目的 观察瑞格菲尼联合维替泊芬对肝癌细胞的影响.方法 应用细胞计数试剂盒(CCK-8)法检测瑞格菲尼及瑞格菲尼联合维替泊芬对肝癌细胞增殖能力的影响,Transwell实验检测瑞格菲尼及瑞格菲尼联合维替泊芬对肝癌细胞迁移能力影响,Western blot法检测瑞格菲尼及瑞格菲尼联合维替泊芬对肝癌细胞上皮-间充质转化(EMT)相关蛋白表达的影响,流式细胞仪检测瑞格菲尼及瑞格菲尼联合维替泊芬对肝癌细胞凋亡影响.结果 CCK-8实验结果表明瑞格菲尼联合维替泊芬(1 μmol/L)处理肝癌细胞的半数抑制浓度(IC50)为2.629 μmol/L,低于单用瑞格菲尼处理肝癌细胞的IC50(3.576 μmol/L).Transwell检测结果显示瑞格菲尼(4μmol/L)联合维替泊芬(2 μmol/L)组细胞迁移数为(147.00 ±9.54)个,低于瑞格菲尼(4μmol/L)组细胞迁移数[(336.00±27.31)个,t=-11.360,P=0.000],并且明显低于对照组细胞迁移数[(531.67±29.54)个,t=-21.466,P=0.000].瑞格菲尼(2μmol/L)联合维替泊芬(1μmol/L)组的细胞凋亡率为(10.20±1.06)％,高于瑞格菲尼组细胞(2 μmol/L)的凋亡率[(5.13 ±0.95)％;t=6.170,P=0.004],明显高于对照组细胞的凋亡率[(1.13±0.35)％;t=14.080,P=0.000].结论 维替泊芬能增强瑞格菲尼对肝癌细胞的抑制增殖、迁移,促进肝癌细胞凋亡的作用.

靶向药物对于肝细胞癌的治疗效果在临床上已经被广泛证实.随着科学技术的发展,越来越多的靶向药物相继出现.近期,瑞格菲尼、ramucimmab等靶向药物在相应的临床实验中也表现出了相当的潜力.更多的二线候选药物,比如c-Met抑制剂tivantinib与cabozantinib、VEGFR-2抑制剂ramuciruma临床试验正在进行.总结了近几年靶向药物治疗肝细胞癌的试验数据及最新进展,为下一步临床试验及治疗提供参考意见.

原发性肝癌(主要指肝细胞癌,HCC)是全球第五大高发的恶性肿瘤,恶性程度较高,预后差.肝癌在肿瘤微环境和生物标志物方面有其特征性的表现,已有研究基于这些特征性靶点设计出了许多分子靶向性的药物,如索拉菲尼、瑞格菲尼等,但仍无法避免全身毒副作用大、远期疗效不佳的问题.而随着纳米医学的发展,基于肝癌特点构建靶向性强、毒副作用小的纳米载体受到了极大的重视,并在基础研究中证实了其良好的疗效,为靶向纳米材料在肝癌诊疗领域的应用奠定了基础.

目的 从FDA已批准的药物库中,筛选可以干扰乙肝病毒核衣壳形成的药物.方法 利用细胞模型SRluc-HBc6,通过分段荧光素酶互补实验来指示二聚体的形成,筛选靶向HBV核心蛋白二聚体形成的药物;对初筛出来的候选化合物,用颗粒凝胶电泳分析法鉴定其对HBV核衣壳形成的影响;用Southern blot方法鉴定候选药物对HBV DNA复制的影响.结果 利用SRluc-HBc6细胞模型筛选了FDA批准的1 434种药物,第1轮筛选鉴定到5种药物:苯丁酸氮芥(Chlorambucil)、克拉屈滨(Cladribine)、亚甲蓝(Methylene Blue)、索拉菲尼(Sorafenib)、瑞格菲尼(Regorafenib);进一步测试发现,苯丁酸氮芥可以减少HBV核心蛋白和核衣壳的形成,抑制HepAD38细胞中HBV DNA的复制.结论 苯丁酸氮芥通过减少HBV核心二聚体和衣壳的形成来抑制HBV DNA的复制.

肝细胞肝癌(hepatocellular carcinoma,HCC)作为最常见的原发性肝癌(占70％～90％),据统计全球每年新增HCC至少有70万例[1],仅我国就占到了其中一半.HCC主要的致病因素包括有:乙肝病毒、丙肝病毒、饮酒、糖尿病及一些代谢性疾病[2].目前临床关于HCC的治疗选择,对于早期局部肝癌患者,可采用局部手术切除、肝移植、射频消融及经动脉化疗栓塞.由于早期无特异性表现,很多HCC患者在中晚期才能被确诊.而对于中晚期肝癌,通常采用全身药物治疗以寻求手术机会,最具代表性的是抑制血管生成的酪氨酸激酶抑制剂(tyrosine kinase inhibitors,TKIs):索拉菲尼、乐伐替尼、瑞格非尼[3].然而,由于药物耐受等原因,TKIs的治疗效果有限[4].肝脏是机体最大的免疫器官,内部存在各种免疫细胞,HCC作为典型的炎症相关肿瘤,免疫耐受及逃避机制在癌症进展中发挥着重要作用[5].在肿瘤微环境(tumor microenvironment,TME)中,癌细胞、细胞因子、免疫细胞、非肿瘤细胞和细胞外基质构成了一个动态系统,它们相互作用,产生生长因子、细胞因子和趋化因子来参与免疫抑制,从而促进肝癌细胞的进展 [6].其中,更有免疫抑制细胞通过分泌及信号转导作用进一步驱动免疫逃避.在本文中,我们将阐述肝癌相关免疫抑制成分及潜在的免疫治疗措施.

目的:探究乐伐替尼与瑞格菲尼在肝癌细胞中对程序性细胞死亡配体1(PD-L1)作用的分子机制.方法:取人肝癌Hep3B、SMMC-7721细胞,分别转染转化生长因子-β1(TGF-β1)空载体、干扰质粒后的肝癌细胞培养,采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测细胞中缺氧诱导因子-1α(HIF1α)、髓细胞增生原癌基因(MYC)、缺氧诱导因子-2α(HIF2α)、信号传导与转录激活因子3(STAT3)、黏蛋白1-C(MUC1-C)、细胞周期素依赖蛋白激酶5(CDK5)、丝裂原活化蛋白激酶(MAPK14)、表皮生长因子受体(EGFR)、间变性淋巴瘤激酶(ALK)及TGF-β1的mRNA表达,采用Western blot实验检测各组肝癌细胞中PD-L1和TGF-β1的蛋白表达量;取4周龄雌性裸鼠(BALB/c)小鼠30只,人肝癌Hep3B细胞皮下接种于小鼠右侧腹肋下,1周后将皮下成瘤的小鼠随机均分为对照组(DMSO)、乐伐替尼组(注射乐伐替尼)及瑞格菲尼组(注射瑞格菲尼),于末次给药后24 h处死小鼠,采用Western blot实验检测各组小鼠皮下瘤组织PD-L1和TGF-β1的蛋白表达量.结果:与对照组比较,乐伐替尼组和瑞格菲尼组小鼠皮下肝癌移植瘤组织中HIF1α、MYC、HIF2α及MUC1-C mRNA表达均上调,STAT3、CDK5、MAPK14、EGFR及ALK mRNA表达均下调,但乐伐替尼组TGF-β1 mRNA表达增加,瑞格菲尼组TGF-β1 mRNA表达降低(P<0.05);与对照组比较,乐伐替尼组肝癌细胞Hep3B和SMMC-7721的TGF-β1 mRNA、PD-L1和TGF-β1蛋白表达均上升,瑞格菲尼组的TGF-β1 mRNA、PD-L1及TGF-β1蛋白表达均下降(P<0.05);肝癌细胞Hep3B和SMMC-7721干扰组TGF-β1 mRNA、PD-L1 mRNA、TGF-β1及PD-L1蛋白表达分别较对照组降低(P<0.05).结论:乐伐替尼使肝癌细胞PD-L1表达上调,瑞格菲尼使PD-L1表达下调,其机制可能是通过影响TGF-β1的表达.

背景 与目的:瑞格菲尼(regorafenib,REG)和TAS102是治疗消化道肿瘤的新型药物.嘧啶类药物5-氟尿嘧啶(5-fluorouracil,5-FU)联合REG可抑制多药耐药转移性结肠癌的进展.肿瘤干细胞(cancer stem cell,CSC)决定肿瘤的自我更新,异质性及治疗耐受等,靶向CSC为治愈肿瘤提供了可能途径.探讨REG联合TAS102治疗肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)的联合效应及潜在机制.方法:以人HepG2、Huh7和SK-Hep1肝癌细胞系为实验对象.REG和TAS102单药或联合处理肝癌细胞及荷瘤动物.采用细胞计数试剂盒(cell counting kit-8,CCK-8)检测肝癌细胞活力;流式细胞术分析肝癌细胞中CD133阳性细胞亚群比例;采用蛋白质印迹法(Western blot)分析不同药物处理后肝癌细胞中蛋白表达差异;含不同药物的干细胞培养基培养肝癌干细胞球(HCC sphere);荷瘤动物实验评估药物联合治疗效果.结果:REG及TAS102单药显著抑制肝癌细胞活力.TAS102联合使用减低REG单药时诱导增加的CD133阳性细胞亚群比例及干细胞标志分子SRY相关的高迁移率族盒蛋白-2(SRY-related high mobility group box protein-2,SOX2)和乙醛脱氢酶1A(aldehyde dehydrogenase 1A,ALDH1A)的蛋白水平.同时REG的联合使用下调TAS102单药处理时诱导活化的抗凋亡蛋白髓细胞白血病-1蛋白(myeloid cell leukemia-1,MCL1)信号.REG联合TAS102显著抑制了HCC sphere的形成.动物实验证实REG联合TAS102显著抑制肝癌瘤体的生长.结论:REG联合TAS102通过调控肝癌细胞的干细胞性及抗凋亡信号,发挥联合用药增强抗HCC的活性,为临床治疗难治性HCC提供了一种新的治疗策略.

由于早期肝癌的临床无症状性以及世界许多地区缺乏肝癌监测方案,大多数患者一旦确诊即已进入中晚期,丧失根治性切除、肝移植等治疗机会.因此,经导管动脉化疗栓塞术(常规动脉化疗栓塞术、动脉载药微球化疗栓塞术)、放射治疗(外部放射治疗、内部放射治疗)、靶向治疗(索拉菲尼、伦伐替尼、瑞格菲尼、卡博替尼、雷莫芦单抗)、免疫检查点抑制剂(纳武利尤单抗、帕博利株单抗)治疗,已成为失去手术机会中晚期肝癌患者的标准治疗方式.