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海藻糖A抑制骨肉瘤细胞增殖信号通路的研究
编辑人员丨5天前
目的:探讨海藻糖A对骨肉瘤细胞增殖转移能力抑制作用及其机制。方法:将骨肉瘤细胞(上海传秋生物科技有限公司提供)分别分为4组。空白组细胞不使用药物干预,低、中、高剂量组细胞分别采用含0.25、0.50、1.00 μmol/L海藻糖A的培养基培养干预不同时间,检测细胞增殖、转移以及相关蛋白表达。然后分别在4组细胞中5.00 μmol/L转化生子因子-β(TGF-β)培养24 h再次检测细胞存活率、转移以及相关蛋白表达。采用方差检验及 t检验。 结果:空白组细胞增殖抑制率(0%)、转移抑制率(0%)显著低于药物干预组[(62.45±23.54)%、(84.15±20.10)%, t=14.111、7.959, P<0.05],差异有统计学意义,N-钙黏蛋白(N-cadherin)、编码锌指蛋白转录因子(Snail)、锌指转录因子(Slug)、波形蛋白(Vimentin)(100%、100%、100%、100%)表达量显著高于治疗组[低剂量组:(72.56±12.25)%、(65.34±10.56)%、(70.41±16.96)%、(71.45±18.96)%;中剂量组:(62.36±10.58)%、(53.47±9.85)%、(51.89±18.47)%、(42.47±9.56)%;高剂量组:(21.17±8.56)%、(19.19±5.56)%、(17.49±6.25)%、(10.77±3.25)%, t=8.246、9.163、8.035、7.441, P<0.05],差异均有统计学意义;各干预组细胞随着药物浓度升高存活率(15.25%、28.22%、39.45%)、转移抑制率显著升高(10.36%、18.45%、45.25%, t=8.644、8.603, P<0.05),差异有统计学意义,N-cadherin、Snail、Slug、Vimentin表达量显著下降。各组细胞在接受TGF-β干预后增殖抑制率和转移抑制率均显著下降,上述蛋白表达量显著升高。 结论:海藻糖A可以有效抑制骨肉瘤细胞增殖转移,其作用与抑制TGF-β/Smad2/3信号通路相关。
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编辑人员丨5天前
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海藻糖凝胶对大鼠全层皮肤缺损创面及兔耳瘢痕增生的影响
编辑人员丨5天前
目的:探讨海藻糖凝胶对大鼠全层皮肤缺损创面及兔耳瘢痕增生的影响。方法:该研究为实验研究。制备海藻糖凝胶和卡波姆凝胶,辐照灭菌后观察其外观并检测其粘度、成模率、阻菌率、重金属含量、保湿率、水蒸气透过率、无菌性等理化特性和细胞毒性、皮内刺激、致敏性等生物相容性。取30只8~10周龄雄性SD大鼠,按照随机数字表法分为实验组、阳性对照组、阴性对照组,每组10只。在阴性对照组、阳性对照组、实验组大鼠背部制备全层皮肤缺损创面模型,分别进行常规换药、卡波姆凝胶换药、海藻糖凝胶换药处理。统计伤后6、12 d创面愈合率并记录创面愈合时间。伤后6 d,采用透射电镜观测大鼠创面组织中自噬体和自噬溶酶体数量,采用酶联免疫吸附测定法检测大鼠创面组织中微管相关蛋白轻链3Ⅰ(LC3Ⅰ)和LC3Ⅱ含量并计算其比值,采用天狼星红-苦味酸染色法检测大鼠创面组织中Ⅰ型胶原蛋白、Ⅲ型胶原蛋白占比及其比值和总胶原蛋白占比。前述实验样本数均为5。取3只3~4个月龄雄性新西兰白化模型兔,在每侧兔耳各制备3个深达软骨膜的创面,同前进行分组和处理,每组6个创面。创面愈合后30 d,大体观察并使用温哥华瘢痕量表评估兔耳瘢痕情况,采用苏木精-伊红染色检测兔耳瘢痕组织中表皮和真皮的厚度,采用天狼星红-苦味酸染色检测兔耳瘢痕组织中Ⅰ型胶原蛋白、Ⅲ型胶原蛋白占比及其比值和总胶原蛋白占比及其排布情况。样本数为6。结果:辐照后的海藻糖凝胶和卡波姆凝胶均呈淡黄色透明状,无异味和杂质。海藻糖凝胶粘度、成膜率、阻菌率、保湿率均显著优于卡波姆凝胶( t值分别为4.13、3.50、4.03、5.80, P<0.05),但水蒸气透过率显著低于卡波姆凝胶( t=-4.14, P<0.05)。2种凝胶均未检出重金属和细菌。2种凝胶均无细胞毒性,皮内刺激和致敏性均为阴性。伤后6、12 d,阳性对照组大鼠创面愈合率均明显高于阴性对照组( t值分别为-6.82和-4.58, P<0.05),实验组大鼠创面愈合率均明显高于阳性对照组( t值分别为-8.90和-4.25, P<0.05)和阴性对照组( t值分别为-8.78和-4.25, P<0.05)。阳性对照组和实验组大鼠创面愈合时间分别为(20.4±2.5)、(23.4±2.5)d,均明显短于阴性对照组的(27.0±2.1)d( t值分别为2.45、-4.49, P<0.05)。伤后6 d,实验组大鼠创面组织中自噬体和自噬溶酶体数量均显著多于阳性对照组( t值分别为7.37和9.33, P<0.05)和阴性对照组( t值分别为-7.06和-8.54, P<0.05)。伤后6 d,阳性对照组大鼠创面组织中LC3Ⅱ含量及LC3Ⅱ/LC3Ⅰ均显著高于阴性对照组( t值分别为-4.48和-2.47, P<0.05);实验组大鼠创面组织中LC3Ⅱ含量及LC3Ⅱ/LC3Ⅰ均显著高于阴性对照组( t值分别为11.98和6.04, P<0.05)和阳性对照组( t值分别为-6.64和-4.17, P<0.05),LC3Ⅰ含量明显低于阴性对照组( t=2.33, P<0.05)。伤后6 d,3组大鼠创面组织中总胶原蛋白和Ⅰ型胶原蛋白占比均相近, P>0.05。伤后6 d,阳性对照组大鼠创面组织中Ⅲ型胶原蛋白占比显著高于阴性对照组( t=-3.19, P<0.05),且Ⅰ型胶原蛋白/Ⅲ型胶原蛋白显著低于阴性对照组( t=2.18, P<0.05);实验组大鼠创面组织中Ⅲ型胶原蛋白占比显著高于阴性对照组和阳性对照组( t值分别为-2.38和5.91, P<0.05),且Ⅰ型胶原蛋白/Ⅲ型胶原蛋白显著低于阴性对照组和阳性对照组( t值分别为3.08和-4.35, P<0.05)。创面愈合后30 d,可观察到阳性对照组兔耳瘢痕增生情况与阴性对照组相近,而实验组兔耳瘢痕增生情况明显减轻。创面愈合后30 d,实验组兔耳瘢痕色泽、血管、厚度、硬度评分及总分均明显低于阳性对照组( t值分别为3.80、3.80、2.39、2.71、4.84, P<0.05)和阴性对照组( t值分别为-3.81、-4.78、0.04、-2.71、-5.14, P<0.05)。创面愈合后30 d,实验组、阴性对照组和阳性对照组兔耳瘢痕组织中表皮厚度相近( P>0.05);阳性对照组兔耳瘢痕组织真皮厚度明显小于阴性对照组( t=5.42, P<0.05),实验组兔耳瘢痕组织真皮厚度明显小于阴性对照组和阳性对照组( t值分别为11.91和8.49, P<0.05)。创面愈合后30 d,3组兔耳瘢痕组织中胶原蛋白排列均紊乱,总胶原蛋白占比相近( P>0.05);实验组兔耳瘢痕组织中Ⅰ型胶原蛋白占比明显低于阳性对照组( t值分别为3.00, P<0.05),Ⅲ型胶原蛋白占比明显高于阴性对照组和阳性对照组( t值分别为-4.46和4.05, P值均<0.05),Ⅰ型胶原蛋白/Ⅲ型胶原蛋白明显低于阴性对照组和阳性对照组( t值分别为8.50和-5.25, P值均<0.05)。 结论:海藻糖凝胶相较于卡波姆凝胶具有更适于创面愈合的理化特性,且生物相容性良好;能基于自噬激活作用促进大鼠全层皮肤缺损创面愈合,减轻兔耳瘢痕增生。
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编辑人员丨5天前
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鸢尾素对大鼠机械通气相关性肺损伤的影响:与NLRP3炎症小体表达的关系
编辑人员丨5天前
目的:评价鸢尾素对大鼠机械通气相关性肺损伤(VILI)的影响及其与NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)炎症小体表达的关系。方法:SPF级健康成年雄性SD大鼠36只,6~8周龄,体重220~300 g,采用随机数字表法分为3组( n=12):对照组(C组)、VILI组和鸢尾素组(I组)。3组大鼠均进行气管切开插管术,C组保持自主呼吸4 h,VILI组和I组行机械通气4 h,I组于气管插管前30 min经尾静脉注射鸢尾素1 μg/kg,其余2组经尾静脉给予等容量生理盐水混合液(生理盐水∶含5%海藻糖PBS缓冲液=1∶9)。通气参数:潮气量20 ml/kg,通气频率80次/min,吸呼比1∶1,吸入氧浓度21%,呼气末正压0。于气管插管前及机械通气结束时采集左侧股动脉血测定PaO 2。处死大鼠后收集肺组织标本和支气管肺泡灌洗液(BALF),光镜下观察肺组织病理学结果并进行肺损伤评分,计算肺组织湿重/干重(W/D)比值,采用ELISA法检测BALF总蛋白浓度、BALF和血清IL-1β及IL-18浓度,采用二氯荧光黄双乙酸盐法检测BALF肺泡巨噬细胞活性氧(ROS)水平,分别采用Western blot法及qRT-PCR法检测肺组织NLRP3、凋亡相关斑点样蛋白(ASC)和caspase-1及其mRNA的表达。 结果:与C组比较,VILI组和I组机械通气结束时PaO 2降低,肺损伤评分和W/D比值升高,BALF总蛋白浓度和肺泡巨噬细胞ROS水平、BALF和血清IL-1β、IL-18浓度升高,肺组织NLRP3、ASC和caspase-1及其mRNA表达上调( P<0.01);与VILI组比较,I组机械通气结束时PaO 2升高,肺损伤评分和W/D比值降低,BALF总蛋白浓度和肺泡巨噬细胞ROS水平、BALF和血清IL-1β、IL-18浓度降低,肺组织NLRP3、ASC和caspase-1及其mRNA表达下调( P<0.05)。 结论:鸢尾素可减轻大鼠VILI,其机制与抑制NLRP3炎症小体激活,减轻炎症反应有关。
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编辑人员丨5天前
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无二甲基亚砜细胞冻存技术的研究进展及展望
编辑人员丨5天前
冷冻保存技术已成为细胞治疗、辅助生殖、组织工程和疫苗储存等生物医学应用的必要方法。冰晶的形成是冷冻保存的主要限制因素,并会对生物样本造成致命性损伤。二甲基亚砜(DMSO)是传统上常用的冷冻保护剂,然而考虑到DMSO自身细胞毒性和给药后对机体产生的潜在不良反应,因此寻找具有安全性和有效性的替代DMSO方法的需求逐渐增长。本文拟概述多种治疗性细胞的无DMSO保存的研究进展及面临的问题和挑战,以期推动新型细胞冷冻保存技术更好地开展。
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编辑人员丨5天前
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胎膜早破孕妇阴道微生物组特征及预测模型的建立
编辑人员丨5天前
目的:研究胎膜早破孕妇阴道菌群特征,找出相关细菌种类,通过功能预测探索细菌与胎膜早破交联的相关功能通路,并建立以阴道菌群特征为基础的预测模型。方法:基于孕妇队列,纳入35例未足月胎膜早破、180例足月胎膜早破和255例胎膜未早破足月分娩(对照组)孕妇。使用16S rRNA基因二代测序技术检测孕妇在妊娠16~28周时的阴道样本V3~V4高变区序列。分析并比较3组孕妇之间Alpha多样性、Beta多样性,识别物种属性和代谢功能预测的差异。随后采用随机森林模型纳入阴道菌群物种以及危险因素,建立胎膜早破发生的预测模型。结果:未足月胎膜早破组与对照组相比,Alpha多样性更高(Observed features, P=0.022;Faith_pd指数, P=0.024),Beta多样性也有显著差异(Unweighted-UniFrac, P=0.010;Jaccard指数, P=0.008)。未足月胎膜早破孕妇中,巨型球菌Ⅰ型转化菌种显著增多( P=0.017),穆氏乳杆菌显著减少( P=0.003)。而足月胎膜早破孕妇中,巨型球菌属显著增多( P=0.009),穆氏乳杆菌显著减少( P=0.002)。功能预测方面,嗜酸菌的硫氧化途径( P=0.021)、乙酸产甲烷途径( P=0.036)、L-组氨酸合成途径( P=0.009)、腺苷钴胺素合成途径( P=0.041)和海藻糖代谢途径( P=0.001)这5种功能在未足月胎膜早破孕妇中显著增加,而L-组氨酸合成途径( P<0.001)和海藻糖代谢途径( P=0.030)在足月胎膜早破孕妇中显著增加。通过随机森林模型纳入阴道菌群物种以及危险因素建立预测模型,未足月胎膜早破预测模型的表现较好[AUC值为0.739(95%CI:0.609~0.869),灵敏度0.928,特异度0.659,阳性预测值0.750,阴性预测值0.906],具有一定的参考价值。 结论:阴道菌群特征可能与胎膜早破的发生发展有关,阴道细菌差异的研究可能成为防治胎膜早破的新思路,功能预测为胎膜早破发生发展机制的研究方向提供了参考借鉴,预测模型可以预防未足月胎膜早破的发生,促进母婴健康。
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编辑人员丨5天前
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海藻糖对小鼠放射性肠损伤的防护作用及机制研究
编辑人员丨5天前
目的:探讨海藻糖对小鼠放射性肠损伤的防护作用及分子机制。方法:采用简单随机抽样法将8周龄的雄性C57 BL/6 J小鼠分为4组:对照组(不给予任何处理)、海藻糖组(饮用2 g/100 ml海藻糖水)、照射组(以13 Gy剂量对小鼠腹部照射)、海藻糖+照射组(饮用2 g/100 ml海藻糖水+以13 Gy剂量对小鼠腹部照射),每组6只。经13 Gy照射和2 g/100 ml海藻糖饮水处理后,每天记录小鼠体重,14 d后处死小鼠并采集小鼠的血液、小肠和结肠,测量结肠长度。采用苏木精-伊红(HE)染色法和过碘酸-雪夫(PAS )染色法评估小鼠肠道损伤程度;酶联免疫吸附实验(ELISA)检测血清和小肠组织中肿瘤坏死因子α(TNF-α)及白细胞介素6(IL-6)的水平;小鼠小肠上皮MODE-K细胞增殖实验、细胞克隆形成实验、细胞凋亡检测实验、活性氧测定实验和DNA损伤检测实验分别检测细胞活力、细胞克隆形成能力、细胞凋亡率、活性氧水平和DNA双链断裂数量;实时定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)法和Western blot法分别检测自噬相关基因mRNA和蛋白水平的表达情况。组间比较采用两独立样本 t检验。 结果:动物实验结果显示,与照射组比较,海藻糖+照射组可显著缓解电离辐射(IR)后小鼠体重的下降,并可促进其恢复( t=4.064 , P<0.05 ),且小鼠结肠缩短程度较轻,2组间的差异有统计学意义( t=4.044 , P<0.05 )。HE和PAS染色法评估结果显示,海藻糖可缓解IR后小鼠小肠黏膜损伤,与照射组比较,海藻糖+照射组小鼠绒毛较长、隐窝较深、杯状细胞数量较多,2组间的差异有统计学意义( t=4.373、8.414、6.515,均 P<0.05 )。ELISA检测结果显示,与照射组比较,海藻糖+照射组可显著降低IR后小鼠血清及小肠组织中TNF-α和IL-6的水平,且差异均有统计学意义( t= 4.475、8.686、3.993、6.007,均 P<0.05)。细胞增殖和克隆实验结果显示,与照射组比较,海藻糖+照射组可促进IR后小鼠小肠上皮MODE-K细胞活性和克隆形成能力[(0.885±0.127)对(0.644±0.151)、(97.330±5.937)对(64.000±7.324)],且差异均有统计学意义( t=2.566、4.411,均 P<0.05 );细胞凋亡检测实验结果显示,与照射组比较,海藻糖+照射组可抑制IR后小鼠小肠MODE-K细胞凋亡率[(15.270±0.647)%对(9.334±0.854)%],且差异有统计学意义( t=8.315 , P<0.05 );活性氧测定实验和DNA损伤检测实验结果显示,与照射组比较,海藻糖+照射组可降低IR后小鼠细胞内ROS水平和DNA双链断裂数量( t=8.884、4.802,均 P<0.05 )。qRT-PCR法和Western blot法检测结果显示,与照射组比较,海藻糖+照射组小鼠小肠组织和MODE-K细胞中自噬相关基因TFEB、MAP1LC3B的表达水平显著增加[(208.210±26.143)对(8.986±5.362)、(13.970±4.587)对(5.815±1.873)] ,且差异均有统计学意义( t=8.875 ,8.461,均 P<0.05 )。 结论:海藻糖通过调控转录因子EB介导的自噬反应激活缓解小鼠放射性肠损伤。
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编辑人员丨5天前
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海藻糖对肝脏缺血再灌注损伤的保护作用及机制研究
编辑人员丨5天前
目的:探讨海藻糖是否对肝脏缺血再灌注损伤具有保护作用及其相关机制。方法:C57BL/6J小鼠数字随机分为无缺血组、缺血再灌注组、海藻糖处理组和生理盐水对照组,缺血90 min后于再灌注的0h和6h,收集血液和肝组织,通过分离血清测丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)肝功能指标及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)和白细胞介素-2(IL-2)炎症因子水平和肝组织病理改变研究海藻糖在肝脏缺血再灌注损伤中的作用;AML12小鼠肝细胞系构建缺糖缺氧-复糖复氧细胞模型,分为实验组和对照组,实验组根据给予的海藻糖浓度不同分为低剂量组和高剂量组,对照组无海藻糖,收集细胞,流式细胞仪检测凋亡水平以研究海藻糖对肝脏缺血再灌注损伤诱导的细胞凋亡的影响,蛋白印迹法检测Caspase-3、Cleaved Caspase-3和Bcl-2蛋白水平以研究海藻糖在肝脏缺血再灌注损伤诱导的细胞凋亡中的分子机制。结果:体内动物实验显示肝脏缺血再灌注后,缺血再灌注组ALT、AST及TNF-α、IL-1β和IL-2等肝功能指标及炎症因子水平升高( P<0.05),且肝组织发生坏死;而在给予海藻糖处理后,ALT、AST、TNF-α、IL-1β和IL-2等水平较生理盐水对照组降低且肝组织坏死面积也减少( P<0.05)。体外细胞实验显示与对照组相比,实验组肝细胞凋亡水平下降;且实验组活化的促凋亡蛋白Cleaved Caspase-3水平下降、抗凋亡蛋白Bcl-2水平升高。 结论:在体内和体外条件下海藻糖对肝脏缺血再灌注损伤有保护作用,其机制可能是通过抑制肝脏缺血再灌注损伤诱导的炎症发生和抑制Caspase-3的活化并促进Bcl-2的表达,减轻细胞凋亡,从而保护肝脏缺血再灌注损伤。
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编辑人员丨5天前
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解磷生物炭基肥料制备的优化及其对葡萄生长及土壤质量的影响
编辑人员丨1个月前
以解磷菌株X-P18 为对象,通过优化炭基微生物肥料制备工艺,制备具有高菌活性的解磷炭基微生物肥料.同时,以"女皇"葡萄作为试验对象,分别设计了空白(CK)、生物炭、炭基肥和液体肥 4 个处理组,通过测定土壤理化性质、采收期葡萄品质等指标,考察了炭基微生物肥料对葡萄品质以及土壤理化性质的影响.结果表明:在菌液与添加生物炭质量比为 3.0∶1.0,吸附时间为 6h,吸附时转速为 100 r/min,保护剂为质量分数 4%的海藻糖时,制备出的炭基微生物肥料活菌数最多.同时,果园实验表明:与CK组相比,炭基微生物肥料显著提高了土壤有效磷的质量分数,可达 221.81%,并且碱解氮、有机质和速效钾含量均有不同程度的提高,分别达到了质量分数8.30%、20.61%和 39.54%,并且土壤培肥效果较好.炭基肥组处理的葡萄果形参数、可溶性固形物和可溶性糖较空白组分别提升了 6.64%、8.81%和 14.95%,总酸度降低了 23.18%,固酸比显著增加,达 40.67%.由此说明:施用解磷生物炭基肥料能更好地增加土壤养分的释放,从而促进葡萄更好的生长和土壤质量的提升.
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编辑人员丨1个月前
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响应面法优化LAMP反应冻干保护剂配方的研究
编辑人员丨1个月前
目的 筛选出适用于甲流病毒环介导等温扩增技术(LAMP)的最佳冻干保护剂组合,建立起可在室温下长时间储存的甲流病毒核酸检测体系,为甲流现场快速检测和分级诊疗提供技术支持.方法 以LAMP核酸扩增活性为评价指标,在单因素试验的基础上利用三因素三水平的响应面法,探究冻干保护剂(海藻糖、牛血清白蛋白和甘露醇)对LAMP试剂的保护效果并优化冻干保护剂的组合.结果 采用Box-Behnken试验结果进行回归模型拟合,LAMP试剂的保护剂最佳配方组合为7.64 wt%海藻糖、0.43 wt%牛血清白蛋白和0.85 wt%甘露醇.经真空冷冻干燥且加入保护剂后的LAMP试剂将以脱水形式贮存,可在常温下长期保持活性,使用时加水复溶即可.为了检验保护剂的稳定性,真空冷冻干燥后的LAMP试剂分别置于25℃和37℃下贮存,第0天、4天、8天、12天、16天、20天取出分别进行LAMP扩增活性检测.添加最优保护剂组合的LAMP冻干试剂其核酸扩增活性远大于添加单一保护剂或未添加冻干保护剂组.结论 添加最优保护剂组合能够延长LAMP试剂的贮存时间和保持试剂的稳定性.
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编辑人员丨1个月前
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基于非靶向代谢组学的脑卒中急性期损伤机制研究
编辑人员丨2024/6/22
目的 通过非靶向代谢组学技术研究脑卒中急性期损伤机制.方法 建立小鼠大脑中动脉闭塞模型模拟卒中后缺血再灌注损伤,利用高效液相色谱-质谱联用技术对卒中后脑组织样本进行代谢组分析,利用京都基因与基因组百科全书(KEGG)数据库及人类代谢数据库(HMDB)分析代谢组结果.结果 卒中后变化明显的194个代谢物中(P<0.05且VIP>1),上调的代谢物有111个,下调的代谢物有82个,其中海藻糖、葡糖苷酸、谷胱甘肽硫醇、尿酸等物质变化显著(P<0.01),分属下列物质:辅因子类、脂质、氨基酸、核苷酸、单糖、二十烷类、神经递质等.KEGG富集通路分析显示,丙氨酸和谷氨酸代谢、牛磺酸代谢、氨基糖和核苷酸糖代谢、糖酵解、核苷酸代谢、嘌呤代谢通路为差异显著的代谢通路[-Log10(P value)>3且impact value>0.15].结论 卒中后有关脂质代谢、能量代谢、核苷酸代谢活动显著变化,为探索损伤机制和寻找干预靶点提供了参考.
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编辑人员丨2024/6/22
