目的:探讨p16 INK4a免疫细胞化学染色（p16 INK4a染色）作为新一代子宫颈细胞学检查技术在人群子宫颈癌初筛与辅助常规细胞学检查及高危型（HR）-HPV初筛后的二次筛查中的价值。 方法:募集2016—2018年深圳及周边地区25~65岁有性生活的非妊娠期妇女5 747例，采用HR-HPV联合子宫颈液基细胞学检查（LCT）进行子宫颈癌初筛；并行p16 INK4a染色，其中902例在初筛的同时进行p16 INK4a染色，其余4 845例为HR-HPV与LCT初筛阳性回叫行阴道镜检查时取样进行p16 INK4a染色。将具有完整LCT检查、HR-HPV检测、p16 INK4a染色及子宫颈活检后病理诊断结果者纳入本研究。以组织学病理诊断为“金标准”，评价p16 INK4a染色作为子宫颈癌初筛、辅助LCT检查及HR-HPV初筛后的二次分流方案检出子宫颈病变［即高级别鳞状上皮内病变（HSIL）］，包括HSIL［子宫颈上皮内瘤变（CIN）Ⅱ］及以上级别病变［HSIL（CIN Ⅱ） +］、HSIL（CIN Ⅲ）及以上级别病变［HSIL（CIN Ⅲ） +］的筛查效率。 结果:（1）具有完整LCT检查、HR-HPV检测、p16 INK4a染色及子宫颈活检病理诊断结果者共1 097例，纳入本研究。病理诊断：正常子宫颈995例，低级别鳞状上内病变（LSIL）37例、HSIL 64例及子宫颈癌1例，其中HSIL（CIN Ⅱ） + 65例，HSIL（CIN Ⅲ） + 34例。HSIL（CIN Ⅱ） +患者的p16 INK4a阳性率（89.2%，58/65）显著高于CINⅠ或正常子宫颈者（10.2%，105/1 032； P<0.01）。（2）p16 INK4a染色作为初筛方案：与HR-HPV检测比较，p16 INK4a染色检出HSIL（CIN Ⅱ） +、HSIL（CIN Ⅲ） +的敏感度均无显著差异（95.4%与89.2%，94.1%与94.1%； P>0.05），但其特异度均显著增高（82.5%与89.8%，80.2%与87.7%； P<0.05）；而与LCT结果≥LSIL比较，p16 INK4a染色检出HSIL（CIN Ⅱ） +、HSIL（CIN Ⅲ） +的敏感度、特异度均无显著差异（ P>0.05）。（3）p16 INK4a染色辅助LCT检查：与单独LCT检查或HR-HPV检测辅助LCT检查比较，p16 INK4a染色辅助LCT检查检出HSIL（CIN Ⅱ） +、HSIL（CIN Ⅲ） +的特异度均显著增高（ P<0.01），而敏感度均无显著差异（ P>0.05）。（4）p16 INK4a染色作为二次分流方案：HR-HPV初筛后以p16 INK4a阳性作为二次分流指标与LCT结果≥ASCUS作为二次分流指标比较，检出HSIL（CIN Ⅱ） +、HSIL（CIN Ⅲ） +的敏感度均无显著差异（84.6%与90.8%，88.2%与91.2%； P>0.05），而特异度均有显著差异（94.1%与89.7%，91.9%与87.4%； P<0.01）；作为二次分流方案，HPV 16和（或）18型（HPV 16/18型）阳性与p16 INK4a阳性序贯的方案，HPV 16/18型阳性与LCT结果≥ASCUS序贯的方案，两种方案比较，检出HSIL（CIN Ⅲ） +的敏感度无显著差异（分别为88.2%、94.1%， P=0.500），而前者的特异度显著增高（分别为88.3%、83.0%， P<0.01），且前者的阴道镜转诊率显著降低（分别为14.0%、19.4%， P=0.005）。 结论:p16 INK4a染色作为子宫颈癌初筛方案检出子宫颈病变的敏感度与HR-HPV检测相当、特异度与LCT检查相当；且在HR-HPV阳性患者的二次分流中具有优势，并可辅助LCT检查进行诊断分级，提高了子宫颈细胞学筛查的准确率。

目的:评价真实世界中哌柏西利治疗激素受体(HR)阳性晚期乳腺癌的疗效和安全性。方法:回顾性分析南京医科大学第一附属医院2018—2020年接受哌柏西利联合内分泌治疗的66例HR阳性复发转移性乳腺癌患者的临床资料。生存分析采用Kaplan－Meier法和Log rank检验，多因素分析采用Cox回归模型，构建预测哌柏西利治疗HR阳性乳腺癌疾病进展风险的列线图模型，使用一致性指数(C－index)和校准曲线进行内部验证评估模型的预测能力和符合度。结果:66例患者中，复发转移后未经内分泌治疗、一线内分泌治疗、二线及以上内分泌治疗的患者分别占33.3% (22例)、42.4% (28例)、24.2% (16例)；肝转移者占36.4% (24例)；内分泌敏感患者占16.7%(11例)，原发内分泌耐药患者占27.3%(18例)，继发性内分泌耐药患者占56.1%(37例)。全组患者客观有效率为14.3%(95% CI：6.7%~25.4%)，临床获益率为58.7%(95% CI：45.6%~71.0%)。非肝转移( P＝0.001)、内分泌治疗敏感/继发耐药( P＝0.004)、复发转移后未行化疗或仅行一线化疗( P＝0.004)、哌柏西利治疗前最近一次免疫组化时间<3个月( P＝0.025)与更好的预后有关，肝转移( P＝0.005)及内分泌原发耐药( P＝0.016)是哌柏西利治疗后患者中位无进展生存时间(PFS)的独立危险因素。患者的临床特征(是否肝转移、是否内分泌原发耐药、转移后化疗线数、内分泌治疗线数、转移部位数目、最近一次免疫组化的时间)构建的列线图模型预测患者6个月和12个月无进展生存概率的C－index分别为69.7%和72.1%。哌柏西利相关的主要不良反应为血液学不良反应。 结论:哌柏西利联合内分泌治疗HR阳性复发转移性乳腺癌疗效确切，安全性良好；肝转移和内分泌原发耐药的患者疗效欠佳，且是哌柏西利治疗后疾病进展的独立危险因素；预测哌柏西利治疗HR阳性乳腺癌疾病进展风险的列线图模型可用于辅助临床决策。

目的:探讨集落刺激因子1受体（colony-stimulating factor 1 receptor，CSF-1R）抑制剂培西达替尼（pexidartinib，PLX3397）对脂多糖（lipopolysaccharide，LPS）刺激下的骨髓来源巨噬细胞（bone marrow-derived macrophages，BMDM）衰老的调节作用。方法:从10只6~8周龄雄性C57BL/6小鼠（贵州医科大学实验动物中心获取）的股骨和胫骨分离、培养BMDM，将BMDM分为空白对照组、LPS组（1 μg/ml LPS处理24 h）和低、中、高浓度PLX3397预处理组（分别给予100、500和1 000 nmol/L PLX3397处理4 h后，再以1 μg/ml LPS处理24 h），采用细胞计数（cell counting kit-8，CCK-8）试剂盒检测细胞活力；通过衰老相关β-半乳糖苷酶（senescence-associated-β-galactosidase，SA-β-gal）染色检测细胞衰老；蛋白质印迹法检测细胞周期依赖性激酶抑制因子p16、p21和CSF-1R的蛋白表达；细胞免疫荧光法检测p16、p21在细胞内的表达；实时定量PCR（real-time fluorescence quantitative PCR，RT-qPCR）检测衰老相关分泌表型（senescence-associated secretory phenotype，SASP）因子包括白细胞介素（interleukin，IL）、趋化因子1/10（chemokine-1/10，CXCL-1/10）、基质金属蛋白酶8（matrix metalloproteinase-8，MMP-8）、转化生长因子-β（transforming growth factor-β，TGF-β）的mRNA表达。结果:中、高浓度PLX3397预处理组SA-β-gal染色阳性细胞率［分别为（39.33±4.93）%、（36.33 ±3.06）%］均较LPS组［（52.00±3.00）%］显著下调（ P=0.020， P=0.005）；低、中、高浓度PLX3397预处理组CSF-1R的蛋白表达（分别为0.74±0.18、0.61±0.07、0.54±0.06）均较LPS组（1.16±0.08）显著下调（ P=0.013， P=0.002， P<0.001）；低、中、高浓度PLX3397预处理组CSF-1R的mRNA表达（分别为1.04±0.06、0.90±0.05、1.18±0.08）均较LPS组（2.90±0.25）显著下调（ P<0.001）；低、中、高浓度PLX3397预处理组p16平均荧光强度（分别为49.76±3.65、48.21±1.72、47.99±1.26）均显著低于LPS组（66.88±5.85）（ P=0.001， P<0.001， P<0.001）；中、高浓度PLX3397预处理组p21平均荧光强度（分别为34.43±3.62、30.13±0.86）均较LPS组（46.82±5.33）显著下调（ P=0.043， P=0.007）；低、中、高浓度PLX3397预处理组p16蛋白表达（分别为0.56 ±0.04、0.55 ±0.04、0.35 ±0.19）均较LPS组（0.98±0.10）显著下调（ P=0.003， P=0.002， P<0.001）。低、中、高浓度PLX3397预处理组p21蛋白表达（分别为0.69±0.20、0.42±0.08、0.26±0.14）均较于LPS组（1.16 ±0.24）显著降低（ P=0.032， P=0.002， P<0.001）。RT-qPCR结果显示，与LPS组相比，PLX3397预处理组IL-6、IL-1β、CXCL-1、CXCL-10、MMP-8的表达均显著降低（ P<0.001），TGF-β mRNA表达水平显著升高（ P<0.001）。 结论:LPS可通过激活BMDM表面CSF-1R诱发细胞衰老，分泌SASP因子，加重局部炎症反应；CSF-1R抑制剂PLX3397可减弱LPS关联的CSF-1R激活，抑制LPS诱导的BMDM衰老。

目的 在细胞学诊断为未明确诊断意义的不典型鳞状上皮细胞(ASCUS)、低级别鳞状上皮内病变(LSIL)、不除外高度病变的不典型鳞状上皮细胞(ASC-H)的患者中,评价免疫细胞化学p16/细胞增殖相关核抗原(Ki-67)双染色法对其中高级别子宫颈病变[包括子宫颈上皮内瘤变(CIN)Ⅱ、CINⅢ]的筛查效能,并分析p16/Ki-67双染色法对于ASCUS、LSIL、ASC-H患者分流的意义.方法 收集2015年10月-2016年3月在北京大学第一医院妇科门诊就诊的液基薄层细胞学检查(TCT)结果为ASCUS、LSIL、ASC-H的患者共251例,对其子宫颈脱落细胞分别行p16/Ki-67双染色法检测、高危型HPV(HR-HPV)检测[采用第2代杂交捕获技术(HC-Ⅱ)检测HR-HPV DNA],并行阴道镜活检组织的病理检查,以组织学病理诊断为“金标准”,采用敏感度、特异度、阳性预测值、阴性预测值和受试者工作特征(ROC)曲线下面积比较p16/Ki-67双染色法和HR-HPV检测的筛查效能.结果 (1)251例患者的子宫颈脱落细胞中,p16/Ki-67双染色的总阳性率为21.1％(53/251).其中,细胞学诊断为ASCUS患者的子宫颈脱落细胞中p16/Ki-67双染色的阳性率为13.9％ (15/108),LSIL患者为21.6％(22/102),ASC-H患者为39.0％(16/41),3者比较,差异有统计学意义(x2=78.516,P＜0.05);阴道镜活检后病理诊断为低级别子宫颈病变(包括正常子宫颈、CINⅠ)患者的子宫颈脱落细胞中p16/Ki-67双染色的阳性率为13.0％(28/215),高级别子宫颈病变患者为69.4％(25/36),两者比较,差异有统计学意义(x2=7.932,P＜0.05).(2)以阴道镜活检后的病理诊断为“金标准”,在细胞学诊断为ASCUS、LSIL、ASC-H的患者中,p16/Ki-67双染色法筛查高级别子宫颈病变的特异度(分别为89.8％、83.3％、88.9％)及阳性预测值(分别为33.3％ 、31.8％、81.3％)均明显高于HR-HPV检测(特异度分别为71.4％、15.6％、40.7％,阳性预测值分别为26.3％、12.6％、38.5％;P均＜0.05),其受试者工作特征(ROC)曲线下面积(分别为0.799、0.708、0.909)也均明显大于HR-HPV检测(分别为0.696、0.531、0.561;P均＜0.05).结论 对于细胞学诊断为ASCUS、LSIL、ASC-H的患者,p16/Ki-67双染色法可作为筛查其高级别子宫颈病变的有效检测手段,其筛查效能明显优于HR-HPV检测.

目的:探讨胰腺癌中E3泛素连接酶亚单位Ring1B、组蛋白赖氨酸特异性去甲基化酶1(LSD1)及细胞周期调节因子P16表达与及其与患者预后的关系.方法:用免疫组化法检测85例胰腺癌患者手术标本(癌组织与癌旁组织)中LSD1、Ring1B与P16蛋白的表达及分布,并选取其中6对癌组织和癌旁组织,用qRT-PCR和Western blot法检测mRNA和蛋白表达;分析三者在胰腺癌组织中表达的相关性,及其与患者生存的关系.结果:免疫组化结果显示,Ring1B与LSD1蛋白主要表达于细胞浆,P16主要表达于胞核;Ring1B与LSD1在胰腺癌组织中表达明显高于癌旁组织,而P16的表达明显低于癌旁组织(均P＜0.05);在胰腺癌组织中Ring1B、LSD1的表达与P16的表达均呈负相关(r=-476;r=-0.673,均P＜0.05).qRT-PCR结果显示,胰腺癌组织中Ring 1B和LSD1的mRNA的平均相对表达量均明显高于癌旁组织(8.908vs.1.947;7.126 vs.1.940,均P＜0.05),P16的mRNA的平均相对表达量明显低于癌旁组织(1.269vs.5.237,P＜0.05);Western blot结果显示,三者的蛋白表达趋势与mRNA表达一致.生存分析显不,Ring1B、LSD1高表达患者生存率均分别低于其低表达患者(x 2=8.958,P=0.012;x 2=8.856,P=0.010),而P16高表达患者生存率高于其低表达患者(x 2=7.867,P=0.024).结论:胰腺癌组织中Ring 1B与LSD1表达升高,P16表达降低;Ring1B、LSD1可能分别通过组蛋白泛素化和去甲基化调控P16的表达,从而影响胰腺癌预后.

血液系统恶性肿瘤系突变的造血干细胞或前体祖细胞过度增殖,而正常造血系统被破坏的一组恶性肿瘤.正常细胞增殖受细胞周期依赖性蛋白激酶(CDK)严格调控,这些激酶不仅在细胞周期中发挥重要作用,还参与造血干细胞的自我更新与分化、表观遗传调节及DNA损伤修复等细胞活动.对于CDK基因敲除小鼠的研究发现,CDK表达缺失与肿瘤发生相关,而其染色体易位、基因突变引起的CDK表达改变均在肿瘤发生、发展中起作用,这也使更多的肿瘤研究聚焦在CDK及其靶向药物抑制剂的研究方面.细胞周期蛋白(cyclin)D可以与CDK形成CDK4/6-cyclin D复合体,参与造血干细胞细胞周期的调控.笔者拟就CDK、cyclin D及CDK4/6-cyclin D复合体在正常造血及血液系统恶性肿瘤的作用机制,以及CDK4/6靶向抑制剂在血液系统恶性肿瘤治疗中的应用的最新研究进展进行综述.

目的 基于短串联重复序列(short tandem repeat,STR)基因分型技术在葡萄胎与非葡萄胎妊娠鉴别诊断中的应用,侧重探讨其在非葡萄胎妊娠诊断中的应用价值及非葡萄胎妊娠的组织学特征.方法 收集北京妇产医院病理科2015年7月至2017年9月临床水肿性流产和/或葡萄胎可疑的流产组织样本656例.应用Simplex OUPTM FFPE DNA组织提取试剂盒提取核酸DNA.基因分型选用PowerPlex 16 HS试剂盒.结果 本研究中成功进行STR分析的有649例,包括葡萄胎妊娠215例和非葡萄胎妊娠434例.非葡萄胎妊娠中二倍体流产占大多数(375例,86.4％),各类三体共计53例(12.2％;包括2?、3?、4?、7?、8?、13?、16?、18?和21?三体),双雌单雄三倍体2例(0.5％),包括4例(0.9％)罕见的单亲同二倍体和单亲异二倍体.对组织形态学疑似葡萄胎的196例样本,经过STR分析得以精确诊断并分型.其中,59例葡萄胎低诊断为二倍体流产,28例二倍体流产过诊断为葡萄胎.将各种类型非葡萄胎妊娠的组织形态学特征与部分性葡萄胎对比分析,发现组织学特征基本无差异;此外,p57kip2蛋白表达在部分性葡萄胎组、三体组及二倍体水肿性流产组中差异无统计学意义(P=0.247).结论 STR分子分型技术解决了非葡萄胎妊娠与早期葡萄胎的鉴别难题,纠正了形态组织学的错误诊断,避免了非葡萄胎妊娠的过诊断问题,并通过分子分型为指导患者的个体化处置方案提供帮助.

目的：探索 miR-125a-5P 在髓母细胞瘤表皮生长因子受体（EGFR）信号通路中的调控机制。方法利用 TargetScan 和 Sanger 软件在 EGFR 信号通路中预测 miR-125a-5P 的潜在靶点，脂质体介导细胞基因转染，共分3组：对照组、无义组和 miR-125a-5P 组。荧光素酶实验验证 miR-125a-5P 与细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂-2B（CDKN2B）、E2F 转录因子3（E2F3）、丝裂原活化蛋白激酶-14（MAPK14）和生长因子受体结合蛋白-10（GRB10）间的靶矢关系；转染髓母细胞瘤 D341细胞 miR-125a-5p 寡核苷酸，反转录聚合酶链反应检测D341细胞中 miR-125a-5p 的表述水平，噻唑蓝法绘制细胞生长曲线，Transwell 实验检测瘤细胞迁移能力， Western blot 法检测 GRB10、EGFR、磷脂酰肌醇-3-羟基激酶（PI3K）和 Ras 的蛋白表达水平。结果荧光素酶实验结果显示，GRB10是所检测基因中唯一的 miR-125a-5P 靶基因；获得 miR-125a-5P 转染后 D341细胞增殖速度减慢。miR-125a-5P 组的细胞迁移率与对照组[（38.16±7.47）％]和无义组[（36.79±8.94）％]比较， miR-125a-5P 组最低[（13.59±4.41）％]，3组间比较有统计学差异（χ2＝11.495，P 约0.05）。miR-125a-5P 转染可致 EGFR 蛋白表达水平升高1.67倍，GRB10、PI3K 和 Ras 的水平分别降低至23％、61％和42％。结论miR-125a-5P 通过靶向沉默GRB10的表达抑制髓母细胞瘤EGFR 下游信号通路，发挥肿瘤生长抑制作用。

目的 研究术前新辅助化疗对宫颈癌患者手术切除病灶内恶性分子表达的影响.方法 选择2015年3月—2017年6月期间在南方医科大学附属小榄医院妇产科诊断为Ⅰb2和Ⅱa2期宫颈癌患者118例,随机数字表法分为2组各59例,试验组接受新辅助化疗联合手术切除,对照组直接接受手术切除治疗.取手术切除的宫颈癌组织,测定促增殖分子[Ki-67、人细胞周期相关激酶(CCRK)、细胞周期蛋白B1(CyclinB1)、细胞周期蛋白依赖性激酶1(CDK1)、Polo样激酶1(Plk1)、生成素(Survivin)]、抑癌基因[多亮氨酸重复区免疫球蛋白样蛋白1(LRIG1)、p16基因、真核起始因子4E3(eIF4E3)、N-myc下游调节基因4(NDRG4)、Ras相关结构域因子2A(RASSF2A)、增强子结合蛋白1(Ebp1)]及侵袭基因[β-连环蛋白(β-catenin)、基质金属蛋白酶-8(MMP-8)、解聚素—金属蛋白酶19(ADAM19)、金属蛋白酶组织抑制剂1(TIMP1)、E-钙黏蛋白(E-cadherin)]的表达量.结果 试验组患者的宫颈癌病灶内促增殖分子Ki-67、CCRK、CyclinB1、CDK1、Plk1、Survivin和促侵袭基因β-catenin、MMP8、ADAM19的mRNA表达量显著低于对照组(t=22.019、26.009、15.096、21.991、26.727、14.592、14.309、21.111、18.154,P=0.000),抑癌基因LRIG1、p16、eIF4E3、NDRG4、RASSF2A、Ebp1和侵袭基因TIMP1、E-cadherin的mRNA表达量显著高于对照组(t=19.018、18.706、16.997、20.411、25.332、20.446、22.476、20.289,P=0.000).结论 术前新辅助化疗能够抑制宫颈癌病灶内促增殖分子及促侵袭基因的表达,促进抑癌基因及侵袭抑制基因的表达.

目的 探讨肝细胞肝癌(HCC)患者血清中癌基因、抑癌基因的表达水平及其临床意义.方法 选择2017年8月至2018年9月经临床确诊的肝病患者135例作为研究对象,其中肝癌组为HCC患者55例、良性组80例(急性肝炎患者20例、慢性肝炎患者20例、肝硬化代偿期患者20例、肝硬化失代偿期患者20例);对照组为同期健康体检人员20例.采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测各研究对象血清中癌基因〔包括增殖相关基因(C-myc)、转化基因(N-ras)、丝/苏氨酸激酶(PLK)1、成纤维细胞生长因子(FGF)2〕、抑癌基因〔细胞周期依赖性蛋白激酶抑制剂(P16)、清道夫受体(SCAR)A5、铁调素(Hepcidin)〕的蛋白含量.结果 与对照组比较,癌基因C-myc、N-ras、PLK1、FGF2在良性组和肝癌组均明显升高且三组间差异有统计学意义(P<0.05);抑癌基因P16、SCARA5、Hepcidin在良性组和肝癌组均明显降低且三组间差异有统计学意义(P<0.05).结论 HCC患者血清中癌基因的上调、抑癌基因的下调揭示了HCC的部分发病机制,为HCC的早期诊断、治疗及设计相应治疗药物提供了有价值的想法和思路.