目的:探讨低氧诱导因子-1α(hypoxia inducible factor-1α，HIF-1α)的小干扰RNA(small interfering RNA，siRNA)载体对胶原诱导关节炎(collagen-induced arthritis，CIA)小鼠的治疗效果及其对巨噬细胞的作用机制。方法:对DBA/1小鼠注射牛Ⅱ型胶原建立CIA小鼠模型。建模成功的CIA小鼠分别给予尾静脉注射阴性对照腺病毒和HIF-1α-siRNA腺病毒，每周1次，共4周。实验分为空白组、CIA模型组、阴性对照组和HIF-1α-siRNA组。分离培养骨髓来源的巨噬细胞(bone marrow-derived macrophages, BMDMs)，RT-PCR检测4组小鼠BMDMs中CD206、精氨酸(arginine, Arg)的相对表达量；流式细胞术检测小鼠脾脏和胸腺中F4/80 +CD16/32 +M1和F4/80 +CD206 +M2型巨噬细胞比例；HE染色观察小鼠踝关节的病理变化；免疫组化法检测小鼠滑膜组织中巨噬细胞及其亚型水平。 结果:(1)与空白组比较，模型组小鼠BMDMs中CD206 mRNA水平降低，Arg mRNA水平升高( P<0.01)。HIF-1α-siRNA可升高CIA小鼠BMDMs中CD206 mRNA表达水平( P<0.05)，降低Arg mRNA表达水平( P<0.01)。(2)与空白组比较，CIA模型组小鼠脾细胞和胸腺细胞中F4/80 +CD16/32 +M1巨噬细胞比例增加( P<0.05)，胸腺细胞中F4/80 +CD206 +M2巨噬细胞比例下降( P<0.05)。HIF-1α-siRNA可以降低CIA小鼠脾细胞和胸腺细胞中F4/80 +CD16/32 +M1巨噬细胞比例( P<0.05)，升高胸腺细胞中F4/80 +CD206 +M2型巨噬细胞比例( P<0.01)。(3)CIA小鼠踝关节的滑膜增生，以M1型巨噬细胞浸润为主；HIF-1α-siRNA可以减轻滑膜组织的增生及炎症细胞的浸润，尤其是M1型巨噬细胞的浸润。 结论:HIF-1α-siRNA可以降低胸腺细胞、BMDMs和小鼠滑膜组织中M1型巨噬细胞的比例，增加M2型巨噬细胞的比例，减轻CIA小鼠滑膜组织的巨噬细胞浸润和增生的情况，提示HIF-1α-siRNA可以通过调控M1型和M2型巨噬细胞的分化而起到治疗CIA小鼠的作用。

膀胱癌是泌尿系统最常见的恶性肿瘤。免疫治疗作为一种新型的治疗方法，在尿路上皮癌领域取得了巨大成功。溶瘤病毒作为免疫治疗的一项新兴研究热点，可以通过特异性破坏肿瘤细胞或激活特异性抗肿瘤免疫的双重作用机制来达到抗肿瘤效应。目前，溶瘤病毒在膀胱癌的治疗中取得了重大突破，特别是在非肌层浸润性膀胱尿路上皮癌的治疗方面。包括腺病毒、柯萨奇病毒、牛痘病毒及单纯疱疹病毒等在内的溶瘤病毒，在膀胱灌注治疗膀胱癌的多项临床试验中显示出良好的安全性和有效性。特别是在重组腺病毒干扰素α治疗膀胱癌的Ⅲ期临床试验中，高达53%的患者3个月时获得完全缓解，且无Ⅳ/Ⅴ级不良反应。本文就溶瘤病毒在膀胱癌治疗中的研究现状和进展进行综述。

目的:探讨胱天蛋白酶募集域蛋白9(CARD9)在大鼠急性胰腺炎相关性肺损伤(APALI)中的作用及机制。方法:30只雄性Sprague Dawley大鼠采用随机数字表法分成对照组(6只)、APALI组(12只)、腺病毒干扰组(12只)。通过胰管注射牛磺胆酸钠建立重症急性胰腺炎(SAP)大鼠模型，造模后3、6 h处死动物。苏木精-伊红(HE)染色评估胰腺组织及肺组织的病理改变。采用时聚合酶链反应(RT-PCR)检测肺组织中CARD9、p65核因子-κB(p65NF-κB)、p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)的转录水平。采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-1β、IL-6水平及肺组织中髓过氧化物酶(MPO)水平。蛋白质印迹法(Western blot)检测肺组织中CARD9、p-p65NF-κB、p-p38MAPK蛋白表达水平。组间数据比较采用单因素方差分析，最小显著性差异法(LSD)法或Tamhane’s T2法进行两两比较。结果:APALI组3、6 h肺组织中CARD9 mRNA水平均高于Control组[3 h(5.572±0.722)、6 h(12.588±2.008)比(0.991±0.066)， F＝134.738， t＝15.475、14.139， P值均<0.05]，差异均有统计学意义；腺病毒干扰组3、6 h CARD9 mRNA水平均低于APALI组相同时间点[3 h(3.079±0.348)比(5.572±0.722)、6 h(7.945±1.538)比(12.588±2.008)， F＝55.899， t3 h＝7.618、 t6 h＝4.497， P值均<0.05]，差异均有统计学意义。造模后3、6 h，APALI组肺组织中NF-κB mRNA、p38MAPK mRNA水平均高于对照组[NF-κB 3 h(6.746±0.894)、6 h(15.116±1.939)比(0.973±0.076)，p38MAPK 3 h(4.422±0.369)、6 h(6.405±0.590)比(0.973±0.536)， tNF-κB＝15.766、17.849， tp38MAPK＝22.686、22.469， P值均<0.05]，差异均有统计学意义；造模后3、6 h，腺病毒干扰组的NF-κB mRNA、p38MAPK mRNA水平分别低于APALI组同时间点[NF-κB 3 h(4.002±0.543)比(6.746±0.894)、6 h(8.771±0.805)比(15.116±1.939)，p38MAPK 3 h(2.705±0.232)比(4.422±0.369)、6 h(5.372±0.401)比(6.405±0.590)， tNF-κB＝6.430、7.401， tp38MAPK＝9.969、3.351， P值均<0.05]，差异均有统计学意义。 结论:APALI大鼠肺组织中存在CARD9相关的NF-κB、p38MAPK信号通路，可通过抑制CARD9表达、减轻炎性反应对APALI发挥保护作用。

患者，女性，62岁。两个月前因"右眼干涩1个月"于当地医院就诊，诊断为干眼，先后使用玻璃酸钠滴眼液和右旋糖酐70滴眼液治疗(生产厂家及用法不详)，未见明显好转。因对治疗效果不满意，故患者于2021年8月17日于哈尔滨医科大学附属第二医院眼科寻求进一步诊治。主诉为右眼磨痛干涩伴少量黏性分泌物3个月。否认有全身系统性疾病史。右眼视力0.1，左眼视力1.0；右眼眼压20 mmHg(1 mmHg＝0.133 kPa)，左眼眼压18 mmHg；右眼结膜充血，角膜中央浅层炎症浸润，形态不规则。见图1。睑板腺开口无阻塞，泪河充盈，Schirmer试验结果显示右眼12 mm/5 min，左眼14 mm/5 min。根据患者的症状和体征，临床初步诊断为右眼浅层角膜炎。给予氧氟沙星滴眼液(日本参天株式会社生产)点眼，4次/d；妥布霉素滴眼液(美国爱尔康公司生产)点眼，4次/d；红霉素眼膏(北京双吉制药有限公司生产)睡前涂于结膜囊内。3 d后患者复诊，自觉眼部症状减轻，但仍觉眼干，结膜充血和角膜炎症浸润均略减轻，分泌物基本消失。虽然患者角膜炎症明显，但却并无明显角膜刺激征的眼痛表现，遂行角膜知觉检查，经细长棉丝轻触角膜检查，结果为阴性。经HRT3型共聚焦显微镜(德国海德堡公司生产)检查，可见角膜上皮下神经缺失明显。见图2。经问询，患者承认右眼有反复眼结膜充血病史。经弓形虫、风疹病毒、巨细胞病毒及单纯疱疹病毒(herpes simplex virus，HSV)血清学检测，结果显示HSV－免疫球蛋白G阳性，HSV－免疫球蛋白M阴性。故临床诊断为单纯庖疹病毒引起的神经营养性角膜炎。给予神经生长因子滴眼液(意大利东沛制药公司生产)点眼，6次/d；小牛血去蛋白提取物眼用凝胶(沈阳兴齐股份有限公司生产)，3次/d；氧氟沙星滴眼液点眼，2次/d。因神经生长因子滴眼液价格昂贵，患者拒绝使用。15 d后患者复诊，诉其合眼困难，经裂隙灯显微镜检查，可见右眼角膜中央有一条水平方向线样上皮缺损。见图3A和图3B。但无磨痛感，患者否认有外伤和自伤行为史；左眼球结膜睑裂斑处无明显水肿，而右眼球结膜睑裂斑处充血水肿。见图3C和图3D。见图3C和图3D。患者家属诉患者睡眠时右侧眼睑无法正常闭合。遂在现有治疗基础上，嘱其配戴角膜绷带镜(美国博士伦公司生产)并建议前往神经内科会诊。神经内科诊断为特发性面神经麻痹导致眼睑闭合不全，给予营养神经治疗。1个月后患者复诊，结膜水肿明显好转，但眼睑闭合不全恶化。7 d后患者因眼睑闭合不全造成角膜绷带镜不慎遗失，经裂隙灯显微镜检查，可见少量丝状分泌物附着下方角膜，诊断为丝状角膜炎。见图4。建议给予氧氟沙星滴眼液点眼，3次/d；0.05%环孢素滴眼液点眼，2次/d，重新配戴角膜绷带镜。至2021年10月，角膜丝状物逐渐消失。于2021年11月23日复诊，角膜上皮恢复良好，为防止病情反复，建议患者继续配戴绷带镜。1个月余后绷带镜再次丢失，复发眼部感染，经过抗感染治疗后，因患者有丝状角膜炎发展趋势，故又重新配戴绷带镜。直到2022年2月11日，患者又多次反复感染丝状角膜炎，均因及时治疗而得到有效控制。此后10个月余，经过与神经内科和中医科合作，患者面神经麻痹程度日渐改善，右眼睑瞬目反射功能基本恢复正常，角膜炎症完全消失，角膜恢复透明。见图5。

目的 分析2021-2022年成都市病毒性腹泻病原学监测结果,总结肠道病毒流行规律,为肠道传染病的防控提供参考依据.方法 在成华区、金牛区、金堂县和彭州市各选择2所医院作为监测哨点,各哨点自2021年4月起采集24h排便3次及以上并伴有大便性状改变(呈稀便、水样便等),或24 h呕吐2次及以上的患者标本并开展病原学监测,监测病毒包括诺如病毒(NV)G Ⅰ、GⅡ型、轮状病毒(RV)A、B和C组、人星状病毒(AstV)、肠道腺病毒(AdV)、札如病毒(SaV).实验室检测方法包括荧光PCR、多病原检测和普通PCR检测.整理分析2021-2022年肠道病毒病原学监测数据.运用SPSS 19.0软件进行统计分析,计数资料描述采用频数和率,组间比较采用Pearson x2检验,检验水准为α=0.05,双侧检验.结果 2021-2022年成都市腹泻/呕吐病人标本检测病毒总阳性率为29.84％,其中RVA、NVGⅡ和AdV的阳性率最高,分别为11.90％、9.26％和8.73％.检出1种病毒型别的占比77.41％,同时检出2种病毒型别的占比16.90％,同时检出3种病毒型别的占比4.52％,同时检出4种病毒型别的占比1.18％.不同月份的腹泻病毒的检出率不同,总体阳性检出率最高在2月,为54.32％,之后呈逐月下降趋势.男性病毒检出阳性率为27.75％,女性病毒检出阳性率为32.27％,差异有统计学意义(x2=4.15,P=0.042).5岁及以下病毒检出阳性率为37.12％,其他年龄组病毒检出阳性率为23.52％,差异有统计学意义(x2=37.48,P＜0.001).不同职业病毒检出阳性率排前3位的是幼托儿童(41.46％)、散居儿童(36.32％)和学生(34.20％).结论 近两年来,轮状病毒、诺如病毒和肠道腺病毒是成都市病毒性腹泻的优势病原体,建议今后尤其应加强对这三类病毒的监测,开展有针对性的预防控制措施.

AIDS:获得性免疫缺陷综合征ALP:碱性磷酸酶ALT:丙氨酸氨基转移酶APTT:活化部分凝血活酶时间AST:天冬氨酸氨基转移酶ATP:三磷酸腺苷AUC:曲线下面积BMI:体重指数CRP:C反应蛋白CT:电子计算机体层扫描DBil:直接胆红素DNA:脱氧核糖核酸ELISA:酶联免疫吸附试验ESR:血沉(红细胞沉降率)FBS:胎牛血清FDA:食品药品监督管理局Fib:纤维蛋白原FPG:空腹血糖FT3:游离三碘甲状腺原氨酸FT4:游离甲状腺素GFR:肾小球滤过率HAV:甲型肝炎病毒HBeAg:乙型肝炎病毒e抗原HBsAg:乙型肝炎病毒表面抗原

伯氏疟原虫、约氏疟原虫和夏氏疟原虫是3种常见的鼠疟原虫,在疟疾疫苗研究中具有重要地位.环子孢子蛋白(CSP)、裂殖子表面蛋白-1(MSP-1)和顶端膜抗原1(AMA1)等抗原是几种有效的鼠疟原虫疫苗候选分子,本文综述了鼠伤寒沙门氏菌、卡介苗、乳酸乳球菌、根癌农杆菌、酵母菌、腺病毒、杆状病毒、牛痘病毒、A型流感病毒、猪细小病毒、刚地弓形虫和豚鼠利什曼原虫等载体介导的鼠疟原虫CSP、MSP-1和AMA1疫苗的研制现状.

目的 构建黑色素瘤缺乏因子2(AIM2)和环鸟苷酸-腺苷酸合成酶(cGAS)相关的HBV感染肝细胞模型,为研究DNA识别受体在肝细胞内固有免疫的炎症作用提供媒介.方法 从4种细胞系中筛选出AIM2和cGAS相对表达高的细胞系.通过慢病毒转染构建稳定过表达钠离子-牛磺胆酸共转运蛋白(NTCP)的该细胞系.超离和纯化的方法获取高纯度高HBV病毒量的血清液,用该血清培养细胞系,3 d后通过罗氏PCR方法测定细胞上清HBV病毒量,ELISA方法测定细胞上清液中乙型肝炎表面抗原(HBsAg)和e抗原(HBeAg).结果 Western blot及rtPCR结果显示4种细胞系中7721细胞系的AIM2和cGAS均高表达,其中AIM2的mRNA在各细胞系组间差异有统计学意义(P<0.05),cGAS的差异无统计学意义(P>0.05).成功构建稳定过表达NTCP的7721细胞系后,感染病毒3 d后细胞上清可检测出HBV病毒和HBsAg阳性,HBeAg阴性.结论 HBV感染的7721细胞系构建成功,可利用该细胞系进行AIM2和cGAS在肝细胞内固有免疫相关研究.

目的 探究黄芩苷对急性胰腺炎(AP)大鼠胰腺细胞自噬及Akt/mTOR通路的影响.方法 SD健康雄性大鼠80只,均尾静脉注射自噬双标腺病毒,其中60只经胰胆管逆行注射3.5％牛黄胆酸钠制备重症AP(SAP)模型,并随机分为模型组、善宁组(醋酸奥曲肽注射液)、黄芩苷组,另外20只仅开腹翻动十二指肠与胰腺作为假手术组.造模成功后10 min,黄芩苷组大鼠向右股静脉注入5％黄芩苷0.2 mL/100 g,接着用微量输液泵连续静脉输入5％黄芩苷.善宁组大鼠向右股静脉一次性推入善宁注射液2.5 μg/100 g,接着用微量输液泵以速度2.5 μg/(100 g·h)连续静脉输入善宁注射液.其余两组大鼠给予等量生理盐水.大鼠静脉给药3、6、12h后测定血清淀粉酶和TAP含量.造模后于相应时间点HE染色检测胰腺组织病理变化;造模后12h免疫荧光观察胰腺腺泡细胞自噬情况;造模后12 h Western blot检测LC3-Ⅱ、Akt、p-Akt、mTOR、p-mTOR蛋白表达变化.结果 造模后相应时间点,模型组、善宁组、黄芩苷组大鼠血清淀粉酶和TAP水平均显著高于假手术组(P＜0.05),黄芩苷组均显著低于模型组、善宁组(P＜0.05).HE染色发现,模型组可观察到腺泡水肿、坏死、出血,黄芩苷干预后大鼠胰腺组织损伤程度显著降低;模型组、黄芩苷组大鼠胰腺组织损伤病理学评分较假手术组均显著升高(P＜0.05),黄芩苷干预后较模型组、善宁组均显著降低(P＜0.05).荧光结果显示,造模后12h模型组、黄芩苷组大鼠胰腺自噬流绿色荧光显著强于假手术组,黄芩苷干预后显著低于模型组、善宁组.Western blot结果显示,造模后12h模型组大鼠胰腺组织LC3-Ⅱ蛋白表达水平较假手术组显著升高(P＜0.05),黄芩苷干预后显著低于模型组和善宁组(P＜ 0.05);造模后12h各组Akt、mTOR蛋白表达水平的差异无统计学意义(P＞0.05),但模型组大鼠胰腺组织p-Akt、p-mTOR蛋白表达水平较假手术组显著升高(P＜0.05),黄芩苷组显著低于模型组和善宁组(P＜0.05).结论 黄芩苷能明显减轻SAP大鼠的病情和胰腺细胞自噬程度,其机制可能与Akt/mTOR信号通路受到抑制有关.

目的 优化贝类中GⅡ型诺如病毒(NoV GⅡ)的检测方法.方法 用NoV GⅡ人工染毒贝类样本,分别比较曲通X-100缓冲液(KNT)、Tris/甘氨酸/牛肉膏(TGBE)缓冲液、甘氨酸缓冲液、脱脂牛奶、磷酸盐缓冲液(PBS)、PBS-吐温80缓冲液和大豆蛋白缓冲液的洗脱效果以及PEG沉淀法、超滤法和膜吸附法3种浓缩方法的回收效果,并采用实时荧光RT-PCR方法进行检测,最后运用优化后的方法对诺如病毒污染的贝类各组织的病毒含量进行检测,以确定最佳检测部位.结果 实时荧光RT-PCR结果表明,人工染毒后的贝类样品采用KNT缓冲液洗脱,再用PEG沉淀法浓缩,回收率最好,达18.95％;诺如病毒在贝类中的分布主要集中于进出水口、鳃和消化腺.结论 贝类海产品中诺如病毒的检测建议取贝类的进出水口、鳃和消化腺,用KNT缓冲液洗脱、PEG沉淀法浓缩,实时荧光RT-PCR进行检测,以提高检测率.