目的 基于指纹图谱和多指标定量测定对鲜地黄中地黄汁、地黄片、地黄渣的化学成分进行分析与比较,阐明鲜地黄药材不同加工方法指标性成分的分布规律.方法 采用HPLC法建立10批地黄汁、地黄片和地黄渣指纹图谱,相似度分析结合化学模式识别法进行分析.采用HPLC法,HPLC-蒸发光散射检测(ELSD)法分别测定地黄样品中苷类、糖类成分含量.结果 建立的HPLC指纹图谱共标定14个共有峰,聚类分析将样品分为3类;经主成分分析,主成分1～3是影响鲜地黄样品质量的主要因子;采用正交偏最小二乘-判别法标记了鲜地黄样品中8个差异性成分.苷类、糖类成分总含量测定均表明地黄汁＞地黄片＞地黄渣,苷类成分中除地黄苷A外,地黄汁中梓醇、桃叶珊瑚苷、地黄苷D、益母草苷含量都高于地黄片和地黄渣,质量分数为7.43％～7.78％、0.10％～0.11％、0.59％～0.66％、0.69％～0.72％;糖类成分除棉子糖外,地黄汁中果糖、葡萄糖、蔗糖、水苏糖的含量都高于地黄片和地黄渣,质量分数为2.40％～2.55％、1.84％～2.02％、12.33％～12.77％、33.03％～33.45％.结论 通过指纹图谱和含量测定方法,明确了鲜地黄不同加工方式化学成分变化,为临床上地黄汁、地黄片的使用提供参考,并为地黄渣的回收利用提供科学依据.

目的 确定生地黄Rehmanniae Radix的性味功效物质基础,阐明生地黄及其拆分组分的寒热药性归属以及中药药性的内部精细结构.方法 采用水煎煮法、水提醇沉法和色谱分离技术,对生地黄的主要化学成分进行拆分.在建立寒证大鼠模型的基础上,测定与能量代谢,和物质代谢密切相关的生理生化指标.同时,对大鼠尿液进行代谢组学分析,筛选出各给药组大鼠尿液中的差异代谢物,从而确定潜在的生物标志物和代谢通路.结果 水煎液、多糖、环烯醚萜苷对寒证模型大鼠呈现相同的药性作用倾向,均能降低肝组织Na+,K+-三磷酸腺苷(adenosine triphosphate,ATP)酶活性和血浆中三碘甲状腺原氨酸(3,5,3'-triiodothyronine,T3)、甲状腺素(thyroxine,T4)、丙酮酸(pyruvic acid,PA)、多巴胺(dopamine,DA)、去甲肾上腺素(norepinephrine,NE)的水平及琥珀酸脱氢酶(succinate dehydrogenase,SDH)活性,升高血浆中乙酰胆碱酯酶(acetylcholinesterase,AchE)活性.低聚糖对寒证模型大鼠呈现相反的药性作用倾向,能升高大鼠肝组织Na+,K+-ATP酶活性和血浆中T3、T4、PA、DA、NE的水平及SDH活性,降低血浆中AchE活性.结论 水煎液、多糖、环烯醚萜苷抑制能量代谢和物质代谢,具有寒凉性;低聚糖促进能量代谢和物质代谢,具有温热性.

目的 综合评价地黄不同入药形式制千金黄连丸(Qianjin Huanglian Pills,QHP)的质量.方法 建立地黄不同入药形式制QHP的HPLC指纹图谱,通过多元统计分析及2种环烯醚萜苷类成分(梓醇、益母草苷)、5种生物碱类成分(黄连碱、表小檗碱、药根碱、小檗碱、巴马丁)、5种糖类成分(果糖、葡萄糖、蔗糖、棉子糖、水苏糖)定量分析对30批地黄不同入药形式制QHP的质量进行评价.结果 30批QHP样品指纹图谱相似度较高,采用SPSS 19.0和SIMCA-P14.1软件对黄连丸19个共有峰峰面积进行系统聚类分析和主成分分析,30批样品可按鲜地黄连丸、鲜干黄连丸、生地黄连丸明显分为3类;采用正交偏最小二乘法-判别分析标记了黄连丸中8个差异性成分,分别为峰1、6、15(表小檗碱)、3、4、2(梓醇)、16、9.含量测定结果表明,2种环烯醚萜苷类成分梓醇、益母草苷总含量顺序为鲜干黄连丸＞鲜地黄连丸＞生地黄连丸,5种生物碱类成分总含量顺序为生地黄连丸＞鲜地黄连丸＞鲜干黄连丸,5种糖类成分总含量顺序为鲜地黄连丸＞鲜干黄连丸＞生地黄连丸,棉子糖和水苏糖的含量均值顺序为鲜地黄连丸＞鲜干黄连丸＞生地黄连丸,提示鲜地黄连丸、鲜干黄连丸中梓醇、益母草苷、棉子糖、水苏糖含量较高,鲜地黄连丸、鲜干黄连丸中生物碱类成分含量略低于生地黄连丸.结论 建立的方法操作简便、重复性好,可用于QHP的定性定量分析;研究结果可为完善QHP质量标准提供依据.

目的 研究棉子糖抗衰老活性并探讨其作用机制.方法 棉子糖(150、200、250 μmol·L-1)加到大肠杆菌中孵育秀丽隐杆线虫后,显微镜下观察线虫身体弯曲频率、头尾摆动频率、体长,观察热应激刺激下线虫的存活时间;通过脂褐素荧光强度检测评价棉子糖对线虫抗衰老能力的影响;采用DAF-16核定位测定和超氧化物歧化酶-3(SOD-3)表达测定研究其抗衰老的相关机制.结果 与对照组比较,棉子糖3个浓度均使线虫的身体弯曲频率加快(P＜0.001);200 μmol·L-1棉子糖使线虫头尾摆动频率加快(P＜0.01);体长测试结果显示棉子糖3个浓度均对线虫生长发育无毒害作用.热应激测试中,与对照组比较,棉子糖3个浓度均显著延长线虫在热应激条件下的存活时间(P＜0.05).脂褐素测试中,与对照组比较,棉子糖3个浓度均使线虫体内脂褐素含量显著降低(P＜0.01).DAF-16核定位测定中,棉子糖3个浓度均促进DAF-16蛋白入核表达.SOD-3表达测定中,与对照组比较,棉子糖250 μmol·L-1浓度组的SOD-3蛋白表达水平显著上升(P＜0.05),与DAF-16核定位测定一并说明棉子糖抗衰老活性依赖IIS分子信号通路.结论 棉子糖能够促进线虫的活动能力,对其生长发育无毒害性,并能延缓线虫的衰老速度,促进DAF-16蛋白入核表达,提高SOD-3蛋白表达水平,其抗衰老机制依赖IIS分子信号通路.

[目的]利用代谢组学分析患枣花病意大利蜜蜂Apis mellifera ligustica工蜂中肠内代谢物变化,挖掘出与蜜蜂枣花病相关的重要代谢通路,旨在揭示蜜蜂枣花病发病机制,为枣花病靶向药物的研发提供理论依据.[方法]分别利用液相色谱-质谱联用(liquid chromatography-mass spectrometry,LC-MS)和气相色谱.质谱联用(gas chromatography-mass spectrometry,GC-MS)技术对患枣花病和健康意大利蜜蜂工蜂进行中肠非靶向代谢组检测;通过主成分分析(principal component analysis,PCA)和正交偏最小二乘法判别分析(orthogonal partial least squares discriminant analysis,OPLS-DA),以变量投影重要性(variable projection importance,VIP)＞1.0,差异倍数(fold change,FC)＞2.0和P＜0.05为标准筛选差异代谢物,并对其进行KEGG注释和通路富集;利用生化方法测定意大利蜜蜂工蜂中肠中超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)和过氧化氢酶(catalase,CAT)的活性,并通过qRT-PCR测定抗氧化基因Sod1,Sod2和CAT及免疫基因Defensin,Hymenoptaecin,Apidaecin和Abaecin在中肠内的表达量.[结果]基于LC-MS代谢组检测,正离子和负离子模式下分别获得患枣花病和健康意大利蜜蜂工蜂间差异代谢物49和43种,其中分别有33和30种能够在HMDB和KEGG数据库中鉴定到.基于GC-MS代谢组检测,患枣花病和健康意大利蜜蜂工蜂间筛选到22种挥发性差异代谢物,其中11种能够在HMDB和KEGG数据库中鉴定到.与健康意大利蜜蜂工蜂相比,患枣花病意大利蜜蜂工蜂中肠内经鉴定的73种差异代谢物中,28种含量上升,45种含量下降;其中,京尼平苷酸、吲哚-3-乙酸、喹啉和棉子糖在患枣花病意大利蜜蜂工蜂中肠内大量积累,而乌索酸、L-苏糖酸、葡萄糖酸、D-半乳糖酸、苏糖酸和芦丁的含量下降最为明显.KEGG代谢通路富集分析结果表明,患枣花病和健康意大利蜜蜂工蜂间差异代谢物显著富集在抗坏血酸和醛酸代谢、半乳糖代谢及丁酸甲酯代谢这3条碳水化合物代谢通路.酶活性测定及qRT-PCR结果显示,与健康意大利蜜蜂工蜂相比,患枣花病意大利蜜蜂工蜂中肠中SOD和CAT酶活显著降低,Sod1,Sod2,CAT,Defensin,Hymenoptaecin和Apidaecin的表达量均呈下调趋势.[结论]利用LC-MS和GC-MS非靶向代谢组学均能够有效地分析枣花病影响下蜜蜂中肠内代谢物的变化差异.研究结果表明,意大利蜜蜂采集枣花后其中肠内碳水化合物代谢发生异常,引起肠道抗氧化和免疫能力显著下降,推测肠道功能障碍是导致蜜蜂死亡的主要原因.该研究为蜜蜂枣花病的发病机理提供了新见解.

目的 分析石生和树生铁皮石斛的多糖含量和次生代谢产物的差异,探究"石斛"和"木斛"是否存在品质差异.方法 参考《中国药典》测定石生和树生铁皮石斛的多糖含量,进一步采用UPLC-Q-TOF-MS系统分析其次生代谢产物,通过主成分分析(PCA)与正交偏最小二乘法-判别分析(OPLS-DA)等多元统计技术对代谢轮廓及化学成分差异性聚类,并挖掘其差异化学成分.结果 石生铁皮石斛的多糖含量显著高于树生铁皮石斛,PCA及OPLS-DA结果表明两者的化学成分含量存在明显差异,进一步对筛选得到的差异变量进行鉴定,并对其进行含量比较分析,发现其中棉子糖、蔗糖、葡萄糖、维采宁-1和1-acetate-α-D-mannopyranose 或其同分异构体在石生铁皮石斛中含量较高,而pinellic acid、α-羟基亚麻酸、L-亮氨酸或其同分异构体以及L-苯丙氨酸或其同分异构体等的含量在树生铁皮石斛中较高.结论 参考传统观点以及《中国药典》以多糖含量作为铁皮石斛的质量评价标准,石生铁皮石斛的质量在一定程度上优于树生铁皮石斛,对目前铁皮石斛药用质量控制及其规范化种植具有一定参考价值.

目的:应用高效液相色谱联用电喷雾检测器(HPLC-CAD)分析不同植物中棉子糖系列寡糖(RFOs).方法:采用微波辅助提取法制备RFOs提取物,再应用HPLC-CAD进行定性、定量分析.色谱条件:采用氨基色谱柱(4.6 mm×250 mm,3.5 μm),流动相为水(A)-乙腈(B),梯度洗脱(0～20 min,75％B→45％B,20-22 min,45％B→75％B),流速为1 mL· min-1,柱温为30℃.外标一点法定量.结果:供试品溶液在48 h内稳定性较好,RSD小于2.8％;低、中、高浓度供试品溶液的重复性RSD分别小于3.6％、3.8％和3.1％.RFOs在豆科植物种子中分布广泛,其在水苏(总量426.19 mg· g-1)和生地黄(总量373.40 mg·g-1)中含量较高,而在车前草(总量1.08 mg·g-1)中含量极低.结论:水苏和地黄有潜力成为开发RFOs新资源.

目的:建立基于薄层色谱(TLC)结合气相色谱-质谱(GC-MS)法评价市售功能糖质量.方法:首先应用TLC结合苯胺-二苯胺显色对功能糖样品进行初步鉴定,然后应用甲基化反应结合GC-MS分析,确定其糖苷键类型及其比例.TLC展开剂为正丁醇-异丙醇-水-醋酸(7∶5∶2∶1);用于糖苷键分析的毛细管色谱柱为HP-5MS(30 m×0.25 mm×0.25 μm),进样量1μL,程序升温条件为起始温度120℃,以5℃·min-1升温至200℃,以8℃·min-1升温至250℃,以20℃·min-1升至280℃.结果:乳果糖样品TLC呈单一条带且显红色,但其不合t-Galp,说明样品与标示不符.大豆低聚糖样品TLC条带颜色及糖苷键分析结果与蔗糖和棉子糖系列寡糖相近,说明产品中可能含有蔗糖、棉子糖、水苏糖等.海藻糖样品TLC显色较弱,仅含有t-Glcp,说明产品可能含有海藻糖但糖含量较低.低聚果糖样品部分条带显红色,与低聚果糖特征一致;但t-Glcp含量较高,说明还含有低聚葡萄糖成分.低聚木糖条带颜色明显不同于对照品,且样品中未检出与木糖相关糖苷键,提示特征与标示产品不符.结论:检测的市售乳果糖和低聚木糖样品与标示不符,存在明显质量问题,低聚果糖中可能混有低聚葡萄糖.

肌醇半乳糖苷合成酶是植物中棉子糖系列寡糖合成中的关键酶,在植物抗性生理中扮演重要作用.本研究利用RT-PCR 技术从泡核桃中成功克隆获得一个受冷害诱导的肌醇半乳糖苷合成酶基因(JsGS1),其含有1 026 bp 的开放阅读框,编码341个氨基酸,登录号为:KX657831.该基因推断的蛋白与核桃(Juglans regia) GS蛋白的相似性为89％;系统进化树分析显示其与核桃、麻疯树(Jatropha curcas)、蓖麻(Ricinus communis)形成一个分支.半定量PCR 显示:低温4℃处理3 h 后有微弱表达,6 h 后大量表达.这说明JsGS1 是典型的受冷害诱导的GS 基因.本研究为揭示泡核桃抗寒机理以及肌醇半乳糖苷合成酶在冷害胁迫下的作用提供帮助,并为利用基因工程手段培育抗寒新品种提供理论依据.

棉子糖系列寡糖是许多植物的运输和贮藏糖,地黄为玄参科地黄属植物,为常用中药材之一,药用部位为块根.地黄块根中含有水苏糖、棉子糖等寡糖,但对生长发育过程中其他器官中的非结构性糖含量的变化研究甚少.该研究以地黄叶、茎、根为材料,分析地黄不同器官中蔗糖、棉子糖及水苏糖等运输型糖含量的日变化及生长发育过程中变化.结果表明自苗期开始地黄叶片中蔗糖含量逐渐上升,而生长前期水苏糖含量变化不大,至生长后期水苏糖迅速升高,整个生长期棉子糖含量逐渐下降;地黄幼叶蔗糖合成能力强于成熟叶,而成熟叶棉子糖及水苏糖的合成能力高于幼叶;茎中蔗糖、水苏糖含量逐渐提高,而棉子糖含量变化不大;自快速生长期开始根中棉子糖、水苏糖含量大幅度提高,而蔗糖含量变化不大.地黄叶片中蔗糖含量昼夜变化不大,而棉子糖、水苏糖含量日变化非常明显,且白天棉子糖、水苏糖含量明显高于夜晚.地黄茎、根中棉子糖含量日变化不大,而根、茎、叶中水苏糖日变化非常明显,特别是在茎、叶中.综上所述叶片是棉子糖的主要合成器官,叶、茎和根都是水苏糖的合成器官.蔗糖、棉子糖及水苏糖是地黄体内碳水化合物的主要运输形式.