目的:探讨卵巢上皮性癌（卵巢癌）患者腹水来源的外泌体对卵巢癌干细胞样细胞（OCS-LC）干性特征及侵袭能力的影响。方法:（1）采用无血清悬浮培养法诱导卵巢癌细胞系A2780细胞生成OCS-LC，并采用成球实验、分化功能实验以及流式细胞仪检测等方法鉴定OCS-LC的成球克隆生长、定向分化潜能、干性标志物CD 133表达等干性特征。（2）采用超速离心法提取卵巢癌来源外泌体（OCDE），包括卵巢癌患者腹水来源及A2780细胞来源的外泌体［即腹水来源外泌体（ADE）及细胞来源外泌体（CDE）］，采用透射电镜观察外泌体形态、纳米颗粒跟踪分析（NTA）法测量外泌体粒径、蛋白印迹（western blot）法检测特异性蛋白分子热休克蛋白70（HSP-70）、CD 63、CD 9的表达等方法对外泌体ADE和CDE进行鉴定。（3）将ADE和CDE分别与OCS-LC共培养，即ADE+OCS-LC组、CDE+OCS-LC组，以磷酸盐缓冲液（PBS）与OCS-LC共培养作为空白对照组。通过观察3组OCS-LC的成球周期、最大球直径及成球率，评估各组OCS-LC的成球能力；采用免疫荧光染色法检测3组OCS-LC的干性标志物CD 133的表达；实时荧光定量PCR技术检测3组OCS-LC中干细胞转录因子八聚体结合转录因子4（Oct-4）和Nanog mRNA的表达；穿膜小室（transwell小室）实验检测3组OCS-LC的侵袭能力。 结果:（1）OCS-LC的鉴定：成球实验显示，OCS-LC单细胞悬液在无血清培养基中可二次成球生长；分化功能实验显示，OCS-LC细胞球在含血清培养基中改变生长方式，分化成呈贴壁生长的A2780细胞；流式细胞仪检测显示，OCS-LC中CD 133阳性（ CD133+）细胞的比例为（18.9±0.9）%，显著高于其对照（即A2780细胞）的（0.6±0.5）%（ t=38.570， P<0.01）。（2）OCDE的鉴定：透射电镜下观察，外泌体ADE和CDE均可见清晰的脂质双层膜结构，一侧呈凹陷的半球形或杯托样；NTA法测量显示，外泌体粒径主要在30~100 nm范围，平均粒径67.2 nm；western blot法检测显示，特异性蛋白分子HSP-70、CD 63、CD 9均呈阳性表达。（3）共培养后，成球实验显示，空白对照组、ADE+OCS-LC组、CDE+OCS-LC组OCS-LC均可继续成球生长，其中ADE+OCS-LC组细胞呈现两种生长方式，大部分细胞继续维持干性成球生长，小部分细胞出现分化，呈贴壁生长；3组OCS-LC的成球周期分别为（15.3±1.5）、（10.3±0.6）、（6.7±0.6） d，细胞球最大直径分别为（100.3±3.2）、（145.2±5.1）和（170.0±2.1） μm，成球率分别为（1.05±0.20）%、（4.15±0.10）%和（10.45±0.25）%，3组分别比较，差异均有统计学意义（ P均<0.05），且CDE+OCS-LC组分别与ADE+OCS-LC组比较，差异也均有统计学意义（ P均<0.05）。免疫荧光染色法检测显示，空白对照组、ADE+OCS-LC组，CDE+OCS-LC组OCS-LC细胞球中呈绿色荧光的 CD133+细胞数依次增多，3组OCS-LC细胞球中 CD133+细胞比例［分别为（26.6±1.5）%、（46.2±2.1）%和（58.4±2.2）%］比较，差异有统计学意义（ F=187.588， P<0.05），且CDE+OCS-LC组较ADE+OCS-LC组更高（ t=6.753， P<0.05）。实时荧光定量PCR技术检测显示，空白对照组、ADE+OCS-LC组、CDE+OCS-LC组OCS-LC中Oct-4 mRNA的表达水平分别为1.04±0.12、3.46±0.24、4.03±0.31，Nanog mRNA表达水平分别为1.00±0.07、1.57±0.32、2.66±0.15，3组分别比较，差异均有统计学意义（ P均<0.05），且CDE+OCS-LC组均显著高于ADE+OCS-LC组（ P均<0.05）。transwell小室实验显示，空白对照组、ADE+OCS-LC组、CDE+OCS-LC组的侵袭细胞数依次增多，分别为（30±5）、（102±4）、（210±7）个，3组比较，差异有统计学意义（ F=820.800， P<0.05），且CDE+OCS-LC组显著高于ADE+OCS-LC组（ t=23.202， P<0.05）。 结论:卵巢癌ADE能够增强和维持OCS-LC的干性特征，促进肿瘤细胞的侵袭转移，但CDE优于ADE。

目的:构建裸鼠皮肤鳞状细胞癌（CSCC）移植瘤模型，探讨紫外线（UV）损伤及人乳头瘤病毒（HPV）感染诱导、促进CSCC的协同作用机制。方法:将人CSCC细胞A431分成3组，即用HPV16 E6腺病毒转染的HPV16 E6过表达组，空白腺病毒转染的空白载体组（简称空载组），未进行腺病毒转染的空白对照组。使用无血清DMEM培养基将空载组及HPV16 E6过表达组（LV-OE-HPV16 E6组）A431细胞制成单细胞悬液，分别接种于SKH-1裸鼠左侧臀部皮下作为空载组（ n = 16）和LV-OE-HPV16 E6组（ n = 16）。每3天观察并记录小鼠肿瘤生长情况，当瘤体达到150 mm 3时，视为建模成功。建模成功后，每组取8只小鼠进行UV照射，分为4组，即空载组、空载+ UV组、LV-OE-HPV16 E6组、LV-OE-HPV16 E6 + UV组，UV照射剂量为1 440 mJ/（cm 2·d），每次12 min，持续4周后处死裸鼠，测量瘤重及体积，绘制肿瘤生长曲线，免疫组化、Western印迹和qRT-PCR检测验证Wnt1、β联蛋白mRNA及蛋白在裸鼠CSCC中的表达。数据若符合正态分布，多组间比较采用方差分析，组间两两比较采用LSD- t检验；数据若不符合正态分布，采用秩和检验对数据进行统计分析。 结果:空载+ UV组瘤重为（2.90 ± 0.36）g，LV-OE-HPV16 E6组（3.19 ± 0.32）g，LV-OE-HPV16 E6 + UV组（4.41 ± 0.18）g，与空载组（2.20 ± 0.24）g比较，差异均有统计学意义（ t值分别为4.39、6.77、20.11，均 P<0.001）；空载+ UV组瘤体积为（1 033.12 ± 400.15）mm 3，LV-OE-HPV16 E6组（1 119.21 ± 447.57）mm 3，LV-OE-HPV16 E6 + UV组（1 464.29 ± 409.98）mm 3，与空载组（688.94 ± 319.31）mm 3比较差异均有统计学意义（ t值分别为1.90、2.21、4.22，均 P<0.001）。免疫组化显示，4组间Wnt1、β联蛋白表达水平差异无统计学意义（ F值分别为0.76、0.71，均 P > 0.05）；Western印迹显示，4组间Wnt1、β联蛋白水平差异有统计学意义（ F值分别为16.74、49.90，均 P<0.05），且LV-OE-HPV16 E6 + UV组Wnt1、β联蛋白水平高于空载组、空载+ UV组和LV-OE-HPV16 E6组（均 P<0.05）。mRNA水平分析显示，4组间组织中Wnt1、β联蛋白mRNA水平差异均有统计学意义（ F值分别为7.77、8.38，均 P<0.05），且LV-OE-HPV16 E6 + UV组Wnt1 mRNA水平高于空载组、空载+ UV组和LV-OE-HPV16 E6组（均 P<0.05）。 结论:UV和HPV感染在诱导、促进CSCC中具有协同作用。

目的:研究川芎嗪对人胚肺成纤维细胞株MRC-5增殖及胶原蛋白的影响。方法:培养MRC-5细胞株，按随机数字表法分为对照组、低剂量组、中剂量组、高剂量组。对照组用不含药物的无血清DMEM处理，低、中、高剂量组分别用含有5、10、20 mg/L川芎嗪的无血清DMEM处理。干预24、36、48 h后，采用MTS法检测细胞增殖抑制率；干预48 h后，采用流式细胞术检测细胞周期比例，采用TUNEL染色观察细胞凋亡情况，Western blot法检测Bcl-2、Bax、细胞周期蛋白D1(CyclinD1)、周期素依赖性蛋白激酶抑制因子P27(p27)蛋白水平，ELISA检测培养基中TGF-β1、Ⅰ型胶原(collagen type Ⅰ, Col-Ⅰ)、Col-Ⅲ水平。结果:干预24、36、48 h时，低、中、高剂量组细胞增殖抑制率较对照组升高( P<0.05)。干预48 h后，与对照组比较，低、中、高剂量组细胞周期G0/G1期比例增加，S期比例明显减少( P<0.05)；凋亡率[(6.59±0.95)%、(10.92±2.25)%、(16.58±3.25)%比(1.38±0.34)%]明显增加( P<0.05)；Bcl-2[(0.79±0.13)、(0.52±0.06)、(0.31±0.05)比(0.91±0.15)]、CyclinD1[(0.62±0.08)、(0.50±0.06)、(0.27±0.04)比(0.83±0.14)]蛋白表达明显降低，Bax[(0.45±0.07)、(0.50±0.06)、(0.79±0.13)比(0.32±0.06)]、p27[(0.39±0.07)、(0.75±0.13)、(0.96±0.16)比(0.20±0.05)]蛋白表达增加( P<0.05)；培养基中TGF-β1、Col-Ⅰ、Col-Ⅲ水平降低( P<0.05)。 结论:川芎嗪可抑制MRC-5细胞增殖及胶原蛋白产生，其机制可能与诱导细胞周期阻滞、调节增殖及细胞周期相关蛋白表达有关。

目的:探讨吉西他滨对膀胱癌干细胞样细胞的抑制作用。方法:利用化疗药物顺铂结合无血清培养基技术筛选出膀胱癌干细胞样细胞株，采用CCK-8法检测不同浓度的吉西他滨对膀胱癌干细胞样细胞的抑制作用，采用流式细胞术检测膀胱癌干细胞样细胞的细胞周期分布情况，采用qRT-PCR技术和Western blot法检测八聚体结合转录因子4(OCT-4)及人类平衡型核苷转运蛋白1(hENT-1)的表达情况。结果:1.6 μmol/L吉西他滨作用24 h后，其细胞抑制率最强[(75.2±4.5)%， P<0.001]。各组间相比较，C组中处于S期的细胞数目明显下降( P<0.05)；与B组相比，C组的OCT-4蛋白及基因水平表达明显降低( P<0.05)，而hENT-1蛋白的表达明显增高( P<0.001)，吉西他滨作用后的膀胱癌干细胞样细胞的肿瘤侵袭能力减弱( P<0.001)。 结论:吉西他滨对膀胱癌干细胞样细胞具有杀伤抑制的作用，并可以减弱干细胞特性及肿瘤侵袭能力。

目的:探讨脂肪干细胞(ADSC)对小鼠皮肤中长波紫外线损伤的修复效果，为皮肤光损伤治疗提供思路。方法:2018年8月至2019年7月，郑州大学第一附属医院整形外科提取C57BL/6小鼠腹股沟及肾周脂肪组织，处理获得小鼠ADSC，并进行表面标志物、成脂、成骨分化能力鉴定。小鼠光老化模型用SS-03AB型紫外光照仪照射，UVB总剂量9.45 J/cm 2，UVA总剂量94.5 J/cm 2。实验小鼠(72只)分为正常组、模型组、DMEM(培养基)组、ADSC组，各18只。正常组、模型组照射结束饲养2周后取材，ADSC组照射结束后给予200 μl ADSC悬液皮下注射，DMEM组给予200 μl无血清培养基，均在2周后取材进行组织病理学染色。实验数据采用方差分析处理。 结果:提取细胞鉴定为脂肪干细胞。HE染色可见镜下炎症细胞浸润ADSC组比DMEM组( t＝20.649， P<0.001)和正常组( t＝16.147， P<0.001)显著减轻，真皮层厚度增加。Masson染色见ADSC治疗后胶原纤维排列整齐密度明显增高。 结论:皮下注射ADSC可减轻炎症反应，促胶原组织增生，增加真皮层厚度，有效抵抗UVB造成的炎症损伤和胶原断裂。

硒是生物体内一种必需的微量元素，缺硒会抑制细胞分化和细胞周期的进程、诱导细胞凋亡以及增强某些病毒的毒力。此外，硒缺乏是克山病的重要病因学说，也是心血管病的危险因素。基于体外细胞实验的低硒研究应用广泛，然而，其低硒条件的构建尚无明确统一的方法。故文中对体外低硒条件构建方法及其应用的研究进展进行综述，以期为后续相关研究提供借鉴。

目的:探讨雌激素相关受体α（ERRα）对脂多糖（LPS）诱导的内皮细胞凋亡及连接蛋白降解的影响。方法:体外培养ERRα敲低的稳转细胞株，并通过LPS处理，将细胞分为四组：正常对照组（Ctr组）；shERRα敲低组（shERRα组）；正常细胞+LPS处理组（LPS组）：六孔板中的细胞用无血清的培养基饥饿培养12 h后，用20 μg/mL LPS处理12 h；shERRα+LPS组：ERRα敲低的细胞按LPS组处理。使用ROS荧光试剂盒检测细胞内ROS的水平；利用TUNEL、AnnexinV-FITC和PI双染检测细胞凋亡情况；细胞荧光检测连接蛋白ZO-1在细胞膜表达情况，Western Blot检测凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、Smac、细胞色素c和连接蛋白ZO-1，Occludin、JAM-A及E-Ca在分子水平的表达情况。结果:与Ctr组及shERRα组相比，LPS组ROS水平增加，细胞凋亡率增加（TUNEL检测为16.44±2.55，流式细胞术检测结果为23.56±2.22），促凋亡蛋白Bax、Smac及细胞色素c表达量增高，而抗凋亡蛋白Bcl-2和紧密连接蛋白表达量降低，细胞荧光结果显示连接蛋白ZO-1在包膜发生降解，网状结构断裂。而与LPS组相比，在shERRα+LPS组中，抑制ERRα的表达加剧上诉细胞损伤。结论:ERRα能够通过负性调节肺微血管内皮细胞内的细胞凋亡，影响肺微血管内皮的功能，从而调控脓毒症诱导的急性肺损伤。

目的:评价沉默信息因子1(SIRT1)/NOD样受体蛋白3(NLRP3)信号通路在七氟烷后处理减轻小鼠海马神经元(HT22细胞)氧糖剥夺-复氧复糖(OGD/R)损伤中的作用。方法:培养HT22细胞，以5×10 4个/ml的密度接种于培养板或培养皿，采用随机数字表法分为4组( n＝24)：空白对照组(Control组)、氧糖剥夺-复氧复糖组(OGD/R组)、七氟烷后处理组(SPC组)和SIRT1小干扰RNA组(si-SIRT1组)。Control组将细胞置于37 ℃常氧培养箱中培养，OGD/R组将细胞培养基更换为无糖无血清培养基，置于37 ℃培养箱(95%N 2+5%CO 2)中培养4 h，随后将无糖无血清培养基更换为原细胞培养基，置于37 ℃常氧培养箱中继续培养24 h制备氧糖剥夺-复氧复糖损伤模型，SPC组在细胞氧糖剥夺4 h后将无糖无血清培养基更换为原细胞培养基，将细胞放入缺氧小室中，在复氧即刻向小室内充入2%七氟烷，之后将小室置于37 ℃常氧培养箱中培养1 h，最后将细胞从缺氧小室中取出，置于常氧培养箱中继续培养23 h进行七氟烷后处理，si-SIRT1组于实验前24 h时加入SIRT1小干扰RNA 150 pmol孵育，其余操作同SPC组。采用MTT法检测细胞存活情况，TUNEL染色检测细胞凋亡情况，采用PCR法检测SIRT1、NLRP3、IL-1β和IL-18的mRNA表达，采用Western blot法检测SIRT1、NLRP3、IL-1β和IL-18的表达。 结果:与Control组比较，OGD/R组细胞存活率降低，细胞凋亡率升高，SIRT1及其mRNA表达下调，NLRP3、IL-1β和IL-18及其mRNA表达上调( P<0.05)；与OGD/R组比较，SPC组细胞存活率升高，细胞凋亡率降低，SIRT1及其mRNA表达上调，NLRP3、IL-1β和IL-18及其mRNA表达下调( P<0.05)；与SPC组比较，si-SIRT1组细胞存活率降低，细胞凋亡率升高，SIRT1及其mRNA表达下调，NLRP3、IL-1β和IL-18及其mRNA表达上调( P<0.05)。 结论:SIRT1/NLRP3信号通路激活参与了七氟烷后处理减轻HT22细胞OGD/R损伤的过程。

目的:探讨乙型肝炎病毒（HBV）对抑制素（PHB）表达的影响及PHB在肝细胞癌（HCC）细胞增殖和存活中的作用。方法:应用实时荧光定量PCR技术和蛋白质印迹法检测13对HBV感染肝脏和正常肝脏及HepG2.2.15和HepG2细胞的PHB表达情况。收集7例慢性乙型肝炎患者抗病毒（替诺福韦酯）治疗前后的肝组织，采用RT-PCR技术和蛋白质印迹法检测PHB的表达。收集转染了Pcmv6-AC-GFP-PHB和对照载体的HepG2.2.15细胞。通过流式细胞仪分析DNA的含量。应用细胞增殖测定法检测每个细胞组的增殖水平。将转染了Pcmv6-AC-GFP-PHB的HepG2.2.15细胞和对照载体在无血清培养基中培养6 d。采用基于荧光激活细胞分选（FACS）的Annexin-V/碘化丙啶双重染色在指定的时间点检测细胞凋亡。组间比较采用Student t检验。 结果:与正常肝组织相比，HBV感染肝组织PHB表达下调（ P < 0.01）；与HepG2细胞相比，HepG2.2.15细胞PHB表达显著下降（ P < 0.01）。抗病毒（替诺福韦酯）治疗后的肝组织PHB表达水平较治疗前明显上调（ P < 0.01）。与对照载体相比，转染了Pcmv6-AC-GFP-PHB的HepG2.2.15细胞增殖速率明显低于对照载体，转染了Pcmv6-AC-GFP-PHB载体的HepG2.2.15细胞的凋亡率显著高于对照（ P < 0.01）。 结论:HBV下调PHB表达从而促进HCC细胞的增殖和存活。

目的:研制创面温度与压力无线传感模块(下称无线传感模块)并进行相关特征性检验和生物安全性评价。方法:(1)设计无线传感模块结构及工作模式；在柔性排线一端焊接温湿度传感器，和压力传感器同时与焊接了蓝牙发射器、微处理器和电源接口的印制电路板相连，建立无线传感模块；开发移动端数据接收应用程序，在智能手机上，通过蓝牙功能读取无线传感模块暴露在空气中的检测数值。(2)同时用无线传感模块和红外线测温仪测量35～42 ℃热水袋温度，对比30对数据并进行相关分析。(3)于第2作者手臂贴负压封闭引流材料，将无线传感模块置于负压条件下，同时记录无线传感模块测得负压值和负压表数值，对比14对数据并进行相关分析。(4)按压力传感器、焊接温湿度传感器柔性排线每3平方厘米表面积加入1 mL生理盐水，分别配置相应材料浸提液。取20只6～8周龄雌性C57BL/6小鼠，称量实验前体质量，采用随机数字表法分为压力传感器浸提液组、柔性排线浸提液组、混合浸提液组和生理盐水组(每组5只)，分别腹腔注射压力传感器浸提液、焊接温湿度传感器柔性排线浸提液、压力传感器浸提液与焊接温湿度传感器柔性排线浸提液1∶1混合浸提液、生理盐水50 mL/kg，观察小鼠有无异常毒性反应，并称量注射后24、48、72 h小鼠体质量，综合评估材料毒性。(5)取4只3～6个月龄、雌雄不限日本大耳白兔，脊柱左侧2个区域敷贴无菌纱布设为无菌纱布组，脊柱右侧2个区域敷贴无线传感模块设为无线传感模块组，评估各区域敷贴后1、12、24、48 h皮肤状态，按照皮肤刺激性评分标准记录评分。(6)按压力传感器、焊接温湿度传感器柔性排线每1平方厘米表面积加入1 mL无血清DMEM培养基，分别配制相应材料浸提液。取L－929成纤维细胞株，分为压力传感器浸提液组、柔性排线浸提液组、苯酚对照组、培养基对照组，前2组分别加入对应浸提液，苯酚对照组加入64 g/L苯酚，培养基对照组加入不含血清的DMEM培养基培养，体积均为100 μL。噻唑蓝法检测培养2、4、7 d吸光度值以计算细胞增殖率(各时间点样本数为6)，进行细胞毒性分级。对数据行配对样本 t检验、Wilcoxon符号秩检验、Pearson相关分析、Spearman相关分析、Mann－Whitney U检验、重复测量方差分析、析因设计方差分析、单因素方差分析、Bonferroni校正。 结果:(1)智能手机通过蓝牙功能成功接收无线传感模块检测的空气温度、湿度与压力信息。(2)无线传感模块测量的热水袋温度为(37.7±1.7)℃，与红外线测温仪的(37.7±1.7)℃相近( t＝－0.112， P>0.05)，且二者存在明显正相关( r＝0.996， P<0.01)。(3)无线传感模块测量的手臂负压材料下负压为－36.7(－38.8，－27.4)kPa，明显低于负压表的－22.7(－32.7，－12.5)kPa( Z＝－3.235， P<0.01)，但二者绝对值存在明显正相关( ρ＝1.000， P<0.01)。(4)各组小鼠均无异常毒性反应。4组小鼠体质量总体比较，差异无统计学意义( F＝3.132， P>0.05)。(5)敷贴后1、12、24、48 h，2组兔敷贴区域皮肤刺激性评分均相近( Z＝－1.000、<0.001、－0.620、<0.001， P>0.05)。(6)培养各时间点，与培养基对照组比较，压力传感器浸提液组和柔性排线浸提液组细胞增殖率均明显升高( P<0.01)，苯酚对照组细胞增殖率均明显降低( P<0.01)。培养2、4、7 d，苯酚对照组细胞毒性分级分别为1、1、2级，各浸提液组细胞毒性分级均为0级。 结论:无线传感模块集成了温湿度与压力传感器，可监测局部温度与压力，并能在移动端应用程序上实现参数的可视化，其测量温度准确，压力测量结果与负压表负压值变化趋势一致，且生物安全性良好，具有较大的临床应用价值和发展前景。