病毒是一种只含有一种核酸和蛋白质外壳的结构简单的非细胞结构微生物。随着分子生物学的发展，作为重要生物资源，微生物菌(毒)种的保藏价值逐渐得到人们的关注。相对于容易污染微生物的传代法和容易失活的干燥法，低温保藏作为一种便宜、简单、省时的方法，已广泛应用于微生物的保藏当中。但是关于病毒低温保藏的现有研究较少且不深入。基于此，本文根据病毒侵染特定细胞的特性，将病毒分为动物病毒、植物病毒和细菌病毒(噬菌体)，综述保藏温度、低温保护剂以及其它因素对不同种类病毒的低温保藏效果的影响，分析其病毒保藏技术问题及发展趋势，为进一步完善微生物低温保藏的现状研究提供参考。

目的:探讨不同粒径大小对γ辐照中脱钙骨基质（demineralized bone matrix，DBM）中胶原结构的影响以及辐照保护剂的有效性。方法:取同一供体的冻干皮质骨，依据Urist改良法制备不同粒径的（0.5~1.0 mm、1.2~2.8 mm、3.3~4.7 mm及5.7~7.0 mm）DBM样品，按照不同剂量分为：0 kGy、15 kGy、25 kGy及25 kGy（辐照保护剂），真空密封后储存于-80℃冰箱待用。通过扫描电镜观察胶原表面形态，大体观察胶原表面结构损伤的程度；将样品按照0.2 g/ml生理盐水比例在50℃条件下72 h，利用浸提液颜色深度观察胶原被辐照损伤的程度；使用2，4-二硝基苯肼（吸光光度计法）测定样品中羰基含量；十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺钠凝胶电泳法（Sodium dodecyl sulfatepolyacrylamide gel electrophoresis，SDS-PAGE）测定样品中胶原分子量的变化；利用差示热量扫描法（differential scanning calorimetry，DSC）检测样品热变性温度以观察胶原热稳定性。结果:样品浸提液颜色与γ辐照剂量相关度较高，未辐照样品浸提液颜色清亮，而在同粒径下随辐照剂量加大浸提液黄色逐渐加深，5.7~7.0 mm粒径组颜色相对较浅；25 kGy组相比于25 kGy+保护剂组浸提液颜色加深。扫描电镜观察到γ辐照导致胶原结构紊乱，纤维断裂，随着辐照剂量增大损伤区域增多，当粒径增大时，损伤区域有减少的趋势；相比于25 kGy组，25 kGy+保护剂组胶原结构性破坏减少。差示热量扫描法得出样品热交换曲线，随着粒径增大，热变性温度有增高的趋势，粒径间对比有统计学差异（ F=189.4， P<0.001）；同粒径间差异不明显。SDS-PAGE发现同粒径下γ辐照剂量愈大，胶原分子量愈小；同辐照条件下随粒径较小，高分子量胶原含量减少明显；225 kGy+保护剂组相比于25 kGy组，高分子量增多。羰基含量结果显示在同一粒径下，γ辐照使羰基含量增多，0.5~1.0 mm组（ F=13.631， P=0.002），1.2~2.8 mm组（ F=6.390， P=0.016），3.3~4.7 mm组（ F=5.630， P=0.023），5.7~7.0 mm组（ F=4.150， P=0.048）的差异均有统计学意义，不同粒径间随着粒径增大羰基含量逐渐减小但差异统计学意义（ F=0.560， P=0.650）。 结论:γ辐照与胶原的氧化损伤具有明显的剂量反应关系，随着γ辐照剂量的增加，胶原损伤程度逐渐增加；DBM的粒径大小影响着胶原对γ辐照的敏感度，随着粒径的减小，DBM颗粒更易被γ辐照损伤；辐照保护剂在辐照过程中对胶原有一定程度的保护作用。

目的:制备地佐辛聚乳酸-羟基乙酸嵌段共聚物(PLGA)微球并进行鉴定。方法:地佐辛PLGA微球制备：地佐辛120 mg、PLGA 0.1 g与其助溶添加剂泊洛沙姆0.1 g分散于四氢呋喃溶剂中，配置成有机相溶液；氯化钠、聚乙二醇溶解于注射用水中，形成内水相溶液和外水相溶液；机相溶液20 ml与内水相溶液20 ml混合，形成水相/油相初乳后，加入外水相溶液中，形成水相/油相/水相复乳，与冻干粉保护剂充分混合冷冻干燥，制成地佐辛PLGA微球。鉴定：清洁级健康雄性SD大鼠18只，10～12周龄，体质量220～260 g，采用随机数字表法分为3组( n＝6)：对照组(C组)、地佐辛普通制剂组(D 1组)和地佐辛PLGA微球组(D 2组)，分别肌肉注射生理盐水、地佐辛注射液(药物剂量1 mg)及地佐辛PLGA微球注射液(药物剂量0.2 μg)0.2 ml。于给药后30 min(T 1)、1 h(T 2)、2 h(T 3)、3 h(T 4)、4 h(T 5)、5 h(T 6)、6 h(T 7)、7 h(T 8)和8 h(T 9)时测定血浆地佐辛浓度，于T 1～T 3、T 5和T 9时测定热缩足潜伏期；肌肉注射后第7天，取注射部位组织，HE染色后观察炎症反应情况。 结果:与C组比较，D 1组T 1～T 3时及D 2组T 1～T 3、T 5和T 9时热缩足潜伏期延长( P<0.05)；与D 1组比较，D 2组T 5、T 9时热缩足潜伏期延长，T 6～T 9时血浆地佐辛浓度升高( P<0.05)。与T 2时比较，D 1组T 4～T 9时血浆地佐辛浓度降低( P<0.05)，D 2组T 3～T 9时血浆地佐辛浓度差异无统计学意义( P>0.05)。肌肉注射后第7天，各组局部组织均未见炎症产生，病理学结果未见明显差异。 结论:本研究成功制备了地佐辛PLGA微球缓释剂型，对大鼠可维持平稳的血药浓度，有效延长药物作用时间，具有显著缓释作用。

目的:探索建立标准化人体小肠液移植（HIFT）及HIFT胶囊的制备体系，并分析其初步应用于孤独症谱系障碍的治疗效果。方法:收集2021年1月至3月于上海市第十人民医院招募的HIFT标准供体3人、孤独症谱系障碍患者亲体供体8人的临床资料。通过制定严格的供体筛选与管理标准，运用床旁经鼻空肠管置管术，将导管头端置入空肠远端，导管连接口处接改良一次性无菌负压收集装置行持续负压引流收集人体小肠液。再分别通过过滤、添加10%甘油保护剂及冻干等方法制成冻干粉HIFT胶囊。本中心初步拟定要求：移植以活菌量作为治疗剂量标准，HIFT每次移植的菌液活菌量需≥5.0×10 8个/ml且活菌比例≥83%，菌粉活菌量需≥2.0×10 6个/g且活菌比例≥81%。观察供体基本情况、供体中菌液及菌粉中菌落总数，并初步分析上述供体制备而成的HIFT胶囊联合标准FMT胶囊治疗（即全肠道菌群移植）治疗孤独症谱系障碍研究（临床试验注册号：ChiCTR2100043929）。 结果:标准供体及亲体供体均符合供体筛选标准，所制菌液及菌粉符合治疗标准。与亲体供体比较，标准供体的菌粉菌落总数更多［（7.47±1.52）×10 6个/g比（5.03±1.38）×10 6个/g， t=11.331， P=0.031］、Chao指数更高（205.4±6.8比194.2±7.2， t=10.415， P=0.001）、Shannon指数更高（3.25±0.14比2.72±0.27， t=19.465， P=0.001），差异均具有统计学意义（均 P<0.05）。有8例患者接受全肠道菌群移植治疗，初步统计结果显示，该疗法可改善孤独症谱系障碍患者症状，治疗后1、2、3、4个月时，孤独症行为评分及儿童孤独症评分均下降，差异均有统计学意义（均 P<0.05）。本组无严重不良反应发生。 结论:在FMT制备体系研究基础上，结合制定高标准HIFT制备体系，同时探索性开展HIFT联合FMT的全肠道菌群移植临床研究，有望成为微生态治疗的一项革新疗法。

目的 制备白藜芦醇(RES)纳米混悬剂,并进行体外评价.方法 采用沉淀法制备RES纳米混悬剂.以平均粒径及多分散系数(PDI)为评价指标,正交试验优化制剂工艺.冷冻干燥法制备纳米混悬剂冻干粉末并进行表征.使用透析袋法研究制剂的体外释放情况.建立高糖刺激的ARPE-19细胞损伤模型,CCK-8法评估RES纳米混悬剂对细胞活力的影响.结果 RES最优处方工艺为:RES浓度6 mg/mL,两种稳定剂(PVP K17∶HPMC)质量比2∶1,RES与稳定剂质量比1∶2,5％甘露醇做冻干保护剂.RES纳米混悬剂为相对规则的颗粒状,载药量为28.04％,36 h内累计释放量达91.27％.与RES相比,RES纳米混悬剂预处理后ARPE-19细胞活力显著提高(P＜0.05).结论 RES纳米混悬剂可提高RES的体外释放率,并且能够减轻高糖对ARPE-19细胞的损伤,提高细胞存活率.

目的:优选出不同状态(新鲜、干燥)及不同药用部位的不同药用植物(滇重楼、密脉鹅掌柴、铁皮石斛)最适宜的制片方法,提高横切面组织装片制备效率.方法:采用不同防冰晶形成保护剂(不处理、蔗糖和甘油)处理新鲜材料并进行冰冻切片,采用甘油软化干燥材料并进行石蜡切片,比较不同前处理条件和两种制片方法的制片效果.结果:新鲜材料中,密脉鹅掌柴的茎叶,滇重楼的根茎、茎、叶采用甘油溶液做保护剂效果较佳,而铁皮石斛适用蔗糖磷酸缓冲溶液做保护剂;滇重楼的须根用石蜡切片法可获得组织结构完整的装片.此外,经甘油溶液软化,滇重楼的干燥根茎和密脉鹅掌柴的干燥叶可获得质量较好的石蜡切片.结论:质地稍硬的新鲜药材用甘油溶液处理后采用冰冻切片可以获取较为理想的效果;质地柔软的新鲜药材可不经任何处理或经蔗糖磷酸缓冲液浸泡后采用冰冻切片;干燥药材或含淀粉类药材采用石蜡切片法可获得理想的切片效果.

目的 筛选出适用于甲流病毒环介导等温扩增技术(LAMP)的最佳冻干保护剂组合,建立起可在室温下长时间储存的甲流病毒核酸检测体系,为甲流现场快速检测和分级诊疗提供技术支持.方法 以LAMP核酸扩增活性为评价指标,在单因素试验的基础上利用三因素三水平的响应面法,探究冻干保护剂(海藻糖、牛血清白蛋白和甘露醇)对LAMP试剂的保护效果并优化冻干保护剂的组合.结果 采用Box-Behnken试验结果进行回归模型拟合,LAMP试剂的保护剂最佳配方组合为7.64 wt%海藻糖、0.43 wt%牛血清白蛋白和0.85 wt%甘露醇.经真空冷冻干燥且加入保护剂后的LAMP试剂将以脱水形式贮存,可在常温下长期保持活性,使用时加水复溶即可.为了检验保护剂的稳定性,真空冷冻干燥后的LAMP试剂分别置于25℃和37℃下贮存,第0天、4天、8天、12天、16天、20天取出分别进行LAMP扩增活性检测.添加最优保护剂组合的LAMP冻干试剂其核酸扩增活性远大于添加单一保护剂或未添加冻干保护剂组.结论 添加最优保护剂组合能够延长LAMP试剂的贮存时间和保持试剂的稳定性.

目的 以人血浆中的纤维蛋白原为研究对象,探索真空冷冻干燥过程中如何优选保护剂,并对冻干品进行评价,从而通过正交试验法建立一种高效的保护剂筛选方法.方法 通过初筛选取出甘露醇、甘氨酸和叠氮钠,分别按照正交试验法以高低浓度组合添加到血浆中冻干.采用极差分析法和方差分析法确定各保护剂的主次关系及最终浓度.同时对冻干品进行无菌评价、质量评价、均匀性和稳定性进行评价,以验证所选保护剂的适用性.结果 采用正交试验并绘制二元图发现甘露醇与叠氮钠之间存在交互作用.利用优于极差法的方差分析法并确定甘露醇与叠氮钠的交互作用和叠氮钠二者为主要因素,其余为次要因素.保护剂最佳组合为:甘露醇5％、甘氨酸0.5％、叠氮钠0.1％.评价冻干品无菌性、外观、含水量、复溶性均符合要求;冻干品均匀,CV瓶间为2.7％,复溶后8h内稳定,2～8℃低温冷藏可保持运输14d内稳定,-20℃冷冻可保持6个月稳定.结论 正交试验法能够在多因素冻干保护剂选择中高效精准地筛选出最佳组合,具有广泛的应用价值.

目的:制备诺米林固体脂质纳米粒(NML-SLN)及其冻干粉,进行体外释药研究.方法:薄膜超声分散法制备NML-SLN,以包封率、载药量、粒径分布为指标,确定最优处方,考察各冻干支架剂对其冻干效果的影响,确定最佳冻干工艺,绘制诺米林释药曲线.结果:NML-SLN的最佳制备工艺为:卵磷脂50 mg、单硬脂酸甘油酯25 mg、二氯甲烷 20 mL、2%泊洛沙姆 188 水溶液 13 mL、超声功率 350 W、超声时间 4 min,所得NML-SLN包封率、载药量及粒径分别为 96.27%、8.73%、189.3 nm,5%甘露醇为最佳冻干保护剂,NML-SLN冻干粉为质地疏松的白色固体,表面光洁、平整,复现性良好,能有效延缓诺米林释放.结论:该研究制备的NML-SLN粒径较小,载药量、包封率高,所得NML-SLN冻干粉复现性良好,具有良好的缓控释效果.

目的 探索制备蜚蠊提取物长效脂质体的最佳工艺,并评价其对溃疡性结肠炎(UC)模型小鼠的治疗效果.方法 采用薄膜分散法制备蜚蠊提取物长效脂质体(CE-Lip),正交实验优化CE-Lip的处方及冻干工艺,进行形态学表征并评价其体外释放速率,并通过UC小鼠模型进行药效学评价.结果 最佳制备工艺为胆固醇-磷脂质量比 1∶5,提取物-磷脂质量比 1∶4,水化时间 0.75 h,水化体积 3 mL,水化温度 30℃;最佳冻干工艺为采用 5%甘露醇、10%海藻糖作为混合冻干保护剂;所制得的CE-Lip平均粒径为(276.7±5.6)nm,呈囊泡状结构,冻干后稳定性良好,在体外释放速率显著低于原料药.药效学结果显示CE-Lip可以显著降低UC小鼠的DAI评分、结肠长度、CMDI评分、TNF-α表达量、HS评分,显著升高EGF表达量、杯状细胞中的黏液素表达量.结论 获得简便、稳定、重现性良好的CE-Lip制备工艺.制得的CE-Lip,大小分散均匀,稳定性好,具有缓释的效果,相比于普通制剂,CE-Lip显著提高了CE对UC小鼠的治疗作用,为CE-Lip的进一步开发研究奠定了基础.