目的:了解青海省自然疫源性病区小型兽类空间分布，并以线粒体细胞色素C氧化酶亚基I（COI）基因作为分子标记，对捕获的小型兽类进行分子水平的物种鉴定。方法:2009 - 2016年，在青海省6个州的16个市（县），采集小型兽类标本为研究对象，分析小型兽类地区分布、不同海拔分布、生态环境类型分布；采用PCR扩增小型兽类的COI基因部分片段序列（长度约650 bp），并进行同源性比较、遗传距离和系统发育分析。结果:共捕获小型兽类1 631只，分别隶属于3目7科21属30种；其中啮齿动物926只，分别隶属于5科19属25种，占56.78%。格尔木市采集的小型兽类数量最多（313只），2 800 ~ < 3 000 m的海拔段为小型兽类分布最高峰（532只），沙地草原捕获数量最多（612只）。共成功扩增292只小型兽类COI基因，同源性比对与目标序列一致。种内遗传距离为0.01% ~ 2.90%，种间遗传距离为4.00% ~ 12.00%，种间遗传距离大于种内遗传距离；属间遗传距离为13.00% ~ 21.00%，科间遗传距离为22.00% ~ 25.00%。邻接法（NJ）系统发育树显示，同种个体聚为有很高支持度的单一分支共形成20个，置信度为98% ~ 100%。结论:青海省小型兽类空间分布受地区、海拔、生态环境等自然地理因素的综合影响，且分子鉴定法可弥补形态学鉴定中的不足。

目的:建立稳定的KIR2DS4基因测序分型法并研究KIR2DS4在中国汉族人群中等位基因多态性。方法:采用PCR序列特异性引物(sequence specific primer，SSP)分析法对222名随机中国汉族个体基因组中的KIR2DS4基因进行阴阳性初筛鉴定，对KIR2DS4阳性的标本采用高保真、长片段PCR测序分型技术(PCR-sequence based typing, PCR，PCR-SBT)对KIR2DS4基因的第4、5外显子的片段进行扩增、测序及分型。结果:建立的PCR-SBT方法成功扩增出KIR2DS4基因的第4、5外显子序列，长度达3.2 kb。探究中国汉族人群中KIR2DS4等位基因型及频率。检出KIR2DS4阳性个体为209个，阳性率为94.1%。测序分型共发现12种基因型和7种等位基因，6种已知的等位基因及其检出频率为：KIR2DS4 *00101/011(180次，81.1%), KIR2DS4 *010(53次，23.9%)，KIR2DS4 *004(34次，15.3%), KIR2DS4 *003(15次和6.8%), KIR2DS4 *006(2次，0.9%)以及KIR2DS4 *015(1次，0.5%)。发现并鉴定一个新等位基因KIR2DS4 *016，与其最相近的等位基因KIR2DS4 *010区别在第5外显子，KIR2DS4 *010的第5外显子是22 bp缺失型，而KIR2DS4 *016的第5外显子为完整型。该新等位基因在受检人群中被发现3次，频率为1.4%，并非罕见等位基因，该等位基因序列已向GenBank(登录号：KC414890)及IPD-KIR数据库(提交号：IWS40001804)提交，并获得世界卫生组织HLA系统命名因子委员会的命名。 结论:本文中我们成功建立了KIR2DS4基因4、5外显子测序分型方法，并对其等位基因多态性进行了探究，发现了新的KIR2DS4等位基因型，丰富了中国汉族人群KIR2DS4基因多态性数据。

目的:调查分析基于中国罕见病注册系统中脊髓性肌萎缩症（SMA）队列人群相关基因诊断技术的应用现况和发展趋势。方法:本项横断面调查研究以2016年7月至2018年12月在首都儿科研究所注册登记的200例SMA患儿为研究对象，通过查阅注册信息、基因检测报告以及电话随访等方式获得患儿基本信息、疾病分型、基因型、基因诊断相关信息等。按照检测时间分层后，分别统计采用不同基因诊断技术的人数和构成比，采用Pearson相关分析基因诊断技术的应用与时间的相关性。结果:除3例资料不全的病例，共纳入197例SMA病例。SMAⅠ、Ⅱ和Ⅲ型的患儿分别为37例（18.8%）、115例（58.4%）和45例（22.8%），SMN1基因纯合缺失和复合杂合变异病例分别为185（93.9%）和12例（6.1%）。2004—2017年SMA基因诊断技术有7种：以多重连接探针扩增技术（MLPA）为主，占54.1%（100/185），其次是聚合酶链反应-限制性片段长度多态性（PCR-RFLP）和一代测序，分别为22.7%（42/185）和10.3%（19/185），等位基因特异性PCR（AS-PCR）、实时定量PCR（qPCR）、全外显子组测序（WES）及变性高效液相色谱分析（DHPLC）分别9、6、5和4例，占2.2%~4.9%。MLPA的应用从2010年开始逐步增加（ r=0.95， P<0.05），而PCR-RFLP从2004年开始逐步下降（ r=-0.99， P<0.05），其他检测方法应用与时间暂未发现相关性（ P>0.05）。定量检测技术（MLPA、qPCR和DHPLC）的应用从2010年开始逐渐增高（ r=0.94， P<0.05），定性检测技术（PCR-RFLP、一代测序、AS-PCR和WES）从2004年开始逐渐下降（ r=-0.94， P<0.05）。纯合缺失与复合杂合变异的基因重复检测率分别为12.4%（23/185）和41.7%（5/12），差异有统计学意义（χ2=5.86， P<0.05）。基因检测结果显示，同时提供SMN1、SMN2基因定量分析报告的构成比在2008—2015年为56.8%（21/37），2016—2017年上升至69.1%（56/81）。 结论:SMA基因检测技术从定性检测技术逐步发展为以MLPA和qPCR为主的定量检测技术。SMA定量检测报告不仅提供了 SMN1致病基因的定量结果，也提供了 SMN2修饰基因的定量结果。

目的 构建尘肺病易感基因单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphisms,SNPs)多位点检测图谱.方法 利用限制性片段长度多态性(restriction fragment length polymorphism,.RFLP)技术,对已报道的易感基因SNPs位点进行整合,并根据基因位点设计不同的扩增片段和酶切片段,构建涵盖多个不同易感基因SNPs位点组成的多位点图谱,通过琼脂糖凝胶电泳的多个长短不一的条带快速实现基因分型;采用陕北某矿区煤工尘肺(coal workers'pneumoconiosis,CWP)和接尘人群队列进行检测,通过遗传分化指数(fixation index,Fst)分析易感基因不同多态位点在队列遗传分化情况.结果 成功构建 5 个易感基因 IL-1β rs16944 T＞C、IL-6 rs1800796 G＞C、IL-8 rs4073 A＞T、HSP70-1 rs562047 C＞G、TGF-β rs1800469 T＞C 的 SNPs 图谱,可快速有效鉴别 SNPs 的基因型;Fst 分析表明IL-1βrs16944、TGF-β rs1800469的Fst为＞0.05～0.15,即发生中等程度遗传分化.结论 该易感基因SNPs多位点图谱可以有效实现基因分型,易感位点rs16944和rs1800469更易受到疾病选择压力的影响,与尘肺病的易感风险有关.

为探讨太空环境对葛麻姆Pueraria montana的诱变效应,筛选出生长状态佳、异黄酮成分含量高的优良种质,实验对79株航天葛麻姆和10株对照葛麻姆进行农艺性状观测、花朵异黄酮成分与AFLP荧光分子标记,用Excel 2019、SPSS 25.0、NTSYSpc-2.11F、Popgen 32等软件进行遗传多样性分析并聚类.结果表明,航天组的叶片毛姿态与花结构等2个性状发生变化,数量性状的CV、H'均高于对照组,聚类后有5株航天葛麻姆分出.航天组共有10株葛麻姆花的6"-O-木糖鸢尾苷与鸢尾苷显著高于对照组,二者总量均超过11％,聚类后共有9株航天葛麻姆分出.从64对引物中筛选出9对多态性引物,多态性位点数共1 620个,多态位点百分率(PPL)平均值为83.33％;Nei's基因多样性指数(H)平均值为0.192 2、Shannon's信息指数(I)平均值为0.305 2,聚类后有4株航天植株分出.综合筛选结果,航天组30号、66号、89号葛麻姆受到太空环境的诱变作用较大,主要表现为生长状况更佳、花朵异黄酮含量更高,且30号有花结构变异、花重达到对照组2倍,可作为后续试验的重点研究材料.

目的:基于内转录间隔区(ITS)序列,运用DNA条形码技术对滇鸡血藤药材及其混伪品进行序列比对分析,根据单核苷酸多态性位点构建滇鸡血藤单倍型数据库,建立快速、准确鉴定滇鸡血藤的分子鉴定方法.方法:以滇鸡血藤及其混伪品为材料,利用DNA提取试剂盒,分别提取滇鸡血藤及其混伪品的总DNA,对ITS序列进行聚合酶链式反应扩增及测序分析,使用DNAMAN软件统计其片段长度及变异位点个数,使用MEGA软件对数据进行分析比对,计算Kimura2-parameter遗传距离,并利用邻接法建立系统发育树进行分析.结果:滇鸡血藤ITS序列片段长度为675 bp,共包括19种单倍型,与其主要混伪品的差异位点为212、223、224 bp,系统发育树显示,ITS序列能够区分滇鸡血藤及其混伪品.结论:ITS条形码可以作为区分鉴定滇鸡血藤及其混伪品的分子条形码,包含19个单倍型的单倍型数据库覆盖了滇鸡血藤全部的单倍型.

目的:通过对子座和虫体部分进行表型与DNA条形码序列分析,探讨一种发现于四川的特殊冬虫夏草(以下简称特殊虫草)与常见冬虫夏草的区别.方法:体视显微镜观察虫草样品的外部特征;聚合酶链式反应(PCR)扩增得到真菌部位内转录间隔区(ITS)序列和宿主蝙蝠蛾昆虫的细胞色素氧化酶Ⅰ(COⅠ)序列;利用CodonCode Aligner和MEGA软件进行序列分析,建立邻接(NJ)系统进化树;对ITS序列进行限制性内切酶图谱分析,寻找具有鉴别意义的酶切位点,并通过PCR-限制性片段长度多态性(RFLP)鉴别进行验证.结果:特殊虫草与常见冬虫夏草相比,虫体头部的颜色明显不同;子座真菌的ITS序列存在 7 个差异位点,虫体COⅠ序列存在56 个差异位点,基于ITS序列及COⅠ序列的NJ系统进化树分析均显示,两者不能聚为一支;在两者差异区域,冬虫夏草存在 1 个XhoⅠ的酶切位点,因此其ITS序列的PCR产物可被限制性内切酶XhoⅠ切割为 2 个片段,特殊虫草不能被XhoⅠ切割,所以酶切前后的PCR产物在琼脂糖凝胶图上没有变化,通过该方法可对两者进行鉴别.结论:发现了一种特殊虫草,其与常见冬虫夏草的真菌子座和宿主蝙蝠蛾昆虫部分均有明显不同,并为鉴别两者提供了有效方法.

目的 检测广西壮族自治区南宁市登革热媒介白纹伊蚊现场种群的击倒抗性基因型及其分布特点,以了解其抗药性水平,为科学防控白纹伊蚊提供依据.方法 2022年在南宁市采用勺捕法采集伊蚊幼蚊,送实验室饲养至成虫,经形态学方法鉴定后,将白纹伊蚊用75％乙醇溶液浸泡,于-20℃保存备用.采用磁珠法试剂盒提取单只成蚊DNA,PCR扩增电压门控钠离子通道(VGSC)基因部分片段,测序结果在美国国立生物技术信息中心进行BLAST比对,对确认为白纹伊蚊VGSC基因的序列使用DNAStar 7.1分析其VGSC基因单位点及多位点联合突变情况.结果 共检测175只白纹伊蚊,获得350条基因序列,长度约为400 bp,VGSC基因1532位点未发现突变,1016和1534位点均存在突变.1016位点有2种等位基因,分别为野生型1016V(148,78.28％)和突变型1016G(49,21.72％);3种基因型分别为野生型纯合子1016V/V(126,72.00％)、突变型纯合子1016G/G(27,15.43％)和野生/突变型杂合子1016V/G(22,12.57％).1532位点有1种等位基因,即野生型1532I(175,100％);基因型均为野生型纯合子1532I/I.1534位点有3种等位基因,分别为野生型1534F(51,16.86％)、突变型1534S(116,36.29％)和突变型1534C(135,46.85％);6种基因型分别为野生型纯合子1534F/F(8,4.57％)、野生/突变型杂合子1534F/S(21,12.00％)、野生/突变型杂合子1534F/C(22,12.57％)、突变型杂合子1534S/C(64,36.57％)、突变型纯合子1534S/S(21,12.00％)和突变型纯合子1534C/C(39,22.29％).结论 南宁市VGSC基因突变率较高,应密切关注白纹伊蚊抗药性水平,科学、规范、高效地指导卫生杀虫剂的使用.

目的 利用全基因组扫描方法,对BALB/c和DBA2小鼠基因组中疟原虫P.yoelii17XL(P.y17XL)易感位点进行染色体定位.方法 以雌性BALB/c小鼠与雄性DBA2小鼠杂交建立杂交一代小鼠(C.DF1),以雄性C.DF1小鼠与雌性BALB/c小鼠回交,得到回交小鼠(C.DN2).提取129只雌性C.DN2小鼠基因组DNA.利用扩增片段长度多态性确定每只小鼠分布于全基因组的微卫星遗传标记基因型;同时监测小鼠感染P.yoelii17XL后的原虫血症水平.采用基因定位专用软件(MAPMANAGER)进行数量性状位点(QTL)分析.结果 BALB/c小鼠感染P.y17XL后,原虫血症水平迅速攀升,于第6~7d全部死亡;DBA2小鼠感染后原虫血症水平上升缓慢,第10d的生存率为75.00%;C.DF1小鼠的原虫血症水平与DBA2相近,生存率为100.00%.对C.DN2小鼠基因组中的控制感染后原虫血症水平的QTL进行的连锁分析显示,控制感染后第3、4、5 d原虫血症水平的QTL均与小鼠第3号染色体66.69cM处遗传标记D3Mit258连锁.此外,控制原虫血症水平的QTL还与第3号染色体的D3Mit307(19.01cM)、D3Mit278(32.59cM)、D3Mit75(43.73cM)以及第15号染色体的D15Mit90(30.86cM)形成有统计学意义的连锁.当C.DN2小鼠D3Mit278、D3Mit75、D3Mit258和D15Mit90位点为纯合的BALB/c来源的等位基因时,感染P.y17XL后的原虫血症水平低于以上位点基因型为杂合的小鼠;在D3Mit258基因型相同的小鼠中,D15Mit90位点为纯合的BALB/c来源的等位基因时,感染P.y17XL后的原虫血症水平低于以上位点基因型为杂合的小鼠.结论 控制C.DN2小鼠感染P.y17XL后原虫血症水平的QTLs与遗传标记D3Mit307、D3Mit278、D3Mit75、D3Mit258、D15Mit90连锁.BALB/c小鼠来源的与D3Mit278、D3Mit75、D3Mit258和D15Mit90连锁的QTLs对P.y17XL的感染起抵抗作用.

长期以来,螨类主要依靠其形态特征进行系统学研究.DNA标记是指能反映生物个体或物种间基因组中某种差异特征的DNA片段.近年来,DNA标记技术在螨类系统学研究中得到越来越广泛的应用.本文综述了随机扩增多态性RAPD、限制性内切酶片段长度多态性RFLP、微卫星SSR、核酸序列扩增、扩增片段长度多态性AFLP和直接扩增片段长度多态性DALP等6种DNA标记技术在螨类系统学研究中的应用现状及前景.