0.124,P=0.026)、hsa-miR-1294与C8orf33基因表达呈负相关(r=-0.116,P=0.001)、hsa-miR-1-2与C8orf33基因表达呈负相关(r=-0.108,P=0.003),其余miRNA与C8orf33基因表达均无相关性.结论 乳腺癌中hsa-miR-370、hsa-miR-1294和hsa-miR-1-2具有潜在靶向抑制C8orf33基因表达的功能,可为乳腺癌诊断治疗提供新思路.