为明确珠子参、羽叶三七和秀丽假人参3 种药用植物叶绿体基因组特征与系统发育关系,该文以秦巴山区 3 种人参属药用植物为研究对象,运用生物信息学技术,分析其叶绿体基因组特征及密码子使用偏好性,并探讨三者之间的亲缘关系.结果表明:(1)3 种人参属药用植物的叶绿体基因组为典型的四分体结构,序列全长为 156 071～156 104 bp,总 GC 含量为 38.10%,基因组大小相似度较高.(2)均注释到 133 个基因,包括 88 个蛋白编码基因、37 个tRNA基因和 8 个rRNA基因.(3)3 种人参属药用植物叶绿体密码子使用偏好性相似,密码子第 3 位碱基以 A/U 结尾为主,密码子使用模式在受到突变影响的同时,主要受到自然选择的影响.(4)系统发育结果显示,3 种人参属药用植物的亲缘关系较近,并且秀丽假人参同羽叶三七亲缘关系更近.综上认为,秀丽假人参与珠子参基源植物之间存在近缘关系,这项发现对于珠子参中药材的资源开发利用和分子鉴定,以及进一步研究人参属物种的分类、系统发育和进化机制提供了重要依据.

珠子参叶是五加科(Araliaca)植物珠子参(Panax japonicas var.major)的干燥带梗叶,为秦巴地区特色中药材.为合理开发利用珠子参叶并阐明其化学成分,该研究利用HPLC方法分析珠子参叶皂苷部位的主要化学成分,测定珠子参叶皂苷部位的脂肪酶抑制活性及抑制类型,通过分子对接及动物实验验证脂肪酶抑制机制及降血脂作用.结果表明:(1)珠子参叶皂苷部位主要成分为20(S)-人参皂苷Rg2、20(R)-人参皂苷Rg2、人参皂苷Rb2、人参皂苷Rb3、人参皂苷Rd、人参皂苷Rh2.(2)珠子参叶皂苷部位、20(R)-人参皂苷 Rg2对脂肪酶具有较强的抑制作用,其IC50分别为 0.14、2.30 μmol·L-1.(3)珠子参叶皂苷部位、20(R)-人参皂苷Rg2、人参皂苷 Rb3 对脂肪酶的抑制为可逆性抑制,抑制类型为非竞争型抑制.(4)配体与ARG337B、ASP331B、ILE248B残基结合可能有助于提高配体的脂肪酶抑制活性.(5)珠子参叶总皂苷可以显著降低高脂血症小鼠血清中胆固醇和甘油三酯的含量.该研究为珠子参叶在降血脂方面的深入开发和利用提供了理论参考.

目的:为珠子参高效优质人工栽培技术提供研究基础.方法:在一个生长周期内对不同栽培年限珠子参主要农艺性状、叶片光合特性、叶绿素和丙二醛含量、保护酶活性进行测定,用Excel与SPSS软件处理数据.结果:3年生珠子参地上部分生长旺盛,叶绿素含量和保护酶活性高,对光能的捕获、有机物的同化、以及对环境的适应能力高于2年生和苗期珠子参.结论:人工栽培珠子参,应根据栽培年限和生长阶段的不同采取相应的遮阴措施.

目的 对竹节参及其近缘物种和混伪品进行分子鉴定,为竹节参现代化鉴定提供科学依据和保证临床疗效与用药准确性.方法 对竹节参样品进行ITS2基因片段扩增和正向测序,并从GenBank数据库下载竹节参、近缘物种和混伪品的ITS2序列,通过ITS2 database剪切最终共获得24个物种102条序列,使用DAMBE软件进行序列替代饱和度检测,利用MEGA 6.06软件进行比对、分析变异位点、计算GC含量、种内和种间遗传距离、构建NJ系统发育树,并预测ITS2二级结构.结果 竹节参ITS2序列长度均为230bp,平均GC含量63.7％,ITS2序列平均遗传距离分析、NJ树、二级结构特征均显示竹节参与非同属混伪品和部分近缘物种(屏边三七、假人参、三叶参、野三七和越南人参)存在极大差异,能有效区分,而鉴定近缘物种西洋参、人参、三七、珠子参、羽叶三七、Panax assamicus、Panax variabilis和狭叶竹节参序列分辨率较低,具有一定局限性.结论 ITS2序列可作为鉴定竹节参与其非同属混伪品DNA条形码之一,对非同属混伪品鉴定分辨率极高,而对于鉴定其近缘物种的通用性仍有待考证,这为后续竹节参及其近缘物种种间遗传关系和亲缘关系鉴定、非同属混伪品鉴别区分和临床安全用药提供重要参考.

目的:珠子参是自然分布狭窄的珍稀植物,为了探讨其对不同环境的适应能力及机制.方法:选择野外自然分布的20个居群珠子参为研究对象,测定珠子参叶片的超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化物酶(POD)、过氧化氢酶(CAT)的活性以及丙二醛(MDA)的含量变化,并分析其与海拔间的相关性.结果:20个居群珠子参的保护酶活性和丙二醛含量存在一定差异.根据CAT、POD、SOD活性和MDA含量,可分为3个类群,POD和SOD活性在各类居群间无显著差异,第Ⅰ类居群的CAT活性分别是第Ⅱ、Ⅲ类居群的1.45倍和1.74倍,其中第Ⅰ类显著大于第Ⅲ类.第Ⅰ类居群的三种酶活性与海拔高度呈二次函数关系,r分别为0.6396、0.5971和0.6344;第Ⅱ类居群的三种抗氧化酶活性随海拔高度变化的规律不明显;第Ⅲ类居群的CAT和SOD活性与海拔高度呈正相关关系,r分别为0.3779和0.5262,POD活性与海拔高度呈负相关关系,r为0.5244.珠子参各类居群的MDA含量随海拔高度变化的规律不明显,第Ⅲ类居群的MDA含量分别是第Ⅰ、Ⅱ类的2.28倍和1.52倍,三者间的差异达显著水平.结论:随着海拔的升高,3类珠子参居群植株对由海拔引起的生态因子变化的适应能力不同,研究各类居群对海拔变化的响应特性,可为珠子参的引种驯化和栽培的生态适应性提供理论参考.

为研究不同遮阴处理下皂苷合成关键酶表达对珠子参总皂苷合成与积累的影响,以全光照、30％遮阴和50％遮阴3种处理下的盆栽珠子参为材料,分别用实时荧光定量PCR法和紫外分光光度法测定了不同生长时期珠子参叶和根茎中3个关键酶基因(CAS,DS,β-AS)的表达和总皂苷含量.结果表明,在开花期CAS,DS,β-AS均在珠子参地上部分高表达,30％遮阴处理显著抑制了叶中CAS的表达而促进了茎,叶和花中DS,β-AS的表达,推测在此时期皂苷合成的主要部位为叶.整个生长周期内,DS,β-AS的表达与叶中总皂苷含量的变化均呈现出“低—高—低”的趋势,相关系数分析表明,两者之间为正相关关系.遮阴处理下DS,β-AS的总体表达水平和总皂苷含量远高于全光照处理,其中以30％遮阴处理对总皂苷积累的促进作用最明显.因此建议在人工栽培珠子参时,采取30％的遮阴处理,以利于珠子参皂苷的积累和品质的提升.

目的:研究酸枣仁芽的化学成分,从物质基础的角度探寻萌发对酸枣仁活性的影响.方法:将干燥的酸枣仁芽粉碎后石油醚浸泡提取,除去油脂类成分,残渣干燥后再用甲醇加热回流提取,减压浓缩后得酸枣仁芽甲醇浸膏,将浸膏溶解,采用硅胶,C18反相硅胶,LH-20型羟丙基葡聚糖凝胶等多种柱色谱方法进行分离纯化,并利用NMR和MS等现代波谱技术,结合参考文献确定化合物的化学结构.结果:从酸枣仁芽中分离鉴定13个化合物,分别为酸枣仁皂苷B(1),酸枣仁皂苷D(2),酸枣仁皂苷A(3),白桦脂酸(4),白桦脂醇(5),羽扇豆醇(6),麦珠子酸(7),美洲茶酸(8),齐墩果酸(9),熊果酸(10),木兰花碱(11),荷叶碱(12),当药黄素(13).结论:以上化合物均首次从酸枣仁芽中分离得到.经对比,发现酸枣仁芽的化学成分与传统药用部位种子相似,主要为三萜及皂苷类、黄酮类、生物碱类化合物等,为酸枣仁芽药用资源的开发利用提供了一定的化学依据.

目的 建立珠子草药材的质量标准及HPLC指纹图谱,探讨不同产地珠子草药材成分的差异性.方法 分别从性状、鉴别、检查和浸出物、含量测定方面对珠子草药材的质量标准进行研究.采用ZORBAX Eclipse plus C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),以乙腈-0.1％磷酸水溶液作为流动相进行梯度洗脱,柱温25℃,检测波长270 nm,流速1.0 mL/min,进样量10μL,对10个不同产地珠子草药材进行测定;采用相似度分析和主成分分析对指纹图谱进行评价.结果 拟定了珠子草药材质量标准草案,建立了10个不同产地珠子草药材的HPLC指纹图谱,确定了8个共有峰,指认了短叶苏木酚和柯里拉京2个特征峰.不同产地珠子草的化学成分组成及含量存在一定差异,其中柯里拉京可作为区别产地的特征性物质.结论 本研究建立的定性定量检测方法操作简便、准确可靠、专属性强、重复性好,可作为珠子草药材的质量控制方法;建立的珠子草HPLC指纹图谱可为该药材的鉴别及质量控制提供参考.

目的 增加氟苯尼考(FF)的水溶性,制备氟苯尼考纳米结晶(FF-NC)并对其药剂学性质进行体外评价.方法 采用微型化介质研磨法,以西林瓶为研磨室,氧化锆珠子为研磨介质,磁力搅拌器为动力装置制备FF-NC,以粒径和多分散系数(PDI)为指标,正交试验得到的优化处方及工艺参数,进一步放大处方,采用喷雾干燥法固化FF-NC,以差式扫描量热分析,X射线衍射分析,傅里叶红外光谱分析对所得纳米结晶进行表征,并考察其饱和溶解度及体外累积溶出度.结果 正交试验最优处方制备得到的FF-NC,其粒径为(189.6±-3.44)nm,PDI为(0.192±0.021);等比例放大研磨固化,复溶后FF-NC粒径与喷雾干燥前基本相同;X射线衍射图谱和差式扫描量热分析结果均表明氟苯尼考制备成纳米结晶后呈无定型状态;饱和溶解度试验及体外溶出结果表明制备的FF-NC的饱和溶解度和体外累积溶出度明显高于FF原粉.结论 微型化介质研磨法为FF-NC制备工艺的筛选提供了简单有效的途径,为放大化制备提供了依据,制备得到的FF-NC速释、高效,值得进一步研究.

目的 研究珠子参Panax japonicus var.major叶的化学成分.方法 采用硅胶、Sephadex LH-20、ODS柱色谱和半制备型高效液相色谱等方法进行分离纯化,根据理化性质和波谱数据分析鉴定化合物的结构.结果 从珠子参中分离并鉴定了3个化合物,分别鉴定为20(21),24-达玛二烯-3β,6α,12β-三醇(1)、20(22)Z,24-达玛二烯-3β,6α,12β-三醇(2)、3-O-[β-D-吡喃葡萄糖-(1→2)-β-D-吡喃葡萄糖]-20-O-[-β-D-吡喃木糖-(1→6)-β-D-吡喃葡萄糖]-23E,25-二烯-20 (S)-原人参二醇(3).结论 化合物1和2为首次从该植物中分离得到,化合物3为新化合物,命名为珠子参苷Z.