目的 建立不同种大黄的HPLC特征指纹图谱和禁用农药残留检测方法,并综合评价其药材质量.方法 收集 3种大黄共 20 批,采用HPLC法进行分析,流动相为甲醇-0.1%磷酸溶液;梯度洗脱;柱温 35℃;检测波长 254 nm;流速1.0 ml/min;并对结果进行聚类分析.采用直接提取法,并建立HPLC-串联质谱法,气相色谱-串联质谱法,对不同来源、产地大黄的 33种禁用农药进行检测.结果 掌叶大黄、唐古特大黄、药用大黄 3种来源大黄的指纹图谱与其对照指纹图谱的相似度均＞0.95,聚类分析将 20批大黄样品分为 3类.不同产地的大黄样品均未检出 33种禁用农药.结论 3种大黄药材质量差异较大,建立的HPLC指纹图谱和禁用农残的方法稳定、可靠、简便准确,可以为大黄的质量控制评价提供依据.

大黄是典型的多基原大宗中药材,研究不同基原大黄药效成分含量和比例的差异,以期实现对不同基原大黄药材质量的精准评价,为大黄在临床上的精准用药提供理论依据.该研究以相同生长年限(四年生)的唐古特大黄、掌叶大黄和药用大黄为材料,采用拟靶向代谢组学技术测定 3 种基原大黄中蒽醌、蒽酮及鞣质类共计 220 个成分的相对含量,并运用多元统计方法对差异成分进行筛选.主成分分析(PCA)结果显示,大黄样品按照基原明显聚为3 类.通过正交偏最小二乘法判别分析(OPLS-DA),最终筛选出 117 种差异成分,其中包括:游离蒽醌类 8 种,结合蒽醌类 18 种,蒽酮类 80 种,鞣质类 11 种.综合比较,28 种成分在唐古特大黄中含量较高,主要为番泻苷类、结合蒽醌类和原花青素类化合物;35 种成分在药用大黄中含量较高,主要为游离蒽醌类和儿茶素类化合物;54 种成分在掌叶大黄中含量较高,主要为二蒽酮类化合物,但其结构暂不能确定.通过对 3 种基原大黄差异成分的分析,根据差异成分在 3 种基原大黄中的含量分布情况可推测出:唐古特大黄的泻下攻积之力最强,药用大黄的清热泻火功效最强,且两者的逐瘀通经功效强于掌叶大黄.

[目的]本研究为开展WRKY基因功能验证提供基础,进而为大黄药材品质形成的转录调控机制研究提供科学依据.[方法]基于掌叶大黄(R.palmatum L.)的全长转录组数据,通过生物信息学方法鉴定掌叶大黄WRKY基因家族成员,分析其蛋白理化性质、结构域、系统发育关系、蛋白互作,结合转录组数据进行不同组织和茉莉酸甲酯(methyl jasmonate,MeJA)处理的表达谱分析.[结果]掌叶大黄WRKY基因家族包含 53 个成员,编码蛋白氨基酸数量为 192-748,均为亲水性蛋白,预测定位均在细胞核.掌叶大黄WRKY基因家族与拟南芥WRKY基因家族成员进化树可分为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ 3 个亚族,其中Ⅱ亚族WRKY占比最高(58.49%).转录组数据分析显示掌叶大黄WRKY基因家族成员在掌叶大黄根、根茎和叶中差异表达,其中 7 个基因在根和根茎中表达量较高,12 个基因响应MeJA处理呈差异表达,其中 10 个被MeJA显著诱导,4 个候选基因RpWRKY5/6/9/33 的qPCR分析与其转录组结果基本一致.蛋白互作网络显示RpWRKY2/16/20/22/23 与查尔酮合酶(chalcone synthase,CHS)发生相互作用.[结论]获得 53 个掌叶大黄WRKY基因、生物信息、组织及响应MeJA的表达特征,其中 5 个可能与大黄蒽醌类物质的合成有关.

目的:调查道孚县药用植物资源现状,掌握该地区药用植物种类、数量等本底资料,为道孚县药用植物资源保护与合理应用提供科学依据.方法:通过野外样地调查、实地走访及查阅文献等方式,对道孚县药用植物进行调查并统计分析.结果:道孚县共有药用植物809种,隶属于115科374属,重点药材112种,国家Ⅰ级保护植物3种,Ⅱ级保护植物31种.草本类植物是道孚县药用植物资源的主体,菊科为主要优势科属.中药材种植种类多、规模大,主产秦艽、当归、掌叶大黄等常用大宗药材.结论:道孚县野生药用植物资源丰富,农牧业与旅游草原融合发展为特色产业.该研究结果可为道孚县中药产业发展规划提供指导,也可作为当地生态资源保护、合理开发利用的施策依据.

目的:研究不同品种大黄降尿酸、抗炎和泻下的作用.方法:选取体质量相近的Wistar大鼠90只,通过次黄嘌呤及氧嗪酸钾建立急性高尿酸血症模型,应用角叉菜胶建立足肿胀模型和复方地芬诺酯建立便秘模型,给予药用、掌叶及唐古特大黄高(5 g/kg)、低剂量(1.25 g/kg)水提物,实验另设空白组、阴性对照组和阳性对照组.通过检测给药前后大鼠血液中尿酸值考察降尿酸作用,通过大鼠足肿胀度和足组织液总蛋白含量考察抗炎作用,通过6 h内首次黑便时间、总黑便次数和大鼠结肠内Na+-K+-ATP酶活力含量考察泻下作用.结果:大黄具有降尿酸作用,其效果依次为掌叶大黄、药用大黄和唐古特大黄,3种大黄之间存在差异(P＜0.05);大黄有一定的抗炎作用,其效果依次为唐古特大黄、掌叶大黄和药用大黄,3种大黄之间存在差异(P＜0.05);大黄具有泻下作用,其效果依次为唐古特大黄、掌叶大黄和药用大黄,3种大黄之间存在差异(P＜0.05).结论:大黄水提取物有较强的降尿酸、抗炎和泻下作用,不同品种之间药理作用存在一定差别,临床应区别用药.

建立高效液相色谱法同时测定大黄中大黄素、大黄酚、大黄酸、芦荟大黄素、大黄素甲醚、番泻苷A、番泻苷B、没食子酸、儿茶素、(-)-表儿茶素-3-没食子酸酯、异莲花掌苷、44’-羟基苯基-2-丁酮、莲花掌苷、4'-羟基苯基-2-丁酮4’-O-β-D-(2″-O-桂皮酰基-6″-O-没食子酰基)-葡萄糖苷14个成分含量的方法.采用Agilent Zorbax SB-C18色谱柱(4.6 mm×150mm,5μm),采用0.05％的磷酸水溶液(A)-乙腈(B)为流动相,梯度洗脱,流速1.0 mL·min-,柱温40℃,检测波长268 nm.结果表明在线性范围内14个成分线性良好(r ＞0.999 9);日内精密度和日间精密度均小于3.1％;平均回收率在91.80％～104.1％.同时,对收集到的10个掌叶大黄和10个唐古特大黄合格样品进行定量测定,发现掌叶大黄中含量比较高的成分是芦荟大黄素,唐古特大黄中含量比较高的是4-4'-羟基苯基-2-丁酮,各样品中所有化合物的含量差异都比较大.所建立的含量测定方法能同时测定大黄中14个成分的含量,为大黄药材多成分含量测定和质量控制提供一种简便的方法.

以采自四川、宁夏、甘肃、陕西的8个掌叶大黄种源为试验材料,采用随机区组设计,分别在四川若尔盖、甘肃宕昌和河北洁源3个试验点布置种源试验,采用HPLC测定含量.探讨遗传与环境及互作效应对掌叶大黄游离蒽醌、结合蒽醌、酚酸类和二蒽酮苷类4类功效组分(包含14种功效成分)含量的影响,为掌叶大黄人工栽培中优质产地和种源的筛选提供理论依据.结果表明遗传和环境对掌叶大黄不同功效成分含量影响同时存在,其中酚酸类成分含量主要受环境因素影响,其他3类功效成分受环境和遗传共同主导,环境因素所占比重较大.因此,提高栽培掌叶大黄的质量应优先考虑环境,再选择种源.四川种植环境可能有利于掌叶大黄游离蒽醌类成分含量的积累,甘肃种植环境可能有利于结合蒽醌类、酚酸类和二蒽酮苷类成分含量的积累.根据功效组分含量和比例初步推断,种源P2可作为潜在的清热解毒专用药材的种质,种源P6可作为潜在的逐瘀通经专用药材的种质,种源P7和P1可作为潜在的泻下攻积功效专用药材的种质,上述结论为特种用途的大黄优良品种定向培育提供参考.

目的:观察丛枝菌根(AM)真菌在人工栽培条件下对掌叶大黄根和根茎的产量及化学成分含量的影响.方法:通过室内盆栽对照试验,设不接种AM组为CK组,设接种摩西斗管囊霉(Funneliformis mosseae)为AM组,每处理组重复15盆,每盆播种掌叶大黄种子10粒,出苗后间苗3株.采用文献方法计算菌根侵染率和浸染强度,采用称重法测定掌叶大黄根和根茎产量,采用高效液相色谱法测定掌叶大黄根和根茎中蒽醌类成分的含量,比较施加AM真菌后,掌叶大黄生物量、蒽醌类组分的变化.结果:AM组与CK组的侵染率分别为(96.96 ± 1.57)％和0,侵染强度分别为(62.07 ± 3.40)％和0;与CK组比较,AM组根和根茎产量提高了(42.96 ± 2.12)％,总蒽醌类平均值提高了127.43％,差异均有统计学意义(P <0.05).HPLC分析结果表明,AM组与CK组掌叶大黄蒽醌类在含量和成分间的比例上发生了一定的变化,但接种AM真菌处理并未导致掌叶大黄有效成分的根本改变.结论:接种AM真菌后,能明显促掌叶大黄根和根茎的生长发育,增加药用部位中有效成分的含量,但在试验期间未造成掌叶大黄质量的变异.

大黄的药用历史悠久、资源丰富,最早记载于《神农本草经》,药用大黄为掌叶大黄(Rheum palmatum),唐古特大黄(R.tanguticum)和药用大黄(R.officinale)3种,为临床常用药之一,具有清热泻火、凉血解毒、逐瘀通经、利湿退黄之功效.大黄中的蒽醌类化合物为9,10-蒽醌,羟基分布于两侧苯环上.蒽醌按母核结构可分为单蒽核类蒽醌与双蒽核类蒽醌,单蒽核类蒽醌含有游离型蒽醌和结合型蒽醌两类,目前已经报道的大黄蒽醌类化合物约有50个,其中单蒽核类型蒽醌类化合物34种,双蒽核类型蒽醌类化合物16种.蒽醌类化合物是大黄中一类重要的活性成分,具有抗炎、抗肿瘤、保护心血管、保肝、护肺、改善脑损伤、治疗肾纤维化等广泛的生物活性.通过查阅、整理国内外有关大黄蒽醌类化合物的文献资料,对其化学成分和近十年国内外药理研究进行归纳总结,分析其研究和开发前景,以期为大黄蒽醌类成分的深入研究和开发利用提供科学依据.未来,可继续深入对大黄蒽醌类化合物及其衍生产物的研究,为其合理应用及开发具有良好临床治疗效果的新药奠定基础.

目的:建立掌叶大黄超高效液相色谱(UPLC)多指标成分测定及指纹图谱方法.方法:采用C18色谱柱(100 mm×2.1 mm,1.7μm),以乙腈-0.1％甲酸溶液梯度洗脱,流速0.3 mL· min-1,检测波长280 nm,测定10批掌叶大黄药材中儿茶素、1-O-没食子酰基-2-O-肉桂酰基-β-D-葡萄糖苷、大黄素、大黄酚和大黄素甲醚5个成分的含量,并建立掌叶大黄药材指纹图谱,采用超高效液相色谱-飞行时间质谱(UPLC-Q-TOF-MSE)技术对掌叶大黄的化学成分进行全面定性分析.结果:不同批次药材中5个成分含量差异较大;建立10批掌叶大黄药材UPLC指纹图谱,获得21个共有峰且相似度在0.936～0.985.通过对照品指认、文献比对以及高分辨质谱数据解析,初步鉴定了包括21个共有峰在内的71个化学成分.结论:建立的多成分测定结合指纹图谱分析方法,并利用液质联用技术的定性分析,为掌叶大黄药材的质量控制提供了可行的方法.