枳实不仅有多基原且有多种合法栽培变种,随着农业技术的进步,栽培品种层出不穷,枳实混淆品繁多导致药材市场混乱.该研究通过外观性状、浸出物、多成分同步测定,以瓤囊-直径比(瓤囊占比,Pc/Cs)、浸出物及 11 种成分含量轮廓等指标,构建枳实与其近缘混淆品的特异性辨识方法.研究发现:①Pc/Cs可方便地将枳、橘及耙耙柑等混淆品检识出来;②浸出物含量可区分香圆来源的混淆品与酸橙;③除枳、香圆、常山胡柚和沃柑混淆品的辛弗林含量不合格外,其余样品均符合《中国药典》要求,个别甜橙可达 1.40%以上;橙皮苷在甜橙的质量分数高于 10.00%,而酸橙均低于 2.50%;酸橙中柚皮苷(3.96%～15.21%)和新橙皮苷(9.38%～21.93%)质量分数较高;④枳及香圆混淆品的成分与代代花较接近,但新橙皮苷(0.03%～0.14%)远低于酸橙,且不含橙皮素和桔红素;混淆品衢枳实(胡柚基原)与臭橙、酸橙-枳杂交品的成分较接近,但其橙皮苷较酸橙高(3.13%);橘与甜橙较为接近且均不含柚皮苷和新橙皮苷;耙耙柑、沃柑的橙皮苷与甜橙相近,且不含野漆树苷.各指标相互配合可准确区分甜橙、酸橙及其近缘混淆品(绿衣枳实、香圆、衢枳实、沃柑、青皮),为枳实药材质量控制提供一套甄别方法.

目的 研究橙皮素(HSP)对大鼠肾缺血再灌注损伤(RIRI)的作用,并探讨其作用机制.方法 将50只雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型组、HSP预处理组、全反式维甲酸(ATRA)预处理组(ATRA+I/R)、HSP+ATRA预处理组(HSP+ATRA+I/R),每组10只.假手术组仅打开腹腔暴露双肾.其余各组采用夹闭双侧肾蒂45 min,再用灌注24 h的方法建立RIRI模型.用苏木精-伊红(HE)染色法确定肾组织损伤水平;用微板法检测血清肌酸酐(Scr)水平;用脲酶法检测血清尿素氮(BUN)水平;用酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测血清中白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的含量;用试剂盒法检测肾组织超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽(GSH)、丙二醛(MDA)和过氧化氢酶(CAT)水平;用蛋白质印迹法检测肾组织中核因子E2相关因子2(Nrf2)及其下游抗氧化蛋白血红素氧合酶-1(HO-1)和醌氧化物还原酶1(NQO1)的表达.结果 假手术组、模型组、HSP预处理组肾小管损伤评分分别为(0.20±0.45)、(4.20±0.84)和(2.40±0.55)分;Scr含量分别为(55.52±11.23)、(207.10±19.22)和(105.60±18.11)μmol·L-1;IL-6含量分别为(33.66±6.83)、(172.50±8.09)和(105.40±10.03)pg·mL-1.假手术组、模型组、HSP预处理组、ATRA预处理组和HSP+ATRA预处理组SOD水平分别为(57.04±3.44)、(37.29±3.60)、(51.61±9.41)、(32.55±5.58)和(37.40±3.66)U·mg·prot-1;Nrf2 蛋白相对表达水平分别为 0.37±0.24、0.57±0.28、1.31±0.34、0.44±0.17 和0.77±0.25;HO-1 蛋白相对表达水平分别为 0.26±0.14、0.57±0.30、1.32±0.61、0.53±0.28 和 0.67±0.50.模型组与假手术组相比,肾小管损伤评分、Scr、IL-6、SOD指标比较,在统计学上差异均有统计学意义(P＜0.05,P＜0.01);HSP预处理组与模型组相比,上述指标在统计学上差异均有统计学意义(P＜0.05,P＜0.01).结论 HSP可能通过激活Nrf2-抗氧化反应元件(ARE)通路上调其下游抗氧化蛋白的表达,减轻氧化应激对肾的损伤,进而改善RIRI.

目的 探讨橘红素对胃癌细胞 BGC-823 和 SGC-7901 的自噬作用及其机制.方法 不同浓度橘红素(7.5、15、30、60、120 μmol/L)处理两株细胞后,CCK-8 法检测其吸光度值,计算细胞增殖抑制率;流式细胞仪检测细胞凋亡水平;用 60 μmol/L 浓度的橘红素处理后通过细胞划痕法检测两种细胞迁移能力;Western blotting 法检测自噬相关蛋白 p62、凋亡蛋白 Bax、Bcl-2 及 PI3K/Akt/mTOR信号通路相关蛋白表达的影响.结果 与对照组相比,橘红素处理组增殖、迁移能力显著下降(P<0.01),细胞凋亡数增加,自噬蛋白 p62 的表达浓度依赖性升高(P<0.05),凋亡蛋白 Bax表达增加(P<0.05),Bcl-2 表达下降(P<0.05),磷酸化的 p-Akt和 p-mTOR的表达水平显著降低(P<0.05).结论 橘红素可通过抑制 PI3K/Akt/mTOR 信号通路调控 SGC-7901 和 BGC-823 细胞的增殖和凋亡,并可抑制其自噬.

电活性微生物奥奈达希瓦氏菌的胞外电子传递(extracellular electron transfer,EET)在污染物降解、环境修复、生物电化学传感、能源利用等方面具有广泛的应用潜力;四血红素细胞色素CctA(small tetraheme cytochrome)是希瓦氏菌周质空间中最丰富的蛋白质之一,能够参与多种氧化还原过程,但目前对CctA在EET中的行为和机理认识仍然有限.[目的]研究阐明CctA蛋白在希瓦氏菌模式菌株MR-1周质空间以偶氮染料作为电子受体的EET中的作用,补充和拓展希瓦氏菌的厌氧呼吸产能机制.[方法]以周质还原型偶氮染料甲基橙(methyl orange,MO)作为电子受体,在mteal reduction(Mtr)蛋白缺失菌株△mtr中研究MO的周质还原特点,并通过基因敲除和回补表达研究CctA蛋白在周质电子传递中的作用.[结果]在缺失Mtr通道的情况下,细胞色素CctA可以介导周质空间的电子传递而还原MO.重组表达CctA在低水平时,MO在周质空间中的还原速率与其表达水平呈正相关,更高水平的CctA表达无助于进一步提高MO的还原速率.蛋白膜伏安结果展示了 CctA与周质空间内其他高电位氧化还原蛋白的显著区别,可能参与构成一条低电位的MO还原通道.[结论]从分子动力学层面揭示了 CctA在周质MO还原中的独特电子传递行为,为进一步推进对细菌周质电子传递机制的理解,以及通过合成生物学设计或改造胞外氧化还原系统、强化生物电化学在污染物降解中的应用提供了重要信息.

目的 制备橘红素纳米结构脂质载体(tangeretin nanostructured lipid carriers,Tan-NLCs)和橘红素固体脂质纳米粒(tangeretin solid lipid nanoparticles,Tan-SLNs),考察相对口服吸收生物利用度.方法 采用包封率、载药量和粒径为指标,单因素结合 Box-Behnken 设计-效应面法(Box-Behnken design-response surface methodology,BBD-RSM)优化 Tan-NLCs 处方,并制备Tan-SLNs.透射电子显微镜观察Tan-NLCs和Tan-SLNs外貌形态,考察在pH 2.0和pH6.8磷酸盐缓冲液(PBS)中的释药情况.X 射线粉末衍射(X-ray powder diffraction,XRPD)法和示差量热扫描(differential scanning calorimetry,DSC)法对晶型进行分析,并考察Tan-NLCs和Tan-SLNs冻干粉的稳定性.以橘红素原料药为参考,比较Tan-NLCs和Tan-SLNs口服药动学行为.结果 Tan-NLCs和Tan-SLNs平均包封率分别为(85.13±1.01)％和(73.07±1.38)％,载药量分别为(5.43±0.19)％和(4.11±0.22)％,粒径分别为(184.77±8.63)nm 和(226.09±10.25)nm.Tan-NLCs 和 Tan-SLNs 呈椭圆形或球形,橘红素在Tan-NLCs和Tan-SLNs冻干粉中可能以无定型形式存在,其释药速率和累积释放率明显提高.Tan-NLCs 冻干粉稳定性高于Tan-SLNs冻干粉.口服药动学结果显示,Tan-SLNs冻干粉Cmax和相对口服吸收生物利用度分别提高至2.01倍和3.10倍;Tan-NLCs.冻干粉Cmax和相对口服吸收生物利用度分别提高至2.83倍和4.59倍.结论 Tan-NLCs和Tan-SLNs均可促进橘红素口服吸收,但Tan-NLCs冻干粉稳定性更高,促吸收作用更大.

目的 本研究旨在探讨橙皮素(hesperetin,Hes)能否通过调控沉默信息调节因子1(silent information regulator 1,SIRT1)/核转录因子E2相关因子2(nuclear transcription factor E2-related factor 2,NRF2)信号减轻氧化应激改善阿霉素(doxorubicin,DOX)诱导的H9c2心肌细胞毒性.方法 采用DOX诱导的H9c2心肌细胞毒性模型,随机分为4组:对照组(Control)、DOX处理组(DOX)、Hes加DOX处理组(DOX+Hes)以及Hes加SIRT1抑制剂EX527联合DOX处理组(DOX+Hes+EX527).光镜下观察细胞形态,CCK-8检测各组细胞活力,流式细胞术检测各组细胞凋亡率,DCFH-DA染色观察各组ROS水平,ELISA试剂盒检测乳酸脱氢酶(lactic dehydrogenase,LDH)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、过氧化氢酶(catalase,CAT)和SIRT1活性以及丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量,Western blot检测裂解的caspase-3(cleaved caspase-3)、细胞色素c(cytochrome c)、SIRT1、Ac-FOXO1、NRF2和血红素加氧酶1(heme oxygenase 1,HO-1)的表达.结果 和Control组相比,DOX组细胞形态肿胀,密度减小,细胞活力降低,培养基中LDH活性增加(P<0.01);细胞凋亡增多,cleaved caspase-3和cytochrome c表达增加(P<0.01);CAT和SOD活性降低,MDA含量和ROS水平增加(P<0.01);SIRT1、NRF2和HO-1表达以及SIRT1活性降低,Ac-FOXO1表达增加(P<0.01);与DOX组相比,DOX+Hes组细胞形态改善,密度和细胞活力增加,培养基中LDH活性降低(P<0.01);细胞凋亡减少,cleaved caspase-3和cytochrome c表达降低(P<0.01);CAT和SOD活性升高,MDA含量和ROS水平降低(P<0.01);SIRT1、NRF2和HO-1表达以及SIRT1活性增加,Ac-FOXO1表达降低(P<0.01);而与DOX+Hes组相比,EX527阻断Hes对DOX诱导的H9c2细胞损伤、氧化应激和SIRT1/NRF2信号的作用.结论 Hes可以通过调控SIRT1/NRF2信号抑制氧化应激和细胞凋亡减轻DOX诱导的H9c2心肌细胞毒性.

目的 探讨番茄红素(Lyc)对高糖诱导的足细胞自噬及凋亡的影响,旨在为临床治疗糖尿病肾病提供可靠的理论依据.方法 采用条件永生化小鼠足细胞系为研究对象,通过添加不同剂量的Lyc对高糖诱导的足细胞进行干预.实验细胞分6组,分别为正常对照组(5.5mmol/L葡萄糖)、高渗对照组(5.5 mmol/L葡萄糖+19.5 mmol/L甘露醇)、高糖组(25 mmol/L葡萄糖)、低剂量Lyc组(25 mmol/L葡萄糖+3.125 μmol/L Lyc)、中剂量Lyc组(25 mmol/L葡萄糖+ 6.25 μmol/L Lyc)和高剂量Lyc组(25 mmol/L葡萄糖+12.5 μmol/L Lyc).在细胞培养48 h后,用吖啶橙染色法观察各组细胞的自噬体变化情况;流式细胞技术检测各组细胞的凋亡率变化;采用实时定量荧光PCR和蛋白质印迹法分别检测自噬相关基因LC3、beclin-1、p62/SQSTMI mRNA和蛋白的表达变化情况.结果 与正常对照组、高渗对照组相比,高糖组细胞中的自噬体数目明显增多,细胞的凋亡率极显著增加(P＜0.01),自噬相关基因LC3-Ⅱ、beclin-1的表达量显著增加(P＜0.05),而p62/SQSTMI基因的表达量则显著降低(P＜0.05).与高糖组比较,不同剂量Lyc组中的足细胞自噬体数目更多;细胞的凋亡率显著降低(P＜0.05),且高剂量Lyc组细胞的凋亡率降低极显著(P＜0.01);自噬相关基因LC3-Ⅱ、beclin-1表达量显著增加(P＜0.05);而p62/SQSTMI基因表达量则显著降低(P＜0.05);且高剂量Lyc组基因表达量变化极显著(P＜0.01);蛋白水平上的检测结果与mRNA水平基本一致.结论 Lyc能进一步增强高糖诱导引起的足细胞的自噬,但对足细胞的凋亡却起到了一定的抑制作用,且高剂量的Lyc作用效果更加明显.

目的 探讨雷公藤红素对小鼠巨噬细胞RAW264.7焦亡的影响及相关机制.方法 采用MTT法测定细胞增殖;吖啶橙(AO)/溴化乙啶(EB)、Hoechst/PI荧光染色观察细胞焦亡形态变化;ELISA法检测细胞上清液中白细胞介素-1β(IL-1β)分泌量;Westem blotting法检测Caspase-1蛋白表达水平;Caspase-1活性检测试剂盒检测细胞内Caspase-1酶活性.结果 经MTT法检测发现,雷公藤红素在50 nmol/L以下对巨噬细胞RAW264.7增殖活性无显著影响;AO/EB、Hoechst/PI染色显示雷公藤红素能够改善脂多糖(LPS)与三磷酸腺苷(ATP)诱导的细胞焦亡;ELISA结果显示,雷公藤红素能够抑制IL-1β的分泌(P＜0.05),且具有一定的浓度依赖性;Western blotting检测发现cleaved-Caspase-1蛋白表达量降低,同时雷公藤红素能抑制Caspase-1的酶活性.结论 雷公藤红素抑制LPS与ATP诱导的细胞焦亡,可能与抑制IL-1β的分泌,抑制Caspase-1的活化有密切关系.

中药在储藏期间,受自身和外在因素的影响,易霉变而产生质量变化.该研究以陈皮为研究对象,以药材的性状特征、含水量、有效成分(柚皮苷、橘红素、橙皮苷、川陈皮素和甜橙黄酮)含量及真菌毒素的积累为评价指标,考察陈皮在不同储藏环境、包装形式中存放12个月前后的质量变化和霉变情况.结果发现,经过12个月储藏后,陈皮外观颜色加深,无霉变现象,牛皮纸和编织袋中的陈皮都有不同程度的虫蛀现象,水分含量均增加,且超过药典标准,有效成分含量降低,尤其是橙皮苷含量在储藏后均不符合药典标准.所有样品中均未检出黄曲霉毒素.根据本文储藏条件考察结果,低温低湿条件较适合于陈皮的储藏,包装材料尚需要进一步考察优化.该研究对防止中药发霉、质变,保障中药品质、有效性和安全性具有指导意义.

目的 建立同时测定枳壳中伞形花内酯、芸香柚皮苷、柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷、川陈皮素、3,5,6,7,8,(3,4)-七甲氧基黄酮、橘红素、橙皮油素的HPLC方法,测定和比较不同周长大小枳壳中的9种化学成分的量.方法 采用Diamonsil C18 (250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为甲醇(A)-水(用磷酸调pH至3.0);梯度洗脱为0～25 min,30％～50％A;25～35 min,50％～70％A;35～40 min,70％～75％ A;40～55 min,75％～100％A.体积流量为1.0 mL/min;柱温30℃;检测波长320 nm;进样量20 μL.结果 伞形花内酯、芸香柚皮苷、柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷、川陈皮素、3,5,6,7,8,(3,4)-七甲氧基黄酮、橘红素和橙皮油素分别在0.002 18～0.07 μg(r=0.999 8)、0.021 8～0.70 μg (r=0.999 9)、0.242 5～7.76 μg (r=0.999 8)、0.024 38～0.78 μg (r=0.999 4)、0.523 76～16.76 μg(r=0.999 3)、0.004 13～0.132 μg (r=0.9996)、0.003 13～0.10 μg (r=0.9993)、0.002 75～0.088 μg (r=0.9996)和0.000 93～0.03 μg(r=0.999 3)呈良好的线性关系;其平均回收率(n=6)分别为98.50％、98.80％、99.51％、98.43％、99.64％、99.21％、100.03％、98.75％和101.11％.结论 该法简便,重复性好,可用于枳壳中伞形花内酯、3,5,6,7,8,(3,4)-七甲氧基黄酮等成分的含量测定.