目的 探讨水苏碱(Sta)调节超音速刺猬因子(Shh)/胶质瘤相关癌基因同源物1(Gli1)信号通路对口腔癌(OC)细胞迁移、侵袭和上皮间质转化(EMT)的影响.方法 采用蛋白质印迹技术检测Shh、Gli1在正常口腔上皮角质细胞HOK和OC细胞株系(Cal-27、Tca8113、SCC-9、HSC-3)中的表达,选择其中高表达的HSC-3细胞为研究对象,随机分为Control组、L-Sta组、M-Sta组、H-Sta组、PM组.EdU染色检测HSC-3细胞增殖;划痕实验检测HSC-3细胞的迁移;Transwell实验检测HSC-3细胞侵袭;采用蛋白质印迹技术检测Sta对E-cadherin、N-cadherin、Vimentin、Shh、Gli1蛋白表达的影响;小鼠荷瘤实验验证Sta对OC肿瘤生长和OC组织Shh、Gli1蛋白表达的影响.结果 L-Sta组、M-Sta组、H-Sta组HSC-3细胞EdU阳性细胞率、划痕愈合率、侵袭数、N-cadherin、Vimentin、Shh、Gli1表达低于Control组,E-cadherin表达高于Control组(P<0.05);与H-Sta组相比,PM组EdU阳性细胞率、划痕愈合率、侵袭数、N-cadherin、Vimentin、Shh、Gli1表达升高,E-cadherin表达降低(P<0.05).Sta组移植瘤质量、体积、Shh阳性率、Gli1阳性率低于对照组(P<0.05).结论 Sta可以抑制OC细胞迁移、侵袭和EMT,其机制可能是通过调节Shh/Gli1信号通路实现的.

目的:评价音猬因子(Shh)/胶质瘤相关癌基因同源物1(Gli1)信号通路在睡眠剥夺致幼鼠认知功能障碍中的作用。方法:SPF级健康雄性C57BL/6小鼠48只，4周龄，体重14~16 g，采用随机数字表法分为3组( n＝16)：对照组(C组)、睡眠剥夺组(SD组)和睡眠剥夺＋Shh激动剂SAG组(SD＋SAG组)。采用多平台水环境法制备小鼠睡眠剥夺模型，每天睡眠剥夺20 h，连续10 d。SD＋SAG组于每次造模前5 min腹腔注射SAG 10 mg/kg，C组和SD组腹腔注射等量生理盐水。造模结束后随机取10只小鼠行新物体识别和Y迷宫实验，行为学实验结束后处死小鼠取海马，采用高尔基染色法测定海马CA1区树突棘密度，采用Western blot法检测Gli1和脑源性神经营养因子(BDNF)表达，采用RT-qPCR法检测Gli1和BDNF的mRNA表达。 结果:与C组比较，SD组新物体识别、Y迷宫偏好指数及海马CA1区树突棘密度降低，海马Gli1和BDNF及其mRNA表达下调( P<0.05)；与SD组比较，SD＋SAG组新物体识别、Y迷宫偏好指数及海马CA1区树突棘密度升高，海马Gli1和BDNF及其mRNA表达上调( P<0.05)。 结论:Shh/Gli1信号通路抑制，降低海马神经元突触可塑性参与了睡眠剥夺致幼鼠认知功能障碍的过程。

目的:探讨眼睑基底细胞癌组织中亮氨酸重复序列和免疫球蛋白样域蛋白-1（LRIG1）、表皮生长因子受体（EGFR）及神经胶质瘤关联癌基因同源物1（GLI1）的表达情况及其相关性。方法:病例系列报告。纳入蚌埠医科大学第一附属医院2016年1月—2020年11月病理确诊的55例眼睑基底细胞癌患者，其中男26例、女29例，年龄52~89（69.1±9.0）岁。选取55例患者手术切除后保留的癌组织标本，并随机抽取其中22例患者的癌旁正常皮肤组织标本作为对照。观察指标：（1）采用免疫组织化学染色检测并比较LRIG1、EGFR及GLI1在眼睑基底细胞癌组织与癌旁正常皮肤组织中的阳性表达率；（2）比较LRIG1、EGFR及GLI1在不同性别、不同年龄（≥65岁和<65岁）、不同肿块大小（≥2.0 cm和<2.0 cm）患者癌细胞中表达的差异。（3）分析LRIG1、EGFR及GLI1三种蛋白表达水平的相关性。结果:（1）LRIG1在眼睑基底细胞癌组织中阳性表达率为16.4%（9/55），低于在癌旁正常皮肤组织中的阳性表达率72.7%（16/22）；而EGFR和GLI1在眼睑基底细胞癌组织中阳性表达率分别为72.7%（40/55）及70.9%（39/55），均高于在癌旁正常皮肤组织中的阳性表达率31.8%（7/22）、27.3%（6/22）：差异均有统计学意义（ χ2=22.77、11.06、12.32， P值均<0.05）。（2）GLI1、EGFR、LRIG1表达在不同性别、不同年龄及不同肿块大小的患者间差异均无统计学意义（ P值均>0.05）。（3）Spearman相关分析表明，55例眼睑基底细胞癌组织中，LRIG1表达分别与EGFR、GLI1表达呈负相关（ r=-0.279， P=0.039； r=-0.306， P=0.023）；EGFR表达与GLI1表达呈正相关（ r=0.499， P<0.001）。 结论:EGFR及GLI1在眼睑基底细胞癌组织中均呈高表达，LRIG1呈低表达并分别与两者呈负相关；EGFR及GLI1蛋白可能会导致眼睑基底细胞癌的发生和发展，而LRIG1对癌症的发生发展可能起抑制作用。

目的:观察转移性肾透明细胞癌(m-ccRCC)在经过舒尼替尼治疗后，行肾癌切除术后癌组织中胶质瘤相关癌基因同源物-2(GLI-2)的表达对预后的影响。方法:选取2016年1月至2018年12月期间就诊于我院的43例m-ccRCC患者，接受舒尼替尼治疗后行肾癌切除术，应用免疫组织化学法检测肾癌组织中GLI-2、舒尼替尼靶向分子[血管内皮生长因子受体(VEGFR)-1和VEGFR-2]和C反应蛋白(CRP)的表达。应用Kaplan-Meier分析其表达与预后的关系。应用蛋白质印迹法(Western blot)和定量聚合酶链反应(qPCR)检测舒尼替尼耐药细胞株(786-O-R)和亲本细胞株(786-O)中蛋白和mRNA的表达。分类变量采用 χ2检验。 结果:43例患者中，1例(2.33%)获得完全缓解(CR)，7例(16.28%)获得部分缓解(PR)，总体有效率为18.60%；单因素分析发现核分级、GLI-2、血管内皮生长因子(VEGF)-1、VEGFR-2和CRP水平是影响舒尼替尼治疗的无进展生存期的因素[风险比( HR)＝2.650、3.770、2.850、2.970、2.660， P<0.05)，多因素分析发现，GLI-2是影响舒尼替尼治疗的无进展生存期的因素( HR＝4.180， P<0.05)；亲本细胞株(786-O)中GLI-2的表达显著低于舒尼替尼抗性细胞株(786-O-R)。 结论:GLI-2可能参与了m-ccRCC对舒尼替尼形成耐药的过程。

下颌骨的发育来源及发育过程均与全身其他骨骼有着显著差异,其发育异常会导致各种骨相关疾病,严重影响了患者的生活质量.近年来Hedgehog信号通路在骨骼发育过程中的作用越来越受到关注.Hedgehog基因包括Sonic Hedgehog(Shh)、Indian Hedgehog(Ihh)和Desert Hedgehog(Dhh)3种亚型,其中Shh及Ihh可通过多种途径参与骨代谢调节,Shh主要参与肢体发育过程,而Ihh主要是在软骨内成骨过程中发挥关键作用.Hedgehog信号通路包括Hedgehog信号蛋白配体、Patched(Ptch)受体、Smoothed(Smo)受体、核内转录因子神经胶质瘤相关癌基因同源蛋白(glioma-associated oncogene homologue,Gli)和下游靶基因等.典型Hedgehog信号通路由Gli激活调控,而非典型Hedgehog信号主要由Ptch、Smo等调控.Shh在早期脊椎动物胚胎形成过程中调控多种生物学行为,如器官的分化、神经干的形成、干细胞的分化增殖、四肢骨骼发育以及牙胚发育等;在骨细胞分化过程中,Shh、Ptch1和Gli1在成骨细胞中均有表达,进一步促进骨髓间充质干细胞向成骨细胞和软骨细胞分化.Ihh对骨骼生长发育以及稳态维持具有不可或缺的功能作用,参与膜内骨领的形成、软骨细胞的增殖和成熟,Ihh在成熟的颅骨成骨细胞中表达,其可作为促成骨因子调控Ptch和骨形态发生蛋白(bone morphogenetic protein,BMP)的表达来诱导膜内骨化过程;脑和肌肉ARNT样蛋白1(brain and muscle ARNT-like 1,BMAL1)可通过与Ptch1和Ihh结合,调节Hedgehog信号通路,在颞下颌关节的软骨形成和软骨内成骨过程中发挥关键作用;而Hedgehog信号激活剂可以改善由BMAL1缺失引起的下颌骨骨量减少.Hedge-hog信号失调会对骨发育过程产生重大影响,并导致一系列骨疾病如骨发育异常、骨折、骨质疏松和骨关节炎.然而,Hedgehog信号通路与下颌骨疾病的相关作用机制尚未完全阐明,未来研究可进一步探讨Hedgehog信号作为治疗下颌骨发育相关疾病的潜在靶点.

目的 探究四神煎对膝骨关节炎大鼠关节软骨的保护作用及其可能的作用机制.方法 40只大鼠分为假手术组、模型组、四神煎低剂量组及高剂量组,每组10只.分组后灌胃给药,每天1次,连续6周.采用HE染色检查膝关节组织形态学变化;采用Micro-CT检测软骨下骨的结构情况并对骨小梁形态学参数进行分析;用qPCR分析各组软骨组织中音猬因子(Shh)、神经胶质瘤相关癌基因同源物1(Gli1)及II型胶原蛋白(Collagen II)的mRNA表达变化.结果 HE染色结果表明,模型组整体染色欠均匀,关节软骨表面破坏明显,且具有明显裂隙,软骨层变薄,软骨数量减少,软骨细胞分布排列紊乱,各层次界限不清晰,潮线明显不规则紊乱,而四神煎低剂量及高剂量组较模型组均有改善.Micro-CT显示模型组关节面破坏严重伴骨赘形成,软骨下骨骨量明显减少,四神煎低剂量及高剂量组均较之改善;与模型组比较,四神煎高剂量组大鼠骨小梁数量(Tb.N)、骨体积分数(BV/TV)、骨小梁厚度(Tb.Th)、软骨组织中Collagen II的mRNA表达量显著增加(P＜0.05),Shh、Gli1的mRNA表达量明显下降(P＜0.001).结论 四神煎对膝骨关节炎大鼠关节软骨具有保护作用,其作用机制可能与抑制Hedgehog信号通路调控Collagen II的表达有关.

目的:探究miR-130a-5p靶向Runt相关转录因子2(Runt-related transcription factor 2,Runx2)对牙槽骨成骨细胞(Alveolar osteoblast,AOB)增殖、凋亡、成骨分化的影响及其机制.方法:将AOB分为NC组、miR-NC组、miR-130a-5p组、miR-130a-5p+Runx2组和miR-130a-5p+SHH组.双荧光素酶报告验证miR-130a-5p对Runx2、Sonic hedgehog(SHH)的调控关系;CCK-8及EdU染色检测细胞增殖能力;AnnexinV-FITC/PI法检测细胞凋亡能力;ALP染色、茜素红染色检测细胞成骨分化能力;RT-qPCR检测miR-130a-5p、Runx2、SHH、神经胶质瘤关联癌基因同源物1(Gli1)mRNA水平;Western Blot检测增殖细胞核抗原(Proliferating cell nuclear antigen,PCNA)、Ki67、B细胞淋巴瘤/白血病-2(B-cell lymphoma/leukemia-2,Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bcl-2 related X protein,Bax)、碱性磷酸酶(Alkaline phosphatase,ALP)、骨钙素(Osteocalcin,OCN)、骨形态发生蛋白2(Bone morphogenetic protein 2,BMP2)、Runx2、SHH、Gil1水平.结果:miR-130a-5p靶向调控Runx2、SHH.过表达miR-130a-5p后,细胞24 h、48 h、72 h OD值及EdU阳性率降低,细胞凋亡率升高,成骨分化能力降低,miR-130a-5p、Bax蛋白水平升高,Runx2、PCNA、Ki67、Bcl-2、ALP、OCN、BMP2蛋白及SHH、Gil1 mRNA和蛋白水平均降低(P＜0.05).过表达miR-130a-5p和Runx2或过表达miR-130a-5p和SHH可减弱过表达miR-130a-5p对细胞增殖、凋亡、成骨分化的影响.结论:miR-130a-5p靶向Runx2抑制AOB增殖和成骨分化,并促进AOB凋亡,其可能通过抑制SHH信号通路发挥作用.

目的 比较幽门螺旋杆菌(Helicobacter pylori,Hp)感染与非Hp感染的慢性萎缩性胃炎(Chronic atrophic gastritis,CAG)患者胃黏膜病理状态与刺猬蛋白-细胞表面受体Ptch-G蛋白偶联受体样蛋白Smo-胶质瘤相关癌基因同源蛋白Gli(Hedgehog信号通路,Hh-Ptch-Smo-Gli)及烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶/核因子κB/转录信号转导子和转录活化子1(NOX/NF-κB/STAT1)信号通路相关因子表达差异,探究Hp促进CAG"炎癌转化"的生物学机制.方法 纳入符合标准的43名CAG患者,分为CAG伴Hp感染组(Hp+CAG组,n=21)、CAG不伴Hp感染组(Hp-CAG组,n=22),观察两组患者胃黏膜苏木精-伊红(HE)染色组织形态学改变,采用蛋白质免疫印迹(Western blot)检测胃黏膜NOX1、NOX2、NOX4、STAT1、P65、p-P65相对表达量;实时荧光定量PCR(RT-qPCR)技术检测胃黏膜胶质瘤相关癌基因同源蛋白1 mRNA(Gli1 mRNA)、胶质瘤相关癌基因同源蛋白2 mRNA(Gli2 mRNA)、胶质瘤相关癌基因同源蛋白3 mRNA(Gli3 mRNA)、音猬因子mRNA(Shh mRNA)、G蛋白偶联受体样蛋白mRNA(Smo mRNA)、细胞表面受体Ptch mRNA(Ptch mRNA)、烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶1 mRNA(NOX1 mRNA)、烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶2 mRNA(NOX2 mRNA)、烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶4 mRNA(NOX4 mRNA)、核因子κB mRNA(NF-κB mRNA)水平.结果 两组患者胃组织HE染色结果:Hp+CAG组患者胃黏膜上皮细胞部分坏死脱落,表面欠光整,腺体数量减少,排列紊乱,可见肠上皮化生,固有层内可见弥漫性淋巴细胞、中性粒细胞浸润;Hp-CAG组患者淋巴细胞和中性粒细胞浸润程度较Hp+CAG组轻.RT-qPCR检测结果:与Hp-CAG组相比,Hp+ CAG组患者胃黏膜Gli1 mRNA、Shh mRNA、Smo mRNA、Ptch mRNA水平显著降低(P<0.01);Gli2 mRNA、Gli3 mRNA、NOX1 mRNA、NOX2 mRNA、NOX4 mRNA、NF-κB mRNA水平显著增高(P<0.01).Western blot检测结果:与Hp-CAG组相比,Hp+CAG组患者胃黏膜NOX1/GAPDH(内参)、NOX2/GAPDH、NOX4/GAPDH、p-P65/GAPDH相对表达量明显增高(P<0.01),STAT1水平显著降低(P<0.01),两组P65/GAPDH相对表达量的差异没有统计学意义(P>0.05).结论 Hp感染后可能通过抑制Hh-Ptch-Smo-Gli信号通路,并使NOX/NF-κB/STAT1信号通路异常活化,导致胃黏膜长期炎症,促进萎缩及肠上皮化生,增加癌变风险.

目的 基于小窝蛋白1(caveolin-1,Cav1)/音猬因子(sonic hedgehog,Shh)信号通路探讨补阳还五汤对脑缺血后星形胶质细胞转分化的作用机制.方法 雄性C57BL/6小鼠随机分为假手术组、模型组及补阳还五汤低、中、高剂量(9.25、18.50、39.00 g/kg)组和丁苯酞(54mg/kg)组,除假手术组外,其余各组采用大脑中动脉栓塞(middle cerebral artery occlusion,MCAO)法复制脑缺血模型,给予药物干预21 d后,采用神经行为学评分、苏木素-伊红染色及免疫组化评估补阳还五汤疗效.随后将雄性野生(WT)小鼠及Cav1-/-(KO)小鼠分别随机分为假手术组、模型组和补阳还五汤(18.5g/kg)组,造模前7d予以脑内注射GFAP-EGFP腺相关病毒,采用MCAO法制备脑缺血模型,给予药物干预21 d.采用免疫荧光检测缺血侧皮质区星形胶质细胞转分化情况,Western blotting法检测缺血侧皮质区Shh、平滑同源物(smootened,Smo)及神经胶质瘤关联癌基因同源物1(glioma associated oncogene homolog 1,Gli1)的蛋白表达,qRT-PCR法检测神经分化因子acoete-scute同系物 1(achaete-scute complex homolog 1,Ascl1)、神经源性分化因子 1(neurogenic differentiation 1,NeuroD1)、神经源性分化因子 2(neurogenic differentiation 2,NeuroD2)、神经元素 1(neurogenin-1,Ngn1)、神经元素 2(neurogenin-2,Ngn2)及配对盒基因2(paired box gene 2,Pax2)的表达.结果 与模型组比较,补阳还五汤各剂量组及丁苯酞组的神经行为学评分显著降低(P＜0.05、0.01),缺血侧皮质区病理损伤明显改善,NeuN表达明显上升(P＜0.05、0.01).此外,补阳还五汤低剂量组和补阳还五汤中剂量组的神经行为学评分及NeuN的表达有显著差异(P＜0.01),而补阳还五汤中、高剂量组及丁苯酞组之间无明显差异.与同基因型模型组比较,WT、KO补阳还五汤组小鼠缺血侧皮质区EGFP-NeuN共定位明显增加(P＜0.01),Shh、Smo 及 Gli1 蛋白表达明显上升(P＜0.05、0.01),神经分化因子 Ascl1、NeuroD1、NeuroD2、Ngn1、Ngn2及Pax2表达明显上升(P＜0.05、0.01).与WT模型组及WT补阳还五汤组比较,KO模型组及KO补阳还五汤组小鼠缺血侧皮质EGFP-NeuN共定位明显下降(P＜0.01),Shh、Smo及Gli1蛋白表达明显下降(P＜0.05),神经分化因子Ascl1、NeuroD1、NeuroD2、Ngn1、Ngn2及Pax2表达明显下降(P＜0.05、0.01).结论 补阳还五汤能够促进脑缺血后星形胶质细胞向神经元转分化,其作用机制可能与通过Cav1调控Shh信号通路,上调各神经分化因子的表达有关.

目的 探究微小RNA-92a(miR-92a)调控音猥因子(SHH)途径对心肌缺血再灌注(I/R)损伤后促血管再生的影响及机制.方法 从1～3 d龄SD大鼠中培养原代心肌细胞后建立心肌细胞缺氧/复氧模型,将其分成心肌细胞常氧培养组和心肌细胞I/R组.miR-92a模拟物(mimic)和拮抗剂(inhibitor)转染入大鼠原代心肌细胞,使miR-92a过表达或低表达,分成对照组、I/R组、miR-92a mimic组和miR-92a inhibitor组.细胞计数法8测 定各组细胞活力,流式细胞仪检测各组细胞凋亡率,ELISA和QT-PCR测定血管内皮生长因子、碱性成纤维细胞生长因子和血管生成素1等血管新生因子表达,Western blot法测定SHH信号通路蛋白表达.结果 心肌细胞I/R组miR-92a表达显著高于心肌细胞常氧培养组(3.89±0.29 vs 1.53±0.19,P＜0.01).对照组、miR-92a inhibitor组、I/R 组和 miR-92a mimic 组 SHH 蛋白(0.57±0.13 vs 0.51±0.11 vs 0.24±0.03 vs 0.14±0.02,P＜0.01)、Smooth-ened 蛋白(0.53±0.12 vs 0.49±0.10 vs 0.14±0.04 vs 0.09±0.01,P＜0.01)、神经胶质瘤相关癌基因同源蛋白 1(0.56±0.14 vs 0.50±0.13 vs 0.15±0.03 vs 0.08±0.01,P＜0.01)和神经胶质瘤相关癌基因同源蛋白 2(0.58±0.11 vs 0.49±0.12 vs 0.18±0.02 vs 0.11±0.03,P＜0.01)比较差异有统计学意义.结论 miR-92a在心肌I/R损伤中异常高表达,抑制miR-92a表达可激活SHH信号通路有效促进血管再生因子表达.