目的:探究普鲁士蓝纳米粒(PBNPs)对过氧化氢(H 2O 2)诱导脂肪间充质干细胞(ADSCs)凋亡的影响及其相关机制。 方法:水热合成法制备PBNPs，电镜、傅里叶变换红外光谱等表征PBNPs合成；流式鉴定ADSCs表面标志物CD29、CD90、CD44、CD73、CD45、CD34；噻唑蓝(MTT)法检测H 2O 2、PBNPs细胞毒性；细胞分为Control组、H 2O 2组(200 μmol/L H 2O 2处理24 h)、L-PBNPs组(10 μg/ml PBNPs预处理12 h后，200 μmol/L H 2O 2处理24 h)、H-PBNPs组(20 μg/ml PBNPs预处理12 h后，200 μmol/L H 2O 2处理24 h)；活性氧探针检测ADSCs的活性氧水平；流式细胞仪分析ADSCs的凋亡水平；蛋白质印迹法检测凋亡相关蛋白表达水平；两组间比较采用 t检验，多组间比较采用单因素方差分析(One-way ANOVA)。 结果:PBNPs为正立方体，表面Fe、C、N等元素均匀分布；ADSCs CD29、CD90、CD44、CD73阳性，CD45、CD34阴性；L-PBNPs组和H-PBNPs组活性氧平均荧光强度、凋亡率显著低于H 2O 2组[7.29±1.38、2.38±0.21比16.35±3.86， t＝3.828、6.259， P<0.05；(10.21±2.27)%、(6.01±0.57)%比(25.42±3.10)%， t＝6.857、10.67， P<0.05]；与H 2O 2组比较，L-PBNPs组半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-9(Caspase-9)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)、细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂1A(p21)、B细胞淋巴瘤因子-2(bcl-2)相关X蛋白(bax)显著下调(1.877±0.076比3.087±0.179， t＝6.21， P<0.05；1.887±0.118比2.627±0.052， t＝5.72， P<0.05；1.950±0.196比3.133±0.291， t＝3.37， P<0.05；3.567±0.398比5.681±0.455， t＝3.49， P<0.05)，bcl-2显著上调(0.363±0.064比0.131±0.025， t＝3.38， P<0.05)；与H 2O 2组比较，H-PBNPs组Caspase-9、Caspase-3、p21、bax显著下调(1.083±0.095比3.087±0.179， t＝9.88， P<0.05；1.117±0.066比2.627±0.052， t＝17.78， P<0.05；1.067±0.095比3.133±0.291， t＝6.76， P<0.05；1.740±0.366比5.681±0.455， t＝6.74， P<0.05)，bcl-2显著上调(0.802±0.026比0.131±0.025， t＝18.49， P<0.05)。 结论:PBNPs对氧化应激处理的ADSCs表现出良好的抗凋亡能力。

类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)关节处于弱酸性环境,关节中RA成纤维样滑膜细胞(RA fibroblast-like syno-viocyte,RAFLS)被异常激活,分泌大量基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinases,MMPs),细胞膜上CD44 受体蛋白被特异性上调.血筒素(xuetongsu,XTS)是土家族药物血筒中抑制RAFLS增殖的主要活性成分,因靶向性差限制了其开发利用.该研究构建了一种可靶向CD44 的仿生XTS-普鲁士蓝纳米(Prussian blue nanoparticles,PB NPs)载药递送系统THMPX NPs.THMPX NPs表面有透明质酸(hyaluronic acid,HA)和三聚甘油单硬脂酸酯(triglycerol monostearate,TGMS)-3-氨基苯硼酸(3-amino-benzeneboronic acid,PBA)长链(PBA-TGMS)修饰.炎性 RAFLS 中过表达的 MMPs 和 H+可协同切割纳米粒表面的 PBA-TGMS,从而暴露HA与CD44 相互作用,使THMPX NPs在RAFLS中高度富集,近红外光照射后产热并释放XTS,抑制RAFLS细胞增殖和迁移.表征发现THMPX NPs为形态均一的立方形,粒径为(190.3±4.7)nm,平均电位在(-15.3±2.3)mV,近红外光照射 5 min温度可达 41.5℃,释药呈现MMPs和H+敏感性;生物安全性考察发现THMPX NPs溶血率小于 4%,对正常的RAW264.7 和HFLS无细胞毒性;体外摄取实验表明THMPX NPs有明显的RAFLS靶向性;自由基清除实验发现THMPX NPs有优异的自由基清除能力,可清除RAFLS中的活性氧;cell counting kit-8 和划痕实验表明THMPX NPs显著抑制RAFLS活力和迁移能力.该研究为开发抗RA中药民族药创新纳米靶向药物提供了思路.

目的 本研究合成了一种新型光化联合纳米载药系统,以期为舌鳞癌综合治疗提供新的策略.方法 通过水热合成法及盐酸蚀刻法,制备介孔普鲁士蓝纳米粒子(PBNP's);用透明质酸-聚乙二醇共聚物(HA-PEG)进行修饰实现肿瘤主动靶向,形成PBNP's-HA-PEG(简称PH);继而装载顺铂纳米颗粒,完成新型纳米给药体系Nano CDDP/PBNP's-HA-PEG(简称NCPH)的制备;随后对该体系粒径分布、靶向性、药物释放性能及光敏特性等进行表征;最后进行体内外抑瘤实验及生物安全性评价.结果 PH粒径在100 nm左右,靶向性良好,光热性能稳定,光照条件下可加快药物释放速度;体内外抑瘤试验结果表明NCPH在一定浓度范围内可以显著抑制体内外肿瘤生长;生物安全性评估发现,该载药系统毒副作用小,耐受性良好.结论 成功制备了新型载药系统NCPH,实现了抗舌鳞癌的光化联合治疗,生物安全性良好.

目的 观察2-脱氧-D-葡萄糖(2-DG)修饰的超顺磁性氧化铁纳米粒(γ-Fe2 O3@DMSA-DG NPs)标记人脐带间充质干细胞(hUCMSCs)的可行性.方法 采用化学共沉淀法制备 γ-Fe2 O3@DMSA-DG NPs.取人脐带华氏胶组织,采用组织块贴壁培养法分离、纯化hUCMSCs.用不同铁浓度(8、16、32、64、128μg/mL)γ-Fe2 O3@DMSA-DG NPs标记hUCMSCs,以铁浓度为0μg/mL的细胞作为对照组,采用普鲁士蓝染色测算标记率,利用CCK-8法及Tr-answell实验检测不同铁浓度对hUCMSCs活力及迁移能力的影响,用MRI T2WI观察磁标记细胞群信号强度,在T2图测量细胞群T2值并计算横向弛豫率R2值(R2=1/T2).结果 铁浓度为8、16、32、64、128μg/mL时,hUCMSCs标记率分别为80.74％、90.80％、96.91％、99.56％、99.58％,细胞活力分别为90.5％、87.3％、88.1％、89.7％、87.3％.对照组及8、16、32、64、128μg/mL铁标记hUCMSCs迁移细胞数分别为(151.4±9.89)、(141.4±5.55)、(154.6±4.83)、(152.4±7.77)、(150.6±8.38)、(47.8±2.28)个,128μg/mL铁标记细胞与对照组相比P<0.01;T2值分别为(115.83±2.24)、(88.70±1.97)、(82.87±1.52)、(80.70±0.78)、(62.36±1.70)、(52.50±1.65)ms,各浓度铁标记细胞T2值与对照组相比P均<0.05.相关性分析显示,hUCMSCs细胞群R2值与培养基γ-Fe2 O3@DMSA-DG NPs铁浓度呈正相关(r=0.964,P<0.05).结论 γ-Fe2 O3@DMSA-DG NPs可有效标记hUC-MSCs,最适标记铁浓度为64μg/mL.

目的 制备载基因的磁性白蛋白纳米球, 评估磁性白蛋白纳米球作为基因载体的可行性及体外的磁靶向性.方法 采用去溶剂化- 交联法制备载基因磁性白蛋白纳米球, 分别运用透射电镜(TEM) 、动态光散射分析(DLS) 对其形态、粒径进行表征.应用绿色荧光蛋白基因系统(pGFP), 观察载基因磁性白蛋白纳米球体外释放基因速率的情况及转染细胞的情况.运用普鲁士蓝染色法观察磁性纳米球的体外磁靶向性.结果 载基因磁性纳米球在TEM 检测下为球形, 大小均匀, 并且在载基因磁性纳米球中明显地观察到在电子密度较低的白蛋白纳米球中包裹着电子密度较高的磁性纳米粒.DLS 显示载基因免疫磁性纳米球的水合粒径约为209nm.体外动态释放基因速率, 计算其累积释放率显示, 该材料13h 释放基因为95. 25％, 曲线平缓; 转染实验结果显示载基因磁性纳米球能够有效转染SMMC-7721 细胞, 且转染效率高于载基因纳米球.普鲁士蓝染色实验结果显示磁靶向组细胞内的铁颗粒明显多于非靶向组.结论 成功制备了载基因磁性白蛋白纳米球, 具有缓释基因的作用, 并且能高效转染人肝癌细胞SMMC-7721.磁性白蛋白纳米球基因载体具有体外靶向性, 有望作为一种潜在的靶向基因载体应用到生物医学领域.

为了探讨超顺磁性Fe3O4纳米粒子(superparamagnetic iron oxide nanoparticles,SPIONs)介导的磷脂酰肌醇3激酶γ(phosphatidylinositol 3kinaseγ,PI3Kγ)抑制表达调控的肿瘤相关巨噬细胞(tumor-associated macrophages,TAM)对小鼠Lewis肺癌细胞(Lewis lung carcinoma,LLC)增殖和凋亡的影响,该研究构建了能启动巨噬细胞(macrophage,MФ)特异性表达PI3Kγ催化亚基p100siRNA的pSilencer-EGFP-SP-p110质粒,通过SPIONs负载成磁性纳米质粒复合物(SPIONs-DNA),在强磁作用下转染MФ,通过普鲁士蓝染色法检测SPIONs-DNA在细胞内的分布,Real-time PCR和Western blot检测细胞PI3Kγp110亚基的表达水平.建立M1、M2型MФ模型,将SPIONs-DNA在强磁作用下转染M2型MФ,通过Real-time PCR和Western blot鉴定细胞表型,明确M2型MФ转化为M1型的强度.采用Transwell系统建立SPIONs-DNA转染的M2型MФ与小鼠LLC细胞的共培养模型,通过锥虫蓝染色法检测LLC细胞的活细胞数并绘制细胞生长曲线,CCK-8法检测LLC细胞增殖情况,硝酸还原酶法检测共培养液上清中NO含量,流式细胞术检测LLC细胞凋亡情况.结果 显示,制备的SPIONs-DNA在强磁作用下成功转染MФ并大量分布在细胞胞核周围,SPIONs-DNA转染组细胞PI3Kγ p110 mRNA和蛋白表达水平显著低于空白细胞对照组(P＜0.05).建立的M1型MФ高表达iNOS(P＜0.001),M2型MФ高表达ARG-I(P＜0.001). M2型MФ转染SPIONs-DNA后细胞iNOS mRNA和蛋白的表达显著增加(P＜O.001),ARG-1 mRNA和蛋白的表达显著降低(P＜0.01).在共培养组中,SPIONs-DNA转染的M2型MФ组能大量分泌NO,LLC细胞生长和增殖能力显著降低(P＜0.05),凋亡率显著增高(P＜0.01).结果 表明,磁性纳米粒负载pSilencer-EGFP-SP-p110重组质粒能够特异性靶向抑制巨噬细胞PI3Kγ p110的表达,诱导M2型MФ转化为M1型;其转染的M2型MФ可显著抑制LLC细胞的生长和增值,促进细胞凋亡,这与其大量分泌NO有关.该磁性纳米质粒复合物可诱导TAM发挥抗肿瘤作用,为研究开发有效的抗肺癌基因治疗措施奠定基础.

目的:构建多功能MRI对比剂C60-IONP-GE11,研究其体外细胞磁共振靶向成像效果及光动力学治疗效果.方法:免疫荧光染色验证EGFR高表达肿瘤细胞株;体外磁共振成像观察靶向组对比剂C60-IONP-GE11和非靶向组对比剂C60-IONP-RP的成像效果,普鲁氏蓝染色观察对比剂分布情况;CCK8法检测C60-IONP-GE11的细胞毒性;光动力学实验设置单纯激光组、C60-IONP-GE11无激光组、非靶向对比剂+激光组和实验组靶向对比剂C60-IONP-GE11+激光组4个处理组,相应处理后CCK8测其细胞存活率,活性氧检测实验观察不同组ROS产生水平,ImageJ半定量分析ROS荧光水平.结果:免疫荧光实验结果证实MD-MBA-231细胞膜上大量表达EGFR;C60-IONP-GE11体外MRI靶向实验可见T2 WI呈负性强化,且T2 WI信号随着靶向对比剂浓度增加而降低,线性回归方程为Y=145.898-30.269?X,R2=0.862;普鲁士蓝染色发现C60-IONP-GE11实验组可使MD-MBA-231细胞膜区明显蓝染,而非靶向对照组不能;体外毒性实验发现C60-IONP-GE11无明显细胞毒性;C60-IONP-GE11体外光动力学杀伤乳腺癌细胞,细胞存活率仅为(22.79±4.84)％,并可见细胞内大量活性氧生成,活性氧水平随C60-IONP-GE11浓度增加而增多.结论:C60-IONP-GE11多功能MR对比剂具有体外靶向乳腺癌细胞MR成像功能,几乎无毒,外加激光可靶向杀伤肿瘤细胞,同时具有MR I成像及PDT治疗作用.