目的 分析477例ABO血型鉴定自动审核不通过的原因及其影响因素,初步建立相应的处理流程.方法 依据并参考临床实验室定量检验结果的自动审核(WS/T 616-2018)的行标,制定了我室ABO血型鉴定的自动审核规则.收集2021年1月至2022年12月北京协和医院检验科ABO血型鉴定自动审核不通过的共计477患者的临床资料,分析ABO血型鉴定不通过的原因,结合患者的临床诊断特征,制定相应的处理流程.结果 按原因分类:抗原所致为79例,其中抗原减弱或缺失为50例,亚型为29例;抗体所致为398例,其中血清抗体减弱/缺失为305例,冷凝集素(冷抗体)为23例/自身抗体为27例,红细胞同种抗体为43例.按患者所患疾病类型:肿瘤为94例占19.7％;血液病为59例占12.4％;免疫性疾病为43例占9％;内分泌疾病为25例占5.2％;妇科疾病及妊娠为72例占15.1％;其他疾病为184例占38.6％.结论 在477例ABO血型鉴定自动审核不通过的原因中,以年龄变化导致的生理变化最为常见;此外不规则抗体、ABO亚型、抗原减弱也可造成此结果.在血型鉴定工作中,应综合考虑患者的情况,针对其原因选择相应辅助实验方法进行鉴定,以提高ABO血型的鉴定准确性,保证临床用血安全.

目的:探讨长链非编码RNA CDKN2BAS(lncRNA CDKN2BAS)是否通过靶向微小RNA(miRNA，miR)-98-5p影响骨肉瘤细胞增殖、凋亡、迁移及侵袭。方法:实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测成骨细胞hFOB1.19(购自上海通派生物科技有限公司)与骨肉瘤细胞U2-OS、SOSP-9607、Saos-2、SJSA-1(购自美国典型菌种保藏中心)中CDKN2BAS、miR-98-5p的表达水平；按照随机数字表法随机分组为si-con组、si-CDKN2BAS组、miR-con组、miR-98-5p组、si-CDKN2BAS＋anti-miR-con组、si-CDKN2BAS ＋anti-miR-98-5p组，噻唑蓝(MTT)法检测CDKN2BAS与miR-98-5p表达对骨肉瘤细胞增殖活力的影响；流式细胞术检测CDKN2BAS与miR-98-5p表达对骨肉瘤细胞凋亡能力的影响；Transwell小室实验检测CDKN2BAS与miR-98-5p表达对骨肉瘤细胞迁移及侵袭能力的影响；双荧光素酶报告实验检测CDKN2BAS是否靶向miR-98-5p；蛋白质印迹法(Western blot)检测细胞核增殖抗原(Ki-67)、基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9、p21、活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(Cleaved Caspase)-3、Cleaved Caspase-9、p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)、磷酸化-丝裂原活化蛋白激酶p38(p-p38 MAPK)的表达量。两组间比较采用独立样本 t检验，多组间比较采用单因素方差分析。 结果:hFOB1.19细胞与骨肉瘤细胞U2-OS、SOSP-9607、Saos-2、SJSA-1中CDKN2BAS的表达水平分别为1.05±0.28、4.26±0.42、3.65±0.56、4.02±0.46、3.75±0.41，miR-98-5p的表达水平分别为0.98±0.06、0.41±0.05、0.64±0.07、0.57±0.06、0.47±0.05，与hFOB1.19细胞比，骨肉瘤细胞株中CDKN2BAS表达明显上调( F＝80.889， P<0.05)，miR-98-5p表达明显下调( F＝130.868， P<0.05)，差异均有统计学意义；沉默CDKN2BAS与过表达miR-98-5p后骨肉瘤细胞存活率分别为(68.57±8.63)%、(64.68±7.24)%，迁移细胞数分别为(98.43±11.51)、(93.46±12.54)个，侵袭细胞数分别为(47.93±6.84)、(38.64±6.69)个，沉默CDKN2BAS与过表达miR-98-5p后骨肉瘤细胞增殖活力明显降低( F＝37.873、60.131， P<0.05)，细胞迁移及侵袭能力明显减弱( F＝159.281、189.097，167.638、302.502， P<0.05)，Ki-67、MMP-2、MMP-9、p-p38 MAPK蛋白表达水平明显降低( F＝101.455、161.465、196.590、149.229、157.759、55.555， P<0.05)，而细胞凋亡率明显升高( F＝260.694、270.939， P<0.05)，p21、Cleaved Caspase-3、Cleaved Caspase-9蛋白表达水平明显升高( F＝88.672、448.342、202.034、118.338、121.661、290.273， P<0.05)，差异均有统计学意义；双荧光素酶报告实验证实CDKN2BAS靶向抑制miR-98-5p的表达；与si-CDKN2BAS＋anti-miR-con组比较，si-CDKN2BAS＋anti-miR-98-5p组细胞增殖、迁移、侵袭能力明显增强( t＝4.546、10.682、5.648， P<0.05)，细胞凋亡能力明显减弱( t＝6.996， P<0.05)，差异均有统计学意义。 结论:lncRNA CDKN2BAS通过靶向负调控miR-98-5p的表达影响骨肉瘤细胞增殖、凋亡、迁移及侵袭能力。

机体特异性免疫应答是一个需要一系列免疫细胞和免疫分子共同参与的异常复杂的过程，这些免疫细胞及分子之间相互调节又相互制约。目前大多数肾脏疾病发病机制尚不明确。B7(CD80)位于调节CD4 +和CD8 +T细胞的抗原提呈细胞上，通过与细胞上的糖蛋白CD28结合发挥信号传递作用、增强或放大免疫反应的功能，或者与细胞毒性T细胞蛋白-4(cytotoxic T lymphocyte-associated antigen4 CTLA-4)结合后抑制免疫应答。通常肾组织不表达或低表达B7，然而某些肾小球疾病的发生与B7的增加有关，其降低了足细胞附着肾小球基底膜的能力，增加炎症反应及肾脏纤维化。当B7与CTLA-4相结合时，免疫反应就会被减弱。因此通过阻断CD28或增强CTLA-4信号可能阻止疾病的发生。该文就共刺激分子B7/CD28在足细胞损伤、原发性肾小球肾炎、紫癜性肾炎、狼疮性肾炎等肾脏疾病的发病机制中的作用，以及B7阻滞剂在部分肾脏疾病靶向治疗的研究进展进行综述。

患者 男性，45岁，因“右上腹疼痛18 h”于2021年7月7日入院。患者无明显诱因出现右上腹疼痛，为持续性刺痛，伴恶心，无呕吐，伴全身大汗、头晕，解黑便2次，冲水不红，无畏寒发热、胸闷气紧、反酸烧心、呕血、便血等不适，自行口服藿香正气液治疗，腹痛无明显好转，在当地医院完善腹部CT等相关检查，考虑“肝癌破裂”，遂就诊于我院。既往有乙肝“小三阳”病史20余年。体检：全身皮肤巩膜未见明显黄染，腹平软，右上腹压痛、反跳痛，无肌紧张，移动性浊音阴性，肠鸣音减弱。急诊全腹部CT增强扫描示（图1）：肝右叶肿块，大小约10.3 cm×9.6 cm×9.0 cm，平扫以低密度为主，内见较高密度影，增强扫描示肿块明显坏死，动脉期可见较多增粗动脉供血，未见造影剂漏出，考虑恶性肿瘤性病变合并破裂出血可能，肝癌可能性大；肝脏7段边缘见1枚最大径约1.4 cm低密度结节，动脉期不均匀明显强化，门静脉期强化减退，肝内另见多发低密度结节，考虑转移瘤或肝癌子灶；肝左外叶、左内叶、尾状叶结节邻近肝包膜不连续，腹盆腔及网膜囊较多积液、积血，肝破裂待排。急诊实验室检查：ALT 236 U/L，AST 892 U/L，肌酐 193.7 μmol/L，估算肾小球滤过率 49.7 ml/（min·1.73 m 2），乙肝表面抗原（+），e抗体（+），核心抗体（+）。急诊未查肿瘤标志物。入院诊断：肝癌（中国肝癌分期-Ⅱb期），合并破裂出血；肝内转移；乙肝小三阳；急性肝功能不全；急性肾功能不全。

目的:探讨不同黑色素处理方法在不同程度黑色素含量黑色素瘤辅助诊断中的应用价值，以提高HE和免疫组织化学（IHC）染色质量，保证诊断的准确性。方法:运用脱黑色素法和异色染色法（AEC显色法和Giemsa双染法）对15例黑色素瘤组织（中少量黑色素组织10例，多量黑色素组织5例）进行黑色素处理，然后进行HE和IHC染色，对比观察，筛选出最佳黑色素处理方法。IHC抗体为鉴别诊断中常用的Melan A、HMB45。结果:（1）HE：0.25%高锰酸钾氧化20 min脱黑色素HE染色评分高，与0.1%、0.5%高锰酸钾组差异具有统计学意义（ P<0.05）。（2）IHC：对照组：黑色素未处理，呈棕黑色与DAB棕黄色难以区分。脱黑色素法：高锰酸钾法、改良高锰酸钾法和H 2O 2法，黑色素去除基本干净，但由于强氧化作用抗原丢失致染色减弱，部分存在脱片现象。异色染色法：Giemsa双染法将黑色素染成墨绿色，与肿瘤细胞对比明显，便于区分。AEC显色法肿瘤细胞呈红色可与黑色素区分，但染片不能长期保存。Melan A、HMB45在高锰酸钾法、改良高锰酸钾法、H 2O 2法、AEC显色法、Giemsa双染法和对照组评分差异显著，具有统计学意义（ P<0.05）。两两比较后发现，Giemsa双染法、AEC显色法和改良高锰酸钾法评分高于高锰酸钾法和对照组，差异均具有统计学意义（ P<0.05）。在中少量黑色素组织中，Melan A、HMB45在Giemsa双染法中评分显著高于改良高锰酸钾法，差异均具有统计学意义（ P<0.05）。但在多量黑色素组织中，改良高锰酸钾法评分高于Giemsa双染法，HMB45评分差异具有统计学意义（ P<0.05）。 结论:Giemsa双染法，染色清晰，对比明显，优于其他黑色素处理方法。但在不同黑色素含量组织中，Giemsa双染法适合于中少量黑色素病例；而在多量黑色素组织中，因黑色素与肿瘤细胞互相叠加区域多，不易分辨，推荐改良高锰酸钾法。

目的:探讨4例ABO血型抗原表达减弱样本的分子生物学机制。方法:采用微柱凝集法及盐水试管法进行ABO血型血清学检测，对 ABO基因第1~7外显子及其上游启动子区域PCR产物直接测序进行 ABO血型基因分型。 结果:4例样本(3例为患儿，1例为患儿的母亲)的红细胞与B抗体反应均出现混合视野(mf)现象，3例患儿表型为ABweak、例2母亲为Bweak。基因测序显示3例样本在 ABO基因启动子区域发生-35至-18位的碱基缺失，通过家系分析，提示该变异发生在B等位基因；1例样本 ABO基因在启动子区域发生-119位C>T新变异。 结论:启动子区域序列发生变异可导致ABO血型抗原的表达减弱。

目的:探讨骨骼肌细胞毒性T细胞淋巴瘤（cytotoxic T-cell lymphoma，CTL）临床病理学特点及预后。方法:回顾性收集2008—2019年首都医科大学附属北京友谊医院和解放军联勤保障部队第九八九医院（原第一五二中心医院）14例骨骼肌CTL和47例非骨骼肌结外CTL患者的临床资料，镜下观察肿瘤形态，检测肿瘤细胞的免疫表型、EB病毒（EBV）感染状态和T细胞受体（TCR）克隆性，比较分析两组患者的临床病理特征和预后。结果:骨骼肌CTL占本组结外CTL的23.0%（14/61）。患者中位年龄45.5岁（11~76岁），男性6例，女性8例。临床上主要表现为局部生长的无痛性肿块。有B症状者占比为2/14。肿瘤分别发生于颊部（7例）、舌部（4例）、下唇（3例）及左上臂（2例），其中有2例均累及两个部位。临床分期ⅠE期10例，ⅡE期4例。与非骨骼肌结外CTL比较，骨骼肌CTL多无B症状、临床分期低、主要累及面颊及口腔（舌部和唇部， P<0.05）。形态学上表现为骨骼肌组织内异型淋巴细胞弥漫性浸润。免疫组织化学检测，肿瘤阳性表达T细胞抗原（CD2、CD3、CD5、CD7），其中一个或多个抗原表达减弱或表达缺失者占比为11/14。所有病例均表达T细胞胞质内抗原-1、颗粒酶B和CD8（CD8 +>CD4 +模式），CD56阴性。Ki-67阳性指数中位数为35.0%（5%~60%）。所有病例EBER原位杂交检测阴性。除6例未检测外，其余病例TCR基因重排克隆性分析检测结果为阳性。10例获得随访，中位随访时间为40个月（10~67个月）。10例患者完全缓解，5年生存率为100%，与非骨骼肌结外CTL（5年总生存率35.9%）比较，差异有统计学意义（χ 2=8.277， P=0.004）。 结论:骨骼肌CTL多发生于面颊和口腔，肿瘤细胞具有侵嗜骨骼肌或肌炎样的形态学特征，具有CD8 +>CD4 +和细胞毒性分子模式的免疫表型，临床分期低，预后较好。

目的:探讨1例ABw07亚型先证者所携带的Bw07等位基因及其转移酶改变的分子生物学机制。方法:选取1例2岁男性患儿为研究对象。先证者及其父母的外周血采用试管法鉴定ABO血型，并对三者进行ABO亚型PCR-SSP检测、ABO基因测序以确定其血型基因型，最后通过模拟突变、DUET结构预测、分子动力学分析和体外细胞实验验证p.Arg352Gln突变对Bw07转移酶的影响。结果:先证者及其母亲血清学表型分别为ABw和Bw，父亲为正常的A型，ABO亚型PCR-SSP检测确定三者基因型分别为Bw07/A、Bw07/O、A/A，Sanger测序进一步验证了先证者及其母亲携带有Bw07基因，模拟突变显示R352Q突变后分子间作用力减弱，DUET预测该p.Arg352Gln突变可以影响Bw07转移酶的热力学稳定性，分子动力学分析证实了热力学稳定性的改变主要是与125-133、193-198、336-354区域氨基酸骨架原子出现较大的波动性有关，体外细胞实验进一步验证了Bw07转移酶合成的抗原减弱。结论:ABw07亚型的形成与Bw07转移酶上高度保守的Arg352突变成Gln有关。

目的:探讨细胞毒性T细胞淋巴瘤（cytotoxic T-cell lymphoma，CTL）临床病理学特点及预后。方法:回顾性收集2008至2020年首都医科大学附属北京友谊医院、解放军联勤保障部队第九八九医院（原第一五二中心医院）和河北医科大学第四医院共计134例CTL患者的临床病理资料，检测肿瘤细胞的免疫表型、EB病毒感染状态和T细胞受体（TCR）克隆性，分析患者的临床病理特征和预后。结果:134例CTL患者中，男女比例1.7∶1.0，中位年龄为49.5岁（范围3~83岁），60岁以下者100例（74.6%）。有B症状者占46.9%（53/113）。多数患者表现为全身浅表淋巴结肿大。按Ann Arbor系统分期，Ⅰ~Ⅱ期占36.8%（39/106），Ⅲ~Ⅳ期占63.2%（67/106）。伴有结外侵犯者占51.6%（66/128）。脾脏受累占24.2%（31/128）。形态学上表现为异型淋巴细胞弥漫性生长，浸润破坏正常组织结构。免疫组织化学染色显示肿瘤细胞阳性表达T细胞抗原（CD2、CD3、CD5、CD7），表达减弱或表达缺失其中一个或多个抗原者占72.0%（77/107）。根据肿瘤细胞CD4和CD8的表达量分组，其中CD8 +>CD4 +组70例（52.2%）。T细胞胞质内抗原1（TIA1）和颗粒酶B表达率分别为99.2%（119/120）和79.8%（95/119）。CD20异常表达率27.6%（37/134），CD56阴性。Ki-67阳性指数中位值为45.0%（范围5%~80%）。EB病毒编码的小RNA原位杂交检测均为阴性。TCR基因克隆性检测，所检的49例样本TCR基因重排结果均为阳性，其余病例未检测。91例患者获得随访，中位随访36个月（范围1~240个月），死亡40例（44.0%）。疗效达完全缓解者23例（含13例局限性单一结外肿块患者）。患者3年和5年总生存率分别为53.5%和49.4%。单因素分析结果显示B症状、脾脏受累、结外侵犯、临床分期、CD8 +>CD4 +表型、CD20异常表达和Ki-67阳性指数（>60%）对患者总生存率的影响差异具有统计学意义（ P<0.05）。将单因素分析有统计学意义的指标纳入多因素Cox回归模型，结果显示脾脏受累和CD8 +>CD4 +表型是影响CTL患者总生存率的独立预后因素。 结论:CTL以60岁以下成年男性多见，常伴有B症状，结外侵犯比例高，CD8阳性表型更多见；脾脏受累和CD8 +>CD4 +表型是CTL预后风险评估的独立预测因子；部分局限性单一结外CTL患者预后良好。

目的:探讨微小RNA(miRNA，miR)-150与胆囊癌肿瘤上皮-间充质转化(EMT)的关系及其作用机制。方法:实时定量聚合酶链反应(qPCR)法检测河北医科大学第二医院2018年1月至2019年5月手术切除的30例胆囊癌肿瘤组织中miR-150的表达，以30例慢性胆囊炎组织为对照；qPCR法同时检测组织中增殖细胞核抗原(PCNA)、E-钙黏蛋白(E-cadherin)、N-钙黏蛋白(N-cadherin)、基质金属蛋白酶(MMP)-9的mRNA表达，分析miR-150与这些基因的关系。应用miR-150 mimics转染人胆囊癌细胞株GBC-SD，划痕实验及Transwell小室实验检测细胞迁移侵袭的改变；qPCR及蛋白质印迹法(Western blot)技术检测各基因mRNA和蛋白的变化。两样本均数比较采用 t检验。多样本均数比较时采用方差分析，方差分析后续的两两比较采用最小显著差异法(LSD)。两样本之间相关性比较采用线性相关分析。 结果:胆囊癌组织中miR-150和E-cadherin的mRNA表达均低于慢性胆囊炎组织( t＝-7.035、-14.146， P<0.01)；PCNA、N-cadherin、MMP-9的mRNA与慢性胆囊炎组织比较均明显增强( t＝3.813、9.339、5.616， P<0.01)。miR-150表达与患者的肿瘤分化程度、临床分期、淋巴结转移有关( t＝3.228、2.396、-2.604， P<0.05)。Pearson相关分析显示，miR-150与E-cadherin呈正相关( r＝0.630， P<0.05)，与PCNA、N-cadherin、MMP-9表达呈负相关( r＝-0.769、-0.628、-0.616， P<0.05)。转染miR-150 mimics后GBC-SD细胞的迁移侵袭能力减弱( F＝1 965.860、114.940， P<0.01)；转染后PCNA、N-cadherin、MMP-9表达降低，而E-cadherin表达增高( P<0.05)。 结论:胆囊癌组织中miR-150表达降低是肿瘤进展的因素，其机制可能在于miR-150通过调节一些基因表达参与肿瘤EMT过程。