目的:探讨旋毛虫（ Trichinella spiralis，Ts）诱导的非特异性免疫对伯氏疟原虫（ Plasmodium berghei，Pb）ANKA感染小鼠小肠组织免疫反应的调节作用。 方法:36只SPF级雌性昆明小鼠（6~8周龄，体重为18~22 g），按体重采用随机数字表法分成4组，分别为对照组、Ts单感染组（Ts组）、PbANKA单感染组（Pb组）、Ts与PbANKA共感染组（Ts + Pb组），每组9只。小鼠正常进食、饮水，普通饲料喂养。对照组不做任何实验处理；Ts组在实验第1天经口感染20条Ts幼虫；Pb组在实验第9天经腹腔注射感染1 × 10 6个寄生PbANKA的红细胞；Ts + Pb组在实验第1天经口感染20条Ts幼虫，第9天经腹腔注射感染1 × 10 6个寄生PbANKA的红细胞。于感染Ts后第22天和/或感染PbANKA后第13天剖杀小鼠，采用透射电镜观察各组小鼠腹腔巨噬细胞的形态变化；采用实时荧光定量PCR（qRT-PCR）检测各组小鼠小肠组织M1型巨噬细胞标记物[诱导型一氧化氮合酶（iNOS）、白细胞介素-6（IL-6）]以及M2型巨噬细胞标记物[C型甘露糖受体2（Mrc-2）、类几丁质酶3（Ym1）]mRNA表达水平，并比较M2/M1型巨噬细胞标记物mRNA表达水平的比值。 结果:透射电镜观察发现，对照组小鼠腹腔巨噬细胞形态结构正常；Ts组小鼠腹腔巨噬细胞呈现较多伪足；Pb、Ts + Pb组小鼠腹腔巨噬细胞除呈现较多伪足外，并吞噬有疟原虫。4组小鼠小肠组织iNOS（1.000 ± 0.290、1.277 ± 0.251、3.088 ± 1.110、2.604 ± 0.773）、IL-6 mRNA表达水平（1.000 ± 0.393、2.180 ± 0.629、1.650 ± 0.612、3.242 ± 1.780）比较，差异有统计学意义（ F=12.420、5.270， P均< 0.05）。与对照组比较，Pb、Ts + Pb组iNOS mRNA表达水平明显升高（ P均< 0.05）；与Ts组比较，Ts + Pb组iNOS mRNA表达水平明显升高（ P < 0.05）。与对照组比较，Ts + Pb组IL-6 mRNA表达水平明显升高（ P < 0.05）。4组小鼠小肠组织Mrc-2、Ym1 mRNA表达水平比较，差异有统计学意义（ F=9.890、20.500， P均< 0.05）。Ts + Pb组Mrc-2 mRNA表达水平明显高于对照、Ts、Pb组（ P均< 0.05）。Pb组Ym1 mRNA表达水平明显高于对照组（ P < 0.05）；Ts + Pb组Ym1 mRNA表达水平明显高于对照、Ts、Pb组（ P均< 0.05）。4组小鼠小肠组织Mrc-2/iNOS、Ym1/iNOS比较，差异有统计学意义（ F=3.642、22.360， P均< 0.05）。Ts + Pb组Mrc-2/iNOS明显高于对照、Pb组（ P均< 0.05）。Ts + Pb组Ym1/iNOS高于对照、Ts、Pb组（ P均< 0.05）。 结论:Ts诱导的宿主非特异性免疫参与PbANKA感染小鼠肠道免疫应答的调节，并促使其小肠组织巨噬细胞向M2型极化。

目的:探讨慢性旋毛虫（ Trichinella spiralis, Ts）感染对伯氏疟原虫（ Plasmodium berghei ANKA， PbA）共感染小鼠肝脏免疫病理的调节作用及其机制。 方法:将64只SPF级6 ~ 8周龄雌性昆明小鼠按体重（22 ~ 25 g）采用随机数字表法分为4组：对照组，不做处理； Ts单感染组（ Ts组），每只小鼠口饲感染30条 Ts幼虫； PbA单感染组（ PbA组），每只小鼠于实验第121天经腹腔注射0.1 ml含1 × 10 6个感染 PbA红细胞的磷酸盐缓冲液（PBS）； Ts与 PbA共感染组（ Ts+ PbA组）：每只小鼠于口饲感染30条 Ts幼虫后第121天经腹腔注射0.1 ml含1 × 10 6个感染 PbA红细胞的PBS溶液。每组16只小鼠，其中每组10只小鼠用于观察生存率。 PbA组和 Ts+ PbA组于感染 PbA后第3天起每隔1天取尾静脉血，制作薄血膜涂片，进行吉姆萨染色，光镜下计数外周血红细胞 PbA感染率。在感染 Ts后第135天和/或感染 PbA后第15天处死小鼠，称取小鼠体重和肝脏重量，计算肝脏指数；取感染 Ts小鼠的新鲜膈肌制作肌肉压片，光镜下观察 Ts幼虫囊包；光镜下，苏木素-伊红（HE）染色观察各组小鼠肝脏组织病理改变，天狼星红染色观察比较各组肝脏组织的纤维化程度，免疫组织化学染色观察肝脏中F4/80 +枯否氏细胞表达水平。 结果:感染 Ts、 PbA后，光镜下分别观察到膈肌组织中的 Ts幼虫囊包和红细胞内的 PbA。感染 PbA后， PbA组和 Ts+ PbA组小鼠生存率比较，差异无统计学意义（ P > 0.05）；与 PbA组比较， Ts+ PbA组小鼠外周血红细胞 PbA感染率在感染 PbA后的第11、15天均较低（%：27.104 ± 7.623比45.032 ± 9.849，60.218 ± 2.776比76.778 ± 6.351， P均< 0.05），小鼠肝脏指数和肝脏组织病理学评分也均较低（ P均< 0.05）。天狼星红染色结果显示， Ts+ PbA组小鼠肝脏组织的纤维化阳性面积显著高于 PbA组（ P < 0.05）。免疫组织化学染色显示， Ts+ PbA组小鼠肝脏组织中F4/80 +枯否氏细胞的平均光密度值显著高于 PbA组（ P < 0.01）。 结论:慢性 Ts感染可降低 PbA共感染小鼠外周血红细胞的 PbA感染率，增强肝脏组织F4/80 +枯否氏细胞的表达，减轻肝脏免疫病理改变。

目的:总结寄生虫病儿童的外周血嗜酸性粒细胞(EOS)增多的特点。方法:收集2002年6月至2020年6月在深圳市儿童医院住院确诊为寄生虫病患儿的临床资料，分析寄生虫感染后外周血EOS的变化特点。结果:1．共确诊儿童寄生虫病37例。其中男25例，女12例；年龄10个月～12岁7个月，中位年龄5岁3个月。2.在37例患儿中外周血EOS绝对计数增多32例(86.49%)，范围为(0.55～43.80)×10 9/L，其中轻度增多6例(18.75%)、中度增多8例(25.00%)、重度增多18例(56.25%)。3.不同虫种外周血EOS增多情况：肺吸虫感染16例(50.00%)，肝吸虫感染4例(12.50%)，混合感染3例(9.38%)，血吸虫、裂头蚴、包虫、囊虫感染各2例(均占6.25%)，蛔虫感染1例(3.13%)。不同种类寄生虫感染外周血EOS增高程度不同，差异有统计学意义( Fisher′ s值为17.97， P＝0.01)。4.不同系统受累外周血EOS增多情况：呼吸系统18例(48.65%)、消化系统13例(35.14%)、皮肤7例(18.92%)、中枢神经系统5例(13.51%)、循环系统3例(8.11%)、其他2例(5.41%)。5.无EOS增多5例寄生虫感染分别为人芽囊原虫2例，裂头蚴和囊虫混合感染、囊虫、旋毛虫感染各1例。不同系统受累后外周血EOS增多情况虽然不同，但差异无统计学意义( Fisher′ s值为7.37， P＝0.06)。 结论:外周血EOS增多是儿童寄生虫病的常见现象，增高的严重程度与感染寄生虫种类相关，与系统受累的部位无相关性。

目的 了解旋毛虫粪口传播途径的可行性及粪便中旋毛虫幼虫的感染力.方法 试验将6只Wistar大鼠分别一次性感染4 000条旋毛虫幼虫,于0、4、8、12、16、24和48 h收集3只大鼠(A组)粪便,分别分成4份于室温下保存0、24、48和72 h,显微镜下计数粪便中幼虫数量,将每份含有旋毛虫幼虫的粪便喂给5只昆明小鼠,42 d后处死小鼠,计数幼虫数并计算生殖力指数(RCI);另外3只大鼠(B组)在感染后1～23 d收集粪便,提取DNA,通过PCR扩增旋毛虫线粒体atp6基因.结果 A组大鼠感染旋毛虫幼虫后4～16 h排出幼虫,8 h排虫量达高峰,24 h及以后粪便中无旋毛虫幼虫.大鼠感染4、8、12、16 h后粪便中旋毛虫幼虫总数分别为350、400、145、40条.感染后4 h收集的大鼠粪便室温保存0、24、48 h后RCI分别为112.5、20.5、2;8 h收集的大鼠粪便室温保存0 h、24 h后RCI为66.7、9;12 h采集的大鼠粪便室温保存0和24 h后RCI为13.3和5;16 h收集的大鼠粪便室温保存0 h后RCI为10.B组大鼠中2只连续18 d扩增出旋毛虫线粒体atp6基因,1只连续20d扩增出旋毛虫线粒体atp6基因.结论 一次性大量食入旋毛虫幼虫后,可排出具有感染力的旋毛虫幼虫,可通过粪口途径进行传播.PCR可以检测粪便中的旋毛虫线粒体atp6基因,但不能确定旋毛虫是否具有感染力.

目的 探讨小鼠白细胞介素-4(IL-4)对肠道期旋毛形线虫感染的保护作用.方法 消化旋毛虫保种小鼠肌肉,收集肌幼虫,超声破碎后离心,取上清制备旋毛虫抗原.将10只野生型BALB/c小鼠随机分成未感染组和野生感染组,每组5只;另取4只IL-4敲除(IL-4KO)BALB/c小鼠作为IL-4KO感染组.野生感染组和IL-4KO感染组每鼠灌胃旋毛虫肌幼虫400条,未感染组灌胃等体积PBS.感染旋毛虫后8 d,采集各组小鼠眼眶静脉血,离心收集血清,ELISA检测单核细胞趋化因子1(MCP-1)含量.剖取十二指肠和近端空肠,制备石蜡切片后进行苏木精-伊红(HE)染色,使用Aperio ImageScope 12.4.3测量测量十二指肠、空肠的肠绒毛和隐窝的长度与杯状细胞的数量和大小,计算肠绒毛长度/隐窝长度的比值(V/C)和杯状细胞数/绒毛长度的比值(GC/V).分离肠系膜淋巴结中的淋巴细胞,与旋毛虫抗原(10μg/ml)共培养72 h,收集细胞上清,高通量液相蛋白芯片(Luminex)技术检测IL-1β、IL-12p70、IL-2、IL-5、IL-6、干扰素γ(IFN-γ)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)的含量.使用SPSS 26.0统计软件对数据进行分析,两两比较采用独立样本t检验,多样本比较采用单因素方差分析.结果 ELISA结果显示,未感染组、野生感染组、IL-4KO感染组小鼠血清中MCP-1含量分别为(344.90±21.80)、(350.50±38.30)、(467.94±190.01)pg/ml,IL-4KO感染组高于野生感染组(t=0.681,P＜0.05).HE染色结果显示,未感染组小鼠的十二指肠和空肠肠黏膜完整、绒毛结构正常,无炎症改变;野生感染组、IL-4KO感染组小鼠的十二指肠和空肠肠黏膜均出现空泡状的杯状细胞、绒毛长度变短,炎症明显,IL-4KO感染组炎症更为严重.IL-4KO感染组小鼠十二指肠和空肠V/C分别为2.62±0.12、2.78±0.25,均低于野生感染组的3.46±0.05、3.65±0.12(F=24.09、20.46,P＜0.01、0.05);未感染组空肠 V/C为4.69±0.16,高于野生感染组(F=25.43,P＜0.01).IL-4KO感染组十二指肠和空肠GC/V分别为9.66±0.88、7.33±0.88,均高于野生感染组的5.33±1.20、4.33±0.33(F=17.12、16.78,均P＜0.05).IL-4KO感染组十二指肠和空肠杯状细胞大小分别为(12.39±1.17)、(11.05±0.60)μm,均大于野生感染组的(8.33±0.44)、(8.44±0.58)μm(F=18.47、16.22,均P＜0.05)o Luminex结果显示,野生感染组小鼠淋巴细胞培养上清中IL-1β、IL-12p70、IL-2、IL-5、IL-6、IFN-γ、TNF-α的含量分别为(0.45±0.03)、(1.03±0.04)、(1.00±0.38)、(0.64±0.16)、(0.62±0.24)、(0.57±0.09)、(0.94±0.31)pg/ml,IL-4KO感染组的含量分别为(0.80±0.37)、(2.70±0.94)、(49.76±16.40)、(25.25±3.26)、(12.51±4.86)、(51.20±8.93)、(15.86±2.74)pg/ml;除 IL-1β(F=0.87,P＞0.05)外,IL-4KO 感染组均高于野生感染组(F=5.52、24.73、48.72、5.00、123.10、50.55,P＜0.05或0.01).结论 IL-4在旋毛虫感染肠道期起免疫保护作用,能够降低小鼠血清中MCP-1含量,减缓十二指肠及空肠的炎症反应,抑制炎性细胞因子的分泌.

目的 分离并鉴定旋毛虫新生幼虫分泌的细胞外囊泡(EV)主要成分,了解新生幼虫EV的功能.方法 消化旋毛虫保种小鼠肌肉,手机旋毛虫肌幼虫,昆明小鼠灌胃感染肌幼虫(2 000条/鼠)后5d取小肠,网筛法收集旋毛虫成虫,成虫置于RPMI 1640培养液中培养48 h后收集新生幼虫.采用差速超速离心法提取旋毛虫新生幼虫培养液中的EV,透射电子显微镜观察EV形态,使用纳米颗粒跟踪分析技术检测EV的粒径,蛋白质免疫印迹(Western blotting)验证EV蛋白.对新生幼虫及其EV进行蛋白组质谱分析和miRNA测序分析,采用t检验比较新生幼虫及其EV之间蛋白和miRNA的表达差异.差异表达蛋白和miRNA靶基因进行基因本体论(GO)功能条目富集分析和京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路富集分析.使用WoLFPSORT分析蛋白的亚细胞定位.结果 透射电子显微镜和纳米颗粒跟踪分析结果显示,旋毛虫新生幼虫分泌的EV为"杯盘"形膜性囊泡,平均粒径为(101.7±1.8)nm.Western blotting结果显示,新生幼虫EV能与旋毛虫感染小鼠血清产生特异性条带,相对分子质量约为65 000.蛋白组质谱分析结果显示,新生幼虫及其EV样品中分别检测到1424和231种蛋白,有220种蛋白在两组样品中均有表达,其中116种表达有差异(在EV中31种表达上调、85种表达下调).蛋白亚细胞定位分析结果显示,差异蛋白主要分布于细胞质(30.2％,35/116)、细胞核(19.0％,22/116)和细胞膜(17.2％,20/116).miRNA测序结果显示,新生幼虫及其EV样品分别检测到183和117种miRNA,有46种miRNA在两组样品中均有表达,其中40种表达有差异(在EV中10种表达上调、30种表达下调).在EV中表达上调的10种miRNA中,let-7-5p表达最高.GO功能条目富集分析结果显示,差异蛋白有57种属于细胞组成、73种具有分子功能、63种参与生物过程,差异miRNA的靶基因主要与自噬相关12基因转移酶活性、胞质泛素连接酶复合物、细胞对紫外线A的响应和钙离子稳态等条目有关.KEGG通路富集分析结果显示,差异蛋白主要富集在代谢途径、内质网中的蛋白质加工等相关通路,差异miRNA的靶基因仅涉及自噬-其他1条途径.结论 本研究分离并鉴定了旋毛虫新生幼虫分泌的EV,检测到新生幼虫及其EV间差异表达的116种蛋白和40种miRNA,主要参与代谢、自噬等途径,推测新生幼虫EV可能在旋毛虫感染早期逃避宿主免疫防御的过程中发挥重要作用.

旋毛虫病是由旋毛虫引起的一种全球分布的食源性人兽共患寄生虫病,对动物生产和人兽公共卫生安全造成严重危害.旋毛虫发育史复杂,整个生命周期都在同一宿主体内完成,为了能与宿主相互共存,其进化出各种免疫逃避机制来躲避宿主的免疫清除,从而建立长期的慢性感染.本研究从旋毛虫抗原变异、对宿主的免疫调节作用和通过形成包囊产生免疫隔离3个方面,对其免疫逃避机制进行阐述,将为深入了解旋毛虫的致病机制提供重要帮助.

患者,女,45岁,农民,山东省菏泽人.2020年6-7月在河南务工期间,无明显诱因出现反复持续高热,就诊于当地医院,经验性予左氧氟沙星、哌拉西林他唑巴坦等治疗,症状无好转.影像学检查示肝脏肿大,未见明显占位,肝脏穿刺活检组织病理,疑似寄生虫感染但未能鉴定虫种.8月12日转诊至山东第一医科大学附属消化病医院.入院查体:反复持续高热(最高体温达42 ℃),精神差;血常规示嗜酸粒细胞5.49×109/L↑,血红蛋白93 g/L ↓;粪样镜检未见寄生虫虫卵.患者有饮用生水、吃剩饭剩菜的习惯.居住环境卫生条件差,常有大鼠出入.捕获大鼠并解剖,可见大鼠肝脏表面有多灶黄色小斑片状及颗粒状肝损伤,病理切片可见肝脏实质大量虫卵聚集,另见成虫横断面.取患者血样,ELISA检测血清抗体,结果示仅抗旋毛虫抗体呈弱阳性.腹部B超示肝脏肿大,密度欠均匀.调取外院肝脏穿刺组织病理切片复阅,于肝实质内查见数灶少量寄生虫卵,周围淋巴细胞及大量嗜酸粒细胞浸润,局部可见多核巨噬细胞吞噬虫卵形成的肉芽肿性炎.患者肝组织中的虫卵和大鼠肝组织中的虫卵形态相同,经鉴定均为肝毛细线虫虫卵.予口服阿苯达唑片20 mg/(kg·d),72h后体温降至正常范围,服药7d后,无明显不适,出院.1个月后患者回医院随访,未再出现发热症状,恢复良好.

目的 研究旋毛虫原肌球蛋白(tropomyosin,Tm)过表达对人小细胞肺癌(small cell lung cancer,SCLC)NCI-H446细胞蛋白组分的影响.方法 本研究通过串联质谱标记(Tandem mass tags,TMT)技术结合生物信息学分析旋毛虫Tm过表达对NCI-H446细胞蛋白组分的影响.比较旋毛虫Tm(Tm-pcDNA3.1)过表达和转染空载体(pcDNA3.1)48 h后NCI-H446细胞的蛋白组分,利用Uniprot数据库检索差异表达蛋白(Differentially expressed protein,DEPs)并对所得DEPs进行基因本体论(GO)富集分析.从STRING数据库获得DEPs相互作用数据,利用Cytoscape 3.9.0软件构建蛋白互作网络并筛选中心节点蛋白.通过Western blot对随机选取的中心节点蛋白NDRG1进行验证.结果 旋毛虫Tm转染NCI-H446细胞48 h后,筛选出DEPs 70个,其中34个上调,36个下调;GO功能富集分析显示,DEPs主要涉及转录后的调控、免疫应答的调节等生物学功能;分析蛋白互作网络获得5个下调的中心节点蛋白:细胞周期蛋白G相关激酶(GAK)、组蛋白H3-7(H3-7)、辛普勒金Symplekin(SYMPK)、N-myc下游调节因子1(NDRG1)、丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶N2(PKN2);Westrne blot结果显示旋毛虫Tm降低NCI-H446细胞中NDRG1的表达.结论 旋毛虫TM能引起NCI-H446细胞蛋白组分的显著变化;旋毛虫Tm可能通过下调NCI-H446细胞中GAK、H3-7、SYMPK、NDRG1、PKN2的表达发挥其生物学作用.

旋毛虫感染可引起严重危害人类健康的人兽共患旋毛虫病.旋毛虫生活史的各个阶段均能影响宿主的免疫应答.免疫逃逸机制是一种常见的自然选择机制,是病原体在自然选择下对免疫系统的一种适应,可使病原体能解除或缓解人体的免疫应答,躲避来自免疫系统的攻击,确保其能继续生存、繁殖.本文综述了旋毛虫免疫逃逸机制在干扰固有免疫反应和适应性免疫反应等方面的研究进展.深入研究旋毛虫的免疫逃逸机制对旋毛虫病的防控、人体自身免疫性疾病和过敏性疾病的治疗有重要意义.