目的:探讨微小RNA-519d-3p(miR-519d-3p)在结直肠癌(CRC)中的表达及对增殖、迁移及侵袭能力的影响。方法:体外培养人结直肠癌细胞系和人正常结肠上皮细胞。将miR-519d-3p模拟物(mimic)分别转染于RKO及SW620，同时设置mimic阴性对照(mimic NC)。采用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测miR-519d-3p表达及DCAF4L2 mRNA表达水平。细胞计数试剂盒(CCK-8)和平板克隆实验检测细胞增殖活性。划痕愈合实验、Transwell迁移和侵袭实验检测细胞迁移及侵袭能力。蛋白质印迹法(Western blot)检测DCAF4L2蛋白表达水平。符合正态分布的计量资料以均数±标准差( ± s)表示，采用两样本 t检验，多组间比较采用单因素方差分析。 结果:miR-519d-3p在人结直肠癌细胞系中显著下降，其中RKO和SW620表达倍数明显低于NCM460[RKO：(0.311±0.165)倍比1.000倍， t＝7.783， P<0.05；SW620：(0.354±0.079)倍比1.000倍， t＝15.72， P<0.01]，差异有统计学意义。成功转染mimic过表达miR-519d-3p，过表达组表达倍数高于对照组 [RKO：(2.913±0.602)倍比1.000倍， t＝5.409， P<0.01；SW620：(3.194±0.427)倍比1.000倍， t＝8.765， P<0.001]，差异有统计学意义。通过生物学功能实验证实miR-519d-3p表达升高能显著抑制CRC细胞的增殖、迁移和侵袭能力。CCK-8检测结果示，过表达组24、48、72、96 h细胞吸光度值低于对照组(RKO：0.248±0.018比0.184±0.012、0.388±0.007比0.277±0.010、0.658±0.033比0.496±0.008、0.877±0.020比0.681±0.021， t＝3.064， P<0.01；SW620：0.213±0.018比0.181±0.050、0.375±0.008比0.274±0.014、0.720±0.009比0.482±0.006、0.978±0.115比0.721±0.032， t＝2.432， P<0.01)，差异有统计学意义。过表达组平板克隆集落形成个数显著低于对照组[RKO：(262.300±11.320)个比(181.700±2.333)个， t＝7.127， P<0.05；SW620：(448.000±33.260)个比(190.300±7.446)个， t＝9.387， P<0.05]，差异有统计学意义。过表达组划痕愈合率低于对照组[RKO：(39.040±0.812)%比(8.979±0.846)%， t＝394.900， P<0.01；SW620：(28.840±0.848)%比(5.576±1.435)%， t＝21.350， P<0.01]，差异有统计学意义。Transwell迁移和侵袭实验中过表达组穿透微孔膜的细胞个数明显低于对照组，迁移实验[RKO：(196.700±6.360)个比(93.330±4.096)个， t＝44.290， P<0.01；SW620：(198.300±4.485)个比(101.300±1.764)个， t＝16.090， P<0.01]，差异有统计学意义；侵袭实验[RKO：(274.700±3.844)个比(85.670±2.728)个， t＝33.950， P<0.01；SW620：(263.300±6.566)个比(70.330±4.256)个， t＝50.980， P<0.01]，差异有统计学意义。在线预测软件(miRWalk、StarBase 2.0和TCGA)预测，并通过qRT-PCR及Western blot验证结果显示，DCAF4L2作为miR-519d-3p靶基因调控CRC，过表达组DCAF4L2的mRNA表达及蛋白表达倍数明显低于对照组，mRNA表达倍数[RKO：(0.170±0.050)倍比1.000倍， t＝18.400， P<0.01; SW620：(0.256±0.069)倍比1.000倍， t＝26.800， P<0.01]，差异有统计学意义；蛋白倍数[RKO：(45.504±6.076)%比100.000%， t＝15.540， P<0.01；SW620：(43.567±3.760)%比100.000%， t＝26.000， P<0.01]，差异有统计学意义。 结论:结直肠癌细胞中miR-519d-3p表达显著下降，并通过调控DCAF4L2表达抑制结直肠癌增殖、迁移及侵袭能力。

目的:探讨微小RNA(miRNA，miR)-519靶向ATP结合盒转运体G1(ABCG1)对乳腺癌细胞吉西他滨耐药性的影响。方法:选取2015年6月到2018年6月来焦作市人民医院接受治疗的乳腺癌患者148例。根据患者对吉西他滨化疗敏感性分为敏感组和耐药组。荧光定量聚合酶链反应(PCR)分析两组乳腺癌组织中miR-519表达水平。构建miR-519或对照miRNA过表达慢病毒载体，包装慢病毒，感染MCF-7乳腺癌细胞，构建miR-519(miR-519组)和对照组细胞株(miRNA对照组)。采用细胞计数试剂盒(CCK-8)法分析miR-519组和miRNA对照组细胞对吉西他滨的敏感性。采用生物信息学和双荧光素酶报告基因分析miR-519的靶基因；采用蛋白质印迹法(Western blot)分析miR-519对靶基因表达的影响。组间数据比较采用 t检验，以 P<0.05为差异有统计学意义。 结果:与吉西他滨敏感组(1.21±0.23)比较，耐药组患者肿瘤组织中miR-519 mRNA表达水平(0.30±0.12)明显下降，差异有统计学意义( t＝3.091， P<0.05)。CCK-8结果显示，miR-519组和miRNA对照组细胞增殖能力(1.76±0.23比1.65±0.26)比较差异无统计学意义( t＝0.691， P>0.05)。经吉西他滨处理后，miR-519组细胞增殖能力(0.68±0.19)较miRNA对照组细胞(1.12±0.22)明显下降，差异有统计学意义( t＝2.819， P<0.05)。生物信息学和双荧光素酶报告基因显示ABCG1是miR-519靶基因。耐药组肿瘤组织中ABCG1蛋白表达水平(1.65±0.25)明显高于敏感组肿瘤组织(0.84±0.19)，差异有统计学意义( t＝2.619， P<0.05)。miR-519组细胞ABCG1蛋白表达水平(0.34±0.11)较miRNA对照组细胞(1.43±0.24)明显增加，差异有统计学意义( t＝3.014， P<0.05)。 结论:miR-519可能通过ABCG1调控乳腺癌对吉西他滨的敏感性。

目的 探究长链非编码 RNA(LncRNA)HOX转录反义 RNA(HOTAIR)通过 miR-519c-3p/骨形成蛋白Ⅱ型受体(BMPR2)调控骨关节炎进展的作用及分子机制.方法 利用生物信息学网站ENCORI、TargetScanHuman 8.0 工具分析预测LncRNA HOTAIR的下游miR-519c-3p以及靶基因BMPR2,并通过双荧光素酶报告及RIP实验验证分子间的相互结合.通过慢病毒转染将miR-519c-3p在细胞中过表达后,将构建好的软骨细胞分为NC组和miR-519c-3p过表达组(miR-519c-3p组).两组细胞分别应用CCK-8 检测、蛋白质印迹、实时荧光定量聚合酶链反应、酶联免疫吸附试验等检测探究LncRNA HOTAIR/miR-519c-3p/BMPR2 轴对人软骨细胞骨关节炎的进展的影响.结果 与NC组比较,miR-519c-3p组细胞生长变慢,降解酶[降基质金属蛋白酶(MMP)3、MMP9、MMP13、含Ⅰ型血小板结合蛋白基序的解聚蛋白样金属蛋白酶(ADAMTS)4 和 AD-AMTS5]和促炎因子(白细胞介素1β、白细胞介素6 和肿瘤坏死因子α)水平显著降低,而COL2A1 和SOX9 水平升高,差异均有统计学意义(P<0.05).此外,LncRNA HOTAIR可结合miR-519c-3p,并且BMPR2 是miR-519c-3p的下游靶基因,回补实验证实LncRNA HOTAIR可通过miR-519c-3p/BMPR2 轴调控人软骨细胞生长、降解酶以及促炎因子的分泌.结论 LncRNA HOTAIR可通过miR-519c-3p/BMPR2 轴调控骨关节炎的进展.

目的 分析miR-519d转染前后人宫颈癌SiHa细胞基因表达谱的变化.方法 向人宫颈癌SiHa细胞中转染模拟物上调细胞内miR-519d的表达,采用人全基因组表达谱芯片筛选其对细胞基因表达谱的影响,结合生物信息学软件进行靶基因预测,确定miR-519d的候选靶基因,采用qRT-PCR进行验证.结果 miR-519d表达上调后,共筛选到差异表达基因5172个,其中上调基因2476个,下调基因2796个.结合生物信息学软件进行靶基因预测,共确定164个miR-519d的候选靶基因.随后,对上述基因进行KEGG信号通路分析,采用STRING和pSTIING在线数据库构建候选基因编码蛋白的互作网络、预测转录相关和物理相关关系,发现了一些重要的节点分子.最后,采用qRT-PCR结果对部分关键基因进行了验证,与芯片结果基本一致.结论 miR-519d过表达促使人宫颈癌SiHa细胞的基因表达谱发生了显著地改变,结合生物信息学软件获得了164个候选靶基因,为系统、全面地阐明miR-519d在宫颈癌中的作用及其分子机制提供了重要的实验依据.

目的 观察微小RNA-519d-3p(miR-519d-3p)对前列腺癌细胞增殖的影响,并探讨可能的分子机制.方法 通过荧光实时定量PCR检测PC-3、DU-145、22RV1、PC-3M、LNCaP人前列腺癌细胞和RWPE-I人正常前列腺上皮细胞中miR-519d-3p的表达水平.以miR-519d-3p表达水平最低的DU-145前列腺癌细胞为转染对象,转染miR-519d-3p模拟物或阴性对照微小RNA (miR-NC)并验证转染效率.采用流式细胞术检测miR-519d-3p对前列腺癌细胞细胞周期的影响,MIT法检测前列腺癌细胞的增殖能力.生物信息学软件预测并应用双荧光素酶报告基因实验验证miR-519d-3p的靶基因.荧光实时定量PCR检测miR-519d-3p靶基因的表达水平,Western blot法检测靶基因蛋白及下游转化生长因子β(TGF-β3)信号通路蛋白表达水平.结果 与正常前列腺上皮细胞相比,miR-519d-3p在前列腺癌细胞的表达水平显著降低,DU-145细胞表达水平最低.DU-145细胞转染miR-519d-3p模拟物后,细胞miR-519d-3p的表达水平显著增加.过表达miR-519d-3p将前列腺癌细胞的细胞周期阻滞于G0/G1期并降低细胞的增殖能力.生物信息学预测及双荧光素酶报告基因证明肿瘤坏死因子受体相关因子4(TRAF4)为miR-519d-3p的靶基因.过表达miR-519d-3p可明显降低前列腺癌细胞中TRAF4基因及下游TGF-β信号通路蛋白的表达水平.结论 miR-519d-3p在前列腺癌细胞中低表达,过表达rniR-519d-3p通过抑制TRAF4的表达抑制DU-145前列腺癌细胞的增殖.

目的 检测微小RNA-302b( miR-302b)在急性心肌梗死( AMI)患者血清中的表达,并探讨其与心肌损伤的关系. 方法 选取2016年陕西省第四人民医院72例AMI患者为AMI组,采用随机数字表法选取同期体检的48名健康人作为对照组.两组均通过实时荧光定量PCR法检测血清miR-302b含量(AMI组患者在临床确诊后12 h内检测),spearman法分析血清miR-302b表达与心肌酶谱的相关性. 结果 miR-302b在AMI组患者血清中的相对表达量显著高于对照组(3. 14 ± 0. 76 比1. 13 ± 0. 22,t=17. 706,P<0. 001);AMI患者的血清miR-302b相对表达量与天门冬氨酸氨基转移酶(r =0. 428,P=0. 017)、乳酸脱氢酶( r =0. 519,P=0. 045)、肌酸激酶同工酶( r =0. 718,P =0. 003)和心肌肌钙蛋白I(r=0. 772,P<0. 001)呈正相关. ROC曲线分析示miR-302b诊断AMI的敏感度为88. 6% 、特异度为64. 3% . 结论 miR-302b在AMI患者血清中呈高表达,并与心肌损伤相关.

目的 探讨微小RNA(miR)-519d-3p对核转运蛋白α-2(KPNA2)的靶向作用及其对胶质瘤细胞增殖、迁移及侵袭的影响及其可能作用机制.方法 体外培养胶质瘤细胞株U251、U87、T98G与正常胶质细胞株SVGp12,采用qRT-PCR与Western印迹法检测细胞中miR-519d-3p与KPNA2的mRNA及蛋白表达.脂质体将miR-519d-3p mimics、si-KPNA2及其各自阴性对照转染入胶质瘤U251细胞;共转染分组:miR-519d-3p+pcDNA组(miR-519d-3p mimics与pcDNA共转染胶质瘤U251细胞),miR-519d-3p+pcDNA-KPNA2组(miR-519d-3p mimics与pcDNA-KPNA2共转染胶质瘤U251细胞).MTT实验与Tran-swell小室检测各组胶质瘤细胞增殖、迁移及侵袭.运用生物信息学方法预测miR-519d-3p与KPNA2的靶向配对关系,采用双荧光素酶报告实验验证miR-519d-3p与KPNA2的作用关系.Western印迹检测CyclinD1、p21、p27、MMP-2、MMP-9、MMP-14蛋白表达.结果 与正常胶质细胞株SVGp12比较,胶质瘤细胞株U251、U87、T98G中miR-519d-3p的表达水平均显著降低(P<0.05),而KPNA2 mRNA及蛋白表达水平均显著升高(P<0.05);miR-519d-3p过表达后胶质瘤细胞增殖、迁移及侵袭能力均明显减弱,促进p21、p27表达,而抑制CyclinD1、MMP-2、MMP-9、MMP-14表达;抑制KPNA2表达后胶质瘤细胞增殖、迁移及侵袭能力均明显减弱,促进p21表达,而抑制CyclinD1、MMP-2、MMP-9表达;miR-519d-3p过表达同时上调KPNA2表达后部分逆转miR-519d-3p过表达对胶质瘤细胞增殖、迁移及侵袭的抑制作用.结论 miR-519d-3p可通过负向调控KPNA2表达而抑制胶质瘤细胞增殖、迁移及侵袭.

目的 通过生物信息学方法了解长链非编码RNA(lncRNA)在结肠癌中的分子调控网络.方法 利用lncRNA疾病数据库预测并筛选得出与结肠癌相关的lncRNAs作为研究对象;运用Starbase v2.0软件预测与lncRNAs相互调控的miRNAs,并利用HMDD v2.0数据库筛选出与结肠癌相关的miRNAs.进一步利用Consite转录因子数据库分别预测出各lncRNA和miRNA的转录因子并各自取交集后筛选出与结肠癌相关的转录因子.运用miRwalk在线软件分别预测各miRNA的靶mRNA,用一致法筛选后得出共同靶基因,并绘制出lncRNA在结肠癌的分子调控网络图.结果 通过lncRNA疾病数据库查询得出与结肠癌相关性最高的前3个lncRNAs为H19、HOTAIR和MALAT1.在Starbase v2.0中预测得出上述3个lncRNAs的共同靶miRNAs为miR-17、miR-20a、miR-20b、miR-93、miR-106a、miR-106b、miR-519d.经HMDD v2.0查询证实与结肠癌相关的miRNAs共90个,与上述7个miRNAs取交集后得出miR-17、miR-20a、miR-106a和miR-106b与结肠癌相关.Consite预测得出3个lncRNAs的共同转录因子为E74A、ARNT、Thing1-E47、Hunchback、Snail;4个miRNAs的共同转录因子为Sox-5、FREAC-4、Sox-17、ARNT、Snail,两者共同转录因子取交集后证实与结肠癌相关的有ARNT、Snail、Sox-17.miRwalk软件预测这4个miRNAs的共同靶基因为HLF、SORL1、ZFYVE26、PFN2、PKD2、PKN2、PTPN4、RBL2、WEE1、FZD3、RGL1、MKRN1、C7orf43、NTN4、ZFP91等,其中PKD2、PKN2、WEE1、ZFP91参与结肠癌的发生、发展.所有基因形成调控环路,参与结肠癌的发生与发展.结论 运用生物学软件对结肠癌相关的lncRNAs分子调控网络进行分析,为进一步阐明结肠癌的分子发病机制,并为后续的实验研究提供线索.

目的:探讨胃癌差异表达微小RNA(miRNA)及其相关基因的单核苷酸多态性(SNPs)与胃癌预后的相关性,为进一步寻找胃癌预后的生物标志物提供线索.方法:应用SNP芯片联合生物信息学分析对福建省胃癌高发区仙游县96例胃腺癌患者与96例健康对照人群基因组中miRNA及其相关基因的SNPs位点进行筛检,应用飞行时间质谱生物芯片(Sequenom MassARRAY)在344例胃癌患者中对筛检出来的SNPs位点进行检测.开展现场流行病学调查,通过面对面的访谈及问卷调查取得患者的病情、治疗方法、患病后1年的生活饮食习惯,分析其预后情况.结果:共筛检出11个miRNA及其相关基因的SNPs位点,包括5个miRNA自身SNPs、5个miRNA靶序列SNPs以及1个miRNA生物合成通路基因相关SNPs.单因素分析显示miR-1297 rs9536676、MSH2 rs17502941位点的多态性与胃癌预后有关联性,其余的多态性位点均与胃癌预后无明显相关性.多因素分析显示是否手术、TNM分期、rs17502941 AA/AG基因型均是影响胃癌预后的独立危险因素.按年龄TNM分期联合分层得出,miR-1297 rs9536676、miRNA-519b rs10413288、miR-379 rs7143252、FAS基因rs1468063、EGFR基因rs10277413位点均与胃癌患者的生存分布有关联.联合作用分析结果显示患者同时携带rs9536676 AA/AG和rs17502941 GG、rs9536676 AA/AG和rs10413288 AA、rs17502941 GG和rs10413288 AA基因型可能会增加预后不良的风险(P<0.05).结论:胃癌差异表达miRNA及其相关基因的SNPs与胃癌病人预后密切相关,可能作为判断胃癌预后的生物标志物.

目的:观察肺腺癌组织中长链非编码RNA(lncRNA)TTN反义RNA 1(TTN-AS1)的表达情况,以及沉默TTN-AS1表达对肺腺癌A549细胞活力和侵袭的影响.方法:RT-qPCR法检测32例肺腺癌和癌旁正常组织中TTN-AS1、微小RNA-519d-3p(miR-519d-3p)和基质金属蛋白酶2(MMP2)的mRNA表达水平.将未转染的A549细胞设为空白组,转染si-NC的为si-NC对照组,转染沉默TTN-AS1表达的siRNA为si-lncRNA组(n=5),采用CCK8和Transwell方法检测沉默TTN-AS1表达对A549细胞活力和侵袭的影响.使用双萤光素酶报告基因实验、RNA免疫沉淀实验、RT-qPCR和Western blot测定TTN-AS1对miR-519d-3p和miR-519d-3p对MMP2的靶向调控作用.结果:32例肺腺癌组织中TTN-AS1的表达水平显著高于对应癌旁正常组织(P<0.05).沉默A549细胞中TTN-AS1的表达可抑制细胞的活力和侵袭.TTN-AS1可通过海绵吸附的方式负调控miR-519d-3p的表达;MMP2是miR-519d-3p的靶基因,受其负调控.过表达MMP2可部分逆转沉默TTN-AS1和过表达miR-519d-3p对A549细胞侵袭的抑制作用.结论:肺腺癌组织中lncRNA TTN-AS1呈现高表达情况,它可能通过miR-519d-3p/MMP2调控肺腺癌A549细胞的活力和侵袭能力.