目的 了解上海市黄浦区市售食品中食源性寄生虫感染状况,为制订食品安全策略提供依据.方法 2015～2017年对上海市黄浦区部分农贸市场和超市的淡水类水产品、海水类水产品、肉类、贝类、牛蛙等食品,分别采用消化法、压片法、剖检法和PCR方法检测寄生虫囊蚴、幼虫和DNA.结果 共检测各类淡水类产品14种271尾(份),华支睾吸虫囊蚴、东方次睾吸虫囊蚴、棘颚口线虫、并殖吸虫囊蚴感染率均为0,腌制黄泥螺棘口吸虫囊蚴感染率为90.91％;检测海鱼27种684尾,有11种海鱼感染异尖线虫,其中小黄鱼、白姑鱼、带鱼、鲐鱼感染较高,感染率分别为80.72％、64.71％、50.00％、40.00％;检测猪肉样品33份,牛肉样品25份,未检出刚地弓形虫、旋毛虫、猪带绦虫和牛带绦虫;检测螺56份,未检出广州管圆线虫;检测牛蛙29只,未检出曼氏迭宫绦虫裂头蚴.结论 上海市黄浦区部分食品受到寄生虫感染,主要是海鱼感染异尖线虫,今后必须继续开展食品卫生宣教工作,提高群众的自我防护意识.

诊治分析宁海县首例带绦虫感染病例,并鉴定感染虫种.对患者开展流行病学调查,收集患者主要临床表现、生活习惯等资料.采集患者粪样,制备生理盐水涂片,观察虫卵形态.使用槟榔南瓜子进行驱虫治疗,对患者排出的虫体进行形态学观察.利用PCR技术扩增虫体DNA的线粒体细胞色素c氧化酶1(cox1)基因片段并进行序列分析.流行病学调查结果显示,患者无外出旅行史和生食史,仅2017年9月初曾食过未完全煮熟的牛肉.于2017年11月10日出现腹泻、易饥饿现象;11月26日,肛周首次排出长约30 cm、白色、扁平状、类似面条样的节片;12月4日,肛周再次排出长约2 cm的多节节片,遂至宁海县中医院诊治,诊断为“疑似带绦虫病”.粪样镜检结果显示,可见虫卵,内含六钩蚴,未见卵膜.对排出的成虫进行形态学鉴定:虫体前端细长,向后逐渐变粗变宽变厚,由颈节和链体节片连接而成,未发现头节;孕节子宫分支整齐,每侧约24～28支,总长5.32 m,疑似牛带绦虫.cox1基因经PCR扩增后,可获得长度为832 bp的目的条带.测序后的BLAST比对分析结果显示,目的条带与牛带绦虫(Taenia saginata,GenBank登录号为AB107239.1)cox1基因序列的同源性为99％,与亚洲带绦虫(Taenia asiatica,GenBank登录号为AB107235.1)和猪带绦虫(Taenia solium,GenBank登录号为AB066485.1)cox1基因序列的同源性分别为96％和88％.综合患者的流行病学调查、虫体形态学观察、cox1基因序列比对的结果,确诊该患者属于食用未煮熟牛肉引起的牛带绦虫感染.

患者,女,30岁,藏族,拉萨市堆龙德庆区德庆乡人,农民.于2018年9月13日出现上腹部疼痛,伴恶心、呕吐,无发热,于当地私人诊所就诊,给予口服药物(具体不详)治疗后无效.后转移至右下腹疼痛,程度加重,至德庆区人民医院就诊.患者既往体健,久居德庆乡.查体:体温38.4℃,脉搏95次/min,呼吸20次/min,血压116/67 mm Hg(1 mm Hg=0.133 kPa),神清、表情痛苦,腹平、未见胃肠型,全腹未扪及包块,右下腹压痛,伴反跳痛、肌紧张.

牛带绦虫又称肥胖带绦虫、无钩绦虫.牛带绦虫和猪带绦虫(即猪肉绦虫或链状带绦虫)同属于圆叶目、带科、带属,在我国主要流行于西藏、新疆、云南等少数民族居住的农牧区[1-2].山东省临沂市人民医院首次发现1例牛带绦虫病例,现将病例的治疗与转归情况报道如下.

鹤草酚是仙鹤草根芽的提取物，应用此药治疗64例带绦虫患者，38例驱下有头节的虫体，其中牛带绦虫2例，猪带绦虫36例。将新鲜标本经冷冻断裂后，用扫描电镜观察绦虫的体壁表面及断裂的内部变化。发现带绦虫经药物作用后，体壁表面的微绒毛几乎完全剥落并呈斑块状剥蚀、剥脱或褶皱等现象。冷断面的体壁实质中空泡增多、线粒体减少，而生殖系统则无异常变化。作者认为，绦虫体壁的破坏可以阻断虫体的正常代谢，是绦虫致死的病理学基础。

目的 建立一种新的敏感、特异且能快速检测细粒棘球绦虫G1的重组酶介导扩增技术(Recombinase aided isothermal amplification,RAA). 方法 以细粒棘球绦虫G1(E.granulosus G1,EgG1)线粒体基因序列(GenBank No.AF297617)作为靶序列设计合成引物,以EgG1 DNA为模板进行RAA扩增,反应产物预期大小为284 bp.以聚合酶链式反应(PCR)作为平行对照,应用RAA扩增不同稀释浓度的基因组DNA及梯度稀释的含目的基因片段不同拷贝数的pMD19-T(Simple)克隆质粒,以评价RAA检测方法的检测灵敏度;应用此方法检测多房棘球绦虫、牛带绦虫、亚洲带绦虫、多头带绦虫、犬复孔绦虫、犬弓首蛔虫、毛首鞭形线虫、贾第鞭毛虫、肝片吸虫、卫氏并殖吸虫、大片吸虫以及华支睾吸虫基因组DNA,以评价方法的特异性.方法优化后用于检测感染EgG1的动物组织标本(10份)、模拟现场阳性犬粪标本(3份)以及现场阳性犬粪标本(5份),以验证该项检测技术的可靠性和实用性. 结果 建立的RAA法可在40 min内特异性扩增EgG1的目的基因片段,最低可检测量为10 pg;以重组质粒为模板,RAA法最低检出质粒拷贝数为104个.用建立的RAA法检测其他寄生虫(包括多房棘球绦虫)结果均为阴性.用优化的RAA方法检测感染EgG1的动物组织标本以及阳性粪便标本(包括模拟现场粪便标本),结果均为阳性,且与PCR检测结果一致. 结论 建立的针对EgG1的RAA方法,其具有简便快捷、检测灵敏度与特异性均较好的特点,可望用于细粒棘球绦虫虫种的鉴定以及棘球蚴病基因诊断.

目的 建立一种快速检测细粒棘球绦虫G1(EgG1)与多房棘球绦虫(Em)DNA的重组酶介导的多重核酸等温扩增方法(mRAA). 方法 以EgG1和Em线粒体基因作为靶序列,设计特异性引物,建立快速检测棘球绦虫的mRAA方法.分别扩增浓度为10.00、5.00、1.00、0.50、0.10、0.05、0.01 ng/μl棘球绦虫基因组DNA及105、104、103、102、10个拷贝/μl的pMD19-T (Simple)克隆质粒,评价mRAA方法的敏感性;分别以牛带绦虫、亚洲带绦虫、多头带绦虫、犬复孔绦虫、犬弓首蛔虫、毛首鞭形线虫、蓝氏贾第鞭毛虫、肝片形吸虫、卫氏并殖吸虫、大片形吸虫以及华支睾吸虫基因组DNA为模板,评价mRAA方法的特异性.采用优化后的mRAA方法,分别对3份EgG1和Em混合模拟犬粪样、19份现场采集的棘球绦虫感染动物肝脏组织(10份EgG1感染、9份Em感染)、7份现场采集的棘球绦虫阳性犬粪(5份EgG1感染、2份Em感染)进行检测,验证mRAA方法的可靠性和实用性. 结果 建立的mRAA方法可特异性扩增EgG1和Em线粒体基因片段,长度分别约为250 bp、500 bp.mRAA方法对EgG1和Em基因组DNA的最低检测限为2 pg/μl,对EgG1和Em重组质粒的最低检测限为200个拷贝/μl.mRAA方法对牛带绦虫、亚洲带绦虫、多头带绦虫、犬复孔绦虫、犬弓首蛔虫、毛首鞭形线虫、蓝氏贾第鞭毛虫、肝片形吸虫、卫氏并殖吸虫、大片形吸虫以及华支睾吸虫基因组DNA的扩增结果均为阴性.mRAA方法成功检出所有EgG1和Em混合模拟犬粪样、棘球绦虫感染动物肝脏组织、棘球绦虫阳性犬粪样,且检测结果与mPCR一致. 结论 建立的mRAA方法可用于EgG1和Em DNA的快速检测,敏感性、特异性和可靠性均较好.

目的 应用重组酶聚合酶扩增(RPA)技术,建立一种敏感、特异、简便且快速的日本血吸虫核酸检测方法. 方法 选择Sj28S核糖体基因片段为靶序列,用Primer Premier 5软件设计特异性引物,建立RPA扩增反应,并进行优化以确定最佳反应条件.提取不同虫期日本血吸虫,以及曼氏血吸虫、埃及血吸虫、单尾尾蚴感染钉螺、华支睾吸虫、大片形吸虫、卫氏并殖吸虫和牛带绦虫等基因组DNA,评价所建立方法的特异性和敏感性,并对不同混合比例(1∶10、1∶50、1∶100、1∶250、1∶500、1∶1000、1∶2000)的阳性和阴性钉螺基因组DNA的检出性能和重复性进行评价. 结果 建立的RPA方法可特异地扩增出日本血吸虫216 bp大小的目的基因片段.RPA的最佳反应条件为39℃、20 min.该方法与曼氏血吸虫、埃及血吸虫、单尾尾蚴感染钉螺、华支睾吸虫、大片形吸虫、卫氏并殖吸虫和牛带绦虫及阴性钉螺基因组DNA均无交叉反应.针对日本血吸虫成虫基因组的最低检出限为100 fg/μl,针对重组质粒的最低检出限为100拷贝/μl,且血吸虫不同虫期的基因组DNA样本均能被准确检出.应用建立的RPA方法检测不同混合比例钉螺DNA混合样品,结果显示,最低检出比例为1:1000.重复性试验结果显示,5次检测结果完全一致,无假阴性和假阳性. 结论 建立了日本血吸虫RPA检测方法,该法敏感性高、特异性好、简便快速,有望用于血吸虫感染的快速检测及风险监测.

目的 建立一种基于重组酶介导等温扩增技术(RAA)的细粒棘球绦虫核酸检测方法.方法 针对细粒棘球绦虫12S rRNA基因序列片段,设计、筛选并合成RAA特异性扩增引物和荧光检测探针,构建细粒棘球绦虫荧光RAA检测方法.分别以含靶序列的不同拷贝数重组质粒和不同浓度细粒棘球绦虫基因组DNA为模板进行荧光RAA扩增,评价其检测灵敏度;分别以细粒棘球绦虫、多房棘球绦虫、日本血吸虫、曼氏血吸虫、十二指肠钩虫、华支睾吸虫、牛带绦虫、曼氏迭宫绦虫、猪带绦虫基因组DNA为模板进行荧光RAA扩增,评价其检测特异性.结果 成功建立了细粒棘球绦虫荧光RAA检测法,在39℃条件下20 min内可以实现对细粒棘球绦虫基因组DNA特异性扩增,最低可以检测出10拷贝/μL含靶序列的重组质粒DNA和0.1 ng/μL细粒棘球绦虫基因组DNA样本,具备较高敏感性;对多房棘球绦虫、日本血吸虫、曼氏血吸虫、十二指肠钩虫、华支睾吸虫、牛带绦虫、曼氏迭宫绦虫、猪带绦虫基因组DNA均无阳性扩增,具备较高特异性;且该荧光RAA法可成功检出细粒棘球绦虫包囊中DNA.结论 成功建立了一种快速、灵敏、特异的可用于细粒棘球绦虫核酸检测的荧光RAA法.

患者,男,40岁,青海省果洛州班玛县人.患者2019年6月2日出现不明原因持续性腹痛,进食后症状加重,以脐周及右下腹疼痛为甚,伴有恶心、呕吐,静脉给予抗生素无效.15日就诊于青海省福利慈善医院.查体:体温38.4℃,急性病容貌,强迫体位,腹膨隆,腹肌紧张,腹部压痛,以脐周和右下腹为明显,有反跳痛,肠鸣音弱,无气过水声.实验室检查:白细胞19.0×109/L,中性粒细胞17.9×109/L,血红蛋白148 g/L.