目的:探讨梓醇对非酒精性脂肪肝病(non-alcoholic fatty liver disease, NAFLD)治疗及降脂机制。方法:高脂饮食喂养ICR小鼠8周以建立NAFLD体内模型，给予低剂量(50 mg/kg)、中剂量(150 mg/kg)、高剂量(300 mg/kg)剂量梓醇干预，分析小鼠体重、肝湿重、肝指数及生化指标。游离脂肪酸诱导人肝细胞LO2建立NAFLD细胞模型。实时荧光定量PCR检测脂肪酸合成相关基因水平。Western印迹法检测内质网应激(ERS)介导的蛋白激酶R样内质网激酶(PERK)-真核翻译起始因子2α(eIF2α)信号通路蛋白水平。结果:与模型小鼠相比，低剂量、中剂量、高剂量梓醇组小鼠体重[(39.43±1.84)g，(34.01±1.83)g，(32.28±1.11)g对(42.17±1.37)g，均 P<0.001]、肝湿重[(1.03±0.06)g，(0.79±0.05)g，(0.64±0.04)g对(1.30±0.13)g, P<0.01或 P<0.001]、肝指数[(2.60±0.09)%，(2.32±0.09)%，(1.99±0.11)%对(3.07±0.30)%, P<0.05或 P<0.001]降低。中、高剂量梓醇组模型小鼠总胆固醇、三酰甘油、低密度脂蛋白胆固醇、天冬氨酸转氨酶和丙氨酸转氨酶降低( P<0.01或 P<0.001)，高密度脂蛋白胆固醇升高( P<0.01或 P<0.001)。细胞模型中，脂肪酸合成基因及PERK-eIF2α通路蛋白水平的升高均被梓醇显著削弱( P<0.05)，且这种削弱作用被信号通路激动剂逆转( P<0.05)。 结论:中药梓醇可能通过调控ERS介导的PERK-eIF2α信号通路发挥改善NAFLD的作用。

目的 基于木糖基转移酶Ⅰ(xylt-1)信号途径探讨熟地黄及其活性成分地黄苷D、梓醇对脑内γ-氨基丁酸(GABA)的调控机制.方法 (1)将SD大鼠随机分为正常组、模型组、治疗组(熟地黄组,30 g·kg-1),每组8 只,雌雄各半.采用辛温燥湿利湿中药复方(30 g·kg-1)灌胃诱导建立阴虚大鼠模型,早晚各 1 次,连续10 d.造模结束后,治疗组灌胃熟地黄水煎液,早晚各 1 次,连续 10 d.测定记录大鼠体质量并通过旷场行为学实验检测其活跃度、穿格次数及总路程;采用ELISA法检测大鼠血清促性腺激素释放激素(GnRH)、促甲状腺素释放激素(TRH)、促肾上腺皮质激素释放激素(CRH)、黄体生成素(LH)、卵泡刺激素(FSH)水平;qPCR法及全自动毛细管蛋白印迹法检测大鼠脑组织中xylt-1、多配体蛋白聚糖 1(SDC-1)、早期生长反应因子 1(EGR1)、谷氨酸脱羧酶 1(GAD67)mRNA及蛋白表达水平;HPLC法检测脑组织中GABA含量.(2)采用siRNA沉默大鼠高分化肾上腺嗜铬细胞瘤细胞(PC12)的xylt-1 基因,细胞分为正常组、阴性对照组、沉默组、沉默+地黄苷 D(10 μmol·L-1)组、沉默+梓醇(10 μmol·L-1)组.采用 qPCR 法检测细胞中 xylt-1、SDC-1、EGR1、GAD67 mRNA表达水平;HPLC法检测细胞内、外液GABA含量;免疫荧光法检测细胞中SDC-1 表达水平.(3)采用慢病毒转染PC12 细胞过表达xylt-1 基因,细胞分为正常组、阴性对照组(空载组)、过表达组.然后采用qPCR法检测细胞中xylt-1、SDC-1、EGR1、GAD67 mRNA表达水平;HPLC法检测细胞内、外液GABA含量.结果 (1)与正常组比较,模型组大鼠的体质量显著降低(P＜0.01),活跃度显著升高(P＜0.01),穿格次数及总路程显著增加(P＜0.01);血清LH、FSH、GnRH、CRH、TRH水平均显著升高(P＜0.01);海马及大脑皮层组织中的GABA含量明显降低(P＜0.05,P＜0.01);脑组织中的xylt-1、SDC-1、EGR1、GAD67 mRNA(海马、大脑皮层组织)及蛋白(下丘脑、大脑皮层组织)表达均显著下调(P＜0.05,P＜0.01).与模型组比较,治疗组大鼠经熟地黄干预后的体质量明显升高(P＜0.05),活跃度显著下降(P＜0.01),总路程明显缩短(P＜0.05);血清LH、FSH、GnRH、CRH、TRH水平均显著下降(P＜0.01);海马及大脑皮层组织中的GABA含量明显升高(P＜0.05,P＜0.01);脑组织中的xylt-1、SDC-1、EGR1、GAD67 mRNA(海马、大脑皮层组织)及蛋白(下丘脑、大脑皮层组织)表达均显著上调(P＜0.05,P＜0.01).(2)与阴性对照组比较,沉默组细胞的xylt-1、SDC-1、EGR1、GAD67 mRNA表达显著下调(P＜0.01);细胞内、外液中的GABA含量明显降低(P＜0.05,P＜0.01);细胞中SDC-1 表达显著下调(P＜0.01).与沉默组比较,沉默+地黄苷D组细胞的xylt-1mRNA表达上调,但差异无统计学意义(P＞0.05),沉默+梓醇组细胞的xylt-1 mRNA表达明显上调(P＜0.05);沉默+地黄苷D组、沉默+梓醇组细胞的SDC-1、EGR1、GAD67 mRNA表达显著上调(P＜0.05,P＜0.01),细胞内、外液中的GABA含量显著升高(P＜0.01),细胞中SDC-1 表达显著上调(P＜0.05,P＜0.01).(3)与正常组及阴性对照组比较,过表达组细胞的xylt-1 mRNA表达显著上调(P＜0.01).与阴性对照组比较,过表达组细胞的SDC-1、EGR1、GAD67 mRNA表达显著上调(P＜0.01),细胞内、外液中的GABA含量显著升高(P＜0.01).结论 脑内可能存在调节GABA合成的xylt-1/SDC-1/EGR1/GAD67 通路,熟地黄可能通过上调该通路提高脑内GABA水平.

目的 探究梓醇(CAT)对急性心肌梗死(AMI)大鼠坏死性凋亡的影响.方法 用结扎左冠状动脉前降支的方法构建大鼠AMI模型.将60只SPF级SD雄性大鼠随机分为假手术组(Sham组)、AMI模型组(Model组)、低剂量CAT组(CAT-L 组,30 mg·kg-1 CAT)、高剂量 CAT 组(CAT-H 组,60 mg·kg-1 CAT)和高剂量CAT+RIP1激活剂重组RIP1组[CAT-H+rRIP1组,60 mg·kg-1 CAT+8μg·kg-1重组大鼠受体相互作用蛋白激酶-1(rRIP1)],每组12只.CAT采取灌胃给药,每日1次,共给药4周.rRIP1采取尾静脉注射,隔天给药,共4周.Sham组、Model组分别灌胃和尾静脉注射等量的0.9％NaCl.CAT-L组、CAT-H组灌胃的同时需隔天尾静脉注射0.9％NaCl.TUNEL染色法观察大鼠心肌细胞凋亡情况.蛋白质印迹法检测大鼠心肌组织RIP1/RIP3/MLKL信号通路相关蛋白的表达.结果 Sham组、Model组、CAT-H组和CAT-H+rRIP1组大鼠的心肌细胞凋亡率分别为(4.23±0.63)％、(33.48±3.94)％、(13.50±1.86)％和(29.62±3.08)％,心肌组织 RIP1 蛋白相对表达水平分别为 0.21±0.02、0.86±0.09、0.43±0.04 和 0.72±0.07,RIP3蛋白相对表达水平分别为0.30±0.03、0.94±0.09、0.49±0.05 和0.83±0.08,MLKL蛋 白磷酸化水平分别为0.35±0.04、1.13±0.11、0.64±0.06和0.97±0.10.Model组上述指标与Sham组比较,CAT-H组的上述指标与Model组和CAT-H+rRIP1组比较,在统计学上差异均有统计学意义(均P＜0.05).结论 CAT可能通过下调RIP1/RIP3/MLKL信号通路抑制AMI大鼠心肌细胞的坏死性凋亡.

三物黄芩汤(Sanwu Huangqin Decoction,SHD)始载于《金匮要略》,由黄芩、苦参、地黄3味药组成,为滋阴清热之经典方剂.主要含有黄酮类、生物碱类、环烯醚萜苷类及苯乙醇苷类等化合物,具有抗肿瘤、抑菌、抗病毒、抗过敏、抗白塞病等药理作用,临床多用于发热性疾病、红斑性肢痛症、自身免疫性肝病、皮肤性疾病等.通过对SHD的处方考证与历史沿革、化学成分、药理作用及现代临床应用等进行系统分析,并在此基础之上,依据中药质量标志物(quality marker,Q-Marker)的五原则对SHD的Q-Marker进行预测,黄芩中黄芩苷、黄芩素、汉黄芩苷、汉黄芩素、千层纸素A,苦参中苦参碱、氧化苦参碱、氧化槐果碱、槐果碱、槐定碱、三叶豆紫檀苷、苦参酮,地黄中梓醇、地黄苷D可初步确定为SHD的Q-Marker,为完善SHD的制剂过程中质量溯源体系及其质量评价与控制体系奠定一定的基础.

目的 基于指纹图谱和多指标定量测定对鲜地黄中地黄汁、地黄片、地黄渣的化学成分进行分析与比较,阐明鲜地黄药材不同加工方法指标性成分的分布规律.方法 采用HPLC法建立10批地黄汁、地黄片和地黄渣指纹图谱,相似度分析结合化学模式识别法进行分析.采用HPLC法,HPLC-蒸发光散射检测(ELSD)法分别测定地黄样品中苷类、糖类成分含量.结果 建立的HPLC指纹图谱共标定14个共有峰,聚类分析将样品分为3类;经主成分分析,主成分1～3是影响鲜地黄样品质量的主要因子;采用正交偏最小二乘-判别法标记了鲜地黄样品中8个差异性成分.苷类、糖类成分总含量测定均表明地黄汁＞地黄片＞地黄渣,苷类成分中除地黄苷A外,地黄汁中梓醇、桃叶珊瑚苷、地黄苷D、益母草苷含量都高于地黄片和地黄渣,质量分数为7.43％～7.78％、0.10％～0.11％、0.59％～0.66％、0.69％～0.72％;糖类成分除棉子糖外,地黄汁中果糖、葡萄糖、蔗糖、水苏糖的含量都高于地黄片和地黄渣,质量分数为2.40％～2.55％、1.84％～2.02％、12.33％～12.77％、33.03％～33.45％.结论 通过指纹图谱和含量测定方法,明确了鲜地黄不同加工方式化学成分变化,为临床上地黄汁、地黄片的使用提供参考,并为地黄渣的回收利用提供科学依据.

四物汤出自唐代蔺道人《仙授理伤续断秘方》,是养血补血的经典名方,具有促进骨髓造血、促进红细胞生成、修复肝损伤、抗氧化、提高学习记忆能力、改善代谢和雌激素样作用,临床常用于治疗贫血,在妇科、骨伤科疾病和肿瘤辅助治疗方面疗效显著.在总结四物汤的化学成分、药理作用及临床应用研究进展的基础上,依照中药质量标志物(Qual-ity Marker,Q-Marker)"五原则"进行预测分析,结果提示芍药苷、芍药内酯苷、苯甲酰芍药苷、川芎嗪、阿魏酸、藁本内酯、洋川芎内酯Ⅰ、梓醇、5-羟甲基糠醛、毛蕊花糖苷可作为四物汤的Q-Marker,可选择这些Q-Marker成分作为指标对四物汤相关制剂的质量进行控制.

地黄为我国传统的常用大宗中药材,具有清热凉血、养阴生津之功效.环烯醚萜苷是地黄药材的主要活性成分,环烯醚萜氧化酶是环烯醚萜苷生物合成途径的关键限速酶.该研究基于转录组数据,筛选到 1 条环烯醚萜氧化酶基因RgIO,对其进行了系统的生物信息学、表达特性和亚细胞定位分析.结果表明,RgIO的编码区为 1 536 bp,编码 511 个氨基酸,相对分子质量 58 258.01.RgIO的蛋白序列包含细胞色素P450 氧化酶的保守结构域和基序,与列当科 3 个植物独脚金、黄独脚金和大花胡麻草的同源蛋白序列一致性最高,与长春花CrIO的序列一致性也高达 77.28%.RgIO在地黄的叶中特异性高表达,而且响应茉莉酸甲酯(MeJA)的诱导,MeJA处理3、6 h,在叶和块根中其表达量分别增加了 3.15、1.3 倍.亚细胞定位结果显示RgIO分布在内质网上.利用根癌农杆菌介导法在地黄叶片中瞬时表达RgIO,梓醇的含量较瞬时表达空载体的对照增加了 0.82倍.该研究为地黄梓醇的分子调控和生物合成提供了关键的靶基因,也为完整解析地黄梓醇的生物合成途径奠定了基础.

目的 探究梓醇调节Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白-1/核因子E2 相关因子 2/血红素氧合酶-1(Keap1/Nrf2/HO-1)信号通路对口腔鳞癌细胞恶性生物学行为的影响.方法 体外培养口腔鳞癌细胞Tac8113;CCK-8 法筛选梓醇最佳作用水平;将Tac8113 细胞分为对照组、梓醇组(24 μg/mL)、sh-NC组(转染sh-NC慢病毒质粒)、sh-Keap1组(转染sh-Keap1 慢病毒质粒)、梓醇+sh-NC组(转染sh-NC+24 μg/mL梓醇)、梓醇+sh-Keap1 组(转染sh-Keap1+24 μg/mL梓醇);CCK-8法检测细胞增殖;划痕试验检测细胞迁移;流式细胞术检测细胞凋亡;2',7'-二氯荧光素二乙酸酯(DCFH-DA)检测细胞活性氧(ROS)水平;采用试剂盒分别检测超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)水平;Western Blot分别检测Keap1/Nrf2/HO-1信号通路及凋亡相关蛋白表达水平.结果 与 0 μg/mL组比较,随着梓醇剂量增加Tac8113 细胞存活率显著降低(P<0.05),因此,选择 24 μg/mL梓醇作为后续实验的干预条件;与对照组比较,梓醇组Tac8113 细胞OD450 值、划痕愈合率、ROS水平、MDA水平及B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、Nrf2、HO-1 表达显著降低,细胞凋亡率、SOD水平及Keap1、胱天蛋白酶 3(caspase3)表达显著升高(P<0.05);Keap1 低表达后Tac8113 细胞恶性生物学行为程度加重,且逆转了梓醇对Tac8113 细胞恶性生物学行为的影响.结论 梓醇抑制口腔鳞癌细胞增殖、迁移,诱导细胞凋亡发挥抑癌作用,可能与上调Keap1 表达,下调Nrf2 和HO-1表达有关.

目的 探究梓醇对H2O2诱导成骨细胞损伤的影响及机制.方法 将小鼠成骨细胞MC3T3-E1分为对照组、模型组、空载组(转染空载质粒)、梓醇组(100 μmol/L)、梓醇+叉头框蛋白O3(FoxO3)过表达组(100 μmol/L梓醇+转染FoxO3过表达质粒),经梓醇和转染处理后,除对照组细胞不作处理外,其余各组细胞以H2O2诱导建立成骨细胞氧化应激模型.检测各组细胞活力、凋亡率、碱性磷酸酶(ALP)活性、钙结节光密度(OD)值、活性氧(ROS)的平均荧光强度(MFI)、抗氧化酶[超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)]活性、炎症因子[白细胞介素6(IL-6)、IL-1β]水平、FoxO3/Wnt/β-连环蛋白(β-catenin)信号通路相关蛋白表达水平.结果 与对照组比较,模型组细胞活力、ALP活性、钙结节OD值、抗氧化酶活性和Wnt、β-catenin蛋白表达水平均显著降低,凋亡率、ROS的MFI、炎症因子水平和FoxO3蛋白表达水平均显著升高(P＜0.05);与模型组比较,空载组细胞上述指标均无明显变化(P＞0.05),梓醇组细胞上述指标均显著逆转(P＜0.05);与梓醇组比较,梓醇+FoxO3过表达组细胞上述指标的逆转效果均被显著削弱(P＜0.05).结论 梓醇可通过下调FoxO3激活Wnt/β-catenin信号通路,抑制H2O2诱导的MC3T3-E1细胞氧化应激和炎症反应,提高细胞活力与成骨分化能力,抑制细胞凋亡.

目的 综合评价地黄不同入药形式制千金黄连丸(Qianjin Huanglian Pills,QHP)的质量.方法 建立地黄不同入药形式制QHP的HPLC指纹图谱,通过多元统计分析及2种环烯醚萜苷类成分(梓醇、益母草苷)、5种生物碱类成分(黄连碱、表小檗碱、药根碱、小檗碱、巴马丁)、5种糖类成分(果糖、葡萄糖、蔗糖、棉子糖、水苏糖)定量分析对30批地黄不同入药形式制QHP的质量进行评价.结果 30批QHP样品指纹图谱相似度较高,采用SPSS 19.0和SIMCA-P14.1软件对黄连丸19个共有峰峰面积进行系统聚类分析和主成分分析,30批样品可按鲜地黄连丸、鲜干黄连丸、生地黄连丸明显分为3类;采用正交偏最小二乘法-判别分析标记了黄连丸中8个差异性成分,分别为峰1、6、15(表小檗碱)、3、4、2(梓醇)、16、9.含量测定结果表明,2种环烯醚萜苷类成分梓醇、益母草苷总含量顺序为鲜干黄连丸＞鲜地黄连丸＞生地黄连丸,5种生物碱类成分总含量顺序为生地黄连丸＞鲜地黄连丸＞鲜干黄连丸,5种糖类成分总含量顺序为鲜地黄连丸＞鲜干黄连丸＞生地黄连丸,棉子糖和水苏糖的含量均值顺序为鲜地黄连丸＞鲜干黄连丸＞生地黄连丸,提示鲜地黄连丸、鲜干黄连丸中梓醇、益母草苷、棉子糖、水苏糖含量较高,鲜地黄连丸、鲜干黄连丸中生物碱类成分含量略低于生地黄连丸.结论 建立的方法操作简便、重复性好,可用于QHP的定性定量分析;研究结果可为完善QHP质量标准提供依据.