目的:探讨伴有自杀意念的抑郁症患者犬尿氨酸代谢通路是否存在异常，及与临床症状的动态关系。方法:根据DSM-5诊断标准前瞻性纳入2019年7月至2022年7月于上海市精神卫生中心心境障碍就诊的68例抑郁症患者，其中男28例，女40例，年龄［ M（ Q1， Q3）］为22.0（17.3，47.8）岁。根据贝克自杀意念量表（Beck Scale for Suicide Ideation，BSI）第4、5题认为是否有“弱”或“中等到强烈”的自杀意念将抑郁症患者分为伴自杀意念的抑郁症组（ n=41）和不伴自杀意念的抑郁症组（ n=27）。同时网络招募性别匹配的健康对照者72名，其中男29名，女43名，年龄为25.5（24.0，36.8）岁。使用24项汉密尔顿抑郁量表（Hamilton Depression Rating Scale-24，HAMD 24）、汉密尔顿焦虑量表（Hamilton Anxiety Rating Scale，HAMA）、BSI分别评估抑郁症患者的抑郁症状、焦虑症状及自杀意念；并采集空腹静脉血检测所有受试者的血浆犬尿氨酸代谢物水平。对伴自杀意念的抑郁症患者进行随访，在第2、4周末重复抑郁症状、焦虑症状及自杀意念的评估和外周犬尿氨酸代谢物的检测。使用超高效液相色谱-三重四极杆质谱联用仪测定血浆中犬尿氨酸代谢物的水平。对血液学指标对数转化后进行 Z-score标准化，不同代谢物的多重比较使用误报率校正。分析基线犬尿氨酸代谢物与量表分之间的关系；采用线性混合效应模型分析随访过程中犬尿氨酸代谢物与量表分的关系。 结果:抑郁症患者的外周吡啶甲酸（0.39±0.87比-0.23±1.09， t=3.89）、3-羟基犬尿氨酸与犬尿氨酸比值（3-hydroxykynurenine/kynurenine，3-HK/KYN）（0.38±0.85比-0.09±1.01， t=2.98）和3-HK（0.31±0.81比0.14±1.04， t=2.78）低于健康对照（均 P<0.05）。在伴或不伴自杀意念的抑郁症患者之间，犬尿氨酸代谢物之间的差异无统计学意义（均 P>0.05）。在伴有自杀意念的抑郁症患者中，基线HAMD 24、HAMA评分均与血浆3-HK（HAMD 24： r=0.38；HAMA： r=0.39）和3-HK/KYN（HAMD 24： r=0.34；HAMA： r=0.37）水平呈正相关（均 P<0.05）。纳入年龄、性别因素后，对该组患者的随访量表评分与犬尿氨酸代谢物水平建立线性混合效应模型，结果显示HAMA评分在随访过程中对3-HK/KYN的正向影响具有统计学意义（ B=0.04， t=2.46， P<0.05）。 结论:抑郁症患者存在犬尿氨酸代谢通路异常，3-HK及3-HK/KYN与伴有自杀意念的抑郁症患者的抑郁、焦虑水平存在相关关系，其中3-HK/KYN代表的犬尿氨酸-3-单加氧酶的活性与焦虑水平存在动态关联。

目的:验证犬尿氨酸酶(KYNU)Arg188Gln(G/A)突变能否改变KYNU的活性.方法:抽提人肝脏细胞的总RNA,通过RT-PCR法获得KYNU基因全长cDNA,以KYNU 基因 Arg188Gln 位点附近序列为模板设计定点突变引物,完成Arg188Gln(G/A)的定点突变,将突变型和野生型KYNU基因克隆到pcDNA载体质粒中,获得野生型和突变型pcDNA-KYNU重组表达质粒,经酶切鉴定和测序验证后转染HEK293细胞,蛋白质印迹法检测KYNU在细胞中的表达,用高效液相色谱法检测HEK293细胞的KYNU活性.结果:野生型和突变型pcDNA-KYNU重组质粒在 HEK293细胞中均能表达有活性的 KYNU,KYNU 的米氏常数分别为(9.833 ± 0.513)μmol/L 和(29.900 ± 0.265)μmol/L,最大酶促反应速率分别为(0.700 ± 0.096)nmol·mg-1·min-1和(0.084 ± 0.003)nmol·mg-1·min-1,差异均有统计学意义(均P<0.05).结论:Arg188Gln(G/A)突变可以减弱KYNU的活性.

目的 探讨卵清蛋白(OVA)致过敏性腹泻小鼠5-羟色胺(5-HT)信号系统的变化.方法 7～8同龄雌性BALB/c小鼠分为模型组、色甘酸钠处理组和对照组.模型组和色甘酸钠处理组分别在0d和14 d,腹腔注射OVA I(50 μg/只).28 d后,隔天对小鼠进行口服灌胃OVAⅡ(50 mg/只)激发(共8次).色甘酸钠处理组从28 d开始,隔天(口服灌胃激发前)给予色甘酸钠(78.0 mg/kg)(共8次).OVA口服灌胃后对小鼠进行综合评分、粪便评分及测定体温变化.43 d后,处死动物.摘眼球取血离心取血清并取胃组织.ELISA检测血清OVA特异性IgE(OVA-SIgE).液相色谱-质谱联用技术(LC-MS)测定血清中的5-HT及其上下游代谢产物犬尿酸(KYN)、色氨酸(TRP)、5-羟色胺酸(5-HTP)和5-羟基吲哚乙酸(5-HIAA)含量,利用实时定量PCR检测过敏小鼠胃组织5-HT代谢相关基因色氨酸羟化酶1(TPH1)、吲哚胺-2,3-双加氧酶1(IDO1)、单胺氧化酶A(MAO-A)、5-HT选择性再摄取转运体(SERT)及其受体5-羟色胺1A受体(HTR1 A)、HTR3A、5-羟色胺4受体(HTR4)的mRNA水平.结果 OVA致敏后,小鼠产生严重的过敏性腹泻,血清中的OVA-SIgE明显升高.血清中的KYN显著上升,5-HT、5-HIAA和5-HTP显著下降.胃组织IDO1及其受体HTR1A、HTR3A的mRNA水平增加,TPH1、MAO-A mRNA水平降低.给予色甘酸钠后综合评分、粪便评分、体温及OVA-SIgE明显降低,并且腹泻率也低于模型组,血清中的5-HIAA及胃组织中MAO-AmRNA水平升高,胃组织IDO1、5-HT1A、5-HT3A mRNA水平降低.结论 OVA致过敏性腹泻小鼠5-HT信号系统激活,给予色甘酸钠后,缓解过敏症状并使5-HT代谢相关产物、代谢基因和受体基因的表达发生改变.

[背景]灰葡萄孢是一种重要的植物病原真菌,实验室前期明确了灰葡萄孢犬尿氨酸单加氧酶(kynurenine 3-monooxygenase,KMO)基因BcKMO参与调控病菌的生长发育和致病力.犬尿氨酸单加氧酶(KMO)是犬尿氨酸途径的关键酶,但灰葡萄孢是否存在犬尿氨酸途径及其在病菌生长、发育和致病过程中的功能尚未见相关报道.[目的]鉴定灰葡萄孢犬尿氨酸途径中的关键酶基因,确定灰葡萄孢犬尿氨酸途径的存在,为阐明灰葡萄孢生长发育和致病力的分子机理奠定基础.[方法]利用生物信息学方法,对灰葡萄孢犬尿氨酸途径中犬尿氨酸酶(kynureninase,KYN)、吲哚-2,3-双加氧酶(indoleamine-2,3-dioxygenase,IDO)、犬尿氨酸氨基转移酶(kynurenine amino transferase,KAT)的编码基因进行分析;利用Real-time PCR技术,检测灰葡萄孢野生型BC22、BcKMO基因T-DNA插入突变体BCG183、恢复菌株BCG183/BcKMO中犬尿氨酸途径关键酶基因的表达水平;利用真菌犬尿氨酸酶KYN检测试剂盒,测定BcKMO突变体中犬尿氨酸酶(KYN)的含量.[结果]灰葡萄孢中含有2个犬尿氨酸氨基转移酶(KAT)的编码基因、3个吲哚-2,3-双加氧酶(IDO)的编码基因、10个犬尿氨酸氨基转移酶(KAT)的编码基因.灰葡萄孢KYN编码基因、IDO编码基因、KAT编码基因在突变体BCG183中的表达水平显著高于或低于在野生型和恢复菌株.突变体BCG183中犬尿氨酸酶(KYN)的含量显著低于野生型BC22和恢复菌株.[结论]灰葡萄孢中存在犬尿氨酸途径,灰葡萄孢BcKMO基因突变影响KYN、IDO和KAT编码基因的表达以及犬尿氨酸酶(KYN)的含量.

目的:应用液相色谱串联质谱(LC-MS/MS)技术对多囊卵巢综合征(PCOS)患者子宫内膜组织进行蛋白质组学研究,寻找差异表达蛋白及其相关生物通路.方法:将符合人组条件的不孕妇女子宫内膜活检组织样本分为P-COS组(n=15)和非PCOS组(n=12),LC-MS/MS技术检测,对数据进行统计学和生物信息学分析.结果:共鉴定出7285种蛋白,其中6920种蛋白在两组样本中均表达,PCOS组上调表达蛋白290种(FC≥2.0,P＜0.05),下调表达蛋白141种(FC≤0.5,P＜0.05).对蛋白进行京都基因与基因组百科全书(KEGG)富集分析,结果差异蛋白在色氨酸代谢,酪氨酸代谢和苯丙氨酸代谢通路中富集明显,其中色氨酸代谢通路富集最显著,涉及的差异蛋白为犬尿氨酸-3-单加氧酶、醛氧化酶1、胺氧化酶、HCG23341蛋白、胺氧化酶(含黄素)A、胺氧化酶(含黄素)B、2-氧戊二酸脱氢酶.结论:PCOS患者子宫内膜可能存在氨基酸代谢异常,产生免疫稳态失衡、细胞增殖功能和供能改变,这种改变可能与其致病机制有关.

目的:分析升降散对急性胰腺炎(AP)的治疗效果及其潜在的作用机制和靶点.方法:将24只雄性C57小鼠随机分为假手术组、模型组、治疗组与对照组.采用雨蛙素及脂多糖联合腹腔注射构建AP并发多器官功能障碍(MODS)模型.造模2 h后,假手术组和模型组均用0.9％氯化钠溶液按5 g/kg剂量灌胃,治疗组按5 g/kg剂量灌胃给药升降散,对照组按30 mg/kg剂量腹腔注射给药犬尿氨酸-3-单加氧酶(KMO)抑制剂GSK180.比较各组间小鼠血清淀粉酶、脂肪酶水平,色氨酸-犬尿氨酸通路的代谢产物水平及多个器官病理评分.结果:模型组小鼠的血清淀粉酶、脂肪酶水平较假手术组显著升高(P<0.05),而升降散和GSK180均显著降低淀粉酶、脂肪酶水平,且两者比较差异有统计学意义(P<0.05).模型组多个器官病理评分较假手术组显著升高(均P<0.05);GSK180显著下调胰腺、肺脏、心脏、肝脏、肾脏病理评分(均P<0.05);升降散显著下调胰腺、肺脏、肾脏、结肠病理评分(P<0.05).模型组小鼠血清中色氨酸-犬尿氨酸通路的关键代谢产物较假手术组明显改变(均P<0.05),如促炎产物犬尿氨酸(KYN)、3-羟基犬尿氨酸(3-HK)明显上升,抗炎产物犬尿喹啉酸(KYNA)明显下调.GSK180可显著下调KYN、3-HK.升降散可显著下调3-HK,上调KYNA(P<0.05).结论:升降散对急性胰腺炎并发多器官障碍具有显著的保护作用,其机制可能与调节色氨酸-犬尿氨酸代谢通路,抑制KMO活性密切相关.