目的 探讨泛素结合酶E2L3(UBE2L3)对颅脑创伤(TBI)后小胶质细胞相关神经炎症的作用及其潜在机制.方法 采用SD大鼠构建TBI及假手术(Sham)组大鼠模型,通过多肽组学筛选Sham组和TBI组建模3 d时创伤病灶周围皮质脑组织差异表达的肽段,并选取下调显著的UBE2L3蛋白作为研究对象;分别通过蛋白免疫印迹法(WB)和实时荧光定量PCR(qPCR)实验验证TBI大鼠脑组织和不同BV2细胞模型中UBE2L3的表达情况.将UBE2L3质粒转染至BV2细胞中并将细胞分为阴性对照组(NC)、UBE2L3过表达组(OE-UBE2L3),采用qPCR和WB实验鉴定UBE2L3基因的过表达情况.构建脂多糖(LPS)诱导的M1型小胶质细胞神经炎症模型,将细胞分为NC组、OE-UBE2L3组、LPS组和LPS-UBE2L3组,分别通过免疫荧光染色和qPCR实验检测UBE2L3过表达对小胶质细胞极化、炎症因子表达的影响;随后通过WB实验分析UBE2L3过表达对NF-κB通路中COX2蛋白和NF-κB p65蛋白磷酸化水平的影响.结果 多肽组学质谱分析结果显示,TBI大鼠病灶周围脑皮质组织中UBE2L3蛋白的表达水平较Sham组降低,差异有统计学意义(P=0.046).WB验证实验显示,在BV2细胞神经炎症模型中,UBE2L3的表达水平在12 h时较0 h时下调,差异有统计学意义(P＜0.01);在TBI大鼠脑组织中,UBE2L3的表达水平在TBI后1 d时较Sham组下调(0.804±0.056对比1.394±0.263),在7 d时(0.558±0.024)表达趋于平缓,差异均有统计学意义(均P＜0.01).WB鉴定实验显示成功构建UBE2L3过表达细胞模型,OE-UBE2L3组UBE2L3表达水平较NC组升高(0.908±0.052对比0.362±0.080),差异有统计学意义(P＜0.01).qPCR实验显示,LPS组白细胞介素1 β(IL-1 β)、白细胞介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)表达水平较NC组均升高,而LPS-UBE2L3组IL-1β、IL-6、TNF-α表达水平较LPS组均下调,差异均有统计学意义(均P＜0.01).免疫荧光实验显示,LPS组小胶质细胞M1型标准物诱导性一氧化氮合酶(iNOS)的表达水平较NC组升高,差异有统计学意义(P＜0.001).通路蛋白WB检测结果显示,LPS-UBE2L3组环氧合酶2(COX2)蛋白的表达水平较LPS组降低(0.460±0.280对比1.273±0.090),差异有统计学意义(P＜0.05);LPS组磷酸化的核因子-κB(NF-κB)p65表达水平较NC组上调(1.738±0.138 对比 0.614±0.192),而 LPS-UBE2L3 组磷酸化的 NF-κB p65 表达水平(0.924±0.207)较LPS组下调,差异均有统计学意义(均P＜0.05).结论 UBE2L3可通过调控NF-κB/COX2通路抑制TBI后小胶质细胞向M1表型极化而发挥抑制神经炎症功能,可作为TBI后抑制神经炎症的潜在治疗靶点.

藓结皮是荒漠生物土壤结皮的重要类型,在荒漠生态系统碳固定与碳排放过程中具有重要作用.研究长期氮添加对藓结皮光合生理活性和土壤有机碳(SOC)组分的影响,有助于理解藓结皮光合生理活性特征与荒漠生态系统土壤碳固存之间的关系及其调控因子.为此,研究依托古尔班通古特沙漠野外长期(13a)氮添加实验,以齿肋赤藓形成的藓结皮为研究对象,选取0(N0)、1.0(N1)、3.0 g N m-2 a-1(N3)三种氮处理,阐明长期氮添加对藓结皮光合生理活性和SOC组分的影响.结果表明:(1)相比对照,长期氮添加对结皮层颗粒有机碳(POC)与矿物结合态有机碳(MAOC)含量无显著影响,但显著减少了 0-5 cm 土层POC和MAOC含量的积累;(2)N1处理显著提高了叶绿素和非结构性碳水化合物(NSC)含量,而N3处理叶绿素a、叶绿素b、总叶绿素及NSC的含量分别显著降低了 50.94％、42.49％、46.71％和50.85％;(3)可溶性糖的含量在N1处理下显著增加,N3处理则显著抑制了其积累,脯氨酸的含量随氮浓度呈显著下降的趋势,长期氮添加对可溶性蛋白含量无显著影响;(4)相关性分析表明,长期氮添加、光合生理活性与POC和MAOC含量无显著相关性,酸碱度、微生物量碳氮、电导率、硝态氮和铵态氮皆显著影响POC和MAOC的含量积累.研究揭示了长期氮添加对藓结皮的光合生理活性和SOC组分的影响,且光合生理活性的响应无法有效反映SOC组分变化,为理解荒漠生态系统中氮沉降对生物土壤结皮的影响提供数据支持.

目的 从巨噬细胞极化角度探讨复方苦参注射液(Compound Kushen Injection,CKI)对大鼠急性放射性口腔黏膜炎的防治效果及相关机制.方法 将72只SPF级雌性SD大鼠按电脑随机抽样法平均分为对照组、模型组和CKI组各24只.将模型组和CKI组暴露于单次30 Gy照射下,对大鼠左侧颊黏膜建立急性放射性口腔黏膜炎模型.CKI组给予复方苦参注射液(1.8 mL/kg)静脉注射,其余各组给予等量0.9％氯化钠溶液.观察照射后各组大鼠一般情况,颊黏膜肉眼观及病理变化.ELISA检测大鼠颊黏膜组织中白细胞介素-6、转化生长因子-β、肿瘤坏死因子-α和白细胞介素-10的浓度水平.免疫荧光法检测大鼠颊黏膜组织中CD86和CD206阳性巨噬细胞数量.RT-PCR和Western Blot-ting 法检测颊黏膜中诱导型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase,iNOS)、精氨酸酶1(arginase 1,Arg1)、共刺激分子CD86和CD206 mRNA表达和蛋白水平.结果 与模型组比较,CKI组大鼠的一般情况得到改善,颊黏膜炎症明显减轻.与模型组比较,CKI组大鼠颊黏膜组织中CD86+巨噬细胞数量明显减少(P＜0.05),M1型巨噬细胞标记物iNOS和CD86 mRNA表达和蛋白水平均显著下降(P＜0.05),促炎因子白细胞介素-6和肿瘤坏死因子-α水平显著降低(P＜0.05).与模型组比较,CKI组大鼠颊黏膜CD206+巨噬细胞数量明显升高(P＜0.05),M2型巨噬细胞标记物Arg1和CD206 mRNA表达和蛋白水平升高(P＜0.05),转化生长因子-β和白细胞介素-10水平明显升高(P＜0.05).结论 复方苦参注射液可通过抑制巨噬细胞M1极化,下调促炎因子白细胞介素-6和肿瘤坏死因子-α蛋白表达,同时促进巨噬细胞M2极化,上调抗炎因子转化生长因子-β和白细胞介素-10蛋白表达,从而改善大鼠一般情况,减轻口腔黏膜炎症反应.

目的 通过体外实验探讨鹰嘴豆素A(BCA)对骨关节炎的作用机制.方法 提取大鼠原代软骨细胞进行培养,随后将其分为对照组(不加诱导剂及干扰剂)、模型组[10 ng/mL白细胞介素-1β(IL-1β)诱导]和BCA组(10 ng/mL IL-1β诱导+0、3、6、12、24、48 μmol/L BCA干预).采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法进行细胞活性评估,衰老β-半乳糖苷酶(SA-β-gal)染色观察细胞衰老情况,酶联免疫吸附(ELISA)法检测细胞内炎症因子和氧化应激指标,蛋白免疫印迹法检测相关蛋白水平,运用分子对接技术验证BCA与Nrf2之间的亲和力.结果 MTT法筛选BCA浓度后,选择6、12、24 μmol/L BCA进行后续实验.与对照组相比,模型组软骨细胞活性及过氧化氢酶(CAT)、超氧化物歧化酶(SOD)活性明显减弱(P＜0.05),SA-β-gal阳性细胞数显著增加,肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)、丙二醛(MDA)表达水平明显升高(P＜0.05),细胞内Ⅱ型胶原蛋白(COL2A1)、蛋白多糖(ACAN)表达水平明显降低(P＜0.05).与模型组相比,BCA组上述情况均出现明显逆转(P＜0.05).此外,BCA可以显著减弱核因子κB抑制因子α(IKB-α)的降解和NF-κBp65的核转位,并促进Nrf2在细胞核中的表达和人血红素氧化酶1(HO-1)在全细胞中的表达(P＜0.05).分子对接研究结果则进一步证实BCA与Nrf2具有极高的亲和力.结论 BCA可通过调控Nrf2/NF-KB信号通路体外抑制骨关节炎软骨细胞氧化应激及炎症反应,缓解关节损伤.

可溶性鸟苷酸环化酶(soluble guanylate cyclase,sGC)是一种胞质异二聚体蛋白,由α和β亚基组成,并带有血红素-一氧化氮和氧结合域.一氧化氮(dnitrogen monoxide,NO)通过与血红素基团的Fe2+结合来刺激sGC活性,使环鸟苷酸(cyclic guanosine monophosphate,cGMP)水平上升.sGC可以以2种不同的形式存在,即作为内源性NO受体的天然含血红素形式和不能结合NO的无血红素形式.采用sGC激动剂或激活剂刺激sGC,是一种治疗心血管、心脏和肾脏疾病的一种有效策略.通过对sGC激动剂与激活剂的研究进展进行综述,旨在为sGC调控机制的深入研究以及sGC激动剂与激活剂的开发提供参考.

目的 探讨柚皮苷对小鼠高脂血症的影响,并阐明其作用机制.方法 将C57BL/6小鼠随机分为对照组、高血脂组和柚皮苷组.高血脂组和柚皮苷组小鼠饲喂高脂饲料,持续喂养4周,建立小鼠高脂血症模型.对照组小鼠饲喂正常饲料.造模成功后,柚皮苷组小鼠每日灌胃200 mg·kg-1柚皮苷,对照组和高血脂组小鼠均灌胃等量0.9％NaCl,连续灌胃5周.收集小鼠血液进行血脂检测.收集小鼠肝组织,用生化法检测超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)活性和丙二醛(MDA)、谷胱甘肽(GSH)含量,用蛋白质印迹法检测目的蛋白的表达水平.结果 对照组、高血脂组和柚皮苷组小鼠肝组织中SOD活性分别为(58.43±6.27)、(37.16±4.10)和(51.23±4.81)U·mg prot-1,CAT 活性分别为(176.11±13.59)、(112.65±10.02)和(158.46±14.37)U·mg prot-1,MDA含量分别为(3.15±0.74)、(12.62±2.07)和(5.76±1.83)U·mg prot-1,GSH含量分别为(91.52±11.47)、(34.16±4.62)和(71.64±8.79)U·mg prot-1,诱导型一氧化氮合酶(iNOS)蛋白相对表达水平分别为0.28±0.05、4.26±1.13和0.94±0.19,腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)蛋白相对表达水平分别为1.32±0.18、0.84±0.11和1.49±0.16,胆固醇调节元件结合蛋白(SREBP)蛋白相对表达水平分别为1.76±0.24、5.78±1.21和2.93±0.42,3-羟基3-甲基戊二酰辅酶A还原酶(HMGCR)蛋白相对表达水平分别为1.69±0.18、6.13±1.38和3.26±0.43.对照组和柚皮苷组的上述指标与高血脂组比较,在统计学上差异均有统计学意义(P＜0.05,P＜0.01,P＜0.001).结论 柚皮苷能够有效调节高脂血症小鼠的血脂水平,抑制氧化应激反应和细胞凋亡水平,其作用机制可能与调控AMPK/HMGCR/SREBP信号通路有关.

目的:探讨长链非编码RNA（lncRNA）LBX2-AS1通过表皮生长因子受体（EGFR）信号通路调控胶质瘤细胞增殖、迁移及凋亡的机制。方法:2018年4月至2021年8月，将脑胶质瘤U251细胞（简称U251细胞）分为对照组和观察组，每组4株，对照组采用常规培养，观察组利用靶向LBX2-AS1的特异性小干扰RNA（siRNA）转染。采用四甲基偶氮唑盐法检测U251细胞增殖能力，划痕实验检测U251细胞转移率，流式细胞仪检测U251细胞凋亡率，蛋白印迹法检测U251细胞总蛋白及血管内皮生长因子（VEGF）、磷酸化磷酸肌醇3激酶（p-PI3K）、磷酸化蛋白激酶B（p-Akt）、磷酸化Ras（p-Ras）和磷酸化Raf（p-Raf）蛋白的表达。结果:观察组U251细胞增殖能力、转移率明显低于对照组[（27.15 ± 1.38）%比（63.54 ± 2.47）%、（37.09 ± 3.74）%比（82.17 ± 9.24）%]，U251细胞凋亡率明显高于对照组[（69.17 ± 5.83）%比（17.58 ± 1.22）%]，差异有统计学意义（ P<0.01）。观察组U251细胞总蛋白及VEGF、p-PI3K、p-Akt、p-Ras、p-Raf蛋白表达水平明显低于对照组（1.52 ± 0.23比2.39 ± 0.31、0.73 ± 0.08比1.68 ± 0.45、0.57 ± 0.11比1.89 ± 0.31、0.68 ± 0.06比1.74 ± 0.51、0.84 ± 0.12比1.99 ± 0.63和0.71 ± 0.08比1.52 ± 0.37），差异有统计学意义（ P<0.01）。 结论:lncRNA LBX2-AS1在胶质瘤细胞中高表达，沉默lncRNA LBX2-AS1的表达通过EGFR通路抑制脑胶质瘤细胞的增殖和转移。

目的:观察PINK1/Parkin-溶酶体相关膜蛋白2(LAMP2)通路介导的线粒体-溶酶体自噬对肾缺血再灌注(I/R)损伤后上皮-间充质转化(EMT)的影响，探讨其在移植肾损伤中的作用。方法:采用随机数字表法将32只Sprague Dawley(SD)大鼠分为4组( n＝8)：假手术组(S组)、肾I/R组、肾I/R+Parkin过表达组(I/R+rAAv组)、肾I/R+Parkin沉默组(I/R+sh组)。采用夹闭双侧肾蒂45 min后恢复肾脏灌注24 h的方法制备肾I/R损伤模型。尾静脉注射腺相关病毒rAAv-Parkin和sh-Parkin分别过表达和沉默Parkin，并设空载体对照。术后24 h处死大鼠，采血并取肾皮质，检测血清肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)水平，使用试剂盒分别检测乳酸脱氢酶(LDH)、丙二醛(MDA)、大鼠肾损伤分子-1(Kim-1)和腺苷三磷酸(ATP)水平，蛋白质印迹法(Western blot)检测肾组织E-黏钙蛋白(E-cad)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SAM)及线粒体自噬相关蛋白PINK1、Parkin、LC3B、P62及LAMP2的表达。两组间的比较采用非配对 t检验。 结果:与S组比较，I/R组血清Scr、BUN、LDH和MDA浓度升高，Kim-1表达上调[(123.45±21.23) μmol/L比(60.12±8.98) μmol/L， t＝9.381， P<0.05；(40.57±9.33) mmmol/L比(18.22±6.34) mmmol/L， t＝7.527， P<0.05；(65.12±12.87) U/L比(30.12±6.21) U/L， t＝6.145， P<0.05；(13.21±4.23) mmmol/L比(6.78±2.21) mmmol/L， t＝6.445， P<0.05；(10.11±4.23) nmol/L比(1.21±4.0.43) nmol/L， t＝5.125， P<0.05]；肾皮质ATP含量减少，E-cad表达下调及α-SAM表达上调(0.34±0.14比1.00， t＝5.608， P<0.05；1.78±0.21比1.00， t＝7.129， P<0.05)；PINK1、Parkin和LC3B表达下调，LAMP2表达上调(0.41±0.23比1.00， t＝6.134， P<0.05；0.54±0.16比1.00， t＝7.182， P<0.05；0.45±0.23比1.00， t＝6.051， P<0.05；1.56±0.14比1.00， t＝7.109， P<0.05)。与I/R组比较，I/R+rAAv组血清Scr、BUN、LDH和MDA浓度降低，Kim-1表达下调[(78.32±12.24) μmol/L比(123.45±21.23) μmol/L， t＝5.137， P<0.05；(20.45±9.67) mmmol/L比(40.57±9.33) mmmol/L， t＝6.182， P<0.05；(45.27±10.46) U/L比(65.12±12.87) U/L， t＝5.891， P<0.05；(7.23±3.56) mmmol/L比(13.21±4.23) mmmol/L， t＝5.128， P<0.05；(4.67±1.65) nmol/L比(10.11±4.23) nmol/L， t＝6.871， P<0.05]；肾皮质ATP含量增多，E-cad表达上调及α-SAM表达下调(0.89±0.35比0.34±0.14， t＝7.598， P<0.05；1.11±0.45比1.78±0.21， t＝5.125， P<0.05)；PINK1、Parkin和LC3B表达上调；LAMP2表达下调(2.12±0.55比0.41±0.23， t＝6.678， P<0.05；2.78±0.33比0.54±0.16， t＝6.982， P<0.05；1.45±0.52比0.45±0.23， t＝6.571， P<0.05；1.01±0.20比1.56±0.14， t＝7.223， P<0.05)。与I/R组比较，I/R+sh组血清Scr、BUN、LDH和MDA浓度明显升高，Kim-1表达明显上调；肾皮质ATP含量明显减少，E-cad表达下调及α-SAM表达上调；PINK1、Parkin和LC3B表达下调，LAMP2表达上调。 结论:调控Parkin的表达且通过PINK1/Parkin-LAMP2线粒体-溶酶体自噬途径能减轻肾I/R损伤引起的EMT，其可能是逆转移植肾EMT的重要机制。

目的:通过化学遗传学技术构建胰升糖素样肽1(GLP-1)神经元可控性模型大鼠，并观察GLP-1神经元兴奋性的变化对食欲的调控作用。方法:将15只大鼠分为绿色荧光蛋白(GFP)组、HM3D组和HM4D组，每组5只。分别在3组大鼠的孤束核区域注射不同组合的腺相关病毒(rAAV)，GFP组在孤束核区域注射rAAV-GLP-1-cre和rAAV-GFP-dio；HM3D组在孤束核区域注射rAAV-GLP-1-cre和rAAV-HM3D-mCherry-dio；HM4D组在孤束核区域注射rAAV-GLP-1-cre和rAAV-HM4D-mCherry-dio。通过观察腹腔注射不同剂量N-氧化氯氮平(CNO)后大鼠的摄食行为和体重变化来筛选其最佳剂量。通过与腹腔注射生理盐水进行比较来确认GLP-1神经元的可调控性。观察大鼠处死前30 min注射CNO后大鼠孤束核区域GLP-1神经元的激活数量及下丘脑POMC神经元的表达。结果:各组大鼠孤束核区域内GLP-1神经元均成功被标记，CNO注射剂量为1mg/kg时，HM3D组大鼠摄食减少( P＝0.021)，而HM4D组大鼠摄食增加( P＝0.002)。而注射剂量为0.5 mg/kg和3 mg/kg时均未出现此效应。免疫荧光结果显示，HM3D组孤束核中GLP-1神经元的兴奋性高于GFP组( P＝0.022)，GFP组高于HM4D组( P＝0.049)。腹腔注射CNO后HM3D组大鼠孤束核区域内的GLP-1神经元及下丘脑的POMC神经元表达也高于HM4D组( P＝0.003)。 结论:通过化学遗传学技术在大鼠孤束核内注射不同组合的rAAV能够成功建立GLP-1神经元可控性模型大鼠。1 mg/kg的CNO剂量能够有效激活或抑制该神经元，从而产生调控食欲的效应。

目的:探讨CD137-CD137L信号（简称CD137信号）是否通过调控巨噬细胞M1/M2极性转变促进血管新生。方法:将3%巯基乙酸盐肉汤诱导的小鼠腹腔原代巨噬细胞分3组，即对照组、CD137信号激动组和CD137信号抑制组，通过检测M1和M2型巨噬细胞的相关特异性标志物观察巨噬细胞表型的变化，采用流式细胞术（FCM）检测巨噬细胞表面CD137、CD86及CD206的表达，Western blot和RT-PCR检测巨噬细胞诱导性一氧化氮合酶（iNOS）、Ⅰ型精氨酸酶（Arg-1）的蛋白和mRNA表达。酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测巨噬细胞培养上清中白细胞介素（IL）-12和IL-10分泌水平。将巨噬细胞和内皮细胞（bEnd.3）共培养，上室种植巨噬细胞，下室基质胶种植内皮细胞，实验分为3组，即对照组、CD137信号激动组和过氧化物酶体增殖物激活受体-γ（PPAR-γ）抑制组，检测各组内皮细胞的管腔形成能力。结果:（1）分离的小鼠腹腔原代巨噬细胞纯度为（97.93±1.31）%，巨噬细胞表面CD137表达为（97.40±2.70）%。（2）与对照组比较，CD137信号激动组Arg-1 mRNA和蛋白表达水平较高（ P<0.05），iNOS mRNA和蛋白表达水平较低（ P<0.05）；与CD137信号激动组比较，CD137信号抑制组Arg-1 mRNA和蛋白表达水平较低（ P<0.05），iNOS mRNA和蛋白表达水平较高（ P<0.05）。流式细胞术显示，CD137信号激动组CD206平均荧光强度高于对照组（ P<0.05），而CD86平均荧光强度低于对照组（ P<0.01）；CD137信号抑制组CD206表达明显低于CD137信号激动组（ P<0.05），CD86表达高于CD137信号激动组（ P<0.01）。ELISA显示，CD137信号激动组IL-10分泌高于对照组（ P<0.01），IL-12分泌明显低于对照组（ P<0.01）；而与CD137信号激动组比较，CD137信号抑制组IL-10分泌较低（ P<0.05），IL-12分泌较高（ P<0.05）。（3）内皮管腔形成实验显示，CD137信号激动组内皮细胞小管长度大于对照组，分支数量多于对照组（ P<0.05）；PPAR-γ抑制组的内皮细胞小管长度及分支数量的形成明显被抑制（ P<0.05）。 结论:CD137信号可能通过调控巨噬细胞M1/M2极性转变促进血管新生。