目的:探讨激活态雪旺细胞(activated schwann cells，ASCs)干预骨髓间基质细胞(bone marrow stromal cells，BMSCs)联合异种神经移植体(acellular nerve xenograft，ANX)修复大鼠坐骨神经缺损的效果。方法:取大鼠骨髓腔内BMSCs，另取大鼠的ASCs和普通SCs，行原代培养。将两种细胞置于Transwell培养皿中培养并分成三组：BMSCs组，SCs-BMSCs组及ASCs-BMSCs组。在培养皿中培养后第2、4、6和8天，用CCK-8法检测各组BMSCs生物学活性，通过q-PCR检测各组脑源性神经营养因子(BDNF)、神经生长因子(NGF)和碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)的mRNA表达水平。在无菌条件下制备10 mm坐骨神经缺损的大鼠模型，制作异种神经支架复合体(兔源胫神经)。将SD大鼠分为三组(n＝10)：ANX＋BMSCs组，ANX＋SCs-BMSCs组及ANX＋ASCs-BMSCs组。将各组细胞打入支架，复合支架培养3 d，移植到大鼠模型中。术后8周通过神经电生理检测各组患肢感觉神经传导速度(sensory nerve conduction velocity，SCV)，使用q-PCR检测神经移植体内神经营养因子(BDNF、NGF和bFGF)表达水平，另比较三组模型的下肢患侧/健侧腓肠肌细胞横截面积比恢复率。结果:CCK-8测定发现共培养系统中BMSCs组细胞增殖活性强于单细胞组，第2天和第4天，三组的活性差异无统计学意义( P>0.05)，第6天ASCs-BMSCs组增殖活性强于BMSCs组与SCs-BMSCs组，差异有统计学意义( P<0.05)，BMSCs组与SCs-BMSCs组之间差异无统计学意义( P>0.05)。通过q-PCR检测BMSCs组中BDNF、NGF及bFGF的mRNA表达最低，ASCs-BMSCs组含量最高( P<0.05)。经8周饲养后的动物实验，通过检测发现，ANX-ASCs-BMSCs组的SCV，ANX内相关神经因子表达量以及ANX-ASCs-BMSCs组的大鼠患侧/健侧腓肠肌肌细胞横截面积均最大。 结论:ASCs能够促进BMSCs的分化增殖；运用ANX-ASCs-BMSCs促进周围神经功能再生。

目的:构建一类肿瘤可视化的小鼠膀胱癌气囊(APBCa)模型，并评估药物灌注疗效。方法:本研究于2019年6—12月构建人源性肿瘤APBCa(H-APBCa)模型和具有免疫功能的APBCa(I-APBCa)模型。在BALB/c裸鼠背部皮下注射无菌空气建立大小为2.5 cm×3.5 cm的气囊，24 h后在气囊内壁通过种植人膀胱癌细胞EJ建立H-APBCa模型。对比灌注吉西他滨与生理盐水20 d后H-APBCa小鼠模型肿瘤的体积，并利用Tunel染色法比较灌注吉西他滨与生理盐水20 d后肿瘤细胞凋亡情况。在C57BL/6小鼠背部皮下注射无菌空气建立大小为2.5 cm×3.5 cm气囊，24 h后在气囊内壁通过种植小鼠膀胱癌细胞MB49建立I-APBCa模型。比较灌注卡介苗与生理盐水20 d后I-APBCa小鼠模型肿瘤的体积，并用免疫荧光染色法观察灌注卡介苗与生理盐水20 d后两组肿瘤组织CD80 ＋巨噬细胞及CD3 ＋T细胞浸润情况。 结果:H-APBCa和I-APBCa两种小鼠模型均成功建立，肉眼能直视观察且可通过游标卡尺测量肿瘤大小。H-APBCa小鼠模型灌注治疗20 d，灌注吉西他滨组肿瘤体积小于灌注生理盐水组[(781.02±241.02) mm 3与(1 213.88±214.02) mm 3， P<0.05]。灌注吉西他滨组小鼠肿瘤细胞凋亡多于灌注生理盐水组(77.33±4.63与14.67±2.60， P<0.05)。H-APBCa模型灌注治疗20 d，灌注卡介苗组肿瘤体积小于灌注生理盐水组[(645.02±156.63) mm 3与(948.84±221.76) mm 3， P<0.05]；灌注卡介苗组肿瘤组织浸润的CD80 ＋巨噬细胞多于灌注生理盐水组(49.67±7.57与16.33±5.69， P<0.05)，肿瘤组织浸润的CD3 ＋T细胞也多于灌注生理盐水组(18.00±3.46与4.67±1.45， P<0.05)。 结论:H-APBCa和I-APBCa两种小鼠模型均成功建立。APBCa模型化疗以及卡介苗灌注治疗后肿瘤均明显缩小，与临床中膀胱癌灌注治疗效果相似，可作为评价药物灌注疗效的新型动物模型。

目的:探讨前蛋白转化酶枯草溶菌素9（PCSK9）对脓毒症相关血小板活化的作用。方法:①临床试验：采用前瞻性研究方法，选择2021年1月至10月滨州医学院附属医院重症医学科收治的年龄≥18岁且符合脓毒症3.0诊断标准的脓毒症及脓毒性休克患者作为研究对象；以同期健康体检者作为对照。记录患者入院后第1次血常规中血小板计数（PLT）；并于确诊1 d取静脉血，采用酶联免疫吸附试验（ELISA）测定血清PCSK9水平。比较两组PCSK9水平及PLT的差异，并针对脓毒症患者根据PLT进行亚组分析；采用Pearson相关法分析脓毒症患者PCSK9水平与PLT的相关性。②动物实验：将80只雄性C57BL/6小鼠按随机数字表法分为对照组、脓毒症模型组〔脂多糖（LPS）组〕、PCSK9抑制剂预处理组（PCSK9 inhibitor+LPS组）及PCSK9抑制剂对照组（PCSK9 inhibitor组），每组20只。腹腔注射LPS 12 mg/kg制备脓毒症小鼠模型；对照组和PCSK9 inhibitor组注射等量无菌生理盐水。PCSK9 inhibitor+LPS组及PCSK9 inhibitor组分别于注射LPS或生理盐水前腹腔注射PCSK9抑制剂5 mg/kg预处理7 d；对照组及LPS组注射等量无菌生理盐水。制模后24 h取肺组织进行病理学及免疫组化观察；取心脏血检测PLT；采用流式细胞仪检测血小板活化情况；采用蛋白质免疫印迹试验（Western blotting）检测血小板活化标志物CD40L的蛋白表达。结果:①临床试验：最终共纳入脓毒症患者57例，同期27例健康体检者作为对照。脓毒症组血清PCSK9水平较健康对照组明显升高（μg/L：232.25±72.21比191.72±54.92， P<0.05），PLT较健康对照组明显降低〔×10 9/L：146.00（75.50，204.50）比224.00（194.00，247.00）， P<0.01〕；进一步亚组分析显示，脓毒症血小板减少者（ n＝20）血清PCSK9水平较非血小板减少者（ n＝37）明显升高（μg/L：264.04±60.40比215.06±72.95， P<0.01）。相关分析显示，脓毒症患者血清PCSK9水平与PLT呈显著负相关（ r＝-0.340， P＝0.010）。②动物实验：光镜下显示，对照组与PCSK9 inhibitor组肺组织均无明显病理学改变，且两组PLT、血小板活化情况及血浆CD40L蛋白表达差异均无统计学意义；LPS组小鼠肺间质可见大量炎症细胞浸润，肺泡结构破坏明显，肺泡间隔增厚，肺泡腔内广泛出血，毛细血管扩张并存在出血及血小板聚集，PLT明显降低，血小板活化及血浆CD40L蛋白表达水平显著增加；而给予PCSK9抑制剂预处理后，小鼠肺组织炎症细胞浸润较LPS组有一定程度减少，肺泡间隔增厚减轻，肺组织血小板聚集减少，PLT显著升高（×10 9/L：515.83±46.60比324.83±46.31， P<0.05），血小板活化及血浆CD40L蛋白表达水平显著降低〔血小板α颗粒膜糖蛋白CD62P阳性表达率：（12.15±1.39）%比（18.33±2.74）%，CD40L蛋白（CD40L/β-actin）：0.77±0.08比1.18±0.10，均 P<0.05〕。 结论:脓毒症中PCSK9水平对促进血小板活化有一定的作用，抑制PCSK9水平对于改善脓毒症血小板减少致不良结局的效果可能具有潜在研究价值。

目的:探讨不同天数饮用含胃蛋白酶的盐酸（PH＝3）的豚鼠建立反流性食管炎模型的效果，并确定最佳天数的新型建模方法。方法:将40只3～4周龄的SD雄性豚鼠采用随机数字表法分为对照组、14 d模型组、21 d模型组、28 d模型组、35 d模型组，每组各8只。适应性饲养7 d后开始造模，其中对照组予以饮用无菌水，500 ml/d，连续28 d。模型组予以饮用含0.5%胃蛋白酶的0.1 mol/L盐酸（HCl），PH＝3 500ml/d，分别连续14、21、28、35 d。每天观察各组豚鼠的一般状况、体重变化。取材后记录食管组织肉眼状态，行苏木精-伊红（HE）染色组织病理学观察。各组豚鼠食管组织通过实时荧光定量聚合酶链反应（RT-PCR）检测白细胞介素-6（IL-6）、白细胞介素-10（IL-10）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、闭锁小带蛋白-1（ZO-1）和闭合蛋白（Occludin）的mRNA相对表达量。同时蛋白质印迹法（Western blot）检测ZO-1、Occludin的蛋白表达。两组间比较采用 t检验。 结果:相较于对照组，各模型组的豚鼠活动力下降、体重增长缓慢，部分出现腹泻及皮疹。大体形态观察可见各模型组豚鼠的食管组织不同程度的黏膜充血，未见明显糜烂灶。光镜下可见各模型组食管黏膜出现不同程度早期炎症损伤，28 d模型组和35 d模型组可见明显的食管黏膜增厚、炎性细胞浸润、鳞状上皮细胞过度增生、固有层乳头延长等食管炎的表现。随着造模时间的延长，模型组豚鼠食管组织中炎性因子表达增加、黏膜屏障功能受损。从Western blot结果可见，21d、28、35 d模型组的连接蛋白ZO-1的蛋白表达水平均低于对照组（0.612±0.051比1.000±0.157、0.508±0.068比1.000±0.157、0.514±0.094比1.000±0.157， t＝4.076、4.979、4.597， P<0.05）。14、21、28、35 d模型组的连接蛋白Occludin的蛋白表达水平均低于对照组（0.758±0.120比1.000±0.089、0.725±0.093比1.000±0.089、0.444±0.054比1.000±0.089、0.443±0.099比1.000±0.089， t＝2.802、3.699、9.259、7.239， P<0.05）。从RT-PCR结果可见，28、35 d模型组的连接蛋白ZO-1的mRNA表达水平均低于对照组（0.115±0.066比1.208±0.796、0.130±0.038比1.208±0.796， t＝4.105、4.056， P<0.05）。14、21、28、35 d模型组的连接蛋白Occludin的蛋白表达水平均低于对照组（0.679±0.148比0.978±0.098、0.551±0.227比0.978±0.098、0.242±0.167比0.978±0.098、0.126±0.103比0.978±0.098， t＝4.837、4.884、11.196、16.894， P<0.05）。28、35 d模型组中炎性因子IL-6的mRNA表达水平均高于对照组（10.985±5.300比1.033±0.284、17.192±11.321比1.033±0.284， t＝－5.625、－4.281， P<0.05）。28、35 d模型组中炎性因子TNF-α的mRNA表达水平均高于对照组（7.565±2.729比1.014±0.182、13.190±5.530比1.014±0.182， t＝－5.449、－4.920， P<0.05）。14、21、28、35 d模型组的抗炎因子IL-10的mRNA表达水平均低于对照组（0.486±0.273比1.010±0.150、0.309±0.206比1.010±0.150、0.190±0.171比1.010±0.150、0.215±0.126比1.010±0.150， t＝5.043、8.253、10.822、12.203， P<0.05）。 结论:通过豚鼠自发性饮酸可以成功建立反流性食管炎模型，并且28 d造模时间是最佳的选择，为后续研究奠定基础。

目的:探讨冻干富血小板纤维蛋白(LPRF)应用于慢性难愈合创面治疗的可行性及临床效果。方法:动物实验中，抽取兔心脏血10~20 ml制备LPRF，将其应用在裸鼠糖尿病创面上，在应用后3、7、10、14 d测量创面大小。临床上，收集13例慢性难愈合创面患者，抽取各自新鲜外周血经离心、冷冻干燥等处理得到LPRF，辐照灭菌处理后，填充至清创后难愈合创面，无菌敷料覆盖，5~7 d后换药观察创面愈合情况。两组间比较创面愈合率，组间比较 t检验。 结果:LPRF应用于裸鼠糖尿病的创面14 d后创面完全上皮化，苏木精-伊红染色和马松染色均可看见LPRF治疗组创面被复层上皮覆盖，而常规辅料组仍有上皮缺失区域。临床上13例LPRF治疗的患者中除1例患者外其他均有效，其中6例患者经一次填充后创面愈合，1例患者发生复发。裸鼠糖尿病创面愈合率CON组低于LPRF组，差异有统计学意义(0.852±0.073比0.974±0.047， t＝－4.018， P<0.05)。 结论:LPRF可以有效的促进慢性创面愈合，可在临床上应用于多种慢性难愈合创面的治疗。

目的:观察脂肪组织来源的脱细胞基质水凝胶（DAT-gel）对大鼠坐骨神经缺损的修复效果。方法:2019年4月-2020年4月,收集在解放军总医院第一医学中心整形修复科行大腿或腹部吸脂术的健康成年女性的术后废弃无菌颗粒状脂肪组织,术前均获得患者知情同意。对脂肪组织行脱细胞和酶消化处理制备成DAT-gel。扫描电镜（SEM）观察水凝胶的超微结构,流变学测试水凝胶的凝胶动力学和粘弹性。建立大鼠坐骨神经缺损模型,并将其随机分为3组：单纯几丁质导管组（Chitin组）、DAT-gel加几丁质导管组（DAT-gel组）和自体神经反接组（Autograft组）,每组10只动物。术后12周分别对再生神经的大体观、功能学以及形态学等一系列指标进行观察,评估损伤神经的修复情况。采用单因素方差分析（one-way ANOVA）进行数据分析,如果组间差异有统计学意义,则进一步采用Turkey法进行两两比较, P<0.05为差异有统计学意义。 结果:SEM检查结果显示DAT-gel凝胶内部呈三维疏松多孔的纤维网络结构。流变学测试结果显示：水凝胶在4 ℃与37 ℃时复数粘度分别为148.91 mPa·s和801.29 mPa·s。DAT-gel随温度增高发生溶胶-凝胶相变结果显示DAT-gel具备良好温敏效应,其溶胶-凝胶相变临界点近似体内温度。动物实验结果显示,术后12周,DAT-gel组的再生神经形态及其功能均优于Chitin组（ P<0.05）。 结论:DAT-gel可能对大鼠坐骨神经缺损的修复具有明显的促进作用。

目的:探讨牵张期给予牵张区持续灌注β神经生长因子(β-NGF)促进骨再生与重建的作用机制。方法:2021年9月至2022年1月，选取由新疆医科大学实验动物中心提供健康成年雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠40只，建立右侧股骨牵张成骨(DO)模型，并运用随机抽样法均分为A组(20例)和对照组(20例)。透视下牵张期给予对照组牵张区注射无菌0.9%生理盐水300 μl，给予A组牵张区注射β-NGF(10 μg/200 μl)300 μl。术后行X线、微型计算机断层扫描(micro-CT)、三点弯曲生物力学试验、血清标本酶联免疫吸附测定(ELISA)、骨组织学染色检测牵张区的骨再生情况。组间采用独立样本 t检验或Mann-Whitney U检验来评估。 结果:矿化第6周A组牵张区新生骨骨密度[(359.62±19.58) mm/cm 3比(278.41±25.73) mm/cm 3， t＝3.824， P<0.001]、骨体积/总组织体积[(43.83±2.48)%比(33.25±3.96)%， t＝4.092， P<0.05]、极限载荷[(48.16±1.25)%比(27.35±2.68)%， t＝4.045， P<0.05]、弹性模量[(58.93±2.57)%比(34.74±3.72)%， t＝3.428， P<0.05]、断裂能量[(56.15±2.77)%比(29.26±3.68)%， t＝6.503， P<0.05]及刚度[(52.68±3.86)%比(34.57±2.49)%， t＝5.322， P<0.05]优于对照组。血清标本酶联免疫吸附测定及组织形态学分析结果显示牵张期给予牵张区持续灌注β-NGF有助于加速DO过程中骨再生与重建。 结论:牵张期给予牵张区持续灌注β-NGF可激活HIF信号通路，加速血管化成骨，有效促进骨再生与重建。

目的:建立兔耳廓复合组织瓣游离移植动物模型，以便后续研究，为临床上耳廓复合组织瓣的应用提供相关参考。方法:选取质量2.5～2.8 kg新西兰大耳白兔20只，由南京鼓楼医院动物实验中心提供。在其背部设计软组织缺损创面2.0 cm×2.0 cm，全层切取耳缘近耳根处同等大小组织，形成背侧皮肤-软骨-腹侧皮肤三层结构耳廓复合组织瓣。适当修剪组织瓣腹侧皮肤及软骨，残余的腹侧皮肤予无菌贴膜覆盖。将组织瓣背侧皮肤作为被盖，游离移植至背部创面，打包固定。结果:所有实验动物无意外死亡，兔耳廓复合组织瓣均成功游离移植，且形态稳定。取材可解剖出软骨及贴膜。结论:利用新西兰大耳白兔可成功建立耳廓复合组织瓣游离移植模型，且该模型易于建立，操作简单，成功率高。

目的:建立现场海水浸泡伤动物感染模型，研究致病菌种类，为海水浸泡伤的诊疗提供依据。方法:于舟山某码头设立9个海水取水点，用无菌海水采样器取水。采用宏基因组测序法检测实验海域海水中所有的细菌种类，并作为海水对照组（SW组）。选取健康白猪16只，均通过手术造成左胫骨开放性骨折，按照实验设计分为实验组（ n=10）和对照组（ n=6）。实验组白猪创面于海水中浸泡2 h，而对照组白猪旷置于无菌手术室。2 h后所有实验动物包扎伤口，定期换药。术后7 d取伤口深部软组织、骨组织行病理学检查并观察感染情况，采用微生物多样性分析法检测致病菌种类并进行差异性分析。 结果:实验组10只白猪皆感染，对照组6只白猪中2只感染；与SW组比较，实验组菌群数量明显减少；与对照组比较，实验组菌群数量明显增多（ P<0.05或 P<0.01）。所有感染的白猪均检出坏死性梭杆菌、孔氏创伤球菌、猪链球菌、大肠埃希菌等机会致病菌，实验组除检出海水中专有的狭义梭状杆菌、脱硫弧菌、哈维氏弧菌外，还检出大芬戈尔德菌、化脓性拟杆菌等多种厌氧菌。 结论:开放性创伤经海水浸泡后具有较高的感染率，且为机会致病菌、海水细菌和厌氧菌的混合感染，故早期彻底的外科清创和使用覆盖厌氧菌的广谱抗生素对控制感染具有重要意义。

目的:验证苯扎氯铵制作的大鼠先天性巨结肠模型是否存在肠道菌群变化并探索其规律。方法:按随机数字表法将18只200 g左右SPF级Sprague-Dawley(SD)雌鼠随机划分为实验组和对照组，每组各9只，实验组采用0.1%-30 min苯扎氯铵液制作先天性巨结肠模型，对照组用无菌生理盐水处理。分别于术后2、3、4周采集上述模型鼠狭窄段、扩张段以及对照组肠段粪菌，提取粪菌DNA。16S rRNA V3-V4区扩增后，利用Illumina MiSeq测序平台检测，并进行基于OUTs的聚类分析，门水平、属水平菌群相对丰度及多样性分析。以α＝0.05为显著性水平，采用One-way ANOVA和Bonferroni校正的事后多重检验，或Kruskal-Wallis法进行差异性分析。结果:实验组狭窄段、扩张段以及对照组肠道菌群总OUTs分别为876.33±27.21、913.00±43.51和6 193.33±1.53，特有OUTs分别为52.00±16.46、64.67±3.78、5 375.33±60.12，各组上述指标与对照组比较，差异均有统计学意义( P均<0.000 1)。实验组狭窄段、扩张段与对照组菌群ACE指数分别为1 040.15±44.2、959.30±27.95和11 923.52±36.66，Chao1指数分别为1 087.47±130.35、946.63±29.56和10 133.08±69.88，各组上述指标与对照组比较，差异均有统计学意义( P均<0.000 1)。实验组狭窄段、扩张段以及对照组菌群Shannon值分别为6.46±0.52、6.50±0.37和8.18±0.01，各组与对照组比较，差异均有统计学意义( P均<0.05)。对照组及实验组狭窄段、扩张段菌群门水平相对丰度较多的是厚壁菌门[(38.46±0.03)%、(72.68±6.15)%、(63.98±7.22)%]、拟杆菌门[(26.76±0.05)%、(24.91±5.98)%、(33.17±6.92)%]和变形菌门[(32.15±0.09)%、(0.70±0.30)%、(0.56±0.14)%]，除拟杆菌门外，各组与对照组比较，差异均有统计学意义( P均<0.05)。实验组与对照组菌群属水平相对丰度前10的菌群比较，差异亦有统计学意义( P均<0.05)。 结论:苯扎氯铵制作的大鼠先天性巨结肠模型存在肠道菌群变化。