目的 探讨水苏碱(Sta)调节超音速刺猬因子(Shh)/胶质瘤相关癌基因同源物1(Gli1)信号通路对口腔癌(OC)细胞迁移、侵袭和上皮间质转化(EMT)的影响.方法 采用蛋白质印迹技术检测Shh、Gli1在正常口腔上皮角质细胞HOK和OC细胞株系(Cal-27、Tca8113、SCC-9、HSC-3)中的表达,选择其中高表达的HSC-3细胞为研究对象,随机分为Control组、L-Sta组、M-Sta组、H-Sta组、PM组.EdU染色检测HSC-3细胞增殖;划痕实验检测HSC-3细胞的迁移;Transwell实验检测HSC-3细胞侵袭;采用蛋白质印迹技术检测Sta对E-cadherin、N-cadherin、Vimentin、Shh、Gli1蛋白表达的影响;小鼠荷瘤实验验证Sta对OC肿瘤生长和OC组织Shh、Gli1蛋白表达的影响.结果 L-Sta组、M-Sta组、H-Sta组HSC-3细胞EdU阳性细胞率、划痕愈合率、侵袭数、N-cadherin、Vimentin、Shh、Gli1表达低于Control组,E-cadherin表达高于Control组(P<0.05);与H-Sta组相比,PM组EdU阳性细胞率、划痕愈合率、侵袭数、N-cadherin、Vimentin、Shh、Gli1表达升高,E-cadherin表达降低(P<0.05).Sta组移植瘤质量、体积、Shh阳性率、Gli1阳性率低于对照组(P<0.05).结论 Sta可以抑制OC细胞迁移、侵袭和EMT,其机制可能是通过调节Shh/Gli1信号通路实现的.

目的 利用超高效液相色谱-质谱(UHPLC-MS)非靶标技术探索胃复方干预SGC-7901荷瘤裸鼠的潜在代谢通路,为研究胃复方的体内代谢机制提供基础.方法 将胃癌细胞SGC-7901接种于6只裸鼠右侧乳垫处皮下,制备供瘤鼠模型.供瘤鼠瘤块长至10 mm×10 mm左右时,剥离瘤体进行鼠间传代接种,建立SGC-7901皮下移植瘤模型.将24只实验鼠按随机数字表法分为对照组和胃复方高、中、低剂量组,每组6只.对照组裸鼠每天给予0.2 mL生理盐水灌胃,胃复方高、中、低剂量组裸鼠每天给予0.2 mL相应药物灌胃,均连续给药14 d.通过祼鼠体质量、瘤体质量、抑瘤率分析干预效果,采用HE染色观察肿瘤标本.使用R程序包提取代谢物信息后,运用SIMCA软件进行主成分分析(PCA)及正交偏最小二乘法-判别分析(OPLS-DA),在Metabo Analyst软件中筛选出意义最大的代谢通路.结果 与对照组比较,中剂量胃复方抑制肿瘤生长效果较好(P<0.05),抑瘤率为35.97%,其次是高剂量和低剂量(P<0.05),抑瘤率分别为30.29%、30.07%.给药14 d内,对照组裸鼠体质量均高于胃复方高、中、低剂量组;第11天起,胃复方高、中剂量组裸鼠体质量均明显低于对照组(P<0.05).胃复方干预荷瘤裸鼠后,筛选出19种显著差异代谢物,包括甜菜碱、葫芦巴碱、水苏碱、蛋氨酸亚砜、L-酪氨酸、2,3-二羟基-3-甲基丁酸酯、肌酸、鸟氨酸、L-脯氨酸、N-乙酰亮氨酸等,其中精氨酸和脯氨酸代谢通路,烟酸和烟酰胺代谢通路,苯丙氨酸、酪氨酸和色氨酸代谢通路为3条关键代谢通路.结论 胃复方能抑制SGC-7901荷瘤裸鼠肿瘤生长,可能与调节体内氨基酸代谢通路有关.

目的 探讨水苏碱(Stachydine,STA)对氧糖剥夺再灌注(Oxygen-glucose deprivation/reoxy-genation,OGD/R)诱导的神经元焦亡及磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B/核转录因子-κB(Phosphatidylinositol 3-kinase/protein kinase B/nuclear transciption factor-kappa B,PI3K/Akt/NF-κB)信号通路的影响机制.方法 MTT比色(MTT assay kit,MTT)法检测不同水平STA对海马神经元细胞系Ht22细胞活力的影响;将Ht22细胞进行OGD/R诱导后分为模型组(OGD/R组)、水苏碱低剂量组(STA-L组)、水苏碱中剂量组(STA-M组)、水苏碱高剂量组(STA-H组)、水苏碱高剂量+通路激活剂740Y-P组(STA-H+740Y-P组)、通路激活剂740Y-P组(740Y-P组),另设置正常培养的细胞为对照组(Control组);细胞活性检测试剂(Cell counting kit-8,CCK-8)法检测Ht22细胞增殖活性;Hoechst/碘化丙啶(Propidium iodide,PI)染色法检测细胞膜损伤;流式细胞仪检测细胞焦亡;酶联免疫吸附试验(Enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)试剂盒检测白细胞介素(Interleukin,IL)-1 β、IL-6、IL-18 和肿瘤坏死因子-α(Tumor necrosis factor-α,TNF-α)的表达水平;吸光光度法检测细胞内超氧化物歧化酶(Superoxidedismutase,SOD)、丙二醛(Malondialdehyde,MDA)水平;2,7-二氯荧光素二乙酸酯(2',7'-Dichlorodihydrofluorescein diacetate,DCFH-DA)荧光染色检测细胞活性氧(Reactive oxygenspecies,ROS)水平;Western blot检测焦亡相关蛋白裂解半胱氨酸蛋白酶-1(Cleaved-caspase-1,C-Caspase-1)、消皮素 D(Gasdermin D,GSDMD)和 GSDMD-N 和 PI3K/Akt/NF-κB 信号通路蛋白表达水平.结果 STA水平在0.5 μmol/L以下不影响Ht22细胞活力,因此采用0.1、0.2、0.5 μmol/L STA进行后续实验.与Control组比较,OGD/R组Ht22细胞增殖活性(24、48、72 h)、SOD活性显著降低,红色荧光强度、焦亡率、焦亡蛋白C-Caspase-1,GSDMD和GSDMD-N、炎性因子、MDA,ROS及PI3K/Akt/NF-κB信号通路蛋白表达水平显著升高(P＜0.05);与OGD/R组比较,STA-L,STA-M,STA-H组Ht22细胞增殖活性、SOD活性显著上升,红色荧光强度、焦亡率、焦亡蛋白C-Caspase-1,GSDMD和GSDMD-N、炎性因子、MDA、ROS及PI3K/Akt/NF-κB信号通路蛋白表达水平显著降低(P＜0.05);STA-H+740Y-P组与OGD/R组上述指标水平无显著差异(P＞0.05);740Y-P组与OGD/R组比较,病理程度显著加重(P＜0.05),通路激活剂740Y-P可抵消STA对于神经细胞损伤的保护作用.结论 STA可以通过抑制PI3K/Akt/NF-κB信号通路来减轻OGD/R诱导的Ht22细胞焦亡.

目的:多方面评价、比较东营地产的戈武益母草与市售益母草的质量.方法:针对3个产地的戈武益母草与15批市售益母草,从植株形态、果实特性评价其外观质量,采用高效液相色谱法(HPLC)测定其盐酸水苏碱与盐酸益母草碱的含量,采用自动定氮仪法测定其氮元素的含量,采用电感耦合等离子质谱法(ICP-MS)测定其磷元素的含量.结果:市售益母草直径0.2～0.5 cm,盐酸水苏碱含量0.43％～1.80％,盐酸益母草碱0.062％～0.278％;戈武益母草直径0.8～1.5 cm,盐酸水苏碱含量为0.82％～2.45％,盐酸益母草碱0.203％～0.374％;戈武益母草中氮、磷、钾含量高于市售益母草,生理元素含量从高到低依次为钾、钙、镁、钠.市售益母草与戈武益母草的果实千粒重基本一致.结论:与市售益母草比较,戈武益母草植株高大、粗壮,果实体积大、发芽率高;戈武益母草中盐酸水苏碱与盐酸益母草碱的含量高于市售益母草;戈武益母草中氮、磷营养元素与生理元素的含量较高,具有显著优势,适合推广种植.

目的:优化路路通益母膏质量控制方法.方法:分别对标准中的麦冬、黄芪及盐酸水苏碱的薄层鉴别的提取方式、展开剂等进行了优化;将现行标准中黄芪甲苷含量测定法由薄层扫描法修改为高效液相色谱法;建立了HPLC-ELSD黄芪甲苷含量测定方法,采用Inertisil ODS-3色谱柱(150 mm×4.6 mm,5 μm),以乙腈-水(32∶68)为流动相,流速1.0 mL/min,柱温为25 ℃,进样量为20 μL.结果:优化后的薄层鉴别方法专属性好,方便快捷;黄芪甲苷进样量在2.036～12.220 μg范围与峰面积有良好的LOG-LOG线性关系(r=0.999 3),平均加样回收率为104.66％,RSD值为3.81％(n=6).结论:本研究的方法比原标准方法更加方便,可作为路路通益母膏的质量控制方法.

目的 运用高效液相色谱-高分辨飞行时间质谱联用(HPLC-TOF-MS)技术和高效液相色谱串联三重四级杆质谱(HPLC-MS/MS)法,对产复康颗粒化学成分进行快速鉴定及定量分析,并进行初步药动学研究.方法 HPLC-TOF-MS法采用ZORBAX Eclipse Plus C18(100 mm×3.0 mm,1.8 μtrn)色谱柱;流动相为乙腈(A)-0.1％甲酸水(B),梯度洗脱,体积流量0.2 mL/min;质谱采用正、负离子扫描,扫描范围m/z 100～2000.HPLC-MS/MS法采用Waters XBridge(R) BEH C18(150 mm×4.6 mm,2.5 μrn)色谱柱;流动相为乙腈(A)-0.1％甲酸水(B),梯度洗脱,体积流量0.4 mL/min;Scheduled MRM正负离子切换监测模式定量分析.ig给予SD大鼠产复康颗粒(0.5、5g/kg),给药后于不同时间点颈静脉取血0.2 mL,分离血浆,HPLC-MS/MS法检测产复康颗粒入血成分及含量.结果 HPLC-TOF-MS法鉴定产复康颗粒中24种成分;建立的HPLC-MS/MS方法分离度良好,各方法学验证均符合要求,对13种主要成分进行定量分析,水苏碱、黄芪甲苷和益母草碱的含量较高,可能是其主要活性成分;药动学结果显示,仅在给药剂量5 g/kg时,血浆中可检测到水苏碱和益母草碱,水苏碱的消除较慢,益母草碱快速消除.结论 该方法简便、准确,重复性好,可用于产复康颗粒中多种成分的鉴定和含量的测定,为药材的质量控制、药动学研究提供了参考.

目的:运用正交试验优化益母草配方颗粒工艺提取,为益母草配方颗粒的生产工艺提供理论依据.方法:以料液比、提取次数和提取时间3个因素设计L9(34)正交试验,以水苏碱含量、益母草碱含量与浸膏得率三者的综合考察指标作为评价指标,优选益母草配方颗粒提取工艺.结果:优选工艺为料液比1∶12,提取2次,每次1.5h,优化后的提取工艺经3个产地每个产地进3次平行验证试验,水苏碱的提取含量在34.29～35.93mg·g-1,益母草碱的提取含量在2.88～3.01 mg·g-1,浸膏得率在25.11％～26.42％,3个评价指标的RSD均小于2.0％,以及三者的综合考察值在0.93～0.97.结论:优选的提取工艺方法稳定可靠,水苏碱、益母草碱及浸膏的提取率较高,为规范和标准化益母草配方颗粒生产研究工艺提供一定的参考依据.

目的:考察纳秒脉冲电场灭菌对益母草膏中盐酸水苏碱的含量和小鼠肝脏毒性的影响.方法:采用纳秒脉冲电场对益母草膏进行灭菌,用HPLC-UV和氨基柱测定盐酸水苏碱的含量,考察小鼠肝脏的毒性.结果:灭菌前后益母草中的盐酸水苏碱含量分别为78.58、77.92μg,对小鼠肝脏无毒性.结论:纳秒脉冲电场灭菌法对益母草膏中盐酸水苏碱的含量无影响、对肝脏无毒性.

目的 探讨水苏碱(stachydrine)对结肠癌生长的影响及其分子作用机制.方法 采用3-(4,5-二甲基吡啶-2-基)-5-(羧基甲氧基苯基)-2-(4-磺苯基)-2H-四唑(MTS)法研究水苏碱对人结肠癌细胞HCT116增殖的影响;构建人结肠癌HCT116裸小鼠细胞移植瘤模型,研究水苏碱对体内结肠癌生长的影响;免疫组化研究水苏碱对移植瘤中平滑肌肌动蛋白2(smooth muscle actin 2,ACTG2)蛋白表达的影响;构建ACTG2的siRNA质粒并转染HCT116细胞,采用小管形成实验研究ACTG2干扰以后水苏碱对结肠癌血管生成的影响;Western blot实验检测ACTG2干扰如何影响水苏碱对结肠癌细胞中血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)、碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)、肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,TNF-α)及血小板衍生生长因子(platelet derived growth factor,PDGF)表达的作用.结果 水苏碱处理HCT116细胞后,肿瘤细胞的体外增殖及体内生长均较对照组明显受到抑制;免疫组化结果显示,水苏碱能够显著抑制ACTG2蛋白的表达;干扰ACTG2后能够显著减弱水苏碱抑制肿瘤细胞血管生成的能力;进一步机制研究发现,水苏碱能够显著下调VEGF、bFGF、TNF-α及PDGF的表达,而干扰ACTG2则能够恢复上述血管生成因子的表达.结论 水苏碱能够通过抑制ACTG2蛋白的表达抑制血管生成,进而发挥抑制结肠癌生长的能力.

目的:建立HPLC-ELSD测定益母草颗粒中盐酸水苏碱含量的方法.方法:供试品采用732钠型阳离子交换树脂处理;Venusil HILIC丙基酰胺键合硅胶色谱柱(4.6 mm ×250 mm,5μm);柱温室温;流动相乙腈-0.2％冰乙酸溶液(80∶20);流速1 mL· min-1;进样量10μL.蒸发光散射检测器参数:漂移管温度79℃;载气体积流量2 L·min-1.结果:盐酸水苏碱在0.498 ～4.980μg呈良好的线性关系(r=0.999 5,n=6);无糖型益母草颗粒平均加样回收率为99.7％,RSD 2.0％(n=6);有糖型益母草颗粒平均加样回收率为99.3％,RSD 1.9％ (n =6).结论:采用732钠型阳离子交换树脂精制和Venusil HILIC丙基酰胺键合硅胶柱、蒸发光散射检测器的检测方法测定,操作简便,结果准确,可作为益母草颗粒中盐酸水苏碱的含量测定方法,并可为益母草的其他单位制剂中盐酸水苏碱的含量测定提供参考及借鉴.