目的:人感染猕猴α疱疹病毒1型是罕见的人畜共患病，2021年4月，在中国北京一位实验动物饲养员出现发热、皮疹、行走无力等症状，后被诊断为人感染猕猴α疱疹病毒1型，病毒性脑脊髓炎，为我国首例人感染猕猴α疱疹病毒1型病患。这名患者在入院前出现心脏呼吸骤停，诊断为缺血缺氧性脑病并出现坏死性病毒性脑脊髓炎，住院期间脑功能损害逐渐加重，临床判定脑死亡，在患者入院39 d，病程第51 d，家属撤除治疗。

目的:对发生在中国的首例疑似猕猴α疱疹病毒1型感染者进行实验室确诊。方法:采集疑似感染者的脑脊液进行高通量测序，并采集疑似感染者的脑脊液、痘疱液、鼻咽拭子、结痂涂抹、唾液等标本以及密切接触者的痘疱液、口咽拭子、血清等标本后，利用4套实时定量PCR方法检测猕猴α疱疹病毒1型、水痘-带状疱疹病毒、猴痘病毒和正痘病毒。结果:疑似感染者的脑脊液高通量测序结果检出285个猕猴α疱疹病毒样序列读数；猕猴α疱疹病毒1型特异性实时定量PCR检测患者脑脊液、结痂涂抹和唾液标本为阳性，疑似感染者的其余样本及密切接触者的样本均为阴性。水痘带状疱疹、猴痘和正痘病毒荧光定量PCR检测所有样本均为阴性。结论:患者脑脊液、结痂涂抹和唾液标本猕猴α疱疹病毒1型核酸检测为阳性，结合病人的临床特征、动物接触史及高通量测序结果，确诊该患者为猕猴α疱疹病毒1型感染。

目的:探讨应用改良的Hulth法建立猕猴膝骨关节炎动物模型的可行性及可靠性。方法:实验组：选用猕猴的10只膝关节，应用改良Hulth手术造模，即切断膝关节内侧副韧带，切除前十字韧带、内侧半月板，并在股骨内侧髁关节面切除部分软骨。对照组：选用实验组猕猴的对侧10只膝关节，只切开皮肤、关节囊，不破坏关节腔结构。对构建的猕猴膝骨关节炎模型分别在造模后2、4、6个月从膝关节功能、X线片、MRI、关节镜下结构、切开肉眼所示大体情况、膝关节股骨软骨组织切片等方面评估骨关节炎造模情况。结果:对照组在术后2、4、6个月的X线片、MRI及切开肉眼观察关节腔与术前无明显差异。实验组在造模后2个月X线片示内侧关节间隙狭窄，膝关节力线内翻；造模后4个月，X线片示关节软骨下骨硬化、关节周缘骨赘形成，髌骨骨赘增生；造模后6个月，X线片示关节软骨下骨硬化、关节周缘骨赘增生进一步加重。实验组造模后2个月，膝关节MRI表现为内侧关节间室狭窄，股骨内侧髁可见软骨造模缺损区，关节腔少许积液；造模后4个月，MRI表现为关节腔积液增多，髁软骨下骨髓水肿；造模后6个月，MRI出现外侧半月板Ⅱ级退变信号、部分区域软骨变薄、软骨下骨髓水肿、骨囊性变及关节积液中的一种或多种征象。造模后6个月，关节镜检查及肉眼均见到软骨毛糙、无光泽、有裂纹，局部凸凹不平，髁间窝滑膜增生。造模术后6个月，组织切片示软骨表层裂隙，出现局部缺损，软骨退变。造模后6个月，实验组膝关节活动度无明显改变，猕猴在笼内行走活动减少，有轻度跛行。实验组的10只造模膝关节在6个月后均造模成功。结论:通过改良的Hulth手术可以在造模后6个月有效建立猕猴膝骨关节炎动物模型。

猕猴α疱疹病毒1型，又称为B病毒，属于疱疹病毒科，a疱疹病毒亚科，单纯疱疹病毒属，是一种在猕猴中广泛流行的疱疹病毒。猕猴是该病毒的天然宿主，人感染后病死率约为80%。2021年4月，我国发现首例人感染猕猴α疱疹病毒1型感染病例，通过开展流行病学调查，对密切接触者采取管理措施，开展实验室检测工作，有效地处置了该起疫情。本文结合我国首例人感染猕猴α疱疹病毒1型病例的流行病学调查、疫情处置措施以及实验室检测进行讨论和研究，形成专家共识，旨在为猕猴α疱疹病毒1型的风险评估和疫情应对提供科学的依据。

本教学实践的教学模式为"情境—问题—任务—活动".以模式动物食蟹猕猴(Macaca foscicularis)的克隆过程这一真实情境为背景,设置了核心任务:通过核移植获得大量克隆猴作为医疗用模式动物.为了解决这一任务,进一步设置了多个小组讨论和学生实践活动,在讨论和实践中培养了学生的实验操作能力,帮助学生构建核移植的概念,并深化学生对核移植过程的理解.

目的:研究软枣猕猴桃根内生真菌C15(Trichoderma sp.)发酵提取物中的总皂苷成分对2种肝癌细胞HepG 2和Huh-7细胞的凋亡作用与初步作用机制.方法:采用CCK-8细胞计数(Cell Counting Kit-8,CCK-8)法检测软枣猕猴桃根总皂苷(AARTS)和内生真菌C15总皂苷(C15TS)对HepG 2和Huh-7细胞的细胞活力的影响;采用细胞划痕实验和Transwell小室实验对细胞的迁移和侵袭能力进行检测;采用蛋白质印记法(Western Blot,WB)检测P53信号通路中3种凋亡相关蛋白(Bax、Bcl-2、Caspase-3)的表达水平;采用Annexin V-FITC/PI染色检测HepG 2和Huh-7细胞的凋亡时期.结果:根据细胞活力测试得出浓度为50～400μg/mL时AARTS和C15TS对HepG 2和Huh-7细胞的活力有抑制作用,且呈现剂量依赖性;细胞划痕实验表明浓度为200、400μg/mL时AARTS和C15TS可以降低HepG 2和Huh-7细胞的迁移能力;在Transwell小室实验中,浓度为200、400 μg/mL时AARTS和C15TS均可抑制对HepG 2细胞和Huh-7细胞的侵袭能力;在WB实验中,AARTS和C15TS经200、400 μg/mL孵育24 h后,HepG 2和Huh-7细胞胞内Bax和Caspase-3蛋白表达量增加,Bcl-2蛋白表达量减少;在Annexin V-FITC/PI染色实验中,浓度为200、400 μg/mL时AARTS组和C15TS组均具有促进HepG2和Huh-7细胞凋亡的能力,且多为早期凋亡.结论:C15TS与AARTS的作用效果相似,也可抑制HepG 2和Huh-7细胞的增殖、迁移和侵袭,促进细胞凋亡,其机制可能与P53信号通路有关.

目的 QuEChERS-超高效液相色谱-三重四极杆质谱法测定猕猴桃中氯吡脲含量的不确定度并进行评定.方法 运用QuEChERS方法对样品进行前处理,超高效液相色谱-三重四极杆串联质谱法测定猕猴桃中氯吡脲的含量,并通过建立数学模型,对实验过程中各分量的不确定度做出了评定.结果 95%置信区间下,猕猴桃样液中氯吡脲的测定结果表示为4.98±0.88 μg/kg(k=2).结论 实验过程中不确定度的主要来源有标准溶液制备、样品前处理、测定仪器、回收实验及标准曲线拟合,为提高实验准确性提供了科学依据.

红阳猕猴桃(Actinidia chinensis var.chinensis'Hongyang')具有较高的经济价值和营养价值,以及较好的市场开发前景.但近年红阳猕猴桃产区如云南、四川等多地多次遭遇倒春寒等极端天气,其抗寒性差的缺点限制了发展空间.该研究通过在组培的过程中使用甲基磺酸乙酯(EMS)诱导红阳猕猴桃突变体,进而筛选出耐寒突变体,并通过转录组分析探究其胁迫响应机制.该研究以红阳猕猴桃叶片为实验材料,在组培时(4.4 g.L-1 MS+4.5 g.L-1 琼脂+1.5 mg.L-16-BA+0.1 mg.L-1 NAA+15 g.L-1 蔗糖+0.01～0.10 g.L-1 EMS)利用EMS诱导技术诱导突变体,并在低温环境下筛选出耐寒突变体.选出的耐寒突变体和正常红阳猕猴桃组培苗先进行 4℃12h寒胁迫处理,再进行转录组测序分析.结果表明:(1)通过初步的表型鉴定,当EMS处理浓度为0.06 g.L-1时诱导的部分突变体具有一定的耐寒性;(2)在转录组测序数据GO功能富集分析中,富集条目最多的是生物学过程;(3)利用KEGG数据库分析时,共筛选到 21 个差异表达基因在15 条通路中得到注释且均为上调表达,其中内质网中的蛋白质加工通路(ath04141)中富集的差异表达基因最多,并且该通路内的sHSF、Hsp70 和NEF可能与耐寒机制调控有关.综上研究结果为红阳猕猴桃耐寒种质资源的研究与利用提供了材料基础及理论依据.

目的 克隆获得灰毡毛忍冬Lonicera macranthoides MADS-box家族基因SHORT VEGETATIVE PHASE(SVP),并对其进行生物信息学、时空表达特异性和蛋白原核表达等特性分析.方法 根据灰毡毛忍冬转录组数据设计特异性引物,通过PCR技术克隆LmSVP基因全长;运用生物信息学方法分析其编码蛋白的序列特征;利用实时荧光定量技术(reverse-transcription polymerase chain reaction,qRT-PCR)分别检测该基因在灰毡毛忍冬2个品种"龙花"和"金翠蕾"叶片、花早期和晚期中的表达水平;最后构建pTOPO-D1-LmSVP原核表达载体,转化至大肠杆菌BL21(DE3)中进行蛋白表达.结果 LmSVP基因全长1472 bp,开放阅读框(open reading frame,ORF)长720 bp,编码239个氨基酸,蛋白质相对分子质量为26 712.63.进化树分析表明,LmSVP蛋白与中华猕猴桃、小粒咖啡的SVP蛋白亲缘关系最近.qRT-PCR结果显示,LmSVP基因在"龙花"和"金翠蕾"品种中的表达均存在组织特异性表达,其在叶中的表达量显著高于花中;而在花发育不同时期,LmSVP基因表达量没有明显差异.LmSVP在大肠杆菌中成功表达出蛋白,蛋白表达结果显示其相对分子质量约为26 710,与预测相符合.结论 通过对LmSVP基因的全长克隆、序列分析和表达特性鉴定,为进一步研究该基因在调控花蕾型灰毡毛忍冬蕾期长及花冠不开放的功能提供实验基础.

目的 构建新型梯度复合羟基磷灰石-二氧化锆(HA/ZrO2)组织工程骨支架,并评估其在猕猴颈椎椎间融合中的效果.方法 通过离子交联法制备壳聚糖水凝胶作为骨形态发生蛋白2(BMP-2)的缓释载体,扫描电镜下观察其微观形态,检测其载药量、包封率及缓释速率;然后分离、培养猕猴源性骨髓间充质干细胞(BMSCs),并进行碱性磷酸酶、冯库萨染色等对其进行鉴定;最后将前期制备好的BMP-2明胶/壳聚糖凝水胶缓释系统和第3代猕猴BMSCs加载于HA/ZrO2泡沫陶瓷,以构建新型组织工程骨,并观察其形态特征.将24只雄性猕猴按照随机数字表法分成4组,其中组织工程骨组(n=8)为植入梯度复合HA/ZrO2泡沫陶瓷负载BMP-2明胶/壳聚糖水凝胶缓释系统和第3代猕猴BMSCs,泡沫陶瓷组(n=8)为植入梯度复合HA/ZrO2泡沫陶瓷,自体髂骨组(n=4)为植入自体髂骨,假手术组(n=4)为只对相应部位的软组织进行切开、缝合,未破坏其椎间盘;观察术后颈椎X线(术后即刻、8周、16周)、组织形态学表现(术后8周、16周)及测试相应节段的生物力学(术后16周).结果 扫描电镜下BMP-2明胶/壳聚糖水凝胶呈3D网状结构,内见均匀分布的壳聚糖微球,其负载BMP-2后的包封率和载药率随时间逐渐降低:第1天分别为87.4%±0.9%和58.2%±0.5%、第15天分别为45.2%±0.6%和30.1%±0.4%,累积释放率第1天为12.6%±0.11%、第15天为55%±0.16%.显微镜下观察见BMSCs的形态呈多样性,以梭形及短棒形等较常见;第3代猕猴BMSCs成骨诱导后的碱性磷酸酶、冯库萨染色以及表面特异性抗原的检测结果显示,符合BMSCs的生物学特性.不同时点的X线及组织形态学观察显示材料内部新生骨量组织工程骨组较泡沫陶瓷组明显增多;生物力学测试结果显示,在最大载荷、抗压强度和能量吸收方面假手术组均低于其他3组(P值均<0.05),在抗压强度上组织工程骨组与自体髂骨组差异无统计学意义(P>0.05).结论 BMP-2明胶/壳聚糖水凝胶缓释系统复合猕猴第3代BMSCs种植于HA/ZrO2泡沫陶瓷构建的新型组织工程骨支架,能有效促进猕猴颈椎椎间融合,在影像学及组织学表现和生物力学测试方面,可达到与自体骨相似的骨代替作用.