目的 通过建立UPLC指纹图谱及多指标成分含量测定方法,构建经典名方桃核承气汤(Taohe Chengqi Decoction,TCD)的质量体系,研究TCD基准样品量值传递规律.方法 遵照古籍记载并结合工艺考察,制备不同产地的15批次TCD基准样品,采用UPLC法建立基准样品指纹图谱,使用中药色谱指纹图谱相似度评价软件(2012版)进行相似度评价,结合UPLC-Q-Exactive Orbitrap-MS技术全面分析基准样品化学成分,同时测定样品中指标成分(苦杏仁苷、桂皮醛、肉桂酸、甘草酸、游离型蒽醌、总蒽醌、结合蒽醌)的含量.结果 建立了 15批TCD基准样品的UPLC指纹图谱,与对照指纹图谱比较相似度≥0.90,通过对照品确认、高分辨质谱数据分析及文献比对,共鉴定出80个化学成分,共归属26个指纹峰,鉴定了 17个色谱峰.15批TCD基准样品中苦杏仁苷、桂皮醛、肉桂酸、甘草酸、游离型蒽醌、总蒽醌、结合蒽醌的质量分数分别为 0.29％～0.58％、0.011％～0.032％、0.05％～0.13％、0.48％～1.04％、0.20％～0.30％、0.42％～0.66％、0.19％～0.37％,饮片到基准样品的转移率分别为 31.49％～60.78％、0.43％～2.67％、51.61％～76.99％、26.79％～49.88％、16.01％～32.65％、9.66％～19.07％、6.97％～19.48％;出膏率为19.55％～22.92％,传递率为80.98％～99.34％.结论 所建立的UPLC指纹图谱及多指标成分含量测定分析方法快速简便,结合基准样品的量值传递过程分析,可为后续制剂的开发和质量控制提供理论依据.

目的 建立一测多评法(QAMS)测定大黄碳酸氢钠片中5种游离蒽醌类成分的含量.方法 采用高效液相色谱法,以大黄酚为内参物,确立芦荟大黄素、大黄酸、大黄素和大黄素甲醚与大黄酚的相对校正因子,并与外标法测定结果进行比较,以验证一测多评法在测定该成分的合理性和可行性.结果 8批不同生产企业的样品,一测多评法计算值与外标法实测值无明显差异,相对平均偏差均小于1.0%.结论 本方法准确可靠,可用于大黄碳酸氢钠片中5种游离蒽醌类成分的含量测定.

该研究以脂多糖(LPS)+三磷酸腺苷(ATP)刺激的J774A.1巨噬细胞建立细胞焦亡体外模型,探讨大黄游离蒽醌(free total rhubarb anthraquinones,FTRAs)对细胞焦亡的干预机制.体外培养J774A.1巨噬细胞,实验分组为空白对照组、不同质量浓度脂多糖(LPS,0.25、0.5、1 μg·mL-1)+ATP(1.25、2.5、5 mmol·L-1)组,通过CCK-8法检测细胞活力、碘化丙锭(PI)凋亡细胞染色法、乳酸脱氢酶(LDH)及白细胞介素(IL)-18和肿瘤坏死因子(TNF)-α释放,建立巨噬细胞焦亡体外模型.之后将J774A.1巨噬细胞随机分为6组:空白对照组,LPS+ATP组,FTRAs高剂量单独作用组,FTRAs低、中、高剂量预保护组.检测上述细胞焦亡的表型特征和关键指标作为评判FTRAs对LPS+ATP诱导的细胞焦亡的影响依据.Western blot法和RT-PCR法检测半胱氨酸蛋白酶(caspase)-1/11细胞焦亡通路相关蛋白和mRNA表达水平,阐明其抗焦亡效应的分子机制.结果显示巨噬细胞焦亡体外模型以0.50 μg·mL-1 LPS+5.00 mmol·L-1 ATP的刺激条件效果最佳.FTRAs预保护细胞24 h,能够提高焦亡条件下细胞的活力、减轻细胞的受损程度、降低PI染色阳性率并减少LDH、IL-18和TNF-α的释放.FTRAs能够明显抑制GSDMD蛋白的活化,并且显著下调焦亡通路特征分子TLR4、NLRP3、cleaved-caspase-1、cleaved-caspase-11的蛋白表达,但是对ASC蛋白无明显影响.FTRAs还能够明显抑制caspase-1、caspase-11和GSDMD的mRNA表达.这些研究结果表明,FTRAs对LPS+ATP诱导的细胞焦亡模型具有抑制作用,且FTRAs通过调控经典和非经典细胞焦亡信号通路,减少炎性炎症因子的产生,发挥抗焦亡效应.

大黄是典型的多基原大宗中药材,研究不同基原大黄药效成分含量和比例的差异,以期实现对不同基原大黄药材质量的精准评价,为大黄在临床上的精准用药提供理论依据.该研究以相同生长年限(四年生)的唐古特大黄、掌叶大黄和药用大黄为材料,采用拟靶向代谢组学技术测定 3 种基原大黄中蒽醌、蒽酮及鞣质类共计 220 个成分的相对含量,并运用多元统计方法对差异成分进行筛选.主成分分析(PCA)结果显示,大黄样品按照基原明显聚为3 类.通过正交偏最小二乘法判别分析(OPLS-DA),最终筛选出 117 种差异成分,其中包括:游离蒽醌类 8 种,结合蒽醌类 18 种,蒽酮类 80 种,鞣质类 11 种.综合比较,28 种成分在唐古特大黄中含量较高,主要为番泻苷类、结合蒽醌类和原花青素类化合物;35 种成分在药用大黄中含量较高,主要为游离蒽醌类和儿茶素类化合物;54 种成分在掌叶大黄中含量较高,主要为二蒽酮类化合物,但其结构暂不能确定.通过对 3 种基原大黄差异成分的分析,根据差异成分在 3 种基原大黄中的含量分布情况可推测出:唐古特大黄的泻下攻积之力最强,药用大黄的清热泻火功效最强,且两者的逐瘀通经功效强于掌叶大黄.

目的 优选红黄丹酊复方的制备工艺.方法 以羟基红花黄色素A(HYSA)、大黄游离蒽醌的提取率和总固体得率作为考察指标,通过层次分析法(AHP)、基于指标相关性确定权重的方法(CRITIC)及AHP-CRITIC混合加权法对各指标的权重系数赋值,应用综合评分法对正交试验结果进行分析,优选红黄丹酊剂的的制备工艺参数.结果 AHP-CRITIC混合加权法科学合理,优选出的最佳制备工艺为4倍量50％乙醇浸渍10 d.结论 优选的制备工艺简便、稳定、成本低,可用于红黄丹酊的制备.

目的:通过筛选大黄炭的潜在质量标志物,分析大黄炭炮制过程中潜在质量标志物的变化规律,为大黄炭炮制机理研究与炮制终点判断提供参考.方法:本研究基于经典文献与网络药理学分析,初步筛选大黄炭的潜在质量标志物.以LPS诱导的HUVEC细胞作为大黄炭"凉血化瘀"功效的体外评价模型,进一步验证大黄炭的潜在质量标志物.使用色差仪对大黄炭的颜色特征进行量化,分析大黄炭炮制过程中潜在质量标志物与颜色变化的关联性.结果:大黄炭的潜在质量标志物可分为两类:结合蒽醌与番泻苷为一类,随炮制程度增加而递减,可能与大黄制炭后泻下作用减弱有关;游离蒽醌、没食子酸、5-HMF为另一类,随炮制程度增加而先增后减,可能与大黄制炭后凉血化瘀作用增加有关.结论:大黄炭中结合蒽醌可作为潜在的"减毒"质量标志物,游离蒽醌可作为潜在的"增效"质量标志物.

目的:比较不同干燥方法下得到的小承气汤干膏粉中蒽醌类成分的含量及HPLC指纹图谱相似度;考察不同干燥方法下干膏粉粉体性质,为小承气汤干膏粉的干燥和颗粒制备提供依据.方法:分别采用冷冻、脉动真空、喷雾和减压干燥制备小承气汤干膏粉,测定其游离蒽醌和总蒽醌的含量,比较其HPLC指纹图谱的相似度.同时测定干膏粉的物理性质,并建立其物理指纹图谱,综合评价其粉体学性质.结果:与水煎液中蒽醌类成分含量比较,喷雾干燥、脉动真空干燥得到的干膏粉无显著性差异(P>0.05),减压干燥、冷冻干燥得到的干膏粉存在显著性差异(P<0.05);4种干燥方法下小承气汤干膏粉HPLC指纹图谱相似度均>0.978;物理指纹图谱显示,4种粉体的干燥方法对小承气汤干膏粉粉体学性质存在一定影响;4种粉体的流动性均较差,但喷雾干燥样品具有较好的可压性和均一性,可用于其颗粒的干法制粒.结论:喷雾干燥方法适合小承气汤干膏粉及其颗粒的制备.

大黄酚是从中药中提取出的一种蒽醌类有效单体,以游离苷元的形式存在于大黄、何首乌、决明子等中药中.有研究表明,大黄酚可以透过血脑屏障并通过多种途径减轻脑缺血再灌注损伤,也可作用于其他中枢神经系统疾病.脑缺血再灌注损伤是脑组织在缺血缺氧的基础上恢复血液后,脑组织结构和功能损伤反而加重,甚至发生不可逆损伤的现象,大黄酚减轻脑缺血再灌注损伤的机制主要有:①抗氧化应激:大黄酚可以提高海马组织中超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)的含量,加速清除自由基,调节氧化应激反应;②抗炎反应:大黄酚可抑制NALP3炎症复合体的激活,降低IL-6,TNF-α和NOS等炎症因子的水平,减轻炎症反应,并对脑缺血起到改善作用;③抑制细胞凋亡:通过抑制促凋亡因子Bax蛋白表达,降低Belin1蛋白水平,减少神经元的凋亡而发挥神经保护作用;④调节中枢神经递质:乙酰胆碱和氨基酸是脑内重要的神经递质,抑制组织中乙酰胆碱酯酶活性从而增加乙酰胆碱含量,平衡谷氨酸-谷氨酰胺循环从而调节脑内氨基酸水平均有助于改善脑缺血再灌注损伤.综上所述,大黄酚可通过抗氧化、抗炎、抑制细胞凋亡、调节中枢神经递质等减轻脑缺血再灌注损伤,发挥神经保护作用.

目的:建立指纹图谱、多成分定量与模式识别相结合的大黄质量评价方法.方法:高效液相色谱法测定9批饮片、2批药材共计11批大黄样品指纹图谱,建立指纹图谱共有模式,并对11批样品指纹图谱进行相似度评价,通过对照品比对指认部分成分,并测定样品中量,分别对指纹图谱及含量测定数据进行聚类分析和主成分分析.结果:11批样品指纹图谱标定了35个共有峰,指认了其中11个成分分别为2个鞣质单体(没食子酸和儿茶素)、4个结合型蒽醌(芦荟大黄素-8-O-葡萄糖苷、大黄素-1-O-葡萄糖苷、大黄酚-1-O-葡萄糖苷和大黄素-8-O-葡萄糖苷)和5个游离型蒽醌(芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚和大黄素甲醚);饮片中游离型蒽醌量占总蒽醌量的比例明显高于药材,指纹图谱相似度和聚类分析均可区分大黄饮片和药材;35个共有峰可分为两类,其中5个游离型蒽醌及没食子酸等8个成分为一类,4个结合型蒽醌及儿茶素等27个成分为另一类;9批饮片主成分综合得分与含量测定结果明显相关.结论:所建立的方法直观、简便、准确、可行,可用于全面评价大黄质量.

目的 分析何首乌水提物中主要化学成分及其量,阐明何首乌水提物及其主要成分对人正常肝实质细胞L02中CYP1A2、CYP2C9和CYP2E1 mRNA表达的影响.方法 HPLC测定何首乌水提物中主要化学成分及其质量分数;MTT法确定何首乌水提物及其主要成分对L02细胞活力的影响;实时荧光定量PCR测定L02细胞中CYP1A2、CYP2C9和CYP2E1mRNA表达量.结果 何首乌水提物主要含有二苯乙烯苷、大黄素-8-O-β-D-葡萄糖苷、大黄素和大黄素甲醚,各成分在何首乌水提物中的质量分数分别为(1.14±0.03)％、(0.1069±0.001 6)％、(0.010 8±0.000 9)％、(0.003 55±0.000 19)％:何首乌水提物及其主要成分作用L02细胞24 h,何首乌水提物和大黄素对细胞活力的影响随着药物浓度的增加抑制作用增强,IC50值分别为7.290 mg/mL和0.082 mmol/L,二苯乙烯苷、大黄素-8-O-β-D-葡萄糖苷和大黄素甲醚在实验浓度范围内对细胞活力的抑制作用不明显;何首乌水提物、大黄素均可明显抑制L02细胞中CYP1A2、CYP2C9、CYP2E1 mRNA的表达;大黄素-8-O-β-D-葡萄糖苷抑制CYP1A2和CYP2C9的mRNA表达;二苯乙烯苷抑制CYP1A2 mRNA表达,但激活CYP2C9mRNA表达;大黄素甲醚浓度依赖性抑制CYP1A2、CYP2C9 mRNA表达,却表现低浓度抑制、高浓度激活CYP2E1 mRNA表达.结论 何首乌水提物抑制L02细胞中CYP1A2、CYP2C9和CYP2E1 mRNA表达是其所含各种成分综合作用的结果,何首乌4种主要成分均可抑制CYP1A2 mRNA表达,蒽醌成分是抑制CYP2C9 mRNA表达的主要成分,游离葸醌是抑制CYP2E1 mRNA表达的主要成分.