目的:探讨巨噬细胞为适应肿瘤微环境(tumor micro-environment，TME)需要而在其自身极化层面上发生谱系变化模型的特征，为进一步研究TME中巨噬细胞的可塑性提供参考。方法:取绿色荧光蛋白(green fluorescent protein，GFP)转基因并已建成近交系的Foxn1 nu.B6-CAG-EGFP/SU裸小鼠骨髓细胞，分别在巨噬细胞集落刺激因子1(colony-stimulating factor 1，CSF-1)、IFN-γ＋LPS、IL-4诱导下，培养出M0、M1和M2亚型，倒置荧光显微镜观察GFP。免疫细胞化学染色法检测巨噬细胞标志蛋白和极化蛋白，并进一步与人脑胶质瘤干细胞SU3共培养。 结果:倒置荧光显微镜下，原始骨髓细胞和条件培养基培养出的M0、M1和M2都发出强烈的绿色荧光。瑞氏-吉姆萨(Wright-Giemsa)染色后，普通显微镜下能观察到巨噬细胞固有的可塑性。免疫细胞化学染色检测CD11C和CD206标志蛋白表达都呈阳性，CD68只在M1巨噬细胞上为弱阳性，CSF-1和CSF-1R在各亚型细胞上都呈强阳性。在共培养的干细胞球体中观察到了绿色荧光细胞浸润，并发生了吞噬反应。结论:本研究建立了绿色荧光裸小鼠的髓源性巨噬细胞谱系模型，包含M0、M1和M2亚型，都有巨噬细胞固有的可塑性，表达共同的标志蛋白和极化相关蛋白，具有巨噬细胞固有的吞噬功能，可用于与肿瘤细胞之间相生相克表征的研究，特别是需要示踪研究时，可通过巨噬细胞发出的绿色荧光进行识别。

高分子微球作为药物载体已被广泛应用于口服递药系统中，其可实现保护药物稳定性、缓释药物、增强免疫及提高药物吸收等目的。制备微球所使用的高分子材料可来源于天然物质，如纤维素、多糖以及蛋白质等；也可来源于合成高分子物质，如聚己内酯、聚乳酸等。对微球在口服递药中的作用以及口服微球种类进行综述，为口服微球的深入研究及开发提供参考。

宏基因组下一代基因测序（mNGS）能够无偏倚分析患者样本中全部微生物和宿主基因含量，被越来越多地用于诊断罕见、复杂和严重感染性疾病。此外，mNGS在病原体亚型分类、耐药性、毒力分析以及病原体与宿主发育相关性等方面也有广阔的应用前景。因感染人类免疫缺陷病毒（HIV）所致患者因免疫缺陷诱发的眼部机会性感染会严重破坏眼部组织结构和功能，是危及视力，导致患者失明的重要原因。HIV眼病的致病微生物包含细菌、病毒、真菌、螺旋体或寄生虫等。HIV患者机会性感染临床症状和体征多变，甚至存在混合感染，难以鉴别，而传统病原学检测由于眼球体积小、眼内液细胞含量少而取样困难，且特异性差，故应用受限。mNGS相比传统检测方法，可以小样本、快速、准确识别眼内感染的全部病原体并对病原体毒力、耐药性等做出分析。笔者将按病原体分类介绍mNGS在对并发眼内机会性感染的HIV患者进行无偏倚微生物检测分析中的应用。

目的:构建可快速、灵敏、定量检测肺炎支原体(MP)免疫球蛋白(Ig)M和IgG抗体的时间分辨荧光免疫层析法(TFICA)。方法:基于毛细管作用，应用铕微球示踪，通过对抗原/抗体微球偶联比、微球稀释度、划膜浓度和血清稀释度进行优化，建立检测MP-IgM和IgG抗体的TFICA，并考核其方法学性能(如灵敏度、特异性、稳定性)。通过对55名健康体格检查者进行检测获得TFICA的正常参考值；采用TFICA与市售化学发光法试剂盒分别检测88名受试者(33例患者，55名健康体格检查者)的血清样本，计算结果一致性( Kappa检验)。 结果:反应条件为：鼠抗人IgG抗体和MP抗原与微球分别按质量比1∶20和1∶100反应，微球工作稀释度分别为1∶200和1∶100；MP抗原和羊抗人IgM的划膜浓度分别为0.5和1.0 g/L；血清稀释度均为1∶300。建立的MP-IgM和IgG TFICA测量范围分别为(0.78~70.00)×10 3相对单位(RU)/L和(0.17~200.00)×10 3 RU/L，检测灵敏度分别为0.78×10 3和0.17×10 3 RU/L，与甲状腺过氧化物酶抗体、心磷脂酶抗体、甲状腺球蛋白抗体均无交叉反应；相对标准偏差分别为3.7%~14.8%和2.9%~14.0%。经37 ℃ 5 d快速老化，MP-IgM和IgG TFICA试剂的平均信号降低率分别为13.7%和14.2%，提示热稳定性好。该法正常参考值分别为3.33×10 3和2.61×10 3 RU/L；与市售化学发光试剂盒检测结果的 Kappa值分别为0.79和0.76。 结论:TFICA检测MP-IgM和IgG抗体具有操作简捷、灵敏度高、特异性好、可定量的优点，具备一定的临床应用价值。

目的:探讨通过支持接触共培养模式，小鼠前庭支持细胞体外诱导人羊水干细胞向功能性神经元分化的可行性。方法:分离培养人来源的羊水干细胞。从新生C57BL/6J小鼠获取内耳前庭组织，经酶解消化、细胞培养，选取其空心球体，制备单细胞饲养层。将标记慢病毒载体介导产生绿色荧光蛋白nGFP的羊水干细胞种植在饲养层表面，形成支持接触共培养，期间不添加任何外源性神经生长因子及神经元信号诱导因子。检测分化后的羊水干细胞中神经元标记物β微管蛋白（β-Tubulin，Tuj1）、突触后致密蛋白PSD95的表达；标记功能性突触小泡技术（FM1-43穿透）检测分化后细胞是否具有神经元离子通道。同时观察羊水干细胞单独分化、小鼠前庭支持细胞单独分化、Transwell共培养体系中羊水干细胞和饲养层细胞神经元的分化情况。结果:单细胞饲养层表达内耳支持细胞特异性标记物细胞周期蛋白激酶抑制因子P27 kip1。nGFP标记过的羊水干细胞接种于饲养层后，nGFP表达阳性的部位有（52.0±3.0）%的细胞表达Tuj1，并具有典型的神经元形态特征，突起长度平均（110.7±6.2） μm。饲养层细胞单独分化，仅有（1.1±0.6）%的细胞表达Tuj1阳性且形态典型的神经元；羊水干细胞单独分化，（92.0±1.0）%的细胞表达神经元标记物Tuj1，但无典型的神经元形态特征，突起长度平均（16.0±4.1） μm。将羊水干细胞与饲养层在Transwell中共培养，虽然（92.0±1.0）%的羊水干细胞表达Tuj1，但仍无典型的神经元形态特征，突起长度平均（17.0±4.5）μm，饲养层仅有（1.2±0.9）%的细胞Tuj1表达阳性且具有典型的神经元形态。 结论:通过支持接触共培养模式，由小鼠前庭来源的内耳支持细胞制备的饲养层，可成功将人羊水干细胞定向诱导分化为功能性神经元。

目的:应用影像组学技术结合心电门控4DCT强化扫描图像，量化分析左心室肌CT影像组学特征在心动周期中的变化情况，为基于心电门控4DCT进行心脏功能动态评估提供可行方法。方法:将14例患者的4DCT强化扫描图像以心动周期5%为间隔，重建0%～95% 20个时相的图像。分别在单个时相勾画左心室肌(LVM)，并在左心室心腔造影剂充盈完好区域勾画直径为13 mm的球体[心腔感兴趣区(ROI)]。利用3DSlicer软件对所有勾画的92个特征进行提取，分析CT值在心腔ROI和LVM上的分布情况，基于心腔ROI进行初步筛选(单因素方差分析)得到稳定特征，再利用稳定特征对LVM进一步筛选(单因素方差分析)得到有差异特征，然后采用Wilcoxon秩和检验量化分析特征在心跳周期中随心跳的变化情况。结果:心跳周期中心腔ROI的平均CT值变化率小于LVM，变化率分别为9.23%、17.88%。有36个稳定特征在心腔ROI上差异均无统计学意义( P>0.05)；在36个稳定特征中，对LVM分析得到20个差异有统计学意义的特征( F＝1.641～6.206， P<0.05)，且平均变化率达到98.63%，其中Firstorder矩阵：中值(-103.96%)、均值(123.67%)；GLDM矩阵：灰度非均匀性(99.81%)等变化率达到了99%以上，且不同心动周期中的最大值、最小值之间的差异均具有统计学意义( Z＝-3.921～-3.173， P<0.05)。 结论:通过结合影像组学技术和心电门控4DCT强化扫描图像可以放大心动周期中CT图像的微观变化，可为左心室肌功能的变化评估提供一个新方法，Firstorder矩阵的均值等特征更具应用潜力。

目的:研究新型氨基修饰的磁性介孔二氧化硅纳米颗粒的生物相容性以及跨膜转运能力，并观察该纳米颗粒的体内代谢分布，以此评价该纳米颗粒在基因或药物载体方面的应用前景。方法:制备新型介孔二氧化硅纳米颗粒，以20 nm Fe 3O 4为核心包裹的二氧化硅颗粒，并且进行修饰使之表面氨基化，对此氨基修饰的磁性介孔二氧化硅纳米颗粒细胞毒性研究，携带N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)受体NR2B亚单位基因小干扰RNA(siRNA)质粒细胞转染实验，以及白鼠活体注射靶向模拟实验研究其在体内的生物分布。采用单因素方差分析。 结果:该新型氨基修饰的磁性介孔二氧化硅纳米颗粒是一种直径在80～100 nm之间，孔径在2～4 nm之间的均一球体型纳米颗粒。在5～125 μg/ml浓度范围内，介孔二氧化硅纳米颗粒的对于细胞活性影响差异无统计学意义( P>0.05)，始终保持在6%以下。在姜黄素染色的装载有NR2B siRNA质粒的该纳米颗粒转染实验中，可以在荧光显微镜下观察到细胞内的荧光现象。在体外红外测定仪观察红外激发荧光染料标记的纳米颗粒实验中，可见该纳米颗粒在小鼠体内不会有蓄积作用，其最终会通过肾脏随尿液汇聚至膀胱，并最终排出体外。同时在外加磁场的情况下，会有大量荧光颗粒向磁场方向聚集，并且在撤出磁场后不会蓄积，浓度会持续下降。 结论:氨基化磁性介孔二氧化硅颗粒具有较好的装载能力以及生物安全性，可以携带NR2B基因siRNA质粒通过胞吞作用进入细胞，在外加磁场诱导下可靶向到达病灶区域，为靶向基因治疗奠定基础。

目的:探讨载P311微球的温敏壳聚糖水凝胶对大鼠全层皮肤缺损创面愈合的影响。方法:采用实验研究方法。通过油包水乳化法制备聚乙烯醇/海藻酸钠微球（单纯微球）、P311微球及异硫氰酸荧光素标记的牛血清白蛋白（FITC-BSA）微球，于光学显微镜/倒置荧光显微镜下观察形貌。制备壳聚糖溶液，将壳聚糖溶液和β-磷酸甘油二钠水合物混合制备单纯温敏水凝胶，在单纯温敏水凝胶中加入相应物质制备载单纯微球和载P311微球的温敏水凝胶，观察4种液体在37 ℃时倾斜状态下的形态变化，冷冻干燥后于扫描电子显微镜下观察微观形貌。取18只3~4周龄雄性SD大鼠，分为不进行任何处理的正常组及于背部脊柱两侧分别制作1个全层皮肤缺损创面并进行相应处理的敷贴组、壳聚糖组、单纯水凝胶组、载单纯微球水凝胶组、载P311微球水凝胶组，每组3只。取5组全层皮肤缺损大鼠，于伤后0（即刻）、5、10、15 d 观察创面愈合情况，计算伤后5、10、15 d创面愈合率；取5组全层皮肤缺损大鼠伤后15 d创面和创缘组织及正常组大鼠相同部位正常皮肤组织，行苏木精-伊红染色观察组织学变化，行免疫组织化学染色观测CD31及血管内皮生长因子（VEGF）的表达，采用蛋白质印迹法检测CD31及VEGF的蛋白表达。样本数均为3。对数据行单因素方差分析、重复测量方差分析及Bonferroni校正。结果:单纯微球呈球形，表面疏松多孔；P311微球及FITC-BSA微球表面光滑无孔隙，且FITC-BSA微球散发出均匀的绿色荧光；3种微球直径基本一致，为33.1~37.7 μm。在37 ℃时倾斜状态下，与壳聚糖溶液及单纯温敏水凝胶相比，载微球的2种水凝胶结构更稳定。载微球的2种水凝胶网状结构较壳聚糖溶液、单纯温敏水凝胶更致密，且其横断面可见直径约30 μm的微球。伤后15 d内，5组大鼠创面均不同程度愈合，其中载P311微球水凝胶组大鼠创面愈合情况最好。敷贴组、壳聚糖组大鼠伤后5、10、15 d创面愈合率分别为（26.6±2.4）%、（38.5±3.1）%、（50.9±1.5）%，（47.6±2.0）%、（58.5±3.6）%、（66.7±4.1）%，均明显低于载P311微球水凝胶组的（59.3±4.8）%、（87.6±3.2）%、（97.2±1.0）%， P<0.05或 P<0.01；单纯水凝胶组大鼠伤后10、15 d及载单纯微球水凝胶组大鼠伤后15 d创面愈合率分别为（76.0±3.3）%、（84.5±3.6）%、（88.0±2.6）%，均明显低于载P311微球水凝胶组（ P<0.05）。正常组大鼠正常皮肤中可见表皮、毛囊及皮脂腺，未见CD31和VEGF阳性表达；载P311微球水凝胶组大鼠伤后15 d创面已几乎完全上皮化，创面血管、毛囊、皮脂腺生成及CD31和VEGF阳性表达较其他4组全层皮肤缺损大鼠明显增加，CD31和VEGF蛋白表达均较其余5组大鼠明显增加（ P<0.01）。 结论:载P311微球的温敏壳聚糖水凝胶，可以缓释包载的药物，延长药物作用时间，并通过促进创面血管生成及再上皮化，促进全层皮肤缺损大鼠创面愈合。

目的:探讨趋化因子配体5(CCL5)及受体在脑胶质瘤微环境中的表达，及其介导脑胶质瘤相关间充质干细胞(gaMSCs)促肿瘤细胞的增殖和侵袭机制。方法:提取并培养gbMSCs(取自15例2017年1月至10月华中科技大学同济医学院附属协和医院神经外科手术切除人脑胶质瘤新鲜肿瘤组织标本，WHO Ⅳ)。使用实时荧光定量聚合酶链反应法(qPCR)检测U87、gbMSCs、BM-MSC和4例外伤脑组织中CCL5表达。使用蛋白质印迹法(Western blot)法、qPCR和免疫细胞染色检测脑胶质瘤细胞株U87和GBM细胞中CCL5受体CCR1、CCR3、CCR5的表达。使用细胞计数法、细胞增殖/毒性检测试剂盒-8(CCK-8)实验、磺酰罗丹明B比色(SRB)法和3D肿瘤球体细胞侵袭实验检测gaMSCs对U87和GBM的增殖和侵袭作用。使用细胞计数法、磺酰罗丹明B比色(SRB)法和3D肿瘤球体细胞侵袭实验检测使用不同浓度CCL5及其抗体对gaMSCs促脑胶质瘤细胞增殖和侵袭的具体机制。多组的比较采用单因素方差分析，进一步实验组或对照组两两比较采用LSD- t检验，Western blot实验结果采用 t检验。 结果:gaMSCs可促进脑胶质瘤细胞增殖和侵袭，CCK-8法检测gaMSC1，gaMSC2组及Control组培养胶质瘤细胞U87增殖能力，细胞活性为1.320±0.063、1.250±0.087和0.700±0.012( F＝42.270， P<0.05)。3D肿瘤球体细胞侵袭实验检测U87在Control、gaMSCs1、gaMSCs2组的细胞侵袭性定量分别为10.23±0.64、29.25±0.87和24.79±0.92( F＝37.610， P<0.05)。gaMSCs和骨髓间充质干细胞(BMSCs)一样高表达CCL5，qPCR检测CCL5 mRNA在BMSCs和gaMSCs1、gaMSCs2、gaMSCs3中的表达，分别为0.62±0.05、0.61±0.03、0.62±0.04、0.59±0.07( F＝5.290， P>0.05)。进一步比较GBM中和Control外伤脑组织的CCL5 mRNA表达，分别为0.55±0.03、0.22±0.05，两两比较，差异有统计学意义( F＝34.750， P<0.05)。脑胶质瘤组织中持续表达CCR3 (14/15的阳性表达)，部分表达CCR5(11/15的阳性表达)，而CCR1几乎不表达(0/15的阳性表达)，差异有统计学意义( F＝86.010， P<0.05)。CCL5 Ab可以明显抑制gaMSCs条件培养液促胶质瘤细胞的增殖和侵袭的能力，不同浓度CCL5(20 μg/L和50 μg/L)均能促U87更快的增殖和侵袭。SRB实验：U87细胞的Control组、gaMSCs组和gaMSCs＋CCL5 Ab(20 μg/L)组细胞存活率分别为0.480±0.030、0.831±0.010和0.571±0.160，比较与对照组，CCL5Ab(20 μg/L)明显抑制gaMSCs条件培养液促U87细胞的增殖，差异有统计学意义( F＝57.930， P<0.05)。含0、25、50 μg/L CCL5的无血清培养液，培养U87细胞4 d后，平均细胞计数分别为18.1×10 4个/孔、21.9×10 4个/孔、26.6×10 4个/孔，细胞增殖数依次增高( F＝42.830， P<0.05)。3D肿瘤球体细胞侵袭实验：U87细胞球在Control、gaMSCs、gaMSCs＋CCL5 Ab(25 μg/L)培养液，细胞侵袭性定量分别为10.53±0.04、26.78±0.61和11.37±0.23，差异有统计学意义( F＝54.270， P<0.05)。gaMSCs条件培养液中加入CCL5 Ab(25 μg/L)明显抑制gaMSCs条件培养液促U87细胞侵袭能力；U87细胞球在含0、10、20 μg/L CCL5的无血清培养液中，细胞侵袭性定量分别为9.97±0.82、15.25±0.43和24.52±0.21，细胞球侵袭面积依次增大，两两比较，差异有统计学意义( F＝74.360， P<0.05)。 结论:脑胶质瘤相关间充质干细胞促进脑胶质瘤增殖和侵袭，CCL5在该过程起关键作用。

目的:探讨NOD样受体蛋白3(NOD-like receptor protein 3，NLRP3)对巨噬细胞吞噬创伤弧菌能力的影响和调控机制。方法:转录组测序分析创伤弧菌感染J774A.1细胞吞噬相关基因的表达谱；CRISPR-Cas9基因编辑技术构建NLRP3敲除(NLRP3 KO)的J774A.1细胞；流式细胞术分析未敲除J774A.1和NLRP3 KO J774A.1细胞对创伤弧菌和pHrodo RED标记的大肠埃希菌( Escherichia coli， E. coli)修饰微球的吞噬能力；荧光定量PCR检测吞噬相关基因 Fgr2 b的表达情况。 结果:J774A.1细胞感染创伤弧菌后，吞噬功能相关基因表达谱中约有18个基因表达上调( P<0.05)；NLRP3 KO J774A.1细胞在NLRP3的第2个外显子中有5个碱基的缺失，发生移码突变，导致NLRP3表达缺陷；创伤弧菌或 E. coli修饰微球体外作用后，NLRP3 KO J774A.1细胞较未敲除组吞噬能力均显著增强，差异有统计学意义；与未敲除组比较，创伤弧菌感染的NLRP3 KO J774A.1细胞中 Fgr2 b基因的表达显著升高，差异有统计学意义。 结论:NLRP3能负调控巨噬细胞对创伤弧菌的吞噬功能，其作用机制可能与调控吞噬相关基因 Fgr2 b的表达有关。