目的 泽曲明山复方是辽宁省名中医卢秉久教授治疗代谢相关性脂肪性肝病(metabolic associated fatty liver disease,MAFLD)的经验方.研究基于PI3K/AKT/mTOR通路探讨该经验方对大鼠非酒精性脂肪性肝炎(non-alcoholic steatohepatitis,NASH)模型的影响.方法 适应性饲养1周后,所有SD大鼠随机分为5组:对照组,模型组,中药低、高剂量组及水林佳组.对照组给予胆碱充足高脂饲料(choline-sufficient high fat diet,CSHF饲料).其余4组大鼠给予胆碱缺乏高脂饲料(choline-deficiency high fat diet,CDHF饲料)8周建立NASH模型,建立模型同时给予对应药物干预.观察相应药物对模型大鼠血清生化学指标、肝脏病理学检查、PI3K/AKT/mTOR信号转导通路mRNA以及蛋白表达的影响.结果 (1)体质量以及肝脏系数:5组大鼠体质量比较差异无统计学意义;与对照组比较,模型组大鼠肝脏系数显著升高;与模型组比较,各药物干预组大鼠肝脏系数不同程度下降,中药高剂量组疗效最为明显.(2)肝功能以及血脂:与对照组比较,模型组大鼠血清谷丙转氨酶(alanine aminotransferase,ALT)、谷草转氨酶(aspartate aminotransferase,AST)、甘油三酯(triglyceride,TG)、总胆固醇(cholesterol,CHOL)水平显著升高;与模型组比较,各药物干预组大鼠肝功能以及血脂指标水平不同程度降低,其中中药高剂量组疗效最为明显.(3)肝脏病理学检查:模型组大鼠肝脏HE染色可见胞质内大量脂肪空泡以及炎症细胞浸润;Sirius red染色可见中央静脉大量纤维组织沉积,证实造模成功;与模型组比较,各药物干预组大鼠肝脏HE以及Sirius red染色显示肝脏组织均有不同程度改善,中药高剂量组改善最为明显.(4)肝脏相关mRNA及蛋白表达:与对照组比较,模型组大鼠肝脏组织中PI3K、AKT以及mTOR mRNA表达明显升高;与模型组比较,各药物干预组mRNA表达有不同程度下调,其中中药高剂量组最为明显.与对照组比较,模型组大鼠肝脏组织中PI3K以及mTOR蛋白表达上调;与模型组比较,各药物干预组蛋白表达均有不同程度下降,其中中药高剂量组改善最为显著(P＜0.01).与对照组比较,模型组大鼠肝脏组织中PPARγ蛋白表达下降;与模型组比较,各药物干预组蛋白表达均有不同程度上调,其中水林佳组改善最为显著.免疫荧光方法检测肝脏组织中PPARγ蛋白表达,结果显示模型组荧光信号表达暗淡;中药组荧光信号表达略亮;水林佳组荧光信号表达较亮.结论 泽曲明山复方通过保护肝功能、调节血脂、改善肝脏病理、抑制PI3K/AKT/mTOR通路表达、上调PPARγ表达等方面治疗NASH.

脓毒症表现为炎症过度反应性疾病，主要由各种感染因素诱发，其核心机制为免疫障碍。被称为先天免疫中最重要组成部分的巨噬细胞，在脓毒症发生发展过程中发挥着重要作用。巨噬细胞极化已被证明与炎症和免疫力密切相关。脓毒症中巨噬细胞极化表型调节炎症因子的释放和炎症反应，其机制复杂，尚不完全清楚，多条信号通路如Toll样受体4/核转录因子-κB（TLR4/NF-κB）、磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B（PI3K/Akt）、Janus激酶/信号转导与转录激活因子（JAK/STAT）、腺苷酸活化蛋白激酶-过氧化物酶体增殖物激活受体γ（AMPK-PPARγ）、Notch、c-Jun氨基末端激酶（JNK）、核因子E2相关因子2（Nrf 2）等参与巨噬细胞极化过程，各通路之间相互作用、相互影响。调节巨噬细胞极化将成为防治脓毒症发生发展、转归预后的新靶点。因此，本文对巨噬细胞极化表型在脓毒症发生发展过程中的最新进展进行总结，旨在为临床上脓毒症的防治提供新思路、新方法。

目的:探讨不同亚型巨噬细胞条件培养基对脐静脉内皮细胞(HUVECs)的生物学功能影响及机制。方法:将巨噬细胞RAW264.7分为M0、M1、M2和si-乳脂球表皮生长因子-8(MFG-E8)组。M0型巨噬细胞不做处理；M1型巨噬细胞采用脂多糖(LPS，100 ng/ml)及γ-干扰素(IFN-γ，10 ng/ml)联合刺激；M2型巨噬细胞使用白细胞介素(IL)-4(10 ng/ml)诱导；si-MFG-E8组通过小干扰寡核苷酸(siRNA)沉默MFG-E8的表达。诱导48 h后免疫荧光法鉴定巨噬细胞极化，实时定量聚合酶链反应(RT-PCR)验证siRNA敲降效率，并收集各组巨噬细胞条件培养基；酶联免疫吸附试验(ELISA)检测各组巨噬细胞及其条件培养基中MFG-E8的表达；细胞计数试剂盒(CCK-8)检测各组巨噬细胞条件培养基对脐静脉内皮细胞增殖能力的影响；Transwell实验检测各组巨噬细胞条件培养基对脐静脉内皮细胞迁移能力的影响；RT-PCR检测各组的磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)、蛋白激酶B(Akt)和雷帕霉素靶蛋白(mTOR)分子的表达水平。组间比较采用非配对 t检验。 结果:免疫荧光法鉴定巨噬细胞成功极化为M1和M2型。RT-PCR验证与si-NC比较，si-MFG-E8组MFG-E8 mRNA的表达含量明显降低( t＝63.070， P<0.01)。ELISA实验结果显示，与M0组比较，M2组巨噬细胞MFG-E8明显增高，M1及si-MFG-E8组明显降低( t02＝14.050， P02<0.01； t01＝28.120， P01<0.01； t0si＝48.690， P0si<0.01)；与M0组比较，M2组巨噬细胞条件培养基中MFG-E8明显增高，M1及si-MFG-E8组明显降低( t02＝17.240， P02<0.01； t01＝16.350， P01<0.01； t0si＝36.260， P0si<0.01)。CCK-8实验结果显示，与M0组比较，经M2型巨噬细胞条件培养基处理的HUVECs的增殖能力明显增加，M1及si-MFG-E8组明显下降( t02＝7.563， P02<0.01； t01＝4.365， P01<0.01； t0si＝5.965， P0si<0.01)。Transwell实验结果显示，与M0组比较，经M2型巨噬细胞条件培养基处理的HUVECs的迁移能力明显增加，M1及si-MFG-E8组明显下降，( t02＝5.339， P02<0.05； t01＝2.991， P01<0.05； t0si＝6.275， P0si<0.01)。RT-PCR实验结果显示，与M0组比较，经M2型巨噬细胞条件培养基处理的HUVECs细胞PI3K、Akt和mTOR分子的表达水平明显升高，M1及si-MFG-E8组明显下降(PI3K： t02＝5.393， P02<0.01； t01＝4.35， P01<0.05； t0si＝4.718， P0si<0.05；Akt： t02＝4.849， P02<0.05； t01＝2.285， P01>0.05； t0si＝2.628， P0si>0.05；mTOR： t02＝6.128， P02<0.01； t01＝2.659， P01>0.05； t0si＝2.663， P0si>0.05)。 结论:M2型巨噬细胞高表达MFG-E8，并可能通过上调PI3K、Akt和mTOR分子表达水平，促进脐静脉内皮细胞增殖和迁移。

目的:探讨层粘连蛋白α3（LAMA3）DNA甲基化对卵巢上皮性癌（卵巢癌）铂耐药及预后的影响及可能的机制。方法:（1）通过数据库中生物信息学数据分析LAMA3 DNA甲基化水平与卵巢癌铂耐药的关系。（2）选取2000年1月至2012年12月在广西医科大学附属肿瘤医院诊治的卵巢癌患者共67例（包括铂耐药组35例和铂敏感组32例），采用焦磷酸测序技术检测两组卵巢癌组织中LAMA3 DNA甲基化水平，探讨其对卵巢癌患者铂耐药及预后的诊断效能，并进一步分析其对卵巢癌铂耐药患者化疗效果及预后的影响。结果:（1）从基因互作检索平台（STRING）数据库中筛选出与LAMA3高度互作的10个蛋白，包括层粘连蛋白β（LAMB）3、层粘连蛋白γ（LAMC）3、整合素α（ITGA）6、整联蛋白β4（ITGB4）、ITGA3、LAMC1、LAMB2、肌营养不良蛋白关联糖蛋白1（DAG1）、LAMB1、17型胶原蛋白α1链（COL17A1）蛋白；京都基因与基因组百科全书（KEGG）富集分析显示，LAMA3及其相关互作蛋白通过细胞凋亡、细胞周期、DNA损伤反应、上皮间质转化（EMT）、雄激素受体（AR）、雌激素受体（ER）、磷脂酰肌醇3激酶（PI3K）/蛋白激酶B（Akt）、大鼠肉瘤癌基因（RAS）/有丝分裂原活化蛋白激酶（MAPK）、受体酪氨酸激酶（RTK）、结节性硬化症蛋白复合体（TSC）/雷帕霉素靶蛋白（mTOR）等信号通路，参与恶性肿瘤发生、发展过程的调控，其表达水平与卵巢癌顺铂等化疗药物的敏感性相关。（2）本院临床数据分析发现，铂耐药组、铂敏感组卵巢癌组织中LAMA3 DNA甲基化水平分别为71%（25/35）、69%（22/32），两组比较，差异无统计学意义（ χ2=0.057， P=0.811）；LAMA3 DNA甲基化水平判断卵巢癌铂耐药的曲线下面积（AUC）为0.601，预测患者预后的AUC值为0.686。LAMA3 DNA高甲基化铂耐药卵巢癌患者（24例）的化疗效果较低甲基化铂敏感患者（15例）更差［有效率分别为50%（12/24）和15/15； χ2=10.833， P=0.001］，且LAMA3 DNA甲基化水平对卵巢癌患者的无进展生存时间和总生存时间均有显著影响（ P均<0.05）。 结论:LAMA3 DNA甲基化水平对卵巢癌患者的铂耐药及预后具有一定的诊断和预测价值，可能与卵巢癌的调控机制、铂耐药及预后存在密切联系。

目的:探讨长链非编码(lnc)RNA HCP5对胶质瘤细胞的辐射敏感性的影响及其机制。方法:分别用0、2、4、6、8 Gy射线照射胶质瘤细胞U251和U87，作为不同剂量辐射组；将si-con、si-HCP5、pcDNA、pcDNA-HCP5转染至细胞U251和U87中，分别记为si-con组、si-HCP5组、pcDNA组、pcDNA-HCP5组；将si-con、si-HCP5转染至细胞U251和U87后再用4 Gy射线照射，分别记为IR＋si-con组、IR＋si-HCP5组，仅用4 Gy射线照射的细胞记为IR组；将si-HCP5分别与anti-miR-con、anti-miR-508-3p共转染至细胞U251和U87后再用4 Gy射线照射，分别记为IR＋si-HCP5＋anti-miR-con组、IR＋si-HCP5＋anti-miR-508-3p组，转染均用脂质体法。采用RT-qPCR检测miR-508-3p和HCP5的表达；细胞克隆形成实验检测胶质瘤细胞的放射敏感性；流式细胞术检测细胞凋亡；Western blot检测磷酸化H2AX(γ-H2AX)、裂解半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Cleaved caspase-3)、磷酸化磷脂酰肌醇3激酶(p-PI3K)、磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)、磷酸化蛋白激酶B(p-AKT)、蛋白激酶B(AKT)蛋白表达；双荧光素酶报告基因检测实验检测荧光活性。结果:放射处理的胶质瘤细胞HCP5高表达，miR-508-3p低表达；沉默HCP5后细胞U251和U87放射敏感性增强，细胞凋亡率升高[U251：(16.67±1.68)%，(3.58±0.62)%， t＝21.929， P<0.05；U251：(12.32±1.08)%，(4.48±0.71)%， t＝18.198， P<0.05]，γ-H2AX[U251：(0.45±0.04)，(0.23±0.05)， t＝10.307， P<0.05；U87：(0.38±0.04)，(0.24±0.03)， t＝8.400， P<0.05]、Cleaved caspase-3[U251：(0.37±0.04)，(0.16±0.03)， t＝12.600， P<0.05；U87：(0.38±0.04)，(0.22±0.03)， t＝9.600， P<0.05]表达水平升高。相比单独沉默HCP5或辐射处理，沉默HCP5同时辐射处理U251细胞，细胞凋亡率[(25.34±1.54)%，(16.67±1.68)%， t＝11.413， P<0.05；(25.34±1.54)，(11.13±1.06)， t＝22.802， P<0.05]显著升高，γ-H2AX[(0.69±0.05)，(0.45±0.04)， t＝11.245， P<0.05；(0.69±0.05)，(0.31±0.04)， t＝17.804， P<0.05]、Cleaved caspase-3[(0.52±0.06)，(0.37±0.04)， t＝6.240， P<0.05；(0.52±0.06)，(0.34±0.04)， t＝7.488， P<0.05]表达水平升高。辐射处理后且沉默HCP5后U251和U87细胞中p-PI3K[(0.21±0.02)，(0.52±0.04)， t＝20.795， P<0.05；(0.26±0.23)，(0.67±0.07)， t＝5.116， P<0.05]、p-AKT[(0.22±0.03)，(0.66±0.07)， t＝17.332， P<0.05；(0.23±0.04)，(0.71±0.03)， t＝28.800， P<0.05]表达水平降低。HCP5可靶向调节miR-508-3p表达；干扰miR-508-3p逆转了沉默HCP5和辐射对U251和U87细胞放射的增敏和促进细胞凋亡的作用，降低了γ-H2AX、Cleaved caspase-3表达水平，提高了p-PI3K、p-AKT表达水平。 结论:沉默lncRNA HCP5可增强胶质瘤细胞的辐射敏感性，促进细胞凋亡，其机制可能与miR-508-3p及PI3K/Akt信号通路有关，可为胶质瘤治疗提供新靶点和新思路。

目的:探讨孕期和哺乳期壬基酚(nonylphenol，NP)暴露对后代小鼠脑组织Th17/Treg细胞平衡的影响及其相关机制研究。方法:30只C57BL/6孕鼠随机分为3组：对照组(饮用蒸馏水)和NP处理组(饮用0.2 μg/ml或2.0 μg/ml NP水溶液)。使用ELISA试剂盒测量仔鼠血清中的TNF-α、IFN-γ和IL-17水平，流式细胞术分析仔鼠脾脏Treg、Th17细胞频率，定量RT-PCR分析仔鼠脑组织中RORγt、Foxp3 mRNA表达，Western blot分析仔鼠脑组织中RORγt、Foxp3和PI3K/Akt/mTOR信号通路相关蛋白质表达，免疫荧光分析仔鼠脑组织中离子钙结合衔接分子1(Iba1)表达情况。结果:与对照组相比，NP暴露增加了雄性后代小鼠的血清IL-17、TNF-α水平( P<0.05)，降低了IFN-γ水平( P<0.05)。流式细胞术分析显示，NP暴露(0.2 μg/ml或2.0 μg/ml)的雄性后代小鼠脾脏中Th17细胞的百分比较对照组显著增加，而Tregs细胞的百分比降低。与对照组相比，NP暴露(0.2 μg/ml或2.0 μg/ml)的雄性后代小鼠脑组织中Foxp3蛋白质水平显著降低，RORγt蛋白质水平显著升高( P<0.05)。在qRT-PCR分析中也观察到类似的mRNA表达结果。在孕期和哺乳期暴露于剂量增加的NP期间，雄性后代小鼠脑组织中mTOR(p-mTOR)及其上游相关调节因子[PI3K、p-Akt(Ser473)、p-Akt(Thr308)]的蛋白质表达水平均升高( P<0.05)。免疫荧光分析显示，与对照组相比，NP暴露(0.2 μg/ml或2.0 μg/ml)的雄性后代小鼠脑组织中Iba1阳性细胞的数量显著增加( P<0.05)。 结论:孕期和哺乳期小鼠暴露于NP可能通过神经免疫轴影响后代神经元的发育/功能，增加后代神经发育障碍的风险。

目的:研究Notch信号通路对婴幼儿血管瘤间充质干细胞(Hem-MSCs)成脂分化的影响及其可能机制。方法:选取2021年1至6月南京医科大学附属儿童医院烧伤整形科手术切除的10例婴幼儿血管瘤标本(男6例，女4例，年龄2至6个月，平均3.5个月)。用贴壁筛选法从增生期血管瘤中分离Hem-MSCs，通过流式细胞术进行鉴定。鉴定成功后进行成脂诱导。使用实时荧光定量PCR检测Hem-MSCs成脂诱导14 d后Notch1、Jagged1及Hes1基因表达情况。在Hem-MSCs培养基中分别加入Notch信号通路抑制剂DAPT、PI3K/AKT信号通路激动剂740Y-P及溶剂DMSO，再进行成脂诱导。将细胞分为6组：空白对照组、成脂诱导组、成脂诱导+DMSO组、成脂诱导+DAPT组、成脂诱导+740Y-P组、成脂诱导+DAPT+740Y-P组。成脂诱导7 d后，蛋白质印迹法检测成脂诱导+DMSO组、成脂诱导+DAPT组、成脂诱导+DAPT+740Y-P组p-PI3K、PI3K、p-AKT、AKT蛋白表达情况；成脂诱导14 d后，实时荧光定量PCR检测上述6组细胞中成脂分化关键转录因子中PPARγ和C/EBPα基因表达情况；油红O染色鉴定成脂效果。两组间比较采用 t检验，多组间比较采用方差分析，组内比较采用SNK- q检验。 P<0.05为差异有统计学意义。 结果:Notch1、Jagged1及Hes1在Hem-MSCs成脂诱导过程中表达逐渐降低，差异均有统计学意义( tNotch1＝8.99， PNotch1＝0.008； tJagged1＝9.49， PJagged1＝0.007； tHes1＝7.74， PHes1＝0.015)。在Hem-MSCs成脂诱导过程中加入Notch信号通路抑制剂DAPT后，PI3K/AKT信号通路相关蛋白表达降低，差异有统计学意义( qp-PI3K＝4.78、 Pp-PI3K＝0.014， qp-AKT＝5.04、 Pp-AKT＝0.010)；相关成脂指标表达增高( q油红O＝6.07， P油红O＝0.003； qPPARγ＝17.34， PPPARγ<0.001； qC/EBPα＝14.8， PC/EBPα<0.001)，差异均有统计学意义。加入PI3K/AKT信号通路激动剂740Y-P后，相关成脂指标无明显变化，差异均无统计学意义( q油红O＝1.82， P油红O＝0.786； qPPARγ＝0.97， PPPARγ＝0.981； qC/EBPα＝1.98， PC/EBPα＝0.654)。同时加入DAPT和740Y-P后，相关成脂指标表达降低( q油红O＝5.22， P油红O＝0.013； qPPARγ＝9.78， PPPARγ<0.001； qC/EBPα＝16.74， PC/EBPα < 0.001) 结论:抑制Notch信号通路可以通过降低PI3K/Akt信号通路活性促进Hem-MSCs向脂肪细胞分化。

胰腺导管腺癌的发病机制与多条关键致癌信号通路包括Ras/MAPK、PI3K/AKT、PLCγ/PKC以及JAK/STATs等密切相关，而细胞外基质及微生物等对肿瘤发病的作用也逐渐被认识。越来越多新的潜在治疗靶点被发现，临床上对多种特异性治疗靶点抑制剂的应用取得了一定效果。化疗、靶向治疗、免疫治疗和基质靶向药物等联合治疗策略是胰腺导管腺癌未来的研究方向。

目的:探究下调脂肪酸结合蛋白5(FABP5)对皮肤细胞放射损伤的影响及其相关机制。方法:构建下调FABP5的慢病毒载体，将慢病毒感染人皮肤角质形成细胞(HaCaT)并检测转染效率。将细胞分为空白对照组、下调FABP5组、单纯照射组、下调FABP5+照射组。予6 MV X射线照射后，CCK-8法测定细胞增殖活力，划痕实验检测细胞迁移，流式细胞术分析细胞凋亡，克隆形成实验检测放射敏感性，免疫印迹检测细胞中PARP1、γ-H2AX、AKT、p-AKT的蛋白表达水平。结果:成功构建下调FABP5的HaCaT细胞，从RNA水平( t＝25.14， P<0.05)和蛋白水平( t＝20.06， P<0.05)验证均达到下调FABP5的目的。下调FABP5组细胞增殖( t＝3.55、5.88、3.18， P<0.05)、迁移能力( t＝15.44， P<0.05)显著减弱，其放射增敏比为0.782。下调FABP5+照射组细胞凋亡率较单纯照射组显著减少[(9.82±1.45)% vs.(22.05±6.71)%， t＝3.08， P<0.05]。下调FABP5+照射组细胞的PARP1和γ-H2AX蛋白水平分别为0.04±0.04、0.11±0.06和0.26±0.11、0.22±0.07，均低于单纯照射组的0.21±0.10、0.52±0.22和0.57±0.06、0.43±0.02( t＝2.83、3.07、4.50、5.33， P<0.05)，而p-AKT蛋白水平高于单纯照射组( t＝－16.24~3.02， P<0.05)。 结论:下调FABP5抑制皮肤细胞增殖、迁移，增强放射抵抗性，减少辐射诱导皮肤细胞凋亡和DNA损伤。这可能是通过磷脂酰肌醇3－激酶(PI3K)/蛋白激酶B(AKT)信号通路来抑制皮肤细胞放射敏感性，为放射性皮肤损伤防护提供一种新思路。

目的:探讨白藜芦醇联合γ射线对宫颈癌Hela细胞生物学行为的影响，并对其可能机制进行初步探究。方法:CCK-8法检测不同浓度白藜芦醇溶液±γ射线照射后细胞群体增殖；划痕实验和Transwell小室实验检测细胞迁移和侵袭；流式细胞术和Annexin V-FITC/PI双染检测细胞凋亡；蛋白印迹法检测PI3K、Akt、p-Akt、mTOR、p-mTOR蛋白表达。结果:与对照组相比，白藜芦醇组±γ射线照射均能抑制细胞增殖、迁移、侵袭能力，并促进细胞凋亡，且联合的效果更加明显。与对照组相比，白藜芦醇和γ射线均能降低细胞中Bcl-2、PI3K、p-Akt、p-mTOR蛋白表达，使Bax蛋白表达上调，但Akt、mTOR蛋白未发生明显改变。结论:白藜芦醇联合γ射线能够明显抑制Hela细胞增殖、迁移、侵袭能力并促进细胞凋亡，其机制可能与PI3K/Akt/mTOR信号通路的抑制作用及下游相关蛋白的表达相关。