目的:探讨神经肽P物质(substance P，SP)活化NK92-MI细胞脱颗粒作用，分析差异表达circRNA调控NK92-MI细胞可能的机制。方法:将培养后的NK92-MI细胞分为空白对照组、SP刺激组和NK-1受体拮抗剂(neurokinin-1 receptor antagonist，NK-1RA)组。荧光定量PCR(real-time quantification PCR，qRT-PCR)法检测并分析NK92-MI细胞经SP刺激后穿孔素mRNA表达的时间效应，流式细胞术检测NK92-MI细胞脱颗粒标志物CD107a的表达，高通量测序技术分析circRNA表达谱，qRT-PCR法验证差异倍数最大的circZNF609和circAMBRA1的表达。生物信息学分析circZNF609、circAMBRA1与穿孔素相关的微小RNA(microRNA，miRNA)，并分析circZNF609、circAMBRA1与穿孔素mRNA表达的相关性。结果:刺激12 h后，SP刺激组穿孔素mRNA表达较对照组升高约2.06倍，刺激24 h后，穿孔素mRNA表达继续升高，约为对照组3.65倍，差异均具有统计学意义( t值分别为4.00、4.72， P值均<0.05)；在12 h时，NK-1RA组穿孔素mRNA的表达高于对照组，差异具有统计学意义( t＝2.39， P<0.05)，但在24 h时，与对照组比较差异无统计学意义( P>0.05)。与静息NK92-MI细胞组相比，K562刺激组、K562+SP组、K562+SP+NK-1RA组中NK92-MI细胞CD107a的表达显著升高{(0.81±0.38)%比[(9.59±2.52)%，(17.78±1.94)%，(10.19±2.04)%]， t值分别为6.27、12.19、7.83， P值均<0.05}。SP作用NK92-MI细胞后共有9个差异表达的circRNAs：circZNF609、circAMBRA1、circCAMSAP1、circAAGAB、circLMBR1、circGNB1、circBPTF、circGPI和circCSNK1G3。NK-1RA可以阻断除circCSNK1G3外的上述8个circRNAs的表达。qRT-PCR验证circZNF609和circAMBRA1的表达与测序结果一致。生物信息学预测，circZNF609、circAMBRA1与穿孔素相关的miRNAs为miR-149-5p、miR-940和miR-942-5p。circZNF609、circAMBRA1与穿孔素mRNA的表达均呈负相关( r值分别为-0.57、-0.74， P值均<0.05)。 结论:SP可以通过与NK-1R结合活化NK92-MI细胞，下调circZNF609和circAMBRA1的表达，上调穿孔素mRNA的表达，促进NK92-MI细胞脱颗粒增强其杀伤功能。

目的:探讨Circ_0015756对非小细胞肺癌增殖和转移的影响及其分子机制。方法:选取河南省人民医院2021年1月至2022年12月手术切除的52例非小细胞肺癌盒癌旁组织作为研究对象，采用荧光定量聚合酶链反应(PCR)分析Circ_0015756表达水平。非小细胞肺癌A549培养至对数生长期，分为对照组和Circ_0015756 KD组，采用细胞计数试剂盒(CCK-8)、5-乙炔基-2’-脱氧尿苷(EdU)和体内移植瘤实验分析两组细胞的增殖能力，采用划痕和Transwell实验分析两组细胞转移能力。生物信息学和双荧光素酶报告基因分析Circ_0015756的靶基因，采用荧光定量PCR分析肿瘤组织和细胞系中靶基因表达水平。组间计量数据比较采用 t检验。 结果:癌旁组织Circ_0015756表达水平(0.94±0.13)明显低于非小细胞肺癌组织Circ_0015756表达水平(1.78±0.27)，差异有统计学意义( t＝20.440， P<0.05)。癌旁组织微小RNA(miR)-942-5p表达水平(1.38±0.18)明显高于非小细胞肺癌组织(0.69±0.11)，差异有统计学意义( t＝23.640， P<0.05)。对照组细胞Circ_0015756表达水平(1.01±0.13)明显高于Circ_0015756 KD组(0.50±0.09)，差异有统计学意义( t＝7.867， P<0.05)。对照组细胞吸光度值(2.01±0.13)明显高于Circ_0015756 KD组(1.43±0.13)，差异有统计学意义( t＝7.591， P<0.05)。对照组细胞EdU染色阳性率[(89.34±3.50)]明显高于Circ_0015756 KD组[(73.04±5.17)%]，差异有统计学意义( t＝6.388， P<0.05)。对照组细胞成瘤体积[(1 034.69±108.92) mm 3]明显高于Circ_0015756 KD组[(729.79±95.01) mm 3]，差异有统计学意义( t＝6.670， P<0.05)。对照组细胞划痕愈合率[(82.41±3.74)%]明显高于Circ_0015756 KD组[(55.59±6.54)%]，差异有统计学意义( t＝8.718， P<0.05)。对照组细胞迁移数量[(107.29±9.73)个]明显高于Circ_0015756 KD组[(74.27±7.16)个]，差异有统计学意义( t＝7.162， P<0.05)。miR-942-5p是Circ_0015756的靶基因。对照组细胞miR-942-5p (1.18±0.11)明显低于Circ_0015756 KD组(2.11±0.14)，差异有统计学意义( t＝12.960， P<0.05)。 结论:Circ_0015756在非小细胞肺癌组织中呈高表达，促进非小细胞肺癌的增殖和转移，通过miR-942-5p来实现的。

目的:探索SOX13基因来源的环状RNA hsa_circ_0004777的特征分析及功能预测。方法:探究了hsa_circ_0004777的基本特征，包括验证反向剪接位点，RNase R消化实验，细胞内RNA的胞质胞核分布，蛋白翻译潜能的预测。此外，使用生物信息学方法，预测hsa_circ_0004777结合的微小RNA（microRNA，miRNA）以及miRNA的靶基因，并且构建了circRNA-miRNA-mRNA的网络图。再对预测到的miRNA的靶基因进行基因本体论（gene ontology，GO）功能富集分析和信号通路富集分析。结果:hsa_circ_0004777的形成是由SOX13基因第4号外显子反向剪接至第2号外显子，hsa_circ_0004777能抵抗RNase R处理，主要分布在细胞质。生信预测hsa_circ_0004777通过作为hsa-miR-1225-3p、hsa-miR-637、hsa-miR-139-5p、hsa-miR-145-5p、hsa-miR-384、hsa-miR-660-5p、hsa-miR-942-5p、hsa-miR-331-3p这8个miRNA的海绵来发挥作用；hsa_circ_0004777潜在结合的8个miRNA的靶基因在对聚合酶Ⅱ启动子转录的正调控、DNA模板、骨骼肌细胞分化等生物过程显著富集。结论:成功探索了SOX13基因来源的环状RNA hsa_circ_0004777的特征，并且从circRNA-miRNA-mRNA网络图中预测了它的功能，为进一步研究hsa_circ_0004777奠定了基础，也为更深入研究SOX13提供了思路。

目的 探讨长链非编码RNA(lncRNA)小核仁RNA宿主基因15(SNHG15)对β淀粉样蛋白25-35(Aβ25-35)诱导的PC12细胞氧化应激和细胞凋亡的影响及分子机制.方法 将PC12细胞分为Con组、Aβ25-35 组、Aβ25-35+si-SNHG15组、Aβ25-35+si-NC组、Aβ25-35+微小RNA(miR)-942-5p组、Aβ25-35+miR-NC组、Aβ25-35+si-SNHG15+anti-miR-942-5p组、Aβ25-35+si-SNHG15+anti-miR-NC组;实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测lncRNA SNHG15和 miR-942-5p表达水平;酶联免疫吸附试验检测细胞超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)表达水平;蛋白质印迹法检测蛋白表达;流式细胞术检测细胞凋亡;双荧光素酶报告实验检测lncRNA SNHG15和 miR-942-5p靶向关系.结果 Aβ25-35 诱导的 PC12细胞中lncRNA SNHG15、MDA、Bax表达水平及细胞凋亡率升高,SOD活性、miR-942-5p、Bcl-2表达水平降低(P<0.05).抑制lncRNA SNHG15表达或过表达miR-942-5p后,SOD活性、Bcl-2表达水平升高,细胞凋亡率、MDA、Bax表达水平降低(P<0.05).lncRNA SNHG15靶向调控miR-942-5p.下调miR-942-5p表达逆转了抑制lncRNA SNHG15表达对Aβ25-35 诱导的PC12细胞氧化应激和凋亡的作用.结论 抑制lncRNA SNHG15表达通过上调miR-942-5p表达减轻Aβ25-35 诱导的PC12细胞氧化应激和细胞凋亡.

目的 观察微小RNA(miRNA,miR)-942在肝细胞肝癌(HCC)组织中的表达及其对肝癌细胞增殖、侵袭能力的影响.方法 采用实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)检测70例肝癌和癌旁组织miR-942的表达;将Huh7细胞分别转染miRNA随机序列(阴性对照组)、miR-942模拟物(miR-942模拟物组)和miR-942抑制物(miR-942抑制物组)后,噻唑蓝(MTT)法和Transwell实验观察Huh7细胞增殖和侵袭能力变化;Western blot检测Huh7细胞增殖细胞核抗原(PCNA)和基质金属蛋白酶-9(MMP-9)的蛋白表达.结果 miR-942在肝癌组织中表达量(0.92±0.08)与癌旁组织(0.42±0.05)比较显著上调(t=5.712,P=0.000);MTT细胞增殖实验结果显示5d后miR-942抑制物组Huh7细胞吸光度(A)值显著低于阴性对照组和miR-942模拟物组(0.79±0.02比1.02±0.04,t =7.513,P=0.001;0.79±0.02比1.51±0.12,t=8.621,P=0.001);Transwell结果显示miR-942抑制物组侵袭转移细胞数明显减少[(59.13±5.41)个比(97.26±11.13)个,t=11.712,P=0.000;(59.13±5.41)个比(99.42±12.13)个,t=12.113,P=0.000];Western blot结果显示PCNA和MMP-9蛋白在miR-942抑制物组的表达分别下调了80.1％和56.3％(t=5.231,P=0.000;t =6.415,P=0.000).结论 miR-942在肝癌组织中高表达,下调miR-942可抑制肝癌细胞的增殖和侵袭,其机制与下调PCNA和MMP-9表达有关.

目的:探讨微小RNA-942-5p(miR-942-5p)在肝细胞癌(HCC)组织中的表达及其功能.方法:用实时定量PCR检测西安交通大学第一附属医院样本库保存的73例HCC组织和对应癌旁组织中miR-942-5p的表达.分析miR-942-5p表达与HCC患者临床病理资料的关系,同时分析TCGA数据库中miR-942-5p表达与HCC患者总生存率的关系.Transwell小室检测干扰miR-942-5p表达后HCC细胞迁移和侵袭能力的变化,StarBase V3.0网站和荧光素酶报告基因质粒预测分析miR-942-5p的下游靶点,并用Western blot验证.结果:miR-942-5p表达量在HCC组织中明显高于对应癌旁组织(2.390 vs.1.764,P＜0.05).miR-942-5p表达量与HCC患者肿瘤数日、血管浸润和临床分期明显有关(均P＜0.05).miR-942-5p高表达HCC患者总生存率明显低于miR-942-5p低表达HCC患者(19.535％vs.53.873％,P＜0.05).沉默miR-942-5p表达后,肝癌HCCLM3和MHCC97H细胞迁移和侵袭能力明显减弱(均P＜0.05) 预测与分析结果显示,扣针蛋白5(FBLN5)是miR-942-5p的直接下游靶点(P＜0.05),沉默miR-942-5p表达导致HCCLM3和MHCC97H细胞中FBLN5表达增加.结论:miR-942-5p在HCC组织中表达异常升高并与恶性临床特征和不良预后密切相关,机制可能与miR-942-5p抑制FBLN5表达促进HCC细胞迁移和侵袭有关.

目的 探讨长基因间非编码RNA 472(LINC00472)靶向调控微小RNA-942-5p(miR-942-5p)表达及对非小细胞肺癌(NSCLC)细胞上皮间质转化(EMT)的影响.方法 采用GEPIA分析来自TCGA数据库的969例NSCLC组织(483例腺癌+486例鳞癌)的LINC00472水平,实时荧光定量PCR(qPCR)检测正常肺上皮细胞BEAS-2B及NSCLC细胞系(NCI-H157、NCI-H1975和A549)的LINC00472水平.构建LINC00472过表达质粒pcDNA3.1-LINC00472并采用脂质体法转染A549细胞,根据转染质粒分为3组:未转染任何质粒的空白对照组、转染pcDNA3.1质粒的阴性对照组和转染pcDNA3.1-LINC00472质粒的过表达组.MTT比色法、划痕实验和Transwell小室实验检测A549细胞的增殖活力、划痕愈合率和穿膜细胞数,qPCR和Western blotting检测EMT相关因子E-钙黏蛋白(E-cad)、N-钙黏蛋白(N-cad)和波形蛋白(Vim)的水平,LncBase预测LINC00472与miR-942-5p的结合序列并经荧光素酶报告基因实验验证两者的靶向关系.结果 GEPIA在线分析显示,NSCLC组织的LINC00472水平低于正常组织(P<0.05);NSCLC细胞的LINC00472水平均低于BEAS-2B细胞(P<0.05),选取水平最低的A549细胞进行后续功能实验.过表达组的LINC00472和E-cad水平升高,而miR-942-5p、N-cad和Vim水平降低(P<0.05).过表达组转染48、72 h后的增殖活力低于其余两组(P<0.05).过表达组的划痕愈合率为(29.148±3.034)％,低于空白对照组的(84.517±8.722)％和阴性对照组的(87.479±5.672)％,穿膜细胞数为(144.437±12.178)个,亦低于空白对照组的(240.365±14.156)个和阴性对照组的(224.713±17.805)个,差异有统计学意义(P<0.05).荧光素酶活性检测结果显示,miR-942-5p模拟物能抑制LINC00472野生型质粒的荧光素酶活性(P<0.05),但对突变型无影响(P>0.05).空白对照组和阴性对照组上述指标的差异无统计学意义(P>0.05).结论 LINC00472在NSCLC组织和细胞中表达均下调,增强LINC00472表达可抑制NSCLC细胞的EMT和侵袭迁移能力,可能通过靶向miR-942-5p来发挥抑癌作用,LINC00472/miR-942-5p轴在NSCLC防治中有一定潜能.

目的 探讨微小RNA对高血压相关性脑出血(HRICH)患者脑血管组织的影响.方法 回顾性连续纳入2018年9月至2019年12月四川绵阳四〇四医院神经外科自发性高血压脑出血住院患者9例为观察组,回顾性连续纳入同期四川绵阳四〇四医院神经外科因颅脑外伤需行颅内减压术且伴高血压病史的住院患者9例为对照组.术中取两组患者术区皮质造瘘口的少量脑血管标本,通过Trizol法提取标本总RNA,筛选差异表达的微小RNA.从微小RNA差异表达谱中随机选择3种微小RNA,用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(PCR)技术验证结果的可靠性.采用TargetScan、miRDB、miRanda三种在线分析工具预测差异表达微小RNA的靶基因,并对靶基因进行京都基因与基因组百科全书(KEGG)分析,富集程度越高,相应的P值越小.结果 (1)与对照组标本比较,观察组患者脑血管组织细胞中有35种差异表达的微小RNA,其中15种微小RNA表达下调,即hsa-let-7g-3p、hsa-miR-103a-2-5p、hsa-miR-126-5p、hsa-miR-130a-3p、hsa-miR-210-3p、hsa-miR-214-3p、hsa-miR-28-5p、hsa-miR-34a-5p、hsa-miR-378a-3p、hsa-miR-145-5p、hsa-miR-4785、hsa-miR-549a-5p、hsa-miR-574-3p、hsa-miR-590-3p、hsa-miR-660-3pg表达降低(均P<0.05);20种微小RNA表达上调,即hsa-miR-1180-3p、hsa-miR-1224-3p、hsa-miR-128-2-5p、hsa-miR-1298-3p、hsa-miR-137-5p、hsa-miR-139-3p、hsa-miR-139-5p、hsa-miR-2682-5p、hsa-miR-370-3p、hsa-miR-433-3p、hsa-miR-485-5p、hsa-miR-541-3p、hsa-miR-543、hsa-miR-598-5p、hsa-miR-6505-5p、hsa-miR-668-3p、hsa-miR-7-5p、hsa-miR-744-5p、hsa-miR-873-3p、hsa-miR-942-3p表达升高(均P<0.05).(2)对已知的差异表达微小RNA采用TargetScan、miRDB、miRanda三种在线分析工具进行基因预测,结果显示,共同交集预测得到的靶基因有87个交集.(3)随机抽取3种差异表达的微小RNA进行荧光定量逆转录PCR验证,结果显示,与对照组(颅脑外伤伴高血压病史者)比较,观察组(自发性高血压脑出血者)hsa-miR-145-5p、hsa-miR-28-5p表达降低(0.22±0.17比1.00±0.29,t=0.153;0.13±0.03比1.00±0.62,t=0.421),hsa-miR-139-3p表达升高(1.95±0.29比1.00±0.52,t=0.492),组间差异均有统计学意义(均P<0.05).(4)交集靶基因的KEGG富集分析结果显示,主要涉及Ras相关蛋白1信号通路、黏附斑激酶、肿瘤微小RNA、环磷酸鸟苷-环磷酸鸟苷依赖性蛋白激酶信号通路、磷脂酰肌醇3激酶-蛋白激酶B信号通路、丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路、人乳头状瘤病毒、肿瘤蛋白聚糖、肿瘤通道蛋白,其中MAPK信号通路的富集程度较高(P<0.01).结论 微小RNA可能在调控HRICH的相关生物学功能中具有重要作用.

目的 探讨长链非编码RNA(lncRNA)OPA相互作用蛋白5反义转录本1(OIP5-AS1)对脑胶质瘤细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响机制.方法 收集33例胶质瘤患者(低级别胶质瘤14例、高级别胶质瘤19例)和33例颅脑损伤患者的组织标本.实时荧光定量PCR(qPCR)检测组织和细胞中OIP5-AS1、微小RNA-942-5p(miR-942-5p)和检查点激酶1(CHEK1)mRNA表达,分析胶质瘤组织中OIP5-AS1、miR-942-5p和CHEK1 mRNA表达水平的相关性.体外培养人脑胶质瘤细胞系U87、SHG-44、U251、H4和正常人星形胶质细胞NHA,Western blot检测细胞中CHEK1蛋白表达.将U87细胞分为对照(NC)组、siRNA阴性对照(si-NC)组、OIP5-AS1 siRNA(si-OIP5-AS1)组、si-OIP5-AS1+inhibitor阴性对照(si-OIP5-AS1+anti-NC)组、si-OIP5-AS1+miR-942-5p抑制剂(si-OIP5-AS1+anti-miR-942-5p)组,采用Lipofectamine 3000试剂进行转染.转染后,qPCR和Western blot检测细胞中OIP5-AS1、miR-942-5p和CHEK1 mRNA和蛋白表达水平;MTT法测定细胞增殖活性;流式细胞术检测细胞凋亡;Transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力.最后通过双荧光素酶和RNA免疫沉淀(RIP)实验验证OIP5-AS1和miR-942-5p以及CHEK1和miR-942-5p的相互作用.结果 OIP5-AS1和CHEK1在脑胶质瘤组织和细胞中过表达,miR-942-5p呈低表达(均P<0.05);相关分析显示,脑胶质瘤组织中OIP5-AS1与miR-942-5p的表达水平呈负相关,miR-942-5p与CHEK1 mRNA的表达水平呈负相关,CHEK1与OIP5-AS1 mRNA的表达水平呈正相关;且OIP5-AS1、CHEK1 mRNA在高级别胶质瘤组织中的表达明显高于低级别组织,而高级别胶质瘤中的miR-942-5p水平明显低于低级别组织(P<0.01).沉默OIP5-AS1可显著上调miR-942-5p,抑制CHEK1的mRNA和蛋白表达(均P<0.05);沉默OIP5-AS1可显著抑制U87细胞增殖、迁移和侵袭,促进U87细胞凋亡(均P<0.05);下调miR-942-5p可上调CHEK1表达,阻断OIP5-AS1沉默对脑胶质瘤细胞生物学行为的影响(均P<0.05).双荧光素酶和RIP实验证实miR-942-5p是OIP5-AS1的靶基因,CHEK1是miR-942-5p的下游靶基因.结论 沉默OIP5-AS1可能通过上调miR-942-5p抑制CHEK1表达,抑制脑胶质瘤细胞的侵袭和迁移,并促进细胞凋亡.

目的:探究LncRNA FENDRR通过miR-942-5p对EC细胞增殖、上皮间充质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)和侵袭的影响.方法:收集EC和食管正常组织,将EC-113 细胞分为BC组(不转染)、过表达(OE)-FENDRR-NC 组(转染 pcDNA 空质粒)、OE-FENDRR 组(转染pcDNA-LncRNA FENDRR质粒)、OE-FENDRR+miR-942-5p mimics-NC组(共转染pcDNA-LncRNA FEN-DRR+miR-942-5p mimics-NC)和OE-FENDRR+miR-942-5p mimics组(共转染pcDNA-LncRNA FENDRR+miR-942-5p mimics).实时荧光定量聚合酶链反应(real-time fluorescence quantitative poly-merase chain reaction,RT-qPCR)分析组织或细胞中LncRNA FENDRR、miR-942-5p表达量;细胞计数试剂盒-8(cell counting kit-8,CCK-8)法、裸鼠成瘤实验、Transwell法分析EC-113 细胞体外和体内增殖和侵袭活性;双荧光素酶报告实验和RNA pull down实验分析LncRNA FENDRR和miR-942-5p的靶向关系;蛋白质印迹法(Western blot)分析EMT相关蛋白表达.结果:转染pcDNA-LncRNA FENDRR质粒可增高EC-113 细胞的LncRNA FENDRR表达量,降低miR-942-5p表达,同时降低体外和体内增殖活性、侵袭数量、N-钙黏附素(N-cadherin,N-CAD)、波形蛋白(vimentin,VIM)和Snial及基质金属蛋白酶 9(matrix metalloproteinase 9,MMP9)蛋白水平,增加 E-钙黏附素(E-cadherin,E-CAD)蛋白水平(P＜0.05),而miR-942-5p mimics逆转了上述作用.LncRNA FENDRR可靶向并下调miR-942-5p表达.结论:LncRNA FENDRR为miR-942-5p分子海绵,可以下调miR-942-5p表达,从而抑制EC细胞增殖、EMT和侵袭能力.