目的 探讨牛膝提取物含药血清对β淀粉样蛋白 1-42(amyloid β-protein1-42,Aβ1-42)诱导的神经元氧化应激和凋亡的影响及作用机制.方法 体外培养大鼠海马神经元,分为对照组,模型组(Aβ1-42 诱导神经元),牛膝低、中、高剂量组(15、30、45 μg/mL的牛膝提取物含药血清作用于Aβ1-42 诱导的神经元),si-ZBTB20-AS1 组[Aβ1-42 诱导转染锌指和BTB结构域蛋白 20 的反义RNA小干扰RNA的神经元]和si-NC组(Aβ1-42 诱导转染乱序无意义阴性序列的神经元).ELISA法检测超氧化物歧化酶(superoxide dis-mutase,SOD)和丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量,CCK-8 法检测细胞存活率,流式细胞术检测细胞凋亡率,RT-qPCR法检测ZBTB20-AS1 表达水平,Western blot法检测细胞增殖抗原Ki67 和胱天蛋白酶-3(cysteine aspartic acid specific protease-3,Cas-pase-3)表达水平.结果 与对照组比较,模型组SOD含量、细胞存活率、Ki67 蛋白表达均降低(P<0.05),MDA含量、细胞凋亡率、BTB20-AS1 表达、Caspase-3 蛋白表达均升高(P<0.05).与模型组比较,牛膝中、高剂量组SOD含量、细胞存活率、Ki67 蛋白表达均升高(P<0.05),MDA含量、细胞凋亡率、BTB20-AS1表达、Caspase-3 蛋白表达均降低(P<0.05).与si-NC组比较,si-ZBTB20-AS1 组SOD含量、细胞存活率、Ki67 蛋白表达均升高(P<0.05),MDA含量、细胞凋亡率、BTB20-AS1 表达、Caspase-3 蛋白表达均降低(P<0.05).结论 牛膝提取物含药血清可能通过下调ZBTB20-AS1 表达抑制Aβ1-42 诱导的海马神经元氧化应激和凋亡.

痛风性肾病是痛风及高尿酸血症常见的并发症之一,最终可发展至肾衰竭,危及生命.高血尿酸水平是痛风性肾病发病的基础,在尿酸的生理代谢过程中,尿酸转运蛋白(GLUT9、URAT1、OAT4、OAT10、GLUT12、NPT1、NPT4、OAT1、OAT2及OAT3等)在促进尿酸排泄方面发挥了重要作用,同时也是目前研究降尿酸药物的关键靶点之一.笔者查阅整理近3年中医药治疗痛风性肾病的相关文献,发现中药有效成分(猫须草水提物、菊苣酸、牛膝茎叶总皂苷、木犀草素、枸杞多糖、芍药花总苷、茯苓提取物及穿心莲提取物等)及中药复方(苓泽合剂、痛风宁、健脾清热利浊汤、复方芪苓配方颗粒及排酸护肾汤)在通过调节尿酸转运蛋白降低血尿酸水平方面有其独特优势,多个中药单体及复方可显著调节GLUT9、OAT1、OAT3、URAT1、ABCG2转运蛋白,降低血尿酸水平,改善高血尿酸所引起的肾组织炎症及损伤,保护肾脏.

目的:研究川牛膝不同浓度乙醇提取的粗多糖在体内的抗凝血活性.方法:用50％乙醇、20％乙醇、水为溶剂回流提取,乙醇醇沉,终浓度80％,沉淀出粗多糖,小鼠连续3 d灌胃给予高、中、低剂量川牛膝不同提取物沉淀的粗多糖,测定全凝血时间(CT)、出血时间(BT)、凝血酶原时间(PT)、凝血酶时间(TT)、活化的部分凝血活酶时间(APTT)和纤维蛋白原(FIB).结果:川牛膝水提粗多糖和20％乙醇提取粗多糖能显著延长CT、BT、APTT和TT,降低FIB值(P＜0.05),而对PT无明显的影响.而50％乙醇提取粗多糖对CT、BT、PT、APTT、TT延长作用不明显,且FIB值无变化.结论:川牛膝水提取粗多糖具有显著的体内抗凝血活性.20％乙醇提取粗多糖对体内抗凝血活性不如水提取粗多糖.50％乙醇提取粗多糖在体内无明显抗凝血活性.多糖有可能是体内抗凝血的活性成分,并通过内源性凝血途径和共同凝血途径发挥抗凝血作用,但是否是抗凝血的活性成分还有待进一步研究.

目的 研究湘产特色药材土牛膝Achyranthes aspera化学成分.方法 采用硅胶、反相硅胶柱色谱与溶剂重结晶等方法分离纯化,采用波谱方法进行单体结构鉴定.结果 从土牛膝醋酸乙酯提取物中得到9个单体化合物,分别鉴定为5,2'-二甲氧基-6-甲氧甲基-7-羟基-异黄酮(1)、齐墩果酸(2)、竹节参皂苷-1(3)、党参内酯(4)、3-吲哚甲醛(5)、3-吲哚甲酸(6)、4-(2-甲酰基-5-甲氧基甲基-1-氢-吡咯-1-基)丁酸(7)、3-羟基-1-(4-羟基-3,5-二甲氧基苯基)-1-丙酮(8)、2-(2-苯氧乙氧基)乙醇(9).结论 化合物1为1个新化合物,命名为土牛膝酮A;化合物4～9均为首次从该植物中分得.

目的 研究湘产特色药材土牛膝化学成分.方法 采用乙醇提取、溶剂萃取法初步分离,硅胶、反相硅胶柱层析与溶剂重结晶进行化合物分离纯化,通过波谱数据、理化性质及文献对照对分离得到的化合物进行结构鉴定.结果 从土牛膝乙醇提取物中获得7个蜕皮甾酮类化合物,分别为:β-蜕皮甾酮(1)、牛膝甾酮(2)、水龙骨甾酮B(3)、pterosterone(4)、24(28)-ecdysterone(5)、achyranthesterone A(6)、rubrosterone(7).结论 化合物4-7均为首次从该种植物中分离得到.

目的 对茯苓、蒲黄、白及、鸡血藤、郁金、红花、牛膝、何首乌、黄芪、仙茅、鹿衔草、白化参共12种中药的醇提取物进行筛选,探讨12种中药醇提取物对转化生长因子.β1(TGF-β1)诱导的非小细胞肺癌A549细胞上皮间质转化(EMT)的干预作用.方法 10 ng/ml TGF-β1诱导A549细胞;采用MTT法检测12种中药醇提取物对A549细胞增殖的影响;观察醇提取物对TGF-31诱导的A549细胞形态变化的影响;采用Western blot方法检测醇提取物对TGF-β1诱导的EMT相关标志蛋白的表达,以及对EMT相关信号转导的影响.结果 10 ng/ml的TGF-31诱导A549细胞48 h后使其发生EMT过程;何首乌醇提取物不影响A549细胞增殖;与TGF-β1组相比较,100μg/ml的何首乌醇提取物能逆转A549细胞形态变化过程;与TGF-β1组相比较,100 μg/ml的何首乌醇提取物降低vimentin蛋白表达水平(P＜0.05),上调E-cadherin蛋白表达水平(P＜0.05);与TGF-β1组比较,100 μg/ml的何首乌醇提取物降低p.Smad2和p-Erk蛋白表达水平(P＜0.05).结论 何首乌醇提取物具有抑制TGF-βi诱导的A549细胞上皮间质转化过程的作用,这可能与Smad2和Erk 1/2信号通路有关.

目的 研究牛膝提取物对大鼠骨髓间充质干细胞向髓核样细胞增殖与分化的影响.方法 分离培养原代大鼠骨髓间充质干细胞后,流式细胞仪检测细胞表面标记物,分成对照组和牛膝提取物组(10、30、50 μg/mL).培养14 d后,MTT法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡,阿利新蓝法检测葡糖胺聚糖含有量,实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)、免疫印迹(Western blot)检测细胞中Sox-9、Ⅱ型胶原(ColⅡ)、聚集蛋白聚糖(Aggrecan)水平.SIRT1抑制剂(尼克酰胺)处理细胞,MTT法检测细胞增殖,RT-PCR和免疫蛋白印迹检测SIRT1、Sox-9水平.结果 骨髓间充质干细胞表面CD90和CD44呈阳性表达,而CD45和CD34呈阴性表达.与对照组比较,牛膝提取物可显著促进骨髓间充质干细胞细胞增殖,抑制细胞凋亡,上调细胞葡糖胺聚糖含有量及Sox-9、ColⅡ、Aggrecan水平,以上差异均有统计学意义(P＜0.05),并呈剂量依赖效应.另外,尼克酰胺可抑制牛膝提取物诱导的骨髓间充质干细胞细胞增殖和Sox-9表达升高.结论 牛膝提取物可通过上调SIRT1水平来促进骨髓间充质干细胞向髓核样细胞增殖与分化.

目的 研究牛膝杯苋甾酮激发大鼠骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)体外迁移及CXCR4蛋白表达的影响.方法 按照牛膝杯苋甾酮5、10、20μg/mL浓度干预BMSCs,进行MTT法、Transwell迁移小室及PCR测试,确定杯苋甾酮激发BMSCs迁移的最佳浓度;通过siRNA沉默CXCR4,进一步验证SDF-1/CXCR4信号轴在杯苋甾酮干预BMSCs迁移中的作用.结果 MTT法、Transwell及PCR结果显示,以10μg/mL浓度杯苋甾酮干预BMSCs迁移效果最好,且CXCR4表达量最高(P＜0.05).用siRNA沉默CXCR4后,4组细胞的迁移能力从低到高的顺序均为CXCR4沉默组、空白对照组、杯苋甾酮+CXCR4沉默组、杯苋甾酮组(P＜0.05),与CXCR4蛋白表达一致.结论 活血药牛膝提取物杯苋甾酮能激发大鼠BMSCs体外迁移,其相关机制可能与上调CXCR4蛋白表达有关.

目的 分析中药牛膝叶中的化学成分和相对含量.方法 运用超高效液相-飞行时间高分辨质谱联用仪对牛膝叶的体积分数50％甲醇-水提取物的化学成分进行快速分析.结果 从产于河南温县的牛膝叶样品中共检测出38种化合物,其中7种化合物相对含量达5％以上.结论 中药牛膝叶化学成分分析结果为进一步阐明其药效物质研究奠定了基础.

目的 研究并比较不同规格怀牛膝不同极性部位的HPLC指纹图谱,探索其内部质量差异,为该药材的规格标准完善及临床用药提供参考.方法 将怀牛膝用体积分数75％乙醇水浴回流提取,得体积分数75％乙醇回流提取物,用40 mL水溶解后,依次用石油醚、三氯甲烷、乙酸乙酯、正丁醇进行萃取,得到各萃取相及萃取后的水相,浓缩至浸膏,采集各部位HPLC指纹图谱;运用相似度、综合聚类法进行数据分析,同时对其不同部位的指纹图谱进行比对分析.结果 石油醚、氯仿部位均标定了11个共有峰,乙酸乙酯部位标定了10个共有峰,正丁醇部位标定了19个共有峰,水部位标定8个共有峰;氯仿部位指纹图谱相似度差异较大,其他部位指纹图谱相似度差异较小,均在0.9以上;石油醚部位指纹图谱差异主要体现在峰高,乙酸乙酯部位、氯仿部位、水部位的化学成分种类及峰高均存在差异;综合聚类分析能将不同规格怀牛膝区分开.结论 不同规格怀牛膝内部质量存在差异;实验中所建立的HPLC指纹图谱可以全面反映不同规格怀牛膝的化学成分分布,为不同规格怀牛膝的整体质量评价提供参考.