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激活态雪旺细胞干预骨髓间充质干细胞对大鼠坐骨神经损伤的实验研究
编辑人员丨1天前
目的:探讨激活态雪旺细胞(activated schwann cells,ASCs)干预骨髓间基质细胞(bone marrow stromal cells,BMSCs)联合异种神经移植体(acellular nerve xenograft,ANX)修复大鼠坐骨神经缺损的效果。方法:取大鼠骨髓腔内BMSCs,另取大鼠的ASCs和普通SCs,行原代培养。将两种细胞置于Transwell培养皿中培养并分成三组:BMSCs组,SCs-BMSCs组及ASCs-BMSCs组。在培养皿中培养后第2、4、6和8天,用CCK-8法检测各组BMSCs生物学活性,通过q-PCR检测各组脑源性神经营养因子(BDNF)、神经生长因子(NGF)和碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)的mRNA表达水平。在无菌条件下制备10 mm坐骨神经缺损的大鼠模型,制作异种神经支架复合体(兔源胫神经)。将SD大鼠分为三组(n=10):ANX+BMSCs组,ANX+SCs-BMSCs组及ANX+ASCs-BMSCs组。将各组细胞打入支架,复合支架培养3 d,移植到大鼠模型中。术后8周通过神经电生理检测各组患肢感觉神经传导速度(sensory nerve conduction velocity,SCV),使用q-PCR检测神经移植体内神经营养因子(BDNF、NGF和bFGF)表达水平,另比较三组模型的下肢患侧/健侧腓肠肌细胞横截面积比恢复率。结果:CCK-8测定发现共培养系统中BMSCs组细胞增殖活性强于单细胞组,第2天和第4天,三组的活性差异无统计学意义( P>0.05),第6天ASCs-BMSCs组增殖活性强于BMSCs组与SCs-BMSCs组,差异有统计学意义( P<0.05),BMSCs组与SCs-BMSCs组之间差异无统计学意义( P>0.05)。通过q-PCR检测BMSCs组中BDNF、NGF及bFGF的mRNA表达最低,ASCs-BMSCs组含量最高( P<0.05)。经8周饲养后的动物实验,通过检测发现,ANX-ASCs-BMSCs组的SCV,ANX内相关神经因子表达量以及ANX-ASCs-BMSCs组的大鼠患侧/健侧腓肠肌肌细胞横截面积均最大。 结论:ASCs能够促进BMSCs的分化增殖;运用ANX-ASCs-BMSCs促进周围神经功能再生。
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编辑人员丨1天前
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导电材料神经导管桥接大鼠坐骨神经缺损观察
编辑人员丨1天前
周围神经再生是世界难题。理想的组织工程神经支架材料需具备良好的降解性、组织相容性及一定的导电性能 [1,2,3]。文献报道显示,甲壳素、壳聚糖相对较为理想,但两者皆不具备导电性。为赋予支架材料导电性,规避甲壳素溶解性差等问题,发挥低脱乙酰度壳聚糖降解性能好的特点 [3],本研究制备了纳米聚吡咯/不同乙酰度壳聚糖复合材料神经导管,桥接大鼠坐骨神经缺损,观察各导管修复神经缺损的效果。
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编辑人员丨1天前
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脂肪组织来源的脱细胞基质生物水凝胶修复大鼠坐骨神经缺损
编辑人员丨1天前
目的:观察脂肪组织来源的脱细胞基质水凝胶(DAT-gel)对大鼠坐骨神经缺损的修复效果。方法:2019年4月-2020年4月,收集在解放军总医院第一医学中心整形修复科行大腿或腹部吸脂术的健康成年女性的术后废弃无菌颗粒状脂肪组织,术前均获得患者知情同意。对脂肪组织行脱细胞和酶消化处理制备成DAT-gel。扫描电镜(SEM)观察水凝胶的超微结构,流变学测试水凝胶的凝胶动力学和粘弹性。建立大鼠坐骨神经缺损模型,并将其随机分为3组:单纯几丁质导管组(Chitin组)、DAT-gel加几丁质导管组(DAT-gel组)和自体神经反接组(Autograft组),每组10只动物。术后12周分别对再生神经的大体观、功能学以及形态学等一系列指标进行观察,评估损伤神经的修复情况。采用单因素方差分析(one-way ANOVA)进行数据分析,如果组间差异有统计学意义,则进一步采用Turkey法进行两两比较, P<0.05为差异有统计学意义。 结果:SEM检查结果显示DAT-gel凝胶内部呈三维疏松多孔的纤维网络结构。流变学测试结果显示:水凝胶在4 ℃与37 ℃时复数粘度分别为148.91 mPa·s和801.29 mPa·s。DAT-gel随温度增高发生溶胶-凝胶相变结果显示DAT-gel具备良好温敏效应,其溶胶-凝胶相变临界点近似体内温度。动物实验结果显示,术后12周,DAT-gel组的再生神经形态及其功能均优于Chitin组( P<0.05)。 结论:DAT-gel可能对大鼠坐骨神经缺损的修复具有明显的促进作用。
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编辑人员丨1天前
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载骨髓间充质干细胞双层胶原神经管修复大鼠坐骨神经缺损的研究
编辑人员丨1天前
目的:观察载骨髓间充质干细胞(BMSCs)的双层胶原神经管对于修复大鼠坐骨神经离断损伤的修复效果。方法:将成年雄性SD大鼠21只,按照1∶2取3只作为空白组对照,其余18只SD大鼠随机分为3组,分别为自体组(AG组)、空管组(CT组)和细胞+管组(C+CT组)。通过体外分离培养Sprague-Dawley(SD)大鼠(南京医科大学动物实验中心提供)BMSCs接种双层胶原管构建神经组织工程移植物,植入大鼠坐骨神经1 cm缺损动物模型后16周,从大体观察、行为学、电生理、免疫组织化学等指标比较各组修复神经离断损伤的情况来评价修复效果,空白组切除后留出10 mm的空隙直接缝合。CT组仅用胶原管桥接神经,C + CT组使用注入BMSC细胞悬液的胶原管,AG组将离断出的神经翻转180°后缝合在缺损处。应用GraphPad Prism 6统计软件分析,采用单因素方差分析。结果:术后16周大体观察发现在胶原管组(CT组)BMSCs复合胶原管组(C+CT组)和自体组(AG组)中神经都己再生。通过坐骨神经功能指数(SFI)、复合肌肉动作电位(CMAP)值、靶肌湿重比、远端再生神经数目等定量指标分析显示,C+CT组和AG组的修复效果均优于CT组,差异有统计学意义(SFI, CT:-92.490±1.836;C+CT:-70.010±7.805;AG:-70.130±8.744; F=17.850, P<0.05),AG组虽优于C+CT组但C+CT组和AG组之间差异无统计学意义(湿重比,CT:0.308 7±0.146 1;C+CT:0.455 0±0.062 9;AG:0.625 7±0.128 3; F=9.036, P>0.05)。 结论:构建的载BMSCs双层胶原神经管在修复大鼠坐骨神经1 cm缺损中展现出与"金标准"自体神经修复接近的修复效果。
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编辑人员丨1天前
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枸杞多糖干预雪旺细胞对大鼠坐骨神经损伤的实验研究
编辑人员丨1天前
目的:探讨枸杞多糖(lycium barbarum polysaccharide,LBP)干预雪旺细胞(Schwann cells,SCs)联合异种神经移植体(acellular nerve xenograft,ANX)修复大鼠坐骨神经缺损的效果。方法:取大鼠的坐骨神经SCs,行原代培养,培养至第三代。将0、50、100、150、200、250、500 mg/L的LBP与SCs混合培养,分成七组。在培养皿中培养后第1、3、5、7和9天,用CCK-8法检测各组SCs生物学活性,通过rt-PCR检测各组脑源性神经营养因子(brain-derived neurotrophic factor,BDNF),神经生长因子(nerve growth factor,NGF)和碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)的表达水平,筛选干预SCs的LBP最适浓度。在无菌条件下制备10 mm坐骨神经缺损的大鼠模型,选取兔的胫神经制作ANX,将SD大鼠分为三组,每组10只:ANX组、ANX-SCs组和ANX-LBP-SCs组。术后8周,通过检测坐骨神经功能指数(sciatic nerve function index,SFI)、神经传导速度(motor nerve conduction velocity,MCV),应用rt-PCR检测再生神经内凋亡因子(Caspase-3)的表达水平,另通过透射电镜比较三组模型的神经移植体内的神经纤维及髓鞘再生。结果:利用CCK-8测定各孔不同时间点SCs活性。在第2~4天,七组的活性差异无统计学意义( P>0.05),第6~8天150~250 mg/L LBP-SCs组增殖活性强于其他浓度组,差异有统计学意义( P<0.05)。通过q-PCR检测200 mg/L LBP-SCs组中BDNF、NGF及bFGF的mRNA表达量高,与其他组相比差异有统计学意义( P<0.05)。移植术后8周,发现ANX-LBP-SCs组热刺痛实验、SFI检测、神经传导速度数据更优,且Caspase-3表达量最低。透射电镜检测结果显示ANX-LBP-SCs组髓鞘水肿程度及神经纤维再生情况优于其他组。 结论:LBP浓度为200 mg/L时,可促进SCs的增殖,并分泌大量神经营养因子。含有LBP干预的SCs培养体系联合ANX移植可显著促进周围神经再生。
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编辑人员丨1天前
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干细胞修复感觉神经损伤的研究进展
编辑人员丨2024/2/3
感觉神经属于周围神经系统的传入神经部分.它们的作用是接受机体内外刺激,传入中枢,形成感觉或反射.外伤、肿瘤侵犯、手术损伤等原因,均可导致感觉神经受损.感觉神经损伤可能会使患者的某些感觉器官功能减退或丧失,如视神经、听神经等重要感觉神经在受损后会给患者生活质量带来严重影响.目前临床上修复感觉神经的方法主要是自体神经移植,但其应用受到各种因素限制,神经功能的恢复效果也常常有限.干细胞具有多向分化潜能,可以分化成施万细胞,继而分泌神经营养因子促进轴突生长和髓鞘再生,施万细胞定向增殖形成宾格尔带,引导神经再生.干细胞也可以分化为神经元,构筑神经缺损的修复材料,是神经修复的理想选择.目前,以干细胞为基础,结合若干关键性的生物技术,例如利用生物聚合或人工合成的表面微图案化的神经导管实现神经缺损的桥接、利用微球实现细胞外基质蛋白和神经营养因子控制性释放等,形成的组织工程学技术正被广泛研究,并取得了一定的成果.该文就干细胞在几种主要的感觉神经如视神经、嗅神经、蜗神经及坐骨神经的感觉神经纤维等损伤修复中的研究进展进行综述,期望为干细胞的神经修复提供新的视角,拓宽干细胞在神经修复中的临床前研究,为后续的临床应用提供参考.
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编辑人员丨2024/2/3
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基于生物力学指标评价化学去细胞异体神经联合骨髓间充质干细胞修复坐骨神经缺损的效果
编辑人员丨2023/11/11
目的 以应力松弛、蠕变生物力学性能指标验证化学脱细胞同种异体神经联合骨髓间充质干细胞(bone mesenchymal stem cells,BMSCs)移植家兔坐骨神经缺损后的效果,为坐骨神经损伤移植选择合适的移植材料提供参考.方法 首先建立家兔 20 mm坐骨神经缺损模型,分别以自体神经、化学去细胞同种异体神经、化学脱细胞同种异体神经联合骨髓间充质干细胞移植;然后于移植 24 周时分别取出每组家兔实验侧坐骨神经各16 个为实验组,随机取各实验组家兔右侧坐骨神经 16 个为正常对照组;最后在每组家兔中取1 个坐骨神经标本进行组织形态观察,观察坐骨神经标本轴突、髓鞘、纤维排列情况,取15 个坐骨神经标本进行应力松弛和蠕变实验,分析应力、应变与时间的变化规律.结果 化学脱细胞同种异体神经移植组的7200s应力下降量和7 200s应变上升量显著低于化学脱细胞同种异体神经联合骨髓间充质干细胞移植坐骨神经组和自体神经移植组(P<0.05);化学脱细胞同种异体神经联合骨髓间充质干细胞移植组坐骨神经的组织形态恢复效果好于化学去细胞同种异体神经移植组.结论 化学脱细胞同种异体神经联合骨髓间充质干细胞具有恢复损伤神经的组织形态和应力松弛、蠕变弹性的作用,有利于损伤的坐骨神经的恢复和再生.
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编辑人员丨2023/11/11
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脂肪间充质干细胞来源外泌体对施万细胞增殖功能及早期神经再生特征影响的研究
编辑人员丨2023/9/16
背景 施万细胞是神经系统的重要构成部分,为促进轴突再生和诱导靶神经再生提供必要的信号和空间线索.脂肪间充质干细胞来源广泛,在再生医学方向效果明确,外泌体作为神经系统细胞间的重要信息媒介,在调节再生方面发挥着重要作用.目的 探索脂肪间充质干细胞来源外泌体(adipose-derived stem cells-derived exosomes,ADSCs-exos)对施万细胞增殖功能及早期神经再生特征的影响.方法 提取ADSCs-exos进行鉴定;利用显微镜和流式细胞学对ADSCs鉴定,通过超速离心法提取ADSCs来源外泌体并通过透射电镜拍摄图片;将ADSCs-exos与大鼠施万细胞进行直接共培养,观察ADSCs-exos对施万细胞增殖的影响;取雌性SD大鼠 8只,Matrigel基质胶搭载ADSCs-exos注入商用硅胶管构建神经移植物为外泌体组,Matrigel搭载PBS注入商用硅胶管为空导管组(Hollow),每组 4只.构建坐骨神经 1cm缺损模型,将神经移植物缝合于近端和远端神经残端之间,缝合伤口后放回笼中安置.3周取出神经移植物评价轴突再生情况.结果 成功提取ADSCs,能够表达间充质干细胞表面标记蛋白CD73、CD90、CD105.成功提取ADSCs-exos,能在透射电镜下观察到磷脂双分子层结构.在ADSCs-exos和施万细胞共培养体系中,比较 24h和 48h施万细胞增殖情况,施万细胞增殖与ADSCs-exos浓度呈剂量依赖性.动物实验结果表明,外泌体组 3周时轴突生长优于Hollow组(P<0.05).结论 ADSCs-exos可以促进施万细胞增殖,负载ADSCs-exo神经移植物的轴突生长长度在3周时即具有优势.
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编辑人员丨2023/9/16
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脂肪来源干细胞促进大鼠坐骨神经再生机制研究
编辑人员丨2023/8/6
目的 探讨高分子神经套管负载大鼠自体脂肪源性干细胞(ADSCs)对大鼠坐骨神经损伤修复的作用.方法 提取10只SD大鼠腹股沟区ADSCs作为实验组,另选择10只SD大鼠作为对照组,制作单侧坐骨神经5.0 mm缺损模型.术后12周应用神经电生理检测,腓肠肌湿重和组织学观察,分析评价神经再生效果.结果 术后12周,实验组存活7只,对照组存活8只,实验组坐骨神经传导速率为(12.39±0.71) ms,对照组为(8.13±0.87) ms,其差异有统计学意义(P<0.05);腓肠肌湿重比率实验组为47.69±0.24,对照组为35.77±0.73,其差异有统计学意义(P<0.05).对照组有髓神经纤维数量较少,呈散在分布;实验组有髓神经纤维数量较多,有神经束膜形成.结论 ADSCs对于SD大鼠周围神经生长有促进作用.
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编辑人员丨2023/8/6
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二氢睾酮联合脂肪源性干细胞对小鼠坐骨神经缺损后脑源性神经营养因子及其受体TrkB表达的影响
编辑人员丨2023/8/6
目的 探讨二氢睾酮(DHT)与脂肪源性干细胞(ADSC)联合应用对小鼠脱细胞同种异体神经支架移植坐骨神经缺损后脑源性神经营养因子(BDNF)及其受体TrkB的表达和功能恢复的影响.方法 30只成年C57BL/6小鼠随机分为脱细胞神经支架(ANA)组、ADSC组和DHT + ADSC组.坐骨神经功能指数(SFI)、电生理和胫前肌湿重比方法检测神经运动功能的恢复, Western印迹检测神经移植体内BDNF及其受体TrkB的蛋白表达.NF200免疫荧光法检测神经支架中轴突表达,并示踪PKH26标记的移植ADSC.结果 与ADSC组比较,DHT + ADSC组神经移植体内BDNF和TrkB蛋白相对表达明显增高,NF200表达增强, PKH-26标记的ADSC数量显著增高(P<0.05).与ANA组比较,ADSC组和DHT + ADSC组电生理波幅明显增高、神经传导速度明显增快、延迟期明显缩短、胫前肌湿重比率明显增高,其中DHT + ADSC组神经恢复作用显著优于ADSC组(P<0.05),而且DHT +ADSC组SFI明显高于ANA组和ADSC组(P<0.05).结论 DHT联合ADSC移植对小鼠脱细胞异体神经支架修复坐骨神经缺损后轴突再生和功能恢复的作用优于ADSC组,其机制可能与促进神经移植体内BDNF及其受体TrkB表达,进而促进移植的ADSC存活有关.
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编辑人员丨2023/8/6
