目的:了解杭州市淡色库蚊对拟除虫菊酯类杀虫剂的抗药性，探究淡色库蚊的击倒抗性（knock down resistance，kdr）基因突变情况，为该地区淡色库蚊防治提供科学依据。方法:2022年9月，在杭州市上城区、拱墅区国家监测点不同方位采集淡色库蚊幼虫和蛹，在实验室饲养繁殖，按照世界卫生组织推荐的成蚊接触筒法和幼虫浸渍法测定其对3种常用拟除虫菊酯类杀虫剂（氯菊酯、溴氰菊酯、高效氯氰菊酯）的抗药性。提取单只淡色库蚊成蚊基因组DNA，经PCR扩增和Sanger测序，检测kdr基因突变情况。结果:杭州市淡色库蚊成蚊接触0.25%氯菊酯、0.025%溴氰菊酯和0.025%高效氯氰菊酯的24 h死亡率分别为20.00%（15/75）、17.33%（13/75）和18.67%（14/75），均表现为抗性。淡色库蚊幼虫对氯菊酯、溴氰菊酯和高效氯氰菊酯的抗性倍数分别为27.08、341.00和15.88倍。共检测183只拟除虫菊酯类杀虫剂诊断剂量下存活成蚊的kdr基因，其中180只成蚊检测出kdr基因第1014位点（L1014）的基因突变，突变率为98.36%；共检测42只拟除虫菊酯类杀虫剂诊断剂量下死亡成蚊的kdr基因，其中5只成蚊检测出kdr基因L1014的基因突变，突变率为11.90%。结论:杭州市淡色库蚊对氯菊酯、溴氰菊酯和高效氯氰菊酯均产生了不同程度的抗药性，且抗性蚊虫kdr基因也存在较高频率的突变。应加强对杭州市淡色库蚊抗药性监测，合理使用化学杀虫剂。

耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌(CRKP)在临床高度流行，由于缺乏有效治疗药物而带来了显著挑战。 blaKPC-2编码的肺炎克雷伯菌碳青霉烯酶-2(KPC-2)是CRKP产生碳青霉烯抗性的主要原因之一。在中国和其他亚洲地区，Tn1721和IncFⅡ质粒是 blaKPC-2在缺乏规律间隔成簇短回文重复序列(CRISPR)和限制-修饰(R-M)系统的 Kpn ST11之间转移的主要载体。转座子的结构对耐药基因的转座频率有明显影响，这可能和不同转座子的转座模式有关系。 blaKPC-2在ST11中有流行优势与ST11免疫缺陷有重要联系，用重新设计的CRISPR/Cas3系统通过接合实验传递入ST11型肺炎克雷伯菌，高危IncFⅡ质粒可以被成功剪切，从而使ST11型CRKP恢复对抗生素的敏感性，这为CRKP的临床治疗和预防提供了新思路。

目的:探讨SCN3A功能性位点c.905A>G/p.N302S和c.1441C>T/p.L481L基因多态性对丙戊酸钠(valproic acid sodium，VPA)治疗壮族癫痫患者疗效的影响。方法:采用聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性(polymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphism，PCR-RFLP)技术和直接测序法检测224例广西百色地区VPA规范治疗的壮族癫痫患者(有效组85例，无效组139例)外周血SCN3A位点c.905A>G/p.N302S和c.1441C>T/p.L481L基因多态性，利用LC-MS色谱法测定VPA血药浓度，评估两组患者不同基因型和等位基因分布频率与VPA疗效的关联性，分析有效组不同基因型患者VPA血药浓度的差异，利用SHEsis软件对c.905A>G/p.N302S和c.1441C>T/p.L481L进行连锁不平衡分析。结果:有效组c.905A>G/p.N302S等位基因分布(A为50.6%，G为49.4%，)及基因型分布(AA型27.1%，AG型47.1%，GG型25.8%)与无效组的等位基因(A为37.4%，G为62.6%)及基因型(AA型16.6%，AG型41.7%，GG型41.7%)比较，均差异有统计学意义(χ 2＝7.501， P＝0.006；χ 2＝7.907， P＝0.019)，而有效组c.1441C>T/p.L481L等位基因分布(C为47.1%，T为52.9%)及基因型分布(CC型23.5%，CT型47.1%，TT型29.4%)与无效组的等位基因(C为38.8%，T为61.2%)及基因型(CC型18.7%，CT型40.3%，TT型41.0%)比较，均差异无统计学意义(χ 2＝2.920， P＝0.088；χ 2＝3.099， P＝0.212)。与AA ＋AG基因型相比，c.905A>G/p.N302的SGG基因型显著降低VPA疗效( OR＝2.051，95% CI＝1.136～3.703)。有效组c.905A>G/p.N302SGG基因型与AA＋AG基因型VPA血药浓度( t＝3.256， P＝0.137)、c.1441C>T/p.L481LTT基因型与CC＋CT基因型VPA血药浓度比较( t＝4.628， P＝0.082)，均差异无统计学意义，c.905A>G/p.N302S和c.1441C>T/p.L481L没有连锁不平衡性。 结论:SCN3A位点c.905A>G/p.N302S基因单核苷酸多态性可能是壮族癫痫患者VPA抵抗性形成的风险因素。

肠道病毒（enterovirus，EV）可引起多种感染性疾病，临床表现复杂多样。作为RNA病毒，EV的RNA依赖的RNA聚合酶缺乏校对功能，导致其基因发生高频率的突变和重组，从而使EV获得进化优势，进而发生对宿主的免疫逃逸、对抗病毒药物的抗性，也可使病毒的传播力和致病性增强或组织嗜性发生改变。本文综述了EV的重组机制，并对部分重要型别和新型别EV的重组情况以及重组对病毒流行、致病性的影响进行了概述。

目的 了解海南省埃及伊蚊抗性水平,为制定当地登革热媒介埃及伊蚊防控措施提供参考.方法 2020年,在海南省儋州和昌江2地采集埃及伊蚊的幼虫和蛹,繁殖至子一代(F1).采用成蚊接触筒法测定埃及伊蚊对常用杀虫剂的抗性,然后利用等位基因特异性聚合酶链反应(allele-specific polymerase chain reaction,AS-PCR)法测定埃及伊蚊击倒抗性(knockdown resistance,kdr)基因V1016G和F1534C突变情况.结果 海南昌江与儋州埃及伊蚊接触溴氰菊酯(0.03%)、氯菊酯(0.40%)、高效氯氰菊酯(0.04%)和高效氯氟氰菊酯(0.02%)4种拟除虫菊酯类杀虫剂1h的击倒率差异无统计学意义,24 h后的死亡率分别为95.56%、85.56%、81.11%、48.89%与94.44%、68.60%、61.11%、30.00%,除溴氰菊酯(0.03%)外,其他差异有统计学意义.昌江埃及伊蚊接触残杀威(0.03%)和噁虫威(0.20%)2种氨基甲酸酯类杀虫剂的死亡率均为100.00%,儋州埃及伊蚊分别为100.00%和98.89%;昌江与儋州埃及伊蚊接触马拉硫磷(1.50%)、毒死蜱(0.80%)2种有机磷类死亡率均为100.00%,接触杀螟硫磷(0.25%)死亡率分别为100.00%和98.89%.海南儋州和昌江埃及伊蚊检测到V1016G和F1534C 2种突变,其突变频率分别为12.50%(20/160)和97.50%(156/160),差异有统计学意义(χ2=233.54,P<0.001),其中昌江埃及伊蚊同时存在V1016G和F1534C突变,其突变频率分别为20.00%和100.00%,而儋州埃及伊蚊仅F1534C发生突变,突变频率为98.75%.结论 海南省埃及伊蚊对溴氰菊酯、氯菊酯、高效氯氰菊酯和高效氯氟氰菊酯4种杀虫剂均产生不同程度的抗性,但对残杀威、噁虫威、马拉硫磷、毒死蜱和螟硫磷均为敏感,其击倒抗性基因以F1534C突变为主.

目的 了解广东省珠海市白纹伊蚊击倒抗性(kdr)基因分布情况及其对拟除虫菊酯类杀虫剂的抗性程度,为该地区蚊虫防治提供科学依据.方法 2023年8-9月分别在珠海市5个行政区采集野外白纹伊蚊幼虫,带回实验室饲养至成蚊,通过形态学鉴定后提取单只成蚊的基因组DNA.扩增电压门控钠离子通道(VGSC)基因片段并进行基因测序后,使用SnapGene软件分析kdr基因的突变情况.使用世界卫生组织推荐的幼虫浸渍法,测定白纹伊蚊对拟除虫菊酯类杀虫剂的抗药性水平,利用SPSS 20.26软件计算毒力回归方程和幼虫的半数致死浓度(LC50).结果 珠海市野外种群白纹伊蚊在V1016和F1534位点均检测到kdr基因突变.5个行政区的154只白纹伊蚊发现1016位点野生型纯合子V/V(94.81%)和突变型纯合子G/G(5.19%)2种基因型;1534位点发现8种基因型,即野生型纯合子F/F(45.45%),野生/突变型杂合子F/C(1.30%)、F/S(18.18%)与F/L(0.65%),突变型纯合子C/C(13.64%)、S/S(10.39%)、L/L(9.74%)和突变型杂合子S/L(0.65%).5个行政区白纹伊蚊幼虫对溴氰菊酯的抗性倍数为12.00～26.00,其中香洲区和高新区、金湾区呈高抗性水平,其余行政区均呈中抗性水平;对高效氯氰菊酯的抗性倍数为10.33～17.33,5个行政区均呈中抗水平;对氯菊酯的抗性倍数为4.10～7.40,5个行政区均呈低抗水平.结论 珠海市白纹伊蚊野外种群已对3种拟除虫菊酯类杀虫剂表现出不同程度的抗性,并且观察到较高频率的kdr基因突变.蚊虫抗性水平的持续监测可为杀虫剂合理使用和延缓抗性产生提供科学基础.

目的 调查多哥冈比亚按蚊(Anopheles gambiae s.l.)中kdr和ace-1的等位基因突变,为该地区蚊媒传染病防制提供科学依据.方法 蚊虫样本采集自多哥2个疟疾高发地区东莫诺(Est-mono)和阿涅(Anié)的6个村庄.所有蚊虫均用于蚊种鉴定以及kdr和ace-1基因分型.结果 An.coluzzii和An.gambiae是在6个采集地点发现的2个冈比亚按蚊复合组中的近缘物种,其中An.gambiae占主导地位,占比约为96.53%.在所有检测到的蚊虫样品中,冈比亚按蚊复合组在kdr 1014位点具有高频率的突变,其中An.gambiae在奥古库利代(Ogou koulidé)、巴纳(Bana)、阿福莱(Afolé)地区突变频率达到100.0%,凯普西(Kepssi)、伊格博梅吉(Igbomedji)的突变频率为97.5%,科洛科佩(Kolocopé)地区突变频率为91.1%,1014F的等位基因频率为85.5%～100.0%,3个地区的An.coluzzii 1014位点的突变频率均为100.0%,1014F的等位基因频率为90.0%～100.0%,突变纯合度较高.An.gambiae在kdr 1575的突变频率为6.6%～24.3%,1575Y的等位基因频率为3.2%～12.2%,所有检测到的突变类型均为杂合突变,An.coluzzii的1575位点未检测到突变.冈比亚按蚊复合组在ace-1基因的119位点也检测到了突变,其中An.gambiae的突变频率为8.8%～15.0%,119S等位基因频率为4.4%～7.5%,An.coluzzii的突变频率为0～20.0%,119S等位基因频率为0～10.0%,所有检测到的119S突变均为杂合突变.结论 由于本研究中检测到的多哥冈比亚按蚊kdr突变频率很高,疟疾蚊媒可能对拟除虫菊酯类杀虫剂已产生高度抗性,同时可能对有机磷或氨基甲酸酯类杀虫剂也产生一定的抗性.提示当地相关病媒管理部门在今后的疟疾病媒控制及耐药性管理规划中应着重考虑杀虫剂耐药问题,并定期进行监测.

目的 明确89K样毒力岛(PAI)的基因组特征及其在猪链球菌致病及耐药传播方面的作用.方法 通过生物信息学方法分析89K样PAIs的基因组特征;通过接合实验比较两种89K样PAIs的转移能力;采用最小抑菌浓度法测定临床分离株及接合子的耐药谱;通过C57BL/6小鼠和斑马鱼感染模型分别评估两个临床菌株及其89K样PAIs的接合子的致病性.结果 携带89K样PAIs的猪链球菌临床菌株GX54和GX82的序列型(ST)分别为ST665和ST107.菌株GX54携带的PAI大小为75Kb,在核苷酸水平上与ST7流行型菌株携带的89K PAI具有99.21％的相似性和79.00％的覆盖率,而菌株GX82携带的PAI大小为87Kb,与89K PAI具有98.80％的相似性和86.00％的覆盖率.这两个PAIs的插入位点与89K PAI相同,均位于rplL位点,且PAIs的两端均含有一段15 bp的att序列(5'-TTATTTAAGAGTAAC-3').此外,这两个PAIs均具有完整的模块化结构,包含完整的NisK-NisR样双组分信号转导系统和Ⅳ型分泌系统(T4SS).而在SalR-SalK样双组分信号转导系统中,仅SalR基因保持完整,SalK基因发生错义突变.与89K PAI相比,本研究中的两个PAIs在基因组成上呈现出一定的差异.75K PAI插入了4个基因,包括两个假定蛋白基因和两个耐药基因tet(O)和erm(B).而87K PAI则插入了12个基因,主要涉及编码与质粒相关的重组酶和假基因,以及与耐药相关的cat、tet(L)、erm(B)基因.此外,还包括编码转座酶、拓扑异构酶等基因.菌株GX54携带的75K PAI的转移频率为4.61×10-5,显著高于菌株GX82携带的87K PAI的转移频率8.46×10-6.与受体菌P1/7RIF相比,两个89K样PAIs的接合子P1/7RIF-GX54与P1/7RIF-GX82的四环素类和大环内酯类抗生素的抗性水平,以及对斑马鱼的致病力均显著增加,且两接合子组间的致病力差异无统计学意义(P＞0.05).菌株GX54和菌株GX82感染C57BL/6小鼠后,菌株GX54感染组小鼠死亡率显著高于菌株GX82感染组(P＜0.05).攻毒8 h后,两感染组小鼠的外周血细菌载量无统计学意义(P＞0.05),但菌株GX54感染组小鼠血清中的TNF-α水平显著高于菌株GX82感染组小鼠(P＜0.05),而IL-6水平在两感染组间无统计学意义(P＞0.05).sly、mrp、epf,ofs,revS,nadR,SSU05_0473,neuB及neuC等在高致病型猪链球菌中常见的毒力基因在GX54与GX82也存在.结论 本研究首次发现了猪链球菌ST665和ST107型临床菌株携带可移动的89K样PAIs.携带不同89K样PAIs的菌株毒力水平具有显著差异,该差异与菌株在感染早期诱导宿主产生TNF-α的水平密切相关,且并非由外周血中的细菌载量差异所引起.仅以包括89K样PAIs在内的已知毒力基因存在与否做为判断猪链球菌毒力水平的方法存在不足.

目的 分析云南中缅边境地区恶性疟原虫抗叶酸类药物磺胺多辛-乙胺嘧啶抗性基因的多态性和抗性回复突变趋势.方法 收集2010-2018年中缅边境恶性疟病例滤纸血样品,巢式PCR扩增恶性疟原虫二氢叶酸还原酶(pfdhfr)基因和恶性疟原虫二氢蝶酸合酶(pfdhps)基因,采用Geneious Prime软件比对测序结果,Microsoft Excel 2016和GraphPad prism 8.0.2软件分析突变频率和单体型分布差异,卡方检验分析抗性相关基因位点单核苷酸多态性特征和不同年份单体型分布差异,Haploview软件分析pfdhfr和pfdhps基因连锁不平衡情况.结果 共收集中缅边境地区190份恶性疟样品,PCR扩增出pfdhfr180份、pfdhps 178份.测序结果显示,pfdhfr和pfdhps均出现等位基因的多重感染,其中pfdhfr检出17个多重感染,突变位点分别位于第51、59、108、164位氨基酸密码子,其表型为511/59R/108N/164L;pfdhps检出4个多重感染,突变位点分别位于第436、437、540、581位氨基酸密码子,其表型为436A/437A/540E\N/581G("\"表示并列关系).pfdhfr第N51I、C59R、S108N、I164L位点的突变率分别为 57.8％(108/187)、90.1％(172/191)、93.3％(168/180)、59.6％(109/183);pfdhps第 S436A\C、A437G、K540E\N、A581G 位点抗性突变率分别为 54.7％(99/181)、86.5％(154/178)、84.9％(152/177)、28.7％(51/178).pfdhfr单体型主要集中在三点、四点突变型(51I59R108N/59R108N164L、51I59R108N164L),分别占44.9％(84/187)和36.9％(69/187).pfdhfr和pfdhps野生型在2010年均未检出.2011年的pfdhfr三点、四点突变单体型(同上)分布频率分别为 35.9％(23/64)、37.5％(24/64),均小于 2010 年的 46.2％(30/65)、49.23％(32/65)(P＜0.05),与 2014-2018 年的 53.4％(32/58)、22.4％(13/58)比较差异有统计学意义(P＜0.05).2014-2018年的pfdhps三点突变单体型(436A\C437G540E\N,437G540E\N581G)分布频率为62.1％(36/58),小于2010年的82.3％(51/62)和2011年的78.7％(48/61)(均P＜0.05).连锁不平衡分析显示,pfdhfr C59R与S108N基因关联性强(D'=1,r2=0.8),pfdhps S436A 与 A581G 关联性强(D'=1,r2=0.6),且 S108N 与 K540E 存在较强关联性(D'=0.8,r2=0.2).结论 云南中缅边境恶性疟原虫pfdhfr和pfdhps基因的抗性分子突变单体型仍是优势基因,且随着停药时间延长突变频率逐渐降低.

目的 分析了解深圳市输入性恶性疟原虫耐药基因突变情况,帮助评估抗疟药的疗效和指导有效用药.方法 收集2022-2023年从境外输入深圳市的恶性疟荧光定量聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)阳性的样本85例,提取基因组DNA,使用巢式PCR扩增耐药基因:恶性疟原虫Kelch螺旋体蛋白基因(Plasmodium falciparum Kelch 13,PfK13)、多药耐药基因 1(multidrug resistance 1,Pfmdr1)、氯喹抗性转运基因(chloroquine resistance transporter,Pfcrt)、二氢叶酸还原酶基因(dihydrofolate reductase,Pfdhfr)和二氢蝶酸合成酶基因(dihydropteroate synthase,Pfdhps),并进行双向测序,使用MEGA11.06软件分析这些耐药基因突变情况.结果 研究发现PfK13错义突变(S549P)1例,同义突变4例.Pfmdr1 62.69％样本存在Y184F突变,未检测到N86Y突变体.Pfcrt基因中,未检测到72和73位点的突变,M74I、N75E和K76T突变分别占17.46％、15.87％和15.87％.Pfcrt基因野生型占主导(82.54％,52例),其次是I74E75T76三重突变体(15.87％,10例).Pfdhfr最常见的突变型为I51R59N108(91.78％,67例),其次是野生型(2.74％,2例).Pfdhps野生型占60.32％(38例),单突变K540E为最常见突变类型,检测到S436A、G437A、K540E、A581G、A613S、I431V、G556K、G579E位点突变.Pfdhfr-Pfdhps组合突变中,I51R59N108-E540是频率最高的组合突变(11.48％),59.02％样本为Pfdhfr单独突变体.结论 在本研究中,PfK13突变率低,且无报导的耐药突变,Y184F成为Pfmdr1突变主导,未发现有N86Y.Pfcrt野生型为主,其次为I74E75T76三重突变体,Pfdhfr I51R59N108三重突变非常普遍,本研究并未发现Pfdhfr-Pfdhps完全抗性和超抗性突变体,但有其他的五重七重突变型.在未来的工作中,需要继续加强疟原虫耐药基因的监测,同时进一步结合体内疗效的监测来有效指导临床用药.