目的:分析中国流行的柯萨奇病毒A6型（coxsackievirus A6，CVA6）D3基因亚型中的D3a和D3b分支序列结构蛋白B细胞抗原表位氨基酸差异性来优化设计CVA6病毒样颗粒（virus-like particle，VLP）疫苗。方法:对GenBank下载的含有P1区核苷酸CVA6序列，使用MEGA.11.0软件基于VP1序列采用最大似然法构建进化树划分基因型及亚型。采用在线工具WebLogo并结合CVA6 B细胞抗原表位研究的相关文献，对D3a和D3b分支序列VP1-VP3区B细胞抗原表位氨基酸差异性分析，为筛选疫苗候选株进行CVA6 VLP的制备。结果:D3a与D3b分支序列在VP1 N末端P27位点分别是天冬酰胺（96.2%）和丝氨酸（92.9%）；在VP3 N末端P60位点为甘氨酸（98.8%）和丝氨酸（60.0%）。基于上述差异性选择具有D3a（VP3-N-P60）和D3b（VP1-N-P27）两分支序列共有的B细胞抗原表位D3a-JX2018（GenBank accession number：MN845862）作为疫苗候选株，并成功制备了CVA6 VLP。结论:本研究为疫苗候选株的选择提供了新的思路，为日后CVA6 VLPs疫苗和免疫诊断试剂的研发提供了基础。

目的:了解2019年云南省曲靖地区手足口病（HFMD）病原学特征。方法:采集曲靖地区2019年HFMD患儿的粪便样本，从粪便悬液中直接提取病毒RNA，先用MD91/OL68-1引物扩增肠道病毒（EV）VP4区基因并测序，序列在GenBank确定病毒型别，用各型病毒的相关引物扩增病毒VP1区全序并测序，通过肠道病毒在线定型工具（Enterovirus Genotyping Tool Version 0.1）进行病毒型别初步鉴定，之后计算与原型株的核苷酸相似性并进行基因进化树分析定型。结果:470份样本中共检测到62株EV毒株，总阳性检出率为13.19%，其中EV-A组病毒42株（8.94%），EV-B组病毒9株（1.91%），EV-C组病毒11株（2.34%），全为脊灰病毒1型疫苗株（Sabin株），未检测到肠道病毒71型（EV-A71）和EV-D组病毒。检出率较高的病毒依次为柯萨奇病毒A10型（CV-A10，4.47%，21株）、柯萨奇病毒A16型（CV-A16，2.55%，12株）、脊髓灰质炎病毒1型疫苗株（2.34%，11株）和CV-A6（1.70%，8株）。结论:2019年云南省曲靖地区儿童HFMD病例的主要病原是CV-A10、CV-A16和CV-A6，未检出EV-A71。与往年国内其他省份相比，曲靖地区2019年HFMD病原体已经发生改变，今后要加强对CV-A10、CV-A16和CV-A6等病原的实验室监测工作。

目的:对2018年青海省一例流感样病例中分离得到的柯萨奇病毒B组5型(coxsackievirus B5, CV-B5)分离株QH/CVB5/2018进行全基因组测序及遗传特性分析。方法:采用二代高通量测序对QH/CVB5/2 018分离株进行全基因组序列测定，利用SPAdes、DNAStar 7.1、MEGA 6.0、Simplot 3.5.1以及RDP4软件对病毒进行全基因组序列拼接以及遗传进化、基因重组和氨基酸突变分析。结果:QH/CVB5/2018全基因组核苷酸序列长度为7 369 bp，编码含2 185个氨基酸残基的多聚蛋白。基于基因组的序列同源性和系统进化分析，显示QH/CVB5/2018与417/JS/CHN/2013同源性最高，核苷酸序列一致性为96.9%(氨基酸序列同源性为99.5%)；基于VP1序列的系统进化分析显示QH/CVB5/2018处于CVB5-C基因型；重组分析显示QH/CVB5/2018可能为CHN_SH/CVB5/2008和CHN_YN-CVB3/2009的重组株，重组发生在6 114～7 199 bp；氨基酸突变位点分析显示，相比于其他CVB5毒株，139S、864S、1086R、1693C、1814D和1819N为QH/CVB5/2018特异突变位点。结论:QH/CVB5/2018分离株属于柯萨奇病毒B组5型的C组基因型，可能为重组株。

目的:了解浙江省衢州地区儿童病毒性脑炎埃可病毒(Echovirus, ECHOV)优势血清型与变迁并分析ECHOV VP1基因分子特征。方法:采集53例病毒性脑炎患儿脑脊液标本进行病毒分离培养。采用荧光RT-PCR和PCR分别检测脑脊液标本中人肠道病毒(human enterovirus，HEV)包括ECHOV、柯萨奇病毒(coxsackie virus，CV)和新型肠道病毒(enterovirus，EV)，以及流行性乙型脑炎病毒(japanese encephalitis virus, JEV)、腮腺炎病毒(mumps virus, MuV)、西尼罗病毒(west nile virus，WNV)、基孔肯雅病毒(chikungunya virus，CHIKV)、单纯疱疹病毒(herpes simplex virus，HSV)和巨细胞病毒(cytomegalovirus，CMV)。HEV阳性脑脊液标本采用RT-PCR法扩增HEV-B组全长VP1基因序列，测序后用多种生物信息学软件分析ECHOV VP1基因型、基因重组和遗传进化特征。结果:RD细胞分离培养出6株毒株，但Hep-2细胞分离培养结果均阴性。11份标本HEV通用荧光RT-PCR结果阳性，但其他病毒检测结果均阴性。11份HEV阳性标本中6份检出ECHOV，与分离培养结果一致，分别为4株ECHO6、1株为ECHO7和1株ECHO30血清型，柯萨奇病毒和EV检测结果均阴性。4株ECHO6病毒属于ECHO6-C2基因亚型，但分为ECHO6-41/46和ECHO6-45/48两个流行克隆，ECHO7和ECHO30分别属于ECHO7-C和ECHO30-C基因型。ECHO6与ECHO30病毒在进化过程中存在VP1基因重组。结论:ECHOV是该地区儿童病毒性脑炎主要病原体，且可能存在局部暴发流行。ECHO6与ECHO30病毒VP1基因存在重组可能性，ECHO6有成为ECHOV优势血清型的可能。

目的:了解安徽省柯萨奇病毒A组4型(coxsackievirus A4，CV-A4)毒株全基因组序列变异及分子进化情况，为今后手足口病的病原学监测和科学防治提供理论依据。方法:采用一代测序法对2020年5株CV-A4分离株进行全基因组测序。运用MEGA11.0对5株CV-A4分离株，32株CV-A4代表株和肠道病毒A71型(Enterovirus A71，EV-A71)原型株BrCr基于VP1区构建系统进化树，对分离株以及肠道病毒A组(enterovirus A，EV-A)原型代表株基于P1、P2、P3区分别构建系统进化树；选用DNAStar进行毒株VP1区氨基酸序列比对，使用BioEdit7.2进行氨基酸置换熵分析并作氨基酸位点熵值图，使用SimPlot3.5和RDP4对CV-A4分离株和EV-A原型代表株进行重组分析，使用DnaSP6软件进行分离株和参考代表株的选择压力分析。结果:系统进化树显示：分离株属于C2亚型，与中国大陆地区流行的CV-A4毒株属于同一分支，C2亚型分支的毒株氨基酸序列同源性为97.30%～100%，分离株同原型相比，均有6个氨基酸变异位点。选择压力分析表明C2亚型的CV-A4毒株受负选择压力的影响，置换熵分析编码区氨基酸序列有25个易突变位点，占比1.14%，毒株进化主要依赖重组。重组分析表明分离株在P2、P3区域与多种EV-A原型株发生不同区段的重组，与CV-A5原型株重组区段较长，尤其在3A-3C区段，P1是相对保守的区段。结论:安徽省CV-A4在P2、P3区与其他EV-A原型株发生频繁重组事件，应对安徽省CV-A4的分子进化研究继续保持密切关注。

目的:了解青海省手足口病(hand, foot and mouth disease, HFMD)患者中肠道病毒流行情况和基因型特征。方法:采集青海省HFMD患者的咽拭子标本，进行病毒分离和特异性引物聚合酶链反应(RT-PCR)，对扩增产物进行核苷酸序列测定和分析，并参考NCBI部分毒株序列构建基因进化树。结果:采集临床诊断HFMD阳性病例标本1 738份，其中人肠道病毒A组71型(EV-A71)型326例，占18.76%、人肠道病毒柯萨奇A16型(CV-A16)型237例，占13.64%、人肠道病毒柯萨奇A6型(CV-A6)型628例，占36.13%，4年间不同基因型别间存在差异，具有统计学意义(EV-A71， χ2＝245.315, P<0.001; CV-A16， χ2＝27.680, P<0.001; CV-A6， χ2＝702.713, P<0.001)，用RD细胞分离后共得到到317株细胞培养物，测序后选取2017年和2018年典型基因型的VP1区核酸序列进行序列分析，全部基因型VP1区核酸序列间同源性在59%~100%之间，19株EV-A71VP1序列间核苷酸同源性分别在93%~100%之间，20株CV-A16型核酸VP1序列的同源性在92%~100%之间，6株CV-A6型VP1核酸序列的同源性在97%~99%之间。从进化树图上看，青海省流行的EV-A71毒株序列全都在进化树图的C4a分支上；CV-A16型分离到20个毒株序列出现在进化树图上的分为两个基因型别，18株为B1b，2株为1D基因型；CV-A6型分离到5个毒株为D3基因型，1株属于B1型。 结论:青海省2015—2018年HFMD的流行基因型别由EV-A71向CV-A16和CV-A6转变，青海省流行的EV-A71型一直是C4a基因型，CV-A16和CV-A6存在不同的基因型别，不同基因型间核酸序列差异性较大，同一基因间序列变异较小。

目的:分析大理白族自治州手足口病的流行病学和病原学构成，为制订手足口病的防控措施提供科学决策和依据。方法:通过中国疾病预防控制信息系统收集2015年1月至2019年12月大理白族自治州手足口病病例的人口学资料，分析患者的发病率，流行病学特征，采用实时反转录聚合链反应检测手足口病患者粪便标本中的柯萨奇病毒A组16型、肠道病毒71型和其他肠道病毒核酸。统计学方法采用 χ2检验。 结果:2015年至2019年，大理白族自治州共报告手足口病30 730例，年均发病率为171.50/10万，2016年至2019年发病率呈上升趋势，其中重症病例24例(0.08%)。年均发病率居前3位者分别为永平县、宾川县和大理市。6月至7月为夏季发病高峰，共报告病例9 168例(29.83%)；9月至10月为秋季流行高峰，共报告病例5 988例(19.49%)，夏季高峰流行强度高于秋季高峰。30 730例病例中，男17 373例，女13 357例，男性年均发病率为120.29/10万，高于女性的75.83/10万，差异有统计学意义( χ2＝1 637.467， P<0.01)。幼儿期(1~<3岁)的发病率最高，其次为学龄前期(3~<6岁)，分别为4 158.96/10万和1 953.11/10万。从幼儿期开始，发病率随年龄的增长而降低；重症病例集中在幼儿期，共报告16例，占重症病例数的66.67%。人群分类以散居儿童为主，共报告20 516例(66.76%)。1 294例实验室确诊病例中，柯萨奇病毒A组16型感染者792例(61.21%)，肠道病毒71型感染者为320例(24.73%)，其他肠道病毒感染者182例(14.06%)。 结论:大理白族自治州手足口病发病具有明显的季节、年龄和人群特征，应加强部门合作、健康教育，严格落实各项防控措施，以降低发病率，并提高重症病例的早期识别救治能力。

目的:了解2002-2018年浙江省病毒性脑膜炎病原学及分子流行病学特征。方法:从设立的监测点医院采集疑似病毒性脑膜炎患者样本2 173份，其中脑脊液1 718份、粪便455份，用荧光定量PCR方法检测脑脊液中人类肠道病毒（HEV）、腮腺炎病毒（MuV）、单纯疱疹病毒（HSV）、巨细胞病毒（CMV）和乙型脑炎病毒（JEV）核酸，粪便样本只检测HEV；用ELISA方法检测脑脊液中上述5种病毒IgM抗体；对HEV核酸阳性样本扩增病毒VP1基因和测序，确定病毒型别并进行进化分析。结果:在2002-2018年2 173份样本中检出HEV核酸阳性871份（40.1 %），其中脑脊液1 718份、阳性654份（38.1 %），粪便455份、阳性217份（47.7 %）；871份HEV核酸阳性样本，VP1扩增测序阳性670份，其中HEV-A 5份、HEV-B 665份，涉及23个病毒血清型，分别为柯萨奇病毒（CV）A组CVA4、CVA6、CVA9、CVA10，CVB组1~5，埃可病毒（EchoV；E）E3、E4、E6、E7、E9、E11、E14、E16、E18、E21、E25、E30、E33和肠道病毒（EV）-71，位于前3位的分别为E30、E6和CVB5，该3个血清型间隔若干年呈现病毒活动性增强的趋势。从2012-2015和2018年795份脑脊液中检出HEV核酸阳性374份、MuV 6份、HSV和CMV均为5份，对其中的368份脑脊液同时检测5种病毒IgM抗体，HEV抗体阳性2份、JEV 6份、MuV 1份。670份HEV中除1份EV-71外，EchoV 517份、CV 152份，两者之比为3.4∶1，两类病毒间隔3~5年存在优势株交替变化的趋势。VP1进化树显示，浙江省HEV位于HEV-A和HEV-B分支上，E30存在h和i基因亚型。 结论:浙江省病毒性脑膜炎的主要病原为HEV-B；EchoV检出率明显高于CV，两类病毒存在交替变化的趋势；优势血清型E30、CVB5和E6间隔若干年呈现病毒活动性增强的趋势；监测点HEV活动强度与病毒性脑膜炎暴发疫情的发生两者之间在时间上有较好的相关性。

目的:观察肝功能异常患儿的临床特点，分析其病因，为临床诊治提供参考。方法:选取杭州市儿童医院2017年4月至2019年2月收治的2个月至13岁肝功能异常患儿176例作为研究对象，采用荧光定量法对患儿分泌物标本进行病原检测，采集血液检测其乙型病毒性肝炎抗体和丙型病毒性肝炎抗体及甲型病毒性肝炎抗体，并采用血培养法检测和鉴定细菌，同时还进行血遗传代谢和凝血功能等筛查。根据患儿年龄将其分为婴儿组、幼儿组、学龄前组及学龄组。结果:176例患儿中，婴儿组肝功能异常者最多，为93例(52.84%)，其次为幼儿组43例(24.43%)。发病原因：原发疾病为感染性疾病者138例(78.41%)、非感染性疾病者8例(4.55%)、未检出病原者30例(17.04%)；感染性疾病致患儿肝功能异常138例中，病毒感染者为123例(89.13%)、细菌感染者8例(5.80%)、支原体感染6例(4.35%)、弓形虫感染者1例(0.72%)。病毒感染致肝功能异常123例中，巨细胞病毒感为62例(50.41%)，其次为EB病毒38例(30.89%)，轮状病毒10例(8.13%)，肠道病毒71型(EV71)5例(4.07%)，肠道通用病毒4例(3.25%)，呼吸道合胞病毒2例(1.63%)，单纯疱疹病毒和柯萨奇A16病毒各1例(0.81%)。学龄前及以上者均以EB病毒感染为主；年龄>1岁肝功能异常因巨细胞病毒所致比例为37.10%(23/62)、EB病毒感染所致比例为92.11%(35/38)，与年龄2个月至1岁的62.90%、7.89%比较，差异有统计学意义(χ 2＝29.27， P＝0.00)。8例细菌感染致肝功能异常：金黄色葡萄球菌3例、肺炎链球菌2例、大肠杆菌2例、铜绿假单胞菌1例。遗传代谢病共3例，其中肝豆状核变性2例，糖原累积症1例。小儿肝功能异常特点：患儿临床主要表现为黄疸、脾肿大和肝脏肿大、咳嗽、腹泻等；转归：治愈98例(55.68%)、好转60例(34.09%)，加重17例(9.66%)、死亡1例(0.57%)。 结论:婴幼儿肝功能异常以病毒感染为主，尤其是巨细胞病毒；早期无明显症状，重度者可表现为黄疸和肝脾肿大，主要以轻度为主，预后较好。

手足口病(hand，foot and mouth disease，HFMD)是我国5岁以下儿童常见的丙类传染病，由多种肠道病毒引起。近年研究发现柯萨奇病毒A组10型(coxsackievirus A10，CVA10)逐渐成为HFMD主要病原体之一，其感染呈上升趋势，与肠道病毒71型(enterovirus 71，EV71)、柯萨奇A组16型(coxsackievirus A16，CVA16)、柯萨奇A组6型(coxsackievirus A6，CVA6)呈共循环流行。CVA10细胞受体为含环状结构跨膜蛋白1(recombinant kringle containing transmembrane protein 1，KRM1)，特异性中和抗体命名为2G8，相关动物模型中的疫苗主要为灭活疫苗及病毒样颗粒疫苗。该文就CVA10的细胞受体、中和抗体、疫苗与动物模型研究等方面做出阐述，为HFMD的防控提供一定思路。