目的:探究Wnt3a对人牙周膜干细胞（periodontal ligament stem cell，PDLSC）增殖、迁移和成骨分化的影响，确定Wnt3a对小鼠实验性牙周炎牙槽骨再生的作用。方法:分别用不同质量浓度的Wnt3a（0、20、100、200、500 μg/L）刺激PDLSC（计为5组），培养2、4、7或10 d后通过细胞计数检测细胞增殖，通过Transwell实验检测细胞迁移；培养21 d时通过实时荧光定量PCR检测成骨相关基因Ⅰ型胶原、runt 相关转录因子2（runt-related transcription factor 2，Runx2）的表达情况。将Wnt3a蛋白包裹在聚乳酸-羟基乙酸共聚物微球复合透明质酸水凝胶中，注入牙周炎小鼠的龈沟中。在1、2、4和8周取上颌牙槽骨样本，用显微计算机断层扫描、HE染色及骨形成标志物碱性磷酸酶（alkaline phosphatase，ALP）、Runx2和骨钙蛋白免疫组化染色评估牙槽骨再生情况。结果:培养10 d后，与0 μg/L Wnt3a组相比，Wnt3a在20~500 μg/L时均可显著促进PDLSC增殖（ P<0.01）。培养21 d时，0、20、100、200及500 μg/L组Ⅰ型胶原mRNA的表达量分别为0.96±0.27、1.90±0.47、2.18±0.24、2.32±0.15、1.99±0.43，Runx2 mRNA的表达量分别为1.08±0.15、3.19±0.17、6.19±0.28、9.19±0.41、5.55±0.06，Ⅰ型胶原和Runx2 mRNA的表达与0 μg/L Wnt3a组相比差异均有统计学意义（ P<0.05）。在注射水凝胶第1、2、4、8周后，包裹Wnt3a的水凝胶组小鼠上颌第二磨牙颊侧釉质牙骨质界至牙槽嵴顶的距离［分别为（497.3±18.2）、（455.7±12.5）、（401.0±8.5）、（362.3±15.5） μm］与牙周炎组小鼠［分别为（710.3±10.2）、（614.0±16.4）、（564.3±12.5）、（502.3±6.8） μm］相比均显著减少（ P<0.01），牙周炎症减轻。注射水凝胶4周后免疫组化结果显示，与牙周炎组相比，Wnt3a水凝胶组成骨相关基因ALP（0.72±0.01）、Runx2（0.77±0.03）及骨钙蛋白（0.72±0.07）的表达水平均显著升高（ P<0.01）。 结论:Wnt3a可以促进PDLSC的增殖、迁移和成骨分化以及实验性牙周炎小鼠的牙槽骨再生。

目的:探讨负载银和重组人碱性成纤维细胞生长因子（rh-bFGF）的甲基丙烯酸酐化明胶（GelMA）水凝胶对兔深Ⅱ度烧伤创面的影响。方法:采用实验研究方法。制备含不同浓度甲基丙烯酸酐（MA）的低浓度MA明胶（GelMA）材料、中浓度GelMA材料和高浓度GelMA材料，加入光引发剂后分别制得低浓度GelMA水凝胶、中浓度GelMA水凝胶和高浓度GelMA水凝胶。采用核磁共振波谱仪检测前述3种浓度GelMA材料的氢核磁共振谱并根据波谱图计算其取代度，采用场发射扫描电子显微镜（FESEM）检测前述3种浓度GelMA水凝胶的三维微观结构及孔径，样本数均为9。根据前述筛选出的MA浓度合成含10种浓度银的GelMA（含银GelMA）溶液，将每种浓度的含银GelMA溶液均分为3份，加入光引发剂后分别暴露于紫外光下持续20、25、35 s，制得相应的含银GelMA水凝胶。采用胶原酶降解法测定不同光交联时间含银GelMA水凝胶降解12、24、36、48 h的降解剩余率及彻底降解所需时长，样本数为5。测定前述筛选出光交联时间下含10种浓度银GelMA水凝胶对金黄色葡萄球菌的抑菌圈直径反映其抑菌能力，样本数均为5。以与含最低浓度银（即不含银）GelMA水凝胶抑菌圈直径相比有统计学意义的含银GelMA水凝胶为有抑菌活性。选取具有抑菌活性的且载药浓度最低的含银GelMA水凝胶，采用FESEM检测其三维微观结构及孔径，采用能谱仪检测其内部银元素的存在情况，样本数均为9。将冻干单纯GelMA水凝胶和冻干含银GelMA水凝胶分别浸没于磷酸盐缓冲液中24 h，通过称重法计算并比较2种水凝胶的溶胀率，样本数为5。根据预实验及前述实验结果，制备含银和rh-bFGF的GelMA水凝胶（简称复合水凝胶）。大体观察复合水凝胶的外观，并采用FESEM检测其三维微观结构与孔径。取30只4~6个月龄、雌雄各半日本大耳兔，在其背部制作深Ⅱ度烧伤创面。以兔头侧为基准，将脊柱左侧创面作为复合水凝胶治疗组，右侧作为纱布对照组，2组创面分别作相应处理。观察伤后3、7、14、21、28 d创面愈合情况；记录伤后7、14、21、28 d创面愈合面积并计算其愈合率，样本数为30。对数据行重复测量方差分析、单因素方差分析、独立样本 t检验。 结果:低浓度GelMA材料、中浓度GelMA材料及高浓度GelMA材料的取代度，差异明显（ F=1 628.00， P<0.01）。低浓度GelMA水凝胶存在疏松、不规则三维空间网状结构，孔径为（60±17）μm；中浓度GelMA水凝胶的三维空间网络、孔径大小均较均匀规则，孔径为（45±13）μm；高浓度GelMA水凝胶的三维空间网状结构致密、层次混乱，孔径为（25±15）μm。3种GelMA水凝胶孔径大小差异有统计学意义（ F=12.20， P<0.01），选取（MA）中浓度为后续材料制作浓度。相同光交联时间下的含不同浓度银GelMA水凝胶的降解性基本一致；20、25、35 s光交联时间下含银GelMA水凝胶降解12 h的降解剩余率分别为（74.2±1.7）%、（85.3±0.9）%、（93.2±1.2）%，降解24 h的降解剩余率分别为（58.3±2.1）%、（65.2±1.8）%、（81.4±2.6）%，降解36 h的降解剩余率分别为（22.4±1.9）%、（45.2±1.7）%、（68.1±1.4）%，降解48 h的降解剩余率分别为（8.2±1.7）%、（32.4±1.3）%、（54.3±2.2）%；20、25、30 s光交联时间下含银GelMA水凝胶彻底降解所需时间分别为（50.2±2.4）、（62.4±1.4）、（72.2±3.2）h，差异有统计学意义（ F=182.40， P<0.01），选取25 s作为后续光交联时间。低浓度至高浓度的10种含银GelMA水凝胶对金黄色葡萄球菌的抑菌圈直径依次为（2.6±0.4）、（2.5±0.4）、（3.2±0.4）、（12.1±0.7）、（14.8±0.7）、（15.1±0.5）、（16.2±0.6）、（16.7±0.5）、（16.7±0.4）、（16.7±0.6）mm，基本呈浓度依赖性升高趋势，总体比较差异有统计学意义（ F=428.70， P<0.01），与含最低浓度银GelMA水凝胶相比，其他有抑菌活性的含低浓度至高浓度银GelMA水凝胶的抑菌圈直径均明显增大（ t值分别为26.35、33.84、43.65、42.17、49.24、55.74、43.72， P<0.01）。对金黄色葡萄球菌抑菌圈直径为（12.1±0.7）mm的含银GelMA水凝胶具有抑菌活性且载药浓度最低，选取该含银浓度为后续材料制作浓度。含银GelMA水凝胶的微观形貌为规律的趋于平行线性的条索状结构，孔径为（45±13）μm，且含有银元素。浸没24 h，含银GelMA水凝胶的溶胀率与单纯GelMA水凝胶相近（ P>0.05）。复合水凝胶呈无色清亮透明状；其三维结构为规则、均匀的网格状，内部存在细丝网状结构，孔径为（40±21）μm。伤后3 d，复合水凝胶组兔创面可见大量坏死组织及渗出物；纱布对照组兔创面可见散在结痂，亦可见少量坏死组织及渗出物。伤后7 d，复合水凝胶组兔创面已明显缩小，纱布对照组兔出现创面存在与纱布粘连情况。伤后14 d，复合水凝胶组兔创面红润、可见肉芽组织生长；纱布对照组兔创面基底呈苍白色、血运差。伤后21 d，复合水凝胶组兔创面完全愈合，纱布对照组兔创面出现愈合趋势。伤后28 d，复合水凝胶组兔创面部位可见新生毛发，纱布对照组兔仍残存椭圆形创面。伤后7、14、21、28 d，复合水凝胶组兔创面愈合率均明显大于纱布对照组（ t值分别为2.24、4.43、7.67、7.69， P<0.05或 P<0.01）。 结论:中浓度GelMA水凝胶在溶胀性、可降解性方面具有良好的理化特性，筛选出的含银GelMA水凝胶具有抑菌活性且载药浓度最低，制得的复合水凝胶可明显缩短兔深Ⅱ度烧伤创面愈合时间。

急性和慢性创面感染发病率和致死率居高不下，给全球医疗卫生系统带来巨大负担。科学家们已对感染的潜在机制进行了广泛研究，标准化创面治疗已经成为常规操作。但是，生物膜形成、延迟愈合以及药物抵抗的出现，导致创面感染的诊断和治疗仍然面临巨大的挑战。南京中医药大学王裔惟教授、陈军教授团队在《Burns & Trauma》发表题为《Challenges and innovations in treating chronic and acute wound infections: from basic science to clinical practice》的综述，系统讨论了急性和慢性创面感染的病理学和相关菌群特征，以及临床诊断、非手术及手术治疗等面临的挑战。该团队详细分析了目前主要应用的创面抗菌剂、抗菌敷料以及抗生素等在临床治疗创面感染中的效果，指出随着新型抗菌肽、噬菌体、药物控释系统、智能水凝胶敷料、光电生物干预和中药的不断开发应用，创面感染问题将有望得以解决；同时优化早期诊断方法敏感性，重视联合治疗和关注皮肤菌群微生态调节在创面愈合中的有益作用，将为创面感染治疗提供新方向。

目的:探讨杀伤细胞免疫球蛋白受体(killer cell immunoglobulin receptor，KIR)基因多态性与烟台地区汉族无偿献血女性妊娠遗传易感性关系及与妊娠女性免疫球蛋白G ( immunoglobulin G，IgG )抗A(B)抗体效价的相关性。方法:收集2016年1月至2016年12月烟台地区无偿献血女性外周血样本，随访样本2017年1月至2018年12月间妊娠状态，分为妊娠组(160例)和未妊娠组(126例)。通过聚合酶链反应-序列特异性引物(polymerase chain reaction-sequence specific primer，PCR-SSP)法进行KIR基因分型。微柱凝胶法检测妊娠女性血清中其血清IgG抗A(B)抗体的效价。统计分析KIR基因频率及单倍型与妊娠遗传易感性的关系，以及与妊娠女性IgG抗A(B)抗体效价的关系。结果:在KIR基因水平，与未妊娠对照组比较，妊娠组KIR2DL5A基因频率高(48.1%比33.3%， χ2＝6.348， P<0.05)，而KIR3DL1、KIR2DS4*FUL基因频率低(86.3%比93.7%，66.9%比80.2%， χ2值分别为4.112和6.271， P值均<0.05)，差异有统计学意义。在KIR单倍型水平，与未妊娠对照组比较，妊娠组单倍型A比例低，而单倍型B比例高(41.3%比56.4%，58.8%比43.7%， χ2值均为6.440， P值均<0.05)，差异有统计学意义。KIR2DL2、KIR2DL5A、KIR2DL5B、KIR2DS1、KIR2DS2、KIR2DS4*DEL、KIR2DS5、KIR3DS1、KIR3DP1*FUL在血清IgG抗A(B)抗体低效价组(<64)基因频率高于高抗体效价组(≥64)(20.9%比5.4%，60.5%比33.8%，15.1%比5.4%，62.8%比37.8%，25.6%比5.4%，55.8%比33.8%，48.8%比20.3%，60.5%比33.8%，23.3%比4.1%， χ2值分别为8.084，11.342，3.950，9.912，11.897，7.781，14.154，11.342，11.915， P值均<0.05)，而KIR2DS4*FUL基因频率在低效价组低于高效价组(51.2%比85.1%, χ2＝20.722， P<0.05)，差异有统计学意义。在KIR单倍型水平，单倍型A在低抗体效价组的比例低于高抗体效价组(18.6%比55.4%， χ2＝23.488， P<0.05)，而单倍型B在低抗体效价组比例高于高抗体效价组(81.4%比44.6%, χ2＝23.488， P<0.05)。 结论:KIR基因频率及单倍型与烟台地区汉族无偿献血女性妊娠及妊娠后IgG抗A(B)抗体效价相关，可为妊娠的遗传易感性和ABO系统新生儿溶血病的遗传筛查提供了新的方向。

目的:制备含锂生物玻璃(Li/BGs)纳米材料，并探讨其对大鼠心肌样细胞(H9C2)和人类脐静脉内皮细胞(HUVECs)的生物相容性。方法:采用溶胶-凝胶法，将0.7 g十六烷基三甲基溴化铵、10 ml乙酸乙酯、7 ml 1 mol/L氨水、3.6 ml正硅酸四乙酯、3.57 g四水硝酸钙和0.37 g碳酸锂反应至少4 h，制备Li/BGs。扫描电子显微镜(SEM)观察Li/BGs纳米颗粒的尺寸和形态。H9C2和HUVECs分别置于10~1 000 μg/ml浓度的Li/BGs培养基中，细胞计数试剂盒(CCK-8)细胞毒性实验(450 nm吸光度值)评估细胞活性。细胞在10 μg/ml浓度的Li/BGs溶液中培养24 h后，采用鬼笔环肽染色法(Phalloidin)和4’，6-二脒基-2-苯基吲哚(DAPI)染色，观察细胞核(蓝色)和细胞骨架蛋白(红色)的共聚焦显微镜图像，评估Li/BGs对细胞形态的影响。组间比较采用单因素方差分析分析数据统计学差异。结果:SEM观察显示，制备的Li/BGs颗粒近球形，粗糙且均匀，直径(82.86±14.28) nm。H9C2经钙黄绿素乙酰氧基甲酯/碘化丙啶(Calcein AM/PI)染色后，大部分细胞展现出活跃状态，未出现细胞的明显死亡。在细胞毒性试验中，250 μg/ml组、500 μg/ml组及1 000 μg/ml组低于H9C2对照组(0.287±0.005、0.317±0.009、0.347±0.025比0.825±0.188， F＝24.72， P<0.001)。Li/BGs处理HUVECs后250 μg/ml组、500 μg/ml组及1 000 μg/ml组低于HUVECs对照组(0.289±0.003、0.320±0.013、0.354±0.021比1.026±0.027， F＝34.44， P<0.001)。Phalloidin和DAPI染色显示两种细胞的Li/BGs组与对照组比较，Li/BGs组细胞骨架保持正常的形状和结构，未出现断裂、异常凝聚或形状改变等现象。 结论:Li/BGs对细胞的形态和结构无明显影响，具有良好的生物相容性。

目的:探讨年龄>6个月ABO血型反定型无凝集患儿的血清免疫球蛋白(Ig)G、IgM和IgA水平变化。方法:选择2018年1月至6月，于湖南省儿童医院检验中心进行ABO血型正、反定型的1 573例患儿中，反定型检测结果为无凝集的57例患儿为研究对象，并且纳入研究组。根据患儿年龄，将其分为A1亚组( n＝32，年龄为6个月至1岁)与A2亚组( n＝25，年龄>1岁)。研究组、A1亚组、A2亚组患儿的中位年龄分别为10.5个月(7.9~14.5个月)、8.3个月(7.0~9.8个月)、15.0个月(13.5~32.5个月)；男性患儿分别为42、23、19例，女性分别为15、9、6例。采用随机数表抽样法，选择同期于本院儿童保健科体检且年龄匹配的60例健康儿童纳入对照组，并且按照年龄将其分为：B1亚组( n＝30，年龄为6个月至1岁)和B2亚组( n＝30，年龄>1岁)。对照组、B1亚组、B2亚组受试者的中位年龄分别为12.5个月(8.4~21.0个月)、8.4个月(7.5~10.5个月)、21.0个月(16.8~23.0个月)；男性受试者分别为43、21、22例，女性分别为17、9、8例。采用试管法和微柱凝胶卡片法，对研究组患儿进行ABO血型正、反定型。采用免疫比浊法对所有受试者进行IgG、IgM和IgA检测。不同亚组患儿ABO血型反定型无凝集检出率比较，采用 χ2检验；研究组与对照组、不同亚组间的IgG、IgM、IgA水平比较，采用Mann-Whitney U检验。本研究遵循的程序符合湖南省儿童医院伦理委员会制定的标准，经过该伦理委员会批准(批准文号：HCHLL-2020-101)，并征得受试者监护人知情同意。 结果:①研究组患儿的血清IgG、IgM和IgA中位水平，分别为5.17 g/L(3.87~6.85 g/L)、0.66 g/L(0.47~0.93 g/L)、0.23 g/L(0.14~0.42 g/L)，均分别低于对照组的5.85 g/L(4.58~8.19 g/L)、0.85 g/L(0.65~1.08 g/L)、0.35 g/L(0.20~0.55 g/L)，并且差异均有统计学意义( Z＝-2.230、-2.391、-2.463， P＝0.026、0.017、0.014)。② A2亚组患儿的血清IgG与IgM中位水平，分别为5.65 g/L(4.51~7.04 g/L)、0.73 g/L(0.49~0.96 g/L)，均分别低于B2亚组的7.68 g/L(5.86~9.35 g/L)、1.01 g/L(0.88~1.24 g/L)，并且差异均有统计学意义( Z＝-2.485、-3.060， P＝0.013、0.002)；而A2亚组与B2亚组受试者的血清IgA水平，A1亚组与B1亚组受试者的血清IgG、IgM和IgA水平分别比较，差异均无统计学意义( P>0.05)。③本研究进行ABO血型正、反定型的1 573例患儿中，年龄为6个月至1岁者的反定型无凝集检出率为1.7%(25/1 456)，低于年龄>1岁者的27.4%(32/117)，并且差异有统计学意义( χ2＝196.48， P<0.001)。A2亚组患儿的血清IgA中位水平为0.28 g/L(0.18~0.70 g/L)，高于A1亚组的0.18 g/L(0.12~0.25 g/L)，并且差异有统计学意义( Z＝2.953， P＝0.003)；而这2个亚组的血清IgG、IgM水平分别比较，差异均无统计学意义( P>0.05)。 结论:年龄>6个月ABO血型反定型无凝集患儿的血清Ig水平较同龄健康儿童降低。

目的：:分析白内障摘除联合人工晶状体（IOL）植入术后发生IOL混浊的特点以及IOL置换术的临床效果。方法：:回顾性病例研究。随机选取2000年1月至2022年12月在青岛眼科医院白内障科诊断为IOL混浊的50例（51眼）患者的临床资料。记录混浊IOL的材质、型号，IOL混浊的类型（暂时性或永久性），混浊IOL的外观变化，IOL置换手术前后最佳矫正视力（BCVA）。手术前后BCVA比较采用配对样本 t检验。 结果：:术中植入发生暂时性IOL混浊的有4例（4眼），均为表面疏水处理的亲水性丙烯酸酯IOL，包括1枚球面L-312（Oculentis），2枚809M（Carl Zeiss）和1枚839M（Carl Zeiss），这4枚IOL在使用之前均从室外低温环境转移到室温环境，且从发现IOL混浊到恢复不超过3 h；46例（47眼）为永久性IOL混浊，包括37枚亲水性丙烯酸酯球面860UV（US），3枚水凝胶折叠式H60M（Bausch and Lomb），5枚表面疏水处理的亲水性丙烯酸酯球面L-312（Oculentis），2枚三片式疏水性丙烯酸酯MA60MA（Alcon）。混浊的亲水性丙烯酸酯球面860UV（US）在光学显微镜下可见其表面有大量致密沉积物。永久性混浊的IOL从手术植入至诊断为混浊的时间为（39.2±32.0）个月。IOL置换术前BCVA（LogMAR）为1.43±1.08，术后BCVA为0.39±0.44，术后BCVA明显优于术前，差异有统计学意义（ t=6.40， P<0.001）。 结论：:不同材质的IOL均可发生混浊，低温引起的暂时性混浊可逆；IOL置换术可明显改善IOL混浊患者的视力。

目的:探讨三维生物打印负载纳米银的甲基丙烯酸酐化明胶（GelMA）水凝胶对大鼠全层皮肤缺损创面的作用。方法:采用实验研究方法。采用扫描电子显微镜观察不同质量浓度的纳米银溶液中的纳米银颗粒的形态、粒径、分布和含不同终质量分数GelMA的含银GelMA水凝胶的孔隙结构，并计算孔径大小。处理1、3、7、14 d，采用质谱仪检测含终质量分数15% GelMA和终质量浓度10 mg/L纳米银的水凝胶的纳米银释放浓度。培养24 h，检测含终质量浓度0（无纳米银）、25、50、100 mg/L纳米银的GelMA水凝胶对金黄色葡萄球菌和大肠埃希菌的抑菌圈直径。取浙江大学医学院附属第二医院泌尿外科2020年7月收治的1名健康5岁男童包皮环切术后废弃包皮和该院整形外科2020年7月收治的1名健康23岁女性抽脂手术后废弃脂肪，采用酶解法分别提取成纤维细胞（Fb）和脂肪干细胞（ASC）。将Fb分为仅有培养基的空白对照组和另加入含相应终质量浓度纳米银溶液的2 mg/L纳米银组、5 mg/L纳米银组、10 mg/L纳米银组、25 mg/L纳米银组、50 mg/L纳米银组，培养48 h，采用细胞计数试剂盒8检测Fb增殖活性。将Fb分为进行相应处理的0 mg/L含银GelMA水凝胶组、10 mg/L含银GelMA水凝胶组、50 mg/L含银GelMA水凝胶组、100 mg/L含银GelMA水凝胶组，于培养1、3、7 d，同前检测Fb增殖活性。将ASC与GelMA水凝胶混合种植，分为三维生物打印组和非打印组，于培养1、3、7 d，同前检测ASC增殖活性并行活/死细胞荧光染色观察ASC生长情况。以上实验中样本数均为3。于18只雄性4~6周龄SD大鼠背部各制作4个全层皮肤缺损创面，分别设为单纯水凝胶组、水凝胶/纳米银组、水凝胶支架/纳米银组、水凝胶支架/纳米银/ASC组并移植相应支架。分别于伤后4、7、14、21 d，行大体观察并计算创面愈合率（样本数为6）；于伤后7、14 d，对创面行苏木精-伊红染色观察组织病理学改变（样本数为6）；于伤后21 d，对创面行Masson染色观察胶原排列情况（样本数为3）。对数据行单因素方差分析、重复测量方差分析、Bonferroni校正、独立样本 t检验。 结果:不同质量浓度的纳米银溶液中的纳米银颗粒均呈圆形，散在分布，粒径均匀。含不同终质量分数GelMA的含银GelMA水凝胶都呈现大小不一且相互连通的孔隙结构。含终质量分数10% GelMA的含银GelMA水凝胶的孔径明显大于含终质量分数15%和20% GelMA的含银GelMA水凝胶（ P值均<0.05）。处理1、3、7 d，含银GelMA水凝胶的体外纳米银释放浓度的变化趋势相对平缓；处理14 d，其体外纳米银释放浓度迅速增加。培养24 h，含0、25、50、100 mg/L纳米银的GelMA水凝胶对金黄色葡萄球菌和大肠埃希菌的抑菌圈直径分别为0、0、0.7、2.1 mm和0、1.4、3.2、3.3 mm。培养48 h，2 mg/L纳米银组、5 mg/L纳米银组Fb的增殖活性均明显高于空白对照组（ P<0.05），10 mg/L纳米银组、25 mg/L纳米银组、50 mg/L纳米银组Fb的增殖活性均明显低于空白对照组（ P<0.05）。与0 mg/L含银GelMA水凝胶组相比，培养1 d，50 mg/L含银GelMA水凝胶组、100 mg/L含银GelMA水凝胶组Fb的增殖活性均明显降低（ P<0.05）；培养3 d，50 mg/L含银GelMA水凝胶组Fb的增殖活性明显升高（ P<0.05），100 mg/L含银GelMA水凝胶组Fb的增殖活性明显降低（ P<0.05）；培养7 d，100 mg/L含银GelMA水凝胶组Fb的增殖活性明显降低（ P<0.05）。培养1 d，三维生物打印组的ASC增殖活性与非打印组比较，差异无统计学意义（ P>0.05）；培养3、7 d，三维生物打印组的ASC增殖活性均明显高于非打印组（ t值分别为21.50、12.95， P<0.05）。培养1 d，三维生物打印组死亡ASC数略多于非打印组。培养3、5 d，三维生物打印组和非打印组中的绝大多数ASC为活细胞。伤后4 d，单纯水凝胶组和水凝胶/纳米银组大鼠创面渗液较多，水凝胶支架/纳米银组和水凝胶支架/纳米银/ASC组大鼠创面干燥且未见明显感染迹象。伤后7 d，单纯水凝胶组和水凝胶/纳米银组大鼠创面仍有少量渗液，水凝胶支架/纳米银组和水凝胶支架/纳米银/ASC组大鼠创面干燥结痂。伤后14 d，4组大鼠创面上的水凝胶均脱落。伤后21 d，仅单纯水凝胶组仍有少量创面未愈合。伤后4、7 d，水凝胶支架/纳米银/ASC组大鼠创面愈合率均明显高于其他3组（ P<0.05）。伤后14 d，水凝胶支架/纳米银/ASC组大鼠创面愈合率明显高于水凝胶/纳米银组和单纯水凝胶组（ P值均<0.05）。伤后21 d，单纯水凝胶组大鼠创面愈合率明显低于水凝胶支架/纳米银/ASC组（ P<0.05）。伤后7 d，4组大鼠创面上的水凝胶均保持在位；伤后14 d，单纯水凝胶组大鼠的水凝胶已与创面脱离，而其余3组仍有部分水凝胶存在于创面新生组织中。伤后21 d，单纯水凝胶组大鼠创面胶原排列无序，而水凝胶/纳米银组、水凝胶支架/纳米银组、水凝胶支架/纳米银/ASC组大鼠创面胶原排列相对有序。 结论:含银GelMA水凝胶具有良好的生物相容性及抗菌性能，其三维生物打印的双层结构能更好地与大鼠全层皮肤缺损创面新生组织相融合并促进创面愈合。

由于ECM丢失、过度炎症反应、血管生成障碍和细菌感染造成的组织微环境恶化导致难愈性创面的治疗仍是一个巨大的临床挑战。受天然ECM的化学成分、纤维结构和生物学功能的启发，抗菌和组织环境响应性糖肽杂化水凝胶被开发出来用于促进慢性创面愈合。该水凝胶可促进细胞增殖和巨噬细胞向M2表型极化，对革兰阴性菌和革兰阳性菌均显示出较强的抗菌效果。值得一提的是，糖肽水凝胶通过协调以大量的M2型巨噬细胞、炎症反应减轻、血管生成增强为标志的促再生反应，加速了耐甲氧西林金黄色葡萄球菌感染的糖尿病和烫伤所致全层皮肤缺失的组织重建。总之，类ECM和免疫调节糖肽水凝胶是一种很有前途的多功能敷料，无须额外的药物、外源性细胞因子或细胞即可重塑受损的组织环境，为慢性创面的修复和再生提供了一种有效策略。

目的:探讨载P311微球的温敏壳聚糖水凝胶对大鼠全层皮肤缺损创面愈合的影响。方法:采用实验研究方法。通过油包水乳化法制备聚乙烯醇/海藻酸钠微球（单纯微球）、P311微球及异硫氰酸荧光素标记的牛血清白蛋白（FITC-BSA）微球，于光学显微镜/倒置荧光显微镜下观察形貌。制备壳聚糖溶液，将壳聚糖溶液和β-磷酸甘油二钠水合物混合制备单纯温敏水凝胶，在单纯温敏水凝胶中加入相应物质制备载单纯微球和载P311微球的温敏水凝胶，观察4种液体在37 ℃时倾斜状态下的形态变化，冷冻干燥后于扫描电子显微镜下观察微观形貌。取18只3~4周龄雄性SD大鼠，分为不进行任何处理的正常组及于背部脊柱两侧分别制作1个全层皮肤缺损创面并进行相应处理的敷贴组、壳聚糖组、单纯水凝胶组、载单纯微球水凝胶组、载P311微球水凝胶组，每组3只。取5组全层皮肤缺损大鼠，于伤后0（即刻）、5、10、15 d 观察创面愈合情况，计算伤后5、10、15 d创面愈合率；取5组全层皮肤缺损大鼠伤后15 d创面和创缘组织及正常组大鼠相同部位正常皮肤组织，行苏木精-伊红染色观察组织学变化，行免疫组织化学染色观测CD31及血管内皮生长因子（VEGF）的表达，采用蛋白质印迹法检测CD31及VEGF的蛋白表达。样本数均为3。对数据行单因素方差分析、重复测量方差分析及Bonferroni校正。结果:单纯微球呈球形，表面疏松多孔；P311微球及FITC-BSA微球表面光滑无孔隙，且FITC-BSA微球散发出均匀的绿色荧光；3种微球直径基本一致，为33.1~37.7 μm。在37 ℃时倾斜状态下，与壳聚糖溶液及单纯温敏水凝胶相比，载微球的2种水凝胶结构更稳定。载微球的2种水凝胶网状结构较壳聚糖溶液、单纯温敏水凝胶更致密，且其横断面可见直径约30 μm的微球。伤后15 d内，5组大鼠创面均不同程度愈合，其中载P311微球水凝胶组大鼠创面愈合情况最好。敷贴组、壳聚糖组大鼠伤后5、10、15 d创面愈合率分别为（26.6±2.4）%、（38.5±3.1）%、（50.9±1.5）%，（47.6±2.0）%、（58.5±3.6）%、（66.7±4.1）%，均明显低于载P311微球水凝胶组的（59.3±4.8）%、（87.6±3.2）%、（97.2±1.0）%， P<0.05或 P<0.01；单纯水凝胶组大鼠伤后10、15 d及载单纯微球水凝胶组大鼠伤后15 d创面愈合率分别为（76.0±3.3）%、（84.5±3.6）%、（88.0±2.6）%，均明显低于载P311微球水凝胶组（ P<0.05）。正常组大鼠正常皮肤中可见表皮、毛囊及皮脂腺，未见CD31和VEGF阳性表达；载P311微球水凝胶组大鼠伤后15 d创面已几乎完全上皮化，创面血管、毛囊、皮脂腺生成及CD31和VEGF阳性表达较其他4组全层皮肤缺损大鼠明显增加，CD31和VEGF蛋白表达均较其余5组大鼠明显增加（ P<0.01）。 结论:载P311微球的温敏壳聚糖水凝胶，可以缓释包载的药物，延长药物作用时间，并通过促进创面血管生成及再上皮化，促进全层皮肤缺损大鼠创面愈合。