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鉴别6种常见食用肉类的多重PCR检测体系的构建及验证
编辑人员丨5天前
目的 建立一种快速、准确、灵敏的多重PCR检测方法,用于同时鉴别6种常见食用肉类(牛、羊、鸡、猪、鹅、鸭),并评估其在肉类食品掺假鉴定中的应用价值.方法 基于GenBank数据库中6个物种的线粒体全基因组序列,筛选具有种内保守性、种间特异性的DNA序列(牛16S rRNA、羊COX-1、鸡Cytb、猪COX-1、鹅NADH2、鸭16S rRNA),并设计物种特异性引物,以此构建一个可同时鉴别6种常见食用肉类的多重PCR检测体系.对该体系进行种属特异性、灵敏度和重复性研究,并进行模拟混合样品检测.结果 成功构建了一个可同时鉴别6种常见食用肉类的多重PCR检测体系,该体系在非目标物种的DNA中均未有效扩增;在DNA模板量为0.0625~2 ng/μL时,6个物种的扩增产物均能检见.在鸭肉和牛肉混合比例低至0.5%时,仍能检测到鸭肉成分.结论 本研究构建了一个特异性强、灵敏度高、重复性好的多重PCR检测体系,可准确鉴别6种常见食用肉类食品中的动物源性成分,为我国常见食用肉类及肉制品的掺假鉴定提供了一种简单、实用的检测技术.
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编辑人员丨5天前
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环状RNA在类风湿关节炎的作用及机制研究进展
编辑人员丨5天前
RA是一种以慢性滑膜炎、骨质破坏为主要特征的全身性自身免疫性疾病,发病机制尚不明确。环状RNA(circular RNAs,CircRNAs)是一类内源性共价闭环结构的非编码RNA,广泛存在于真核细胞中,具有不易被RNA酶水解、细胞或组织特异性表达、不同物种间的进化保守和结构稳定等特征,在多种疾病的诊断和治疗中发挥着重要作用。本文综述了CircRNA的起源及其生物学功能、CircRNA在RA发病过程中的作用和机制等方面的研究进展,旨在为识别用于早期治疗的新的分子靶点及RA的精准靶向治疗提供新的思路。
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编辑人员丨5天前
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环状RNA的研究进展
编辑人员丨5天前
环状RNA(circular RNA,circRNA)是一类具有闭合环状结构的非编码RNA分子,大量存在于真核转录组中。环状RNA在不同的物种中具有保守性,同时存在组织及不同发育阶段的表达特异性。由于环状RNA对核酸酶不敏感,故比线性RNA更稳定。环状RNA具有竞争性内源RNA机制(competing endogenous RNAs,ceRNA),调控可变剪切和转录过程,以及与功能蛋白结合等功能。基于环状RNA的特征和生物功能,其在疾病中发挥着重要的调控作用。随着研究发展,环状RNA在组织和疾病的表达机制和功能机制也取得了进步。本综述旨在总结环状RNA的起源、特征、生物功能以及在疾病中的最新作用。
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编辑人员丨5天前
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环状RNA与心血管疾病关系的研究进展
编辑人员丨5天前
环状RNA是一种闭合的环状结构RNA,绝大多数具有物种间的高度保守性,又具有细胞与组织特异性,与细胞的生长、增殖和凋亡关系密切。研究发现环状RNA对很多心血管疾病的发生、发展有重要的调控作用。该文从环状RNA的形成、调控机制,及其与动脉粥样硬化、心肌梗死、心肌肥厚、肺动脉高压、心房颤动等心血管疾病的关系做一综述。
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编辑人员丨5天前
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胎膜早破孕妇阴道微生物组特征及预测模型的建立
编辑人员丨5天前
目的:研究胎膜早破孕妇阴道菌群特征,找出相关细菌种类,通过功能预测探索细菌与胎膜早破交联的相关功能通路,并建立以阴道菌群特征为基础的预测模型。方法:基于孕妇队列,纳入35例未足月胎膜早破、180例足月胎膜早破和255例胎膜未早破足月分娩(对照组)孕妇。使用16S rRNA基因二代测序技术检测孕妇在妊娠16~28周时的阴道样本V3~V4高变区序列。分析并比较3组孕妇之间Alpha多样性、Beta多样性,识别物种属性和代谢功能预测的差异。随后采用随机森林模型纳入阴道菌群物种以及危险因素,建立胎膜早破发生的预测模型。结果:未足月胎膜早破组与对照组相比,Alpha多样性更高(Observed features, P=0.022;Faith_pd指数, P=0.024),Beta多样性也有显著差异(Unweighted-UniFrac, P=0.010;Jaccard指数, P=0.008)。未足月胎膜早破孕妇中,巨型球菌Ⅰ型转化菌种显著增多( P=0.017),穆氏乳杆菌显著减少( P=0.003)。而足月胎膜早破孕妇中,巨型球菌属显著增多( P=0.009),穆氏乳杆菌显著减少( P=0.002)。功能预测方面,嗜酸菌的硫氧化途径( P=0.021)、乙酸产甲烷途径( P=0.036)、L-组氨酸合成途径( P=0.009)、腺苷钴胺素合成途径( P=0.041)和海藻糖代谢途径( P=0.001)这5种功能在未足月胎膜早破孕妇中显著增加,而L-组氨酸合成途径( P<0.001)和海藻糖代谢途径( P=0.030)在足月胎膜早破孕妇中显著增加。通过随机森林模型纳入阴道菌群物种以及危险因素建立预测模型,未足月胎膜早破预测模型的表现较好[AUC值为0.739(95%CI:0.609~0.869),灵敏度0.928,特异度0.659,阳性预测值0.750,阴性预测值0.906],具有一定的参考价值。 结论:阴道菌群特征可能与胎膜早破的发生发展有关,阴道细菌差异的研究可能成为防治胎膜早破的新思路,功能预测为胎膜早破发生发展机制的研究方向提供了参考借鉴,预测模型可以预防未足月胎膜早破的发生,促进母婴健康。
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编辑人员丨5天前
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凉血活血方对脓毒症急性肾损伤小鼠肠道菌群及NLRP3/caspase-1/GSDMD焦亡通路的影响
编辑人员丨5天前
目的:探讨凉血活血方对脓毒症急性肾损伤(AKI)小鼠肠道菌群、肠道屏障及肾组织NOD样受体蛋白3/天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶1/焦孔素D(NLRP3/caspase-1/GSDMD)细胞焦亡信号通路的影响。方法:将30只雄性C57BL/6小鼠随机分为假手术组(Sham组)、脓毒症组(CLP组)、脓毒症+凉血活血方组(CLP+LXHX组),每组10只。通过盲肠结扎穿孔术(CLP)建立脓毒症AKI小鼠模型;Sham组仅进行开腹处理。制模前2 h,CLP+LXHX组给予凉血活血方水煎剂(6 g/kg)灌胃治疗;Sham组及CLP组给予等体积生理盐水灌胃。制模后24 h,麻醉处死小鼠,取结肠和肾组织及结肠内新鲜粪便。光镜下观察小鼠肾组织和结肠组织的病理变化;采用实时聚合酶链反应(RT-PCR)检测小鼠肾脏组织炎症因子白细胞介素(IL-1β和IL-18)的mRNA表达;采用蛋白质免疫印迹试验(Western blotting)检测小鼠肾组织中NLRP3、caspase-1和GSDMD的蛋白表达;采用16S rDNA高通量测序检测小鼠肠道菌群的变化。结果:与Sham组比较,CLP组肾脏组织炎症细胞浸润增加,肾脏空泡化,肾脏组织中IL-1β和IL-18的mRNA表达及NLRP3、caspase-1和GSDMD的蛋白表达均明显升高;结肠组织病理损伤显著,肠道菌群的物种丰富度显著降低,肠球菌和埃希菌-志贺菌的相对丰度显著增加,回肠杆菌属、拟普雷沃菌属、毛螺菌属、克雷伯菌属和副萨特菌属的相对丰度显著升高。与CLP组比较,凉血活血方可以显著减轻脓毒症小鼠肾脏组织和结肠组织病理损伤,并降低病理评分(分:肾脏组织为1.75±0.43比3.50±0.50,结肠组织为1.25±0.43比4.50±0.50,均 P<0.05),改善肠道菌群组成,降低肠球菌和埃希菌-志贺菌的相对丰度,并显著增加乳酸杆菌和阿克曼菌属的相对丰度,显著降低肾脏组织中IL-1β和IL-18的mRNA表达〔IL-1β mRNA(2 -ΔΔCt):1.59±0.05比4.61±0.88,IL-18 mRNA(2 -ΔΔCt):1.69±0.17比2.86±0.63,均 P<0.05〕及NLRP3、caspase-1和GSDMD的蛋白表达(NLRP3/GAPDH:0.71±0.04比0.89±0.01,caspase-1/GAPDH:1.04±0.04比1.48±0.04,GSDMD/GAPDH:0.90±0.01比1.41±0.02,均 P<0.05)。 结论:凉血活血方对脓毒症所致AKI具有明显的保护作用,其作用机制可能通过调节肠道菌群改善肠道屏障,从而抑制肾脏组织中NLRP3/caspase-1/GSDMD信号通路的活化,降低焦亡相关炎症因子的表达。
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编辑人员丨5天前
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邻苯二甲酸二环己酯暴露致小鼠PXR激活及脂质稳态变化
编辑人员丨5天前
目前已发现塑料相关内分泌干扰物(endocrine disrupting chemicals,EDCs)暴露与人类心血管疾病(cardiovascular diseases,CVD)风险增加相关,但潜在的机制尚不清楚。孕烷X受体(pregnane X receptor,PXR)是一种具有外源物质感应作用的核受体,且具有促动脉粥样硬化作用。已有研究发现许多EDC具有PXR配体功能,提示PXR介导EDC暴露所致生理病理变化的可能性。该研究从塑化剂邻苯二甲酸二环己酯(dicyclohexyl phthalate,DCHP)暴露对CVD风险因素和脂质稳态产生的不良影响出发,探究PXR的参与机制和作用。该研究使用了多种在体和离体实验模型和方法,包括细胞体外试验、原代类器官培养、PXR条件敲除小鼠和PXR人源化小鼠模型。另外,靶向脂质组学被用于测量循环型神经酰胺水平,作为一种新型预测指标用于CVD的风险评估。研究结果发现DCHP是一种强效PXR选择性激动剂,可致野生型小鼠血浆胆固醇水平升高。肠上皮细胞特异性PXR敲除小鼠实验结果表明DCHP通过激活肠道PXR诱发高血脂症状。DCHP对循环神经酰胺升高的影响具有PXR依赖的特征。此外,DCHP所致PXR激活引起肠道脂肪生成和神经酰胺合成相关基因的表达上调。鉴于PXR在受体药理学方面表现出显著的物种差异,人源化PXR小鼠被用于验证并重复了上述发现。该研究发现了DCHP通过激活PXR致小鼠高胆固醇血症和神经酰胺生成的相关机制,提示了PXR在塑料相关EDC心血管健康风险中的重要作用,以及PXR用于邻苯二甲酸盐等其他EDC风险评估的意义和潜力。
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编辑人员丨5天前
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狂犬病疫苗免疫新进展
编辑人员丨5天前
目前的狂犬病疫苗免疫方案需要多剂量才能达到高中和滴度,而且成本高昂,在狂犬病死亡率高的发展中国家很难实施广泛的疫苗接种。许多临床前和临床研究正在进行,测试新型疫苗、佐剂和注射方法。关于使用活疫苗和替代疫苗载体的研究正在进行中,开发的DNA疫苗还达不到传统疫苗的免疫原性和中和能力。分子佐剂的发展能够以较少的抗原诱导更快、更强的免疫反应,已经产生了激动人心的临床前结果,似乎使我们更接近于一种更好的狂犬病疫苗。然而,严峻的挑战依然存在:分子佐剂需要与活疫苗一起施用,而免疫分子物种特异性的差异使佐剂研发复杂化。大多数新疫苗尚未在临床试验中进行测试,只有在各方面都优于现有疫苗的疫苗才有机会被广泛采用。
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编辑人员丨5天前
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胆汁酸调节鱼类糖脂代谢、免疫及肠道菌群的研究进展
编辑人员丨5天前
胆汁酸(BAs)是一类两亲性甾醇化合物,按来源可分为初级胆汁酸和次级胆汁酸,初级胆汁酸由肝脏中的胆固醇合成后进入肠道,在肠道中,初级胆汁酸在回肠末端和结肠上段肠道菌群的作用下转化为次级胆汁酸,大部分肠道中的胆汁酸在回肠部位通过肝肠循环进入肝脏,剩余胆汁酸随着粪便等排出体外.研究表明,胆汁酸在维持鱼类糖脂稳态、提高免疫功能、重塑肠道菌群等方面具有显著效果.不同鱼类中的胆汁酸成分具有物种特异性,不同胆汁酸的有益效果也因鱼而异,但是目前对鱼类中胆汁酸的组成、分类及功能知之甚少.文章总结了胆汁酸的组成分类、主要受体、生物学功能及其在鱼类上的研究进展和存在的问题,以期为鱼类中胆汁酸的进一步研究及其在水产养殖中的高效利用提供参考.
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编辑人员丨5天前
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肉制品中牛源性成分芯片数字PCR定量检测方法的建立
编辑人员丨1周前
目的 为了对肉制品中牛肉源性成分进行准确定量,本文采用数字PCR(dPCR)技术对牛肉的线粒体Cytb基因进行定量检测,根据基因拷贝数建立了肉制品中牛肉源性成分PCR的定量检测方法.方法 参照标准设计的牛源性特异性引物、探针,猪源性特异性引物、探针,鸭源性特异性引物、探针以及动物源性成分通用引物、探针,建立了双重数字PCR体系.结果 在一定范围内生鲜牛肉质量与DNA含量、DNA含量与DNA拷贝数之间均呈现明显的线性关系,并以DNA含量为中间值计算出DNA拷贝数(C)与生鲜牛肉质量之间的换算公式:M 牛=0.020 9C+0.676.应用建立的dPCR方法对构建的肉样模型进行检测,结果显示牛肉定量检测值与实际质量基本一致,且受外源物种的干扰小.运用该方法对抽取的10份市售牛肉样品检测,同时通过特异/通用引物扩增的拷贝数之比(%)辅助判断肉制品中是否存在非牛源性的其他动物源性成分掺假,检测出部分样品不符合标签规定.结论 该方法可实现对牛源性成分的量化检测,能够作为区分故意添加和无意污染的依据,为执法监管部门提供有力的技术保障.
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编辑人员丨1周前
