目的:基于非靶向尿液代谢组学探究前列金丹片对慢性非细菌性前列腺炎大鼠的作用机制.方法:将30 只8 周龄雄性SD大鼠按照体质量随机分为空白组、模型组和药物组,每组 10 只.模型组和药物组制备慢性非细菌性前列腺炎大鼠模型(大鼠前列腺两侧叶均注入0.2 ml弗氏完全佐剂).从造模的第4 天开始,空白组和模型组予生理盐水灌胃,药物组予前列金丹片混悬液灌胃,每日1 次,连续灌胃30 d.实验结束后用超高效液相色谱-串联静电场轨道阱质谱联用仪检测各组大鼠的代谢物变化,并通过多元统计分析等鉴定各组间的差异代谢物,然后对差异代谢物进行功能注释.结果:代谢组学分析得到 8 个共同代谢物,其中 5 个代谢物在模型组表达下降,在药物组表达升高(P<0.05);其他3 个代谢物在模型组表达升高,在药物组表达下降(P<0.05).其中肌酐和染料木黄酮是重要差异代谢物,精氨酸和脯氨酸代谢通路以及异黄酮生物合成通路是前列金丹片发挥治疗作用的主要通路.与空白组相比,模型组精氨酸和脯氨酸代谢通路上调,肌酐生成增多(P<0.05);异黄酮生物合成通路下调,染料木黄酮生成减少(P<0.05).与模型组相比,药物组逆转了上述变化.结论:前列金丹片通过调节精氨酸和脯氨酸代谢通路干预L-精氨酸代谢,以及调节异黄酮生物合成通路干预柚皮素代谢,发挥对慢性非细菌性前列腺炎大鼠的治疗作用.

目的:探讨染料木素磺酸钠(genistein-3'-sodium sulfonate，GSS)对帕金森病(Parkinson disease，PD)模型小鼠运动功能及脑组织自噬水平的影响。方法:将40只C57BL/6J小鼠按照随机数字表法分为对照组、模型组、GSS低剂量组(0.15 mg/kg)、GSS中剂量组(0.50 mg/kg)和GSS高剂量组(1.50 mg/kg)，每组8只。模型组和GSS高、中、低剂量组小鼠采用腹腔注射1-甲基-4-苯基-1，2，3，6-四氢吡啶建立PD小鼠模型，建模后GSS高、中、低剂量组小鼠腹腔注射对应剂量的GSS(1次/d，共21 d)，模型组小鼠则注射等体积0.9%氯化钠溶液(1次/d，共21 d)，对照组小鼠正常饲养。21 d后通过步态分析实验、旷场实验、转棒实验、改良Y迷宫实验评估小鼠的运动和认知能力。Western blot法检测小鼠大脑皮质和纹状体组织LC3-Ⅱ和Beclin-1蛋白的表达水平。用SPSS 26.0软件对数据进行统计分析，正态分布多组间比较采用单因素方差分析，进一步两两比较采用LSD检验；非正态分布数据采用Kruskal-Wails H检验。 结果:(1)步态分析实验结果显示，5组小鼠左前肢、左后肢、右后肢的步长( F＝5.93，6.21，3.78，均 P<0.01)和正常步序比( H＝14.409， P<0.01)均差异有统计学意义。模型组小鼠正常步序比低于对照组( P<0.05)，GSS低、中、高剂量组正常步序比均高于模型组(均 P<0.05)。(2)旷场实验中，5组小鼠的运动总路程和平均运动速度均差异有统计学意义( F＝5.49，5.49，均 P<0.01)，模型组小鼠的运动总路程和平均运动速度均低于对照组(均 P<0.05)，GSS中、高剂量组小鼠的运动总路程[(2 395.57±319.35)cm，(2 386.51±396.00)cm]和平均运动速度[(7.98±1.06)cm/s，(7.95±1.32)cm/s]均高于模型组[(1 863.31±278.96)cm，(6.21±0.93)cm/s]和GSS低剂量组[(1 956.90±297.15)cm，(6.52±0.99)cm/s](均 P<0.05)。(3)5组小鼠转棒实验中的掉落潜伏期和改良Y迷宫实验中的停留时间均差异有统计学意义( F＝58.41，9.90，均 P<0.01)，模型组小鼠的掉落潜伏期和停留时间均低于对照组(均 P<0.05)，而GSS中、高剂量组的掉落潜伏期和停留时间均高于模型组和低剂量组(均 P<0.05)。(4)Western blot结果显示，5组小鼠皮质和纹状体区LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值( F＝8.17，15.47，均 P<0.01)及Beclin-1蛋白( F＝29.07，20.54，均 P<0.01)的表达水平均差异有统计学意义。模型组小鼠的LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值及Beclin-1蛋白表达水平在皮质区[(0.51±0.14)，(0.46±0.06)]和纹状体区[(0.58±0.09)，(0.55±0.10)]均低于对照组[皮质区：(1.00±0.10)，(1.00±0.05)；纹状体区：(1.00±0.06)，(1.00±0.25)；均 P<0.01]；GSS中剂量组小鼠在皮质区和纹状体区的LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值均高于模型组和GSS低、高剂量组(均 P<0.05)；在皮质区模型组小鼠的Beclin-1蛋白表达水平低于GSS各剂量组(均 P<0.05)，在纹状体区模型组Beclin-1蛋白表达水平与GSS各剂量组比较，均差异无统计学意义(均 P>0.05)。 结论:GSS能改善PD模型小鼠的运动和认知功能，其机制可能与上调小鼠大脑皮质和纹状体区的自噬活性有关。

目的:探讨白细胞介素17(IL－17)修饰的小鼠骨髓间充质干细胞(BMSC)对异体小鼠皮肤移植的影响及机制。方法:(1)取5只BALB/c小鼠(均为雌性，4～8周龄，性别、鼠龄下同)，处死后取股骨、胫骨和肱骨，采用全骨髓密度梯度离心联合贴壁分离法分离纯化培养BMSC，取第3代细胞行形态学观察，该代细胞经成骨、成脂诱导分化鉴定。第4代细胞经干细胞表面标志物鉴定。取第3～6代BMSC，经终质量浓度50 ng/mL小鼠重组IL－17预处理5 d后，行形态学观察。取IL－17预处理的BMSC和未经IL－17预处理BMSC标记碳花青荧光染料(CM－Dil)，行形态学观察并计算标记率。(2)取45只C57BL/6J小鼠，按随机数字表法分为磷酸盐缓冲液(PBS)对照组13只、单纯BMSC组16只、BMSC＋IL－17组16只。在小鼠皮肤移植术前1 d，单纯BMSC组13只小鼠经尾静脉注射5×10 6个/mL未经CM－Dil标记的BMSC 0.1 mL，另3只小鼠经尾静脉注射5×10 6个/mL CM－Dil标记的BMSC 0.1 mL；BMSC＋IL－17组13只小鼠经尾静脉注射5×10 6个/mL未经CM－Dil标记的IL－17预处理的BMSC 0.1 mL，另3只小鼠经尾静脉注射5×10 6个/mL CM－Dil标记的IL－17预处理的BMSC 0.1 mL；PBS对照组13只小鼠经尾静脉注射0.1 mL PBS。取45只BALB/c小鼠作供体，将前述3组处理后的45只C57BL/6J小鼠作为受体，建立背－背全厚皮移植模型。于移植术后第2天，再次对3组小鼠注射与移植术前1 d一样的等量相应细胞或PBS。于移植术后第7天，分别取单纯BMSC组和BMSC＋IL－17组中注射CM－Dil标记的BMSC和CM－Dil标记的IL－17预处理BMSC的3只小鼠，脱颈处死后采用荧光显微镜观察BMSC的CM－Dil示踪并计数。于移植术后第6天拆除敷料后，从单纯BMSC组注射未经CM－Dil标记的BMSC的13只小鼠和BMSC＋IL－17组注射未经CM－Dil标记的IL－17预处理BMSC的13只小鼠及PBS对照组13只小鼠中选取7只小鼠，记录移植皮片的存活时间。于移植术后第8天，从3组剩余的6只小鼠中分别取3只小鼠进行移植皮片的大体观察，酶联免疫吸附测定法检测小鼠血清中γ干扰素、IL－10、转化生长因子β(TGF－β)的水平，流式细胞仪检测脾脏CD4 ＋CD25 ＋叉头翼状螺旋转录因子p3(Foxp3) ＋调节性T细胞(Treg)比例，行苏木精－伊红染色观察移植皮片的组织形态。于移植术后第14天，取3组剩余3只小鼠同前行组织形态观察。对数据行独立样本 t检验、单因素方差分析、LSD检验。 结果:(1)培养5 d，经IL－17预处理的BMSC与未处理的BMSC形态和大小并无明显差别。(2)CM－Dil标记后，经IL－17预处理的BMSC与未处理的BMSC生长状态均较良好，标记率几乎可达100%。(3)移植术后第7天，单纯BMSC组小鼠皮片及邻近皮下组织CM－Dil标记阳性的BMSC数量为每100倍视野下(6.2±2.6)个，明显少于BMSC＋IL－17组CM－Dil标记阳性的IL－17预处理BMSC的每100倍视野下(15.0±5.3)个( t＝－2.962， P<0.05)。(4)单纯BMSC组和BMSC＋IL－17组小鼠移植皮片的存活时间分别为(13.3±1.2)、(17.0±1.5)d，明显长于PBS对照组的(8.7±0.8)d( P<0.01)，而BMSC＋IL－17组小鼠移植皮片的存活时间明显长于单纯BMSC组( P<0.01)。(5)移植术后第8天，PBS对照组小鼠移植皮片大部分发黑变硬且结痂坏死，单纯BMSC组小鼠移植皮片大部分存活良好，BMSC＋IL－17组小鼠移植皮片均存活良好。(6)移植术后第8天，与PBS对照组相比，单纯BMSC组和BMSC＋IL－17组小鼠的血清中IL－10和TGF－β含量明显升高( P<0.01)，γ干扰素含量明显降低( P<0.01)；与单纯BMSC组相比，BMSC＋IL－17组小鼠的血清中IL－10和TGF－β含量明显升高( P<0.01)，γ干扰素含量明显降低( P<0.01)。(7)移植术后第8天，单纯BMSC组和BMSC＋IL－17组小鼠脾脏CD4 ＋CD25 ＋Foxp3 ＋Treg比例明显高于PBS对照组( P<0.01)，BMSC＋IL－17组小鼠脾脏CD4 ＋CD25 ＋Foxp3 ＋Treg比例明显高于单纯BMSC组( P<0.01)。(8)移植术后第8天，PBS对照组小鼠移植皮片可见大量炎性细胞浸润，表皮、真皮坏死；单纯BMSC组小鼠移植皮片可见局灶性的炎性细胞浸润，仅有轻微的表皮变性；BMSC＋IL－17组小鼠移植皮片皮肤附属器存活完好，同时有血管形成。移植术后第14天，单纯BMSC组小鼠移植皮片可见广泛的炎性细胞浸润，并有较重的表皮变性和局灶性坏死；BMSC＋IL－17组小鼠移植皮片可见局灶性的炎性细胞浸润和轻微表皮变性；PBS对照组小鼠移植皮片已完全坏死。 结论:IL－17可通过提高小鼠BMSC诱导免疫耐受的能力和增强BMSC的归巢能力，最终起到减轻异体皮片移植后免疫排斥反应，延长小鼠移植皮片存活时间的作用。

目的 考察炮制、配伍对栀子豉汤有效成分的影响.方法 取生品、炒制品、焦制品及三者与淡豆豉的配伍适量,HPLC法同时测定京尼平龙胆双糖苷、栀子苷、染料木苷、西红花苷Ⅰ、西红花苷Ⅱ、大豆苷元、染料木素的含量,计算溶出率.结果 7 种成分在各自范围内线性关系良好(r＞0.999 4),平均加样回收率 95.22%～104.94%,RSD≤3.36%.炮制后,生品中栀子苷、西红花苷Ⅰ、西红花苷Ⅱ含量降低;配伍后,生品、炮制品水提物中环烯醚萜苷类、二萜色素类成分溶出率降低;乙醇提取时有利于环烯醚萜苷类成分溶出,提取溶剂对西红花苷类成分溶出的影响更大.结论 该方法简便、重复性好,可为栀子豉汤质量标准建立提供理论依据.

目的 建立HPLC法同时测定脑脉泰胶囊中 3′-羟基葛根素、2-羟基红花黄色素A、葛根素、葛根素芹菜糖苷、3′-甲氧基葛根素、大豆苷、二苯乙烯苷、木犀草苷、染料木苷、木犀草素、丹酚酸B、迷迭香酸的含量.方法 分析采用Kromasil C18 色谱柱(250 mm×4.6 mm,5 μm);流动相乙腈-水(含 1.0 g/L 磷酸),梯度洗脱;体积流量0.8 mL/min;柱温 30℃;检测波长 280 nm.再进行聚类分析、主成分分析.结果 12 种成分在各自范围内线性关系良好(r＞0.999 0),平均加样回收率 97.07%～98.30%,RSD 0.86%～1.82%.10 批样品聚为 4 类,4 种主成分累积方差贡献率达 86.262%.结论 该方法简便稳定,可靠准确,可为脑脉泰胶囊的质量控制提供科学依据.

目的 研究染料木素邻苯二甲酰亚胺衍生物的体外抗乳腺癌活性及其作用机制.方法 合成染料木素邻苯二甲酰亚胺衍生物,通过MTT法检测其对癌细胞株MCF-7、MBA-MD-231、MBA-MD-435 增殖抑制作用;并通过分子对接的方法探讨染料木素邻苯二甲酰亚胺衍生物与雌激素受体α(ERα)的作用方式.结果 合成了3 个染料木素邻苯二甲酰亚胺衍生物,并对其生物活性及抗乳腺癌机制进行了验证.结论 染料木素邻苯二甲酰亚胺衍生物具有较强的抗乳腺癌活性,可能与竞争性抑制ERα等机制有关.

酪氨酸激酶抑制剂(TKI)的应用是肝细胞癌系统治疗的重要进展,但由于其持续的抗血管生成治疗会导致肿瘤缺氧增加,加速缺氧微环境的发展,促进缺氧诱导因子(HIF)表达,进而导致肿瘤患者对TKI耐药.本文从代谢重编程、癌及癌相关基因的异常表达、铁死亡等方面总结了HIF介导肝细胞癌对TKI耐药的作用机制,并归纳耐药应对策略,以期为临床解决TKI耐药问题提供参考.结果发现,HIF/糖酵解轴抑制剂(如异黄酮染料木素、辛伐他汀等)可基于代谢重编程机制改善TKI耐药,癌基因靶向抑制剂和TKI的联合应用(如辣椒素和索拉非尼联合)可基于癌及癌相关基因的异常表达机制改善TKI耐药,脂肪酸合酶抑制剂(如奥利司他)可基于铁死亡机制改善TKI耐药.

目的 研究大发表Campylotropis trigonoclada干燥全株的化学成分.方法 利用HPD-100大孔吸附树脂、硅胶、反相RP-18、凝胶Sephadex LH-20、HPLC等色谱方法进行分离纯化,并运用MS、NMR等波谱方法鉴定化合物的结构.结果 从大发表中分离得到24个化合物,分别鉴定为(+)-儿茶酸(1)、芦丁(2)、槲皮素-3-O-α-L-阿拉伯吡喃糖苷(3)、广寄生苷(4)、槲皮素-3-O-葡萄糖苷(5)、槲皮素-3-O-β-D-吡喃木糖苷(6)、木犀草素-7-O-β-龙胆二糖苷(7)、荭草素(8)、异牧荆素-2"-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(9)、voilanthin(10)、染料木素(11)、bolusanthin Ⅲ(12)、二羟四氢黄酮-7-O-葡萄糖苷(13)、白皮杉醇4'-O-p-D-吡喃葡萄糖苷(14)、(Z)-虎杖苷(15)、二氢菜豆酸(16)、millettiaspecoside B(17)、七叶内酯(18)、交链孢酚(19)、邻苯二甲酸二丁酯(20)、邻苯二甲酸二辛酯(21)、2,4-二羟基-3,6-二甲基苯甲酸甲酯(22)、3,4-二羟基苯甲醛(23)和没食子酸乙酯(24).其中黄酮类化合物13个、二苯乙烯苷类化合物2个、倍半萜类化合物1个、苯酚苷类化合物1个、香豆素类化合物1个和其他芳香化合物6个.结论 除化合物11外,其余23个化合物均为首次从该属植物中分离得到.

目的 优选染料木素三元包合物的制备工艺,并对其体外抗癌活性进行评价.方法 通过相溶解度及分子模拟对染料木素二元与三元包合物的溶解性和稳定性进行评价,优选染料木素包合物的种类.通过处方和制备工艺研究,确定三元包合物的处方组成和制备工艺.利用傅里叶变换红外光谱、X射线粉末衍射、差示扫描量热法和扫描电子显微镜等对染料木素三元包合物进行表征,采用人乳腺癌MCF-7细胞和人非小细胞肺癌A549细胞对染料木素三元包合物的抗癌活性进行考察.结果 染料木素三元包合物与二元包合物相比溶解度更高、稳定性更好.研究表明,以处方染料木素与HP-β-CD物质的量比(1∶1.8),加入染料木素-HP-β-CD总质量5％聚乙烯吡咯烷酮(PVP)K30,通过酸碱位移结合喷雾干燥法制备染料木素三元包合物,染料木素的溶解度可达8.8mg/mL,溶出度为93％;体外抗癌活性实验表明,染料木素三元包合物能明显增强染料木素对MCF-7细胞和A549细胞的抑制作用.结论 优选工艺为酸碱位移结合喷雾干燥法制备染料木素三元包合物,能明显提高染料木素的溶解性,并显著增强染料木素对MCF-7细胞和A549细胞的抑制作用.

目的:缺氧是一种常见的病理现象,通常由机体组织供氧不足或无法有效利用氧导致.羟基化及甲氧基化黄酮类化合物具有显著的抗缺氧活性.本研究旨在探索6-羟基染料木素(6-hydroxygenistein,6-OHG)及其甲基化衍生物的合成方法和抗氧化与抗缺氧活性.方法:以鹰嘴豆芽素A为原料,经甲基化反应、溴化反应、甲氧基化反应及去甲基化反应得到6-OHG及其4个甲基化衍生物[4',6,7-三甲氧基-5-羟基异黄酮(化合物3)、4',5,6,7-四甲氧基异黄酮(化合物4)、4',6-二甲氧基-5,7-二羟基异黄酮(化合物6)、4'-甲氧基-5,6,7-三羟基异黄酮(化合物7)].采用氢-1核磁共振波谱法(1H-nuclear magnetic resonance spectroscopy,1H-NMR)和质谱法(mass spectrometry,MS)表征产物结构;高压液相色谱法检测化合物的纯度;1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH)自由基清除实验检测化合物的体外抗氧化活性.将PC12细胞分为正常组、缺氧模型组、芦丁组(1×10-9～1×10-5 mol/L),以及常氧和缺氧条件下的目标化合物组(1×10-9～1×10-5 mol/L),采用细胞计数试剂盒-8(cell counting kit-8,CCK-8)检测细胞活力,筛选得到抗缺氧活性优异的目标化合物及其最佳抗缺氧活性时的药物浓度.分别用抗缺氧活性优异的目标化合物、芦丁的最佳药物浓度处理PC12细胞后,在光镜下观察细胞形态,采用流式细胞术测定细胞凋亡率,蛋白质印迹法检测缺氧诱导因子-1α(hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α)和血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)的蛋白质表达水平.结果:6-OHG及其4个甲基化衍生物的结构无误,纯度均>97%.当浓度为4 mmol/L时,化合物7和6-OHG的DPPH自由基清除率分别为81.16%和86.94%,均高于阳性对照芦丁,而化合物3、4、6的清除率均低于20%.与正常组相比,缺氧模型组的细胞活力显著下降(P<0.01);与缺氧模型组相比,化合物3、4、6对缺氧条件下的细胞活力无显著影响;在所有实验浓度下,6-OHG组的细胞活力均显著高于缺氧模型组(均P<0.05);在给药浓度为1×10-7或1×10-6 mol/L时,化合物7组的细胞活力显著高于缺氧模型组(均P<0.05).6-OHG和化合物7的抗缺氧活性优异,最佳药物浓度分别为1×10-6和1×10-7 mol/L.采用6-OHG(1×10-6 mol/L)和化合物7(1×10-7 mol/L)处理PC12细胞后,与缺氧模型组相比,细胞损伤明显减轻,细胞凋亡率显著下降(P<0.01),HIF-1α和VEGF蛋白质的表达水平显著下调(均P<0.01).结论:优化后的合成路线可提高6-OHG的产率,通过甲基化和选择性去甲基化得到4个衍生物.6-OHG和其衍生物化合物7表现出优异的体外抗氧化和抗缺氧活性,该活性与其分子中存在的A环邻三酚羟基结构有关.