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多重PCR-毛细管电泳法的应用及HPV感染亚型分布特征分析
编辑人员丨2天前
目的:分析河北省石家庄地区人乳头状瘤病毒(human papillomavirus,HPV)感染特征以及HPV亚型分布情况,探讨多重PCR-毛细管电泳片段分析法的应用评估。方法:采用横断面调查研究,2022年5至8月期间纳入河北省人民医院434例女性(年龄范围17~74岁,就诊者260例、查体者174例)进行横断面调查,应用多重PCR-毛细管电泳片段分析法进行HPV分型检测。以多重荧光定量PCR试剂盒作为参考,采用卡方检验分析多重PCR-毛细管电泳片段分析法的诊断效果, Kappa值分析其一致性。 结果:总HPV感染率为45.85%(199/434),其中高危型HPV(HR-HPV)阳性率为35.48%(154/434)、低危型HPV(LR-HPV)3.92%(17/434)、HR-HPV和LR-HPV混合感染6.45%(28/434)、单一型别感染率27.88%(121/434)和多型别17.97%(78/434)。HPV52(9.68%,42/434)、HPV16(6.91%,30/434)、HPV58(6.91%,30/434)为常见HPV亚型。查体者阳性率为45.40%(79/174),接近于就诊者阳性率为54.76%(120/260),差异无统计学意义( χ2=0.024, P>0.05)。17~30岁年龄组感染率最高为56.32%(46/84),各年龄组之间阳性率差异无统计学意义( χ2=4.123, P>0.05)。以多重荧光定量PCR为参考,多重PCR-毛细管电泳片段分析法的敏感度和特异度分别是92.96%和94.04%, Kappa值为0.870。 结论:HPV感染可能呈现年轻化,HR-HPV感染阳性率最高,以HPV52、16、58为主要感染亚型。多重PCR-毛细管电泳片段分析法与多重荧光定量PCR相比的检测结果具有高度一致性,适合HPV DNA分型检测。
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编辑人员丨2天前
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基于中部同序引物的多重PCR联合核酸质谱分析技术检测常见血流感染病原菌
编辑人员丨2天前
目的:基于多重聚合酶链式反应(PCR)与基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)联用的高通量检测技术,构建不同菌种的特征性单核苷酸多态性图谱以建立血流感染病原菌快速、准确、高灵敏的诊断方法。方法:选取血流感染常见的大肠埃希菌等7种病原菌作为检测对象,优化多重PCR条件,采用MALDI-TOF MS检测各目标菌特征峰,建立多重PCR联合质谱检测体系;分别设计普通引物对及中部同序引物对,分析引物二聚体的形成情况;采用模拟的细菌感染血液样本,测定上述建立体系的特异度及灵敏度;收集2020年6—9月解放军总医院检验科疑似菌血症患者血液样本150份,并将上述体系的鉴定结果与临床应用的传统鉴定方法结果使用χ2检验进行比较。结果:本研究设计的中部同序引物对的引物二聚体循环阈值(Ct)值在38以上,比普通引物对延迟出现6~10个循环;建立的联合质谱检测体系可同时检测分为两组的7种细菌,目标菌均可检测到特异的产物峰,除目标菌外的临床菌株只有引物峰,所有图谱无非特异的杂峰;大肠埃希菌的灵敏度可以达到50 CFU/ml,其余各菌的检测限为100 CFU/ml;对150例患者的血液样本进行检测,传统方法鉴定出阳性46例,阳性检出率为30.67%(46/150),包括2例混合感染,联合质谱方法鉴定出阳性48例,阳性检出率为32.0%(48/150),包括3例混合感染;阴性符合率为100%(101/101),核酸质谱敏感度为97.82%(45/46),特异度为97.11%(101/104),一致性检验Kappa=0.938( P=0.625),2种方法检测一致性良好。 结论:所建立的检测体系不仅能快速、准确地鉴定引起血流感染的7种常见病原菌,有效缩短传统培养鉴定所需时间,还可检测多重细菌混合感染,弥补混合感染漏检可能。该方法也可用于其他病原菌的鉴定。
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编辑人员丨2天前
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安阳市宫颈病变患者人乳头瘤病毒感染现状及基因分型分析
编辑人员丨2天前
目的:分析安阳市宫颈病变患者人乳头瘤病毒(human papillomavirus,HPV)感染现状,并分析其基因型。方法:选取2018年6月至2020年12月在本院门诊就诊或住院治疗的宫颈病变患者372例,参照宫颈组织病理活检结果分为宫颈炎、宫颈上皮内瘤变(cervical intraepithelial neoplasia,CIN)Ⅰ级、CIN Ⅱ级、CIN Ⅲ级、宫颈原位癌;采用聚合酶链式反应-反向点杂交法检测HPV感染情况及HPV基因分型。结果:HPV阳性率77.15%(287/372);未检出HPV 81型、HPV 82型,高危型HPV以HPV 16型、HPV 58型、HPV 52型最常见(30.31%、16.38%、12.20%),低危型HPV以HPV 11型、HPV 6型、HPV 43型最常见(13.59%、12.54%、11.15%);CIN Ⅰ级、CIN Ⅱ级、CIN Ⅲ级、宫颈原位癌中HPV阳性率显著高于宫颈炎( P<0.05),但CIN Ⅰ级、CIN Ⅱ级、CIN Ⅲ级、宫颈原位癌中HPV阳性率组间比较差异无统计学意义( P>0.05);Spearman相关性分析显示宫颈病变程度与HPV感染显著正相关( r=0.280, P<0.01);单一感染占80.84%(232/287),多重感染占19.16%(55/287),不同宫颈病变患者HPV多重感染率差异无统计学意义( P>0.05);不同宫颈病变患者HPV 16型、HPV 31型、HPV 52型、HPV 53型、HPV 66型及HPV 6型、HPV 11型、HPV 42型、HPV 43型检出率差异有统计学意义( P<0.05)。 结论:安阳市宫颈病变患者HPV感染率较高,且宫颈病变程度与HPV感染显著正相关。高危型HPV以HPV 16型、HPV 58型、HPV 52型常见,多数为单一感染,但CIN Ⅰ级、CIN Ⅱ级、CIN Ⅲ级、宫颈原位癌与HPV阳性率、多重感染率的关系仍有待探究。
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编辑人员丨2天前
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Filmarray在儿童社区获得性肺炎中的应用价值
编辑人员丨2天前
Filmarray作为一种多重聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)病原检测体系,具有通量高、阳性率高等特点,该文评价了Filmarray在儿童社区获得性肺炎(community acquired pneumonia,CAP)中的病原检测性能、临床价值和经济学价值。支气管肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid,BALF)是用于Filmarray呼吸道病原检测较好的样本类型。Filmarray呼吸检测体系(Filmarray respiratory panel,FARP)可作为CAP中常规检测方法阴性时病原体补充检测手段之一,可提供重症CAP患儿更多的病原信息,可为重症CAP提供"早期病原预警"信号,可能对重症CAP或重症CAP转化倾向的患儿更加适用。Filmarray肺炎检测体系(Filmarray pneumonia panel,FAPP)在重症CAP早期或者病情加重时提供快速的病原结果和耐药基因结果辅助指导抗生素针对性的使用,有望发挥一定的抗生素管理潜力。FARP和FAPP的结果需要医生综合患儿临床特征进行判读,评价两种检测体系中的临床指标和经济学价值,需严格控制混杂因素。
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编辑人员丨2天前
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烟台233例流感样病例流感阴性的病原体分布及流行特征分析
编辑人员丨2天前
目的:了解烟台市流感阴性的流感样病例中呼吸道病原谱及其流行特征,为疾病防控和临床诊疗提供参考依据。方法:于2020年3月至2021年2月在烟台市国家流感网络实验室监测的所有哨点医院采集了233例流感阴性的流感样病例的鼻咽拭子样本,使用多重荧光定量聚合酶链式反应法检测22种呼吸道病原体,分析流行病学特征。结果:233份标本中总病原学检出率为69.96%(163/233),共检出17种呼吸道病原体,检测率前三位的病原体是冠状病毒(human coronavirus,HCoV)(32.62%)、鼻/肠病毒(rhinovirus,RhV)/(enterovirus,EV)(17.17%)和嗜肺军团杆菌( legionella pneumophila,LP)(16.74%)。不同年龄组检出率分别为0~15岁组80.28%(57/71)、16~30岁组62.65%(52/83)、31~45岁组68.18%(30/44)、46~60岁组64.28%(9/14)、>60岁组71.43%(15/21),差异无统计学意义。呼吸道病原体全年均有检出,以单一病原体携带模式为主(44.21%),各季节呼吸道病原体检出率差异无统计学意义。多种病原体的季节流行规律具有差异,HCoV 229E型春季检出率最高(68.75%);RhV/EV在秋季(26.98%)和冬季(23.08%)的检出率较高;LP在春季(19.05%)和夏季(27.27%)的检出率较高;副流感病毒(human parainfluenza virus,HPIV)在春季的检出率(22.22%)显著高于夏季(3.64%)。且HPIV和百日咳鲍特菌( bordetella pertussis,BP)均以0~15岁组的检出数量最多,检出率在不同年龄组之间差异有统计学意义。 结论:应加强HCoV、RhV、EV、LP、HPIV等呼吸道病原体的持续性监测,了解其流行特征及致病力的标化,为对可能由其他病原体引起的疫情暴发提供了数据支持和流行病学调查提供参考依据。
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编辑人员丨2天前
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职业性汞暴露人群血浆差异基因表达及生物信息学分析
编辑人员丨2天前
目的:应用人基因表达谱芯片和荧光定量PCR技术筛选、识别职业性汞暴露人群血浆差异基因和相关信号通路。方法:于2018年9月至2019年10月,选择江苏省某水银温度计工厂291名参加职业健康检查的工人作为调查对象,对符合纳入标准的126名工人进行成组匹配后,将其中60人分为高浓度汞暴露组(高暴露组)和低浓度汞暴露组(低暴露组),每组30人。用基因表达谱芯片(芯片初步筛选阶段)对高暴露组和低暴露组(各10例)血浆总RNA样本进行检测,筛选变化倍数>2倍的差异表达基因(DEGs),使用DAVID和Metascape在线工具对DEGs进行基因功能聚类、通路和蛋白互作网络分析;而后对关键DEGs(荧光定量PCR验证阶段)在高暴露组和低暴露组(各20例)中进行荧光定量PCR测定,验证其表达量变化。结果:高暴露组和低暴露组共有269个DEGs(上调203个,下调66个);生物信息学分析结果显示,DEGs主要涉及前脑发育、胶质细胞命运决定等细胞生物学过程和PID NF-κB、PTEN等信号通路。荧光定量PCR验证结果显示,与低暴露组相比,NFE2L1、SOX8、SOX6和RNF2基因在高暴露组表达明显下调(下调倍数分别为2.10、11.52、2.19和4.38),差异均有统计学意义( P<0.05)。 结论:职业性高浓度汞暴露人群中,血浆NFE2L1、SOX8、SOX6和RNF2基因表达发生明显改变,PTEN信号通路和神经胶质细胞命运决定生物学过程可能与汞暴露致机体损伤密切相关。
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编辑人员丨2天前
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2024年北京市春季呼吸道病原体流行特征分析
编辑人员丨2天前
目的:掌握2024年北京市春季呼吸道感染病原体的流行特征,为临床呼吸道感染疾病的诊断治疗和疫情防控提供参考依据。方法:依托北京市呼吸道病原监测系统,收集2024年17—20周北京市17个区35家哨点医院及北京市两家儿童医院的呼吸道感染患者样本,应用多重实时荧光聚合酶链式反应技术检测30种/型常见呼吸道病原体,并采集相应流行病学资料。结果:2024年春季17~20周监测呼吸道感染病例734例,不同年龄组呼吸道病毒、肺炎支原体和肺炎衣原体的阳性率为:<5岁39.8%(33/83)、5~17岁46.4%(77/166),18~59岁26.5%(61/230),≥60岁15.7%(40/255),其中鼻病毒在18~59岁和≥60岁年龄组位列第一;肺炎支原体在<5岁和5~17岁年龄组位列第一。急性上呼吸道感染样本呼吸道病原体检出率68.46%(293/428)。病原谱前6位为流感嗜血杆菌、肺炎链球菌、鼻病毒、肺炎支原体、百日咳鲍特氏菌、副流感病毒、A族链球菌、腺病毒,阳性率分别为30.16%(131/428)、12.15%(52/428)、11.68%(50/428)、11.68%(50/428)、6.78%(29/428)、5.14%(22/428)、5.14%(22/428)、4.91%(21/428)。结论:2024年北京市春季呼吸道病毒以鼻病毒、副流感病毒、腺病毒为主,细菌及支原体类病原谱以流感嗜血杆菌、肺炎链球菌、肺炎支原体为主。持续加强呼吸道多病原监测有助于呼吸道疾病的诊断治疗和预警预测。
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编辑人员丨2天前
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产前诊断中采用拷贝数变异测序技术检测胎儿DMD基因缺失或重复的效能
编辑人员丨2天前
目的:评估产前诊断中采用低深度高通量全基因组拷贝数变异测序(CNV-seq)技术对胎儿DMD基因缺失或重复的诊断效能。方法:对2018年1月至2023年7月于云南省第一人民医院行产前诊断的34 544例胎儿的CNV-seq检测结果进行回顾性分析,共纳入156例胎儿,包括:有假性肥大型进行性肌营养不良[DMD;包括表型较轻的贝氏肌营养不良(BMD)]生育史或家族史的胎儿125例;无DMD/BMD生育史或家族史但因其他指征行产前诊断检出DMD基因缺失或重复的胎儿31例。采用多重连接依赖性探针扩增(MLPA)技术对胎儿样本进行检测验证,对CNV-seq和MLPA结果进行一致性检验,获得CNV-seq对胎儿DMD基因缺失或重复的检测效能。结果:与MLPA相比,CNV-seq对胎儿DMD基因缺失或重复的检出总符合率为92.3%(144/156),敏感度和阳性预测值均为88.2%,特异度和阴性预测值均为94.3%,漏检率为3.8%,Kappa系数为0.839。有DMD/BMD生育史或家族史的胎儿中,MLPA共检出20例缺失和6例重复,其中4例缺失和2例重复因变异片段<100 Kb被CNV-seq漏检。无DMD/BMD生育史或家族史的胎儿中,CNV-seq检出缺失占42%(13/31),重复占58%(18/31),重复占比高于有DMD/BMD生育史或家族史的胎儿,其中3例位于第42~67号外显子(可能致病),9例覆盖DMD基因5’或3’末端,均包含第1或第79号外显子(临床意义未明),其余6例CNV-seq检出重复片段位于chrX:32650635_32910000(临床意义未明),但MLPA检测结果均为阴性。结论:CNV-seq可有效检出胎儿DMD基因缺失或重复,但存在少量漏检风险,结果需MLPA验证。CNV-seq检测到chrX:32650635_32910000区域重复及检出覆盖DMD基因5′端或3′端重复的变异可能并不致病。
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编辑人员丨2天前
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2020年我国部分地区食品来源致泻大肠埃希菌耐药性及质粒介导黏菌素耐药机制分析
编辑人员丨2天前
目的:探讨我国部分地区2020年食源性致泻大肠埃希菌(diarrheagenic Escherichia coli,DEC)的耐药性以及质粒介导黏菌素耐药基因 mcr的携带情况。 方法:针对我国福建省、河北省、内蒙古自治区和上海市等地区2020年度食品中分离获得的91株致泻大肠埃希菌,采用Vitek2 Compact生化鉴定和药敏检测平台测定其对9类18种抗菌药物的敏感性,采用多重聚合酶链式反应(mPCR)检测 mcr-1~ mcr-9基因的携带情况,并对 mcr基因PCR阳性菌株开展进一步药敏实验、全基因组测序和生物信息学分析。 结果:91株致泻大肠埃希菌总体耐药率为76.92%(70/91),对氨苄西林和甲氧苄啶-磺胺甲噁唑的耐药率最高,分别为69.23%(63/91)、59.34%(54/91),多重耐药菌株占47.25%(43/91);检出2株 mcr-1基因和ESBL(extended-spectrum beta-lactamase,超广谱β内酰胺酶)均为阳性的EAEC(enteroaggregative Escherichia coli,肠道集聚性大肠埃希菌)菌株,其中1株为O11:H6血清型,可对10类25种测试药物耐药且基因组预测出38种耐药基因,另1株为O16:H48血清型,可对7类21种测试药物耐药,并携带 mcr-1基因新变体 mcr-1.35。 结论:2020年我国部分地区食源性致泻大肠埃希菌分离株的整体耐药水平较高,多重耐药情况严重,检出携带 mcr-1基因等多种耐药基因的多重耐药菌株,且发现 mcr-1基因新变体,需继续开展动态污染和耐药监测并持续开展耐药机制研究。
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编辑人员丨2天前
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CNVPLUS Ⓡ微阵列芯片在 DMD基因诊断中的应用
编辑人员丨2天前
探讨CNVPLUS ?微阵列芯片(CNVPLUS ?-array)在 DMD基因诊断中的应用价值。选取2014年1月至2023年3月在上海交通大学医学院附属新华医院儿内分泌遗传科就诊、临床诊断Duchenne/Becker肌营养不良(DMD/BMD)的96例儿童纳入回顾性分析,分别采用CNVPLUS ?-array技术和多重连接探针扩增(MLPA)—二代测序(NGS)—Sanger测序序贯法检测患儿外周血 DMD基因。序贯法中,MLPA检出的单外显子缺失运用聚合酶链式反应(PCR)验证,PCR结果正常的样本再行Sanger测序;MLPA阴性的样本行NGS检测并用Sanger测序验证。结果显示,96例样本中,CNVPLUS ?-array检出 DMD基因致病性变异91例,其中大片段缺失/重复即拷贝数变异(CNV)76例、微小变异即单核苷酸变异/小插入缺失(SNV/Indel)15例,5 d完成所有样本的实验和诊断;序贯法则检出致病性CNV 76例、SNV/Indel 20例,48 d完成全部实验和诊断。5例CNVPLUS ?-array漏诊的SNV/Indel样本优化运算模式后致病位点可以正确聚类。综上,CNVPLUS ?-array由于集CNV和SNV探针为一体,能同步检测 DMD基因的CNV和SNV/Indel,但对CNV的诊断性能优于SNV/Indel,有待优化运算模式必要时需补充其他检测以减少漏诊风险。
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编辑人员丨2天前
