新型冠状病毒肺炎疫情暴发以来，全球多个国家已建立基于污水流行病学的污水新冠病毒监测，而我国尚未建立污水中新型冠状病毒的标准检测方法。本标准给出了聚乙二醇沉淀法、铝盐混凝沉淀法和离心超滤法三种污水中新型冠状病毒富集浓缩方法，以用于生活污水、医疗机构污水中新型冠状病毒富集浓缩和核酸检测。本标准的制定对规范污水中新型冠状病毒检测、对保证污水中新型冠状病毒检测的科学性、有效性具有重要意义。

目的:持续监测2019年生活污水中的脊髓灰质炎病毒（poliovirus，PV），了解脊灰病毒在外环境中的流行变化趋势，为维持无脊灰状态提供实验室环境监测数据支持。方法:选择南昌市某区污水处理厂作为长期固定监测点，每月在污水处理厂入水口采集1 L污水作为样本。膜浓缩后在L20B、RD、Hep-2三种细胞上进行病毒分离培养，对阳性分离物进行VP1全长基因的测序分析。结果:共分离出脊灰病毒25株，分离率为91.67%（11/12），包括PV Ⅰ型3株，PV Ⅲ型22株，PVⅡ型0株。3株PVⅠ型毒株均为疫苗相似株，在全基因组的2749位点处均由腺嘌呤A突变为鸟嘌呤G，导致异亮氨酸突变成甲硫氨酸；2株PVⅢ（JX2019JHH037L、JX2019JHH042R）在2636位点处发生了由鸟嘌呤G突变为腺嘌呤A变异，导致了亲水氨基酸丙氨酸替代了疏水氨基酸苏氨酸。结论:在生活污水监测中分离到的脊灰病毒株均为疫苗株和疫苗相似株，未发现脊灰野毒株、脊灰疫苗衍生株及PVⅡ毒株。因此为维持无脊灰状态，需要持续对污水等外环境标本加强监测。

目的:了解生活污水中的A组轮状病毒（RVA）的检出情况及分子流行病学特征。方法:本研究于2016—2018年3年期间，在济南市每月采集生活污水，获得的36份污水样本通过阴离子膜吸附洗脱法浓缩后，进行核酸提取，RT-PCR扩增RVA VP7和VP4基因片段，再经纯化、TA克隆和测序后，对所获得的序列进行基因定型、同源性分析和系统发生学分析。结果:36份污水样本中有31份检测出RVA G基因（检出率为86.1%），33份样本检测出RVA P基因型（检出率为91.7%）。共获得RVA序列536条，其中G基因型序列225条，分属于6个基因型，G9型别占比最多为92.4%（208条）；获得P基因型序列311条，分属于4个基因型，优势型P［8］占50.1%（156条），P［4］次之为41.8%（130条）。系统发生学分析显示优势型别G9、P［8］在当地均存在多个传播链共循环。结论:本研究通过对济南市生活污水所获得的RVA相关序列进行型别、同源性、系统发生学特征的分析，进一步证实RVA环境监测可行且必要。

目的 基于2021年山东省农村环境卫生监测项目工作指标,对黄河流域山东段农村环境卫生进行综合评价,识别发展短板,探讨改善策略.方法 基于主成分—逼近理想解排序(TOPSIS)分析法,根据山东省2021年农村环境卫生监测工作方案,在现有的农村环境卫生监测体系中,选择13个沿黄河流域区县作为研究对象,同时以其他12个非沿黄河流域区县为对照,选择9个正向高优指标拟合评价模型,采用单个评价指标与最优理想解的标准化距离对黄河流域山东段农村环境卫生进行综合评价.结果 从监测指标中筛选出9个核心指标用于主成分分析,分别为全县农民人均年纯收入(万元)、年度农村人均纯收入(万元)、县级农村环境卫生投入(万元)、农村环境卫生综合整治项目创建率(％)、环境卫生管理制度建设率(％)、卫生厕所普及率(％)、集中式供水覆盖率(％)、农村生活垃圾转运率(％)、农村生活污水转运率(％);经主成分分析,农村环境卫生监测项目评价指标可以用3个主成分表示,分别为经济状况、卫生管理、基础卫生设施,其特征值λ分别为2.109、2.076和1.349,累计贡献率为61.486％.利用TOPSIS欧式距离计算各区县综合评价指数,综合评价指数前5位的区县为黄河流域的桓台县和寿光市(0.705,0.665),非黄河流域的荣成市、兖州市、高密市(0.758,0.687,0.662).变异系数最大的为黄河流域区县经济状况评价指数(0.481),最小的为黄河流域农村环境卫生管理评价指数(0.114).结论 黄河流域区县的优势在于其较好的农村环境卫生管理和基础卫生设施建设,但黄河流域区县经济状况对其综合评价指数的贡献低于非黄河流域区县.

目的 了解济宁市城区生活污水中沙门菌分布、血清型、耐药特征,并进行全基因组测序分析,为沙门菌的防控提供科学依据.方法 2023年2-3月,每周采集城区3个污水厂进水口污水各2份,每份500 ml,连续采集7周,合计42份污水样本,对污水样本进行沙门菌的培养、分离、鉴定,分离出的沙门菌进行血清凝集试验和荧光定量PCR血清分型,利用微量肉汤稀释法对41株沙门菌进行9类17种药物的最低抑菌浓度(minimum inhibitory concentration,MIC)检测,进行全基因组测序及系统进化分析.结果 济宁市城区生活污水沙门菌分离率较高,42份样本中阳性样本24份,共分离出41株沙门菌,属9种血清型,以阿贡纳和肯塔基为主,李营和济东污水厂有其独有的血清型.只有1株吉韦沙门菌不耐药,其余40株沙门菌均为多重耐药菌,对复方新诺明、四环素、氨苄西林、链霉素耐药率达90％以上,对氨苄西林/舒巴坦耐药率达80％以上,共19种耐药谱,SXT-TET-STR-AMP-AMS占首位,不同血清型沙门菌的耐药谱不同,肯塔基沙门菌、黄金海岸沙门菌、婴儿沙门菌的多重耐药非常严重,同种血清型在不同污水厂中的耐药谱也不一致,李营污水厂的沙门菌耐药现象最严重.利用CARD数据库进行耐药基因预测,主要预测出8类耐药家族的18个耐药基因,耐药表型与耐药基因几乎全部一致.不同血清型沙门菌的ST分型不同,以ST13的阿贡纳沙门菌为主,进化树分为6个簇,不同污水厂的沙门菌在不同分支,提示基因组有差异,不同源.结论 济宁市城区生活污水中沙门菌血清型多样,提示可能已在人群中存在并传播,耐药严重,携带耐药基因广泛,有些型别菌株持续存在且跨区域分布,有致病风险,需持续监测,并制定对科学的防控措施以控制沙门菌的流行及耐药的加重.

目的 了解北京市门头沟山区农村环境卫生状况和变化趋势,为持续改善农村环境提供数据支持.方法 2017 年和 2021 年采用简单随机抽样方法 ,分别选取 5 个镇共 20 个行政村作为监测点,每个监测点选取 5 户农村家庭作为监测户.通过查阅资料、问卷调查和现场观察等方法 收集行政村和农村家庭环境卫生情况.结果 与 2017 年相比,2021 年监测村内垃圾通过垃圾转运系统集中处理的占比由 75.00%提高到 100.00%(P= 0.047),对生活污水进行处理的占比由 55.00%提高到 100.00%(P=0.001);饭前便后都洗手的家庭由 89.00%提高到 100.00%(χ2 = 11.64,P=0.001);最近两周家庭成员出现腹泻腹痛的家庭由 12.00%降低到 0.00%(χ2 =12.77,P<0.001);使用卫生厕所家庭占比由 81.00%提高到 93.00%(χ2 =6.37,P=0.012).在病媒生物控制上开展"灭鼠"和"灭蝇"的监测村均在 90.00%以上;开展"灭蚊"的监测村占比由 45.00%增加至 90.00%,差异有统计学意义(P = 0.006).结论 2021 年相对2017 年,门头沟山区农村环境卫生明显改善,尤其是在家庭垃圾分类处理、饭前便后洗手卫生习惯和腹痛腹泻发生率等,但在卫生厕所使用、病媒生物控制方面仍有待提高,应进一步采取相应措施,保护辖区居民健康.

目的 了解生活污水中人星状病毒(HAstV)的型别分布及遗传多样性.方法 2018年1月—2019年6月在山东省济宁市按季度采集6份生活污水样本,通过阴离子膜吸附洗脱法进行浓缩后,提取核酸,进行ORF2完整编码区的RT-PCR扩增及扩增产物下一代测序,对产生的干净数据使用CLC Genomics Workbench 12.0软件de novo组装后,进行基因定型、同源性比较和系统发生学分析.结果 检测地区生活污水中HAstV的检出率为100％,共获得HAstV序列43条,分属9种基因型,分别为HAstV-1、HAstV-2、HAstV-3、HAstV-4、HAstV-5 等经典型和 MLB1、VA1、VA2、VA3 等新型 HAstV,其中 HAstV-5(47.53％)占比最高;基于 ORF2完整编码区的系统发生学显示山东株与国内外其他参考株在一些分支上聚集在一起,表明不同型别在世界不同地区的传播.结论 本研究证实了基于NGS的环境监测有助于提高对HAstV遗传多样性的认识.

目的 对天津市柯萨奇病毒B组3型(Coxsackievirus B3,CVB3)分离株进行基因分型及全基因组特征分析,完善天津市CVB3病毒进化信息,为相关疾病的监测预警提供依据.方法 对在天津分离到的5株CVB3毒株提取病毒RNA,通过反转录酶-聚合酶链锁反应(reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)扩增病毒全基因组序列,使用二代测序方法进行全基因组序列测定,对病毒全基因组序列进行系统进化与重组分析.结果 本研究中5株CVB3毒株开放阅读框1(open reading frame,ORF)均含有6 555个核苷酸,编码2 185个氨基酸,ORF2均由编码68个氨基酸大小的序列构成.核苷酸序列相似性为78.3％～100％,氨基酸序列相似性为95.7％～100％.而5株病毒与病毒原型株相比,核苷酸序列相似性为78.2％～79.1％,氨基酸序列相似性为94.9％～95.3％.5株病毒均在VP2蛋白上出现T151A位点突变,此外脑炎分离株还存在VP2蛋白K158E位点突变,1株生活污水分离株在5'非编码区存在C234T突变.5株病毒分属2个不同基因型,其中2016年的脑炎分离株属于D基因型,而2021年的外环境生活污水分离株属于E基因型,这也是我国北方地区首次报道E基因型CVB3.本研究的CVB3毒株在非结构蛋白区可能存在重组事件,其中脑炎分离株可能与1株柯萨奇病毒B组5型(Coxsackievirus B5,CVB5)毒株发生重组,而生活污水分离株与1株埃可病毒18型(ECHO virus 18,E18)毒株存在重组事件.结论 天津市CVB3分离株分属D与E基因型,病毒基因组在非结构蛋白区可能存在重组事件.外环境生活污水中CVB3病毒基因组分析结果提示天津市人群有CVB3感染存在,同时其流行优势基因型可能发生了转变.

目的 了解江西省农村环境卫生影响因素,为制定改善农村环境卫生状况政策措施提供依据.方法 采用分层随机抽样方法抽取江西省11个设区市的28个县,560个行政村,2 801户家庭,采用统一的调查表,通过访谈、现场观察等方法收集资料和数据.结果 本次调查的560个村中,村内垃圾集中转运覆盖79.11％的监测村,71.78％的村做过专门的环境卫生规划,只有16.07％的村开展了“灭四害”工作;被调查农户家庭中,生活污水排放方式主要为经明沟排放(占监测户的43.13％)和随意排放(占27.13％),大部分污水排入河流、坑塘和农田,家庭户厕粪便处理方式以排入沟塘河道、直接施肥和进入排水系统为主,24.13％家庭的秸秆绝大部分会在田里焚烧,家庭农药使用率70.69％,农药废弃包装处理方式主要为扔在田边或垃圾堆(占使用农药农户的85.20％),92.50％的农户房屋周围有病媒生物孳生地.结论 江西省农村家庭污水和粪便处理、村内病媒生物消杀工作有待加强,农户农药废弃包装处置不规范.

为探讨农村居民腹泻在家庭环境卫生和行为习惯方面的影响因素,于2015年5-10月,在泰安市随机抽取3个县,每个县随机选择5个乡镇(不含城关镇),每个乡镇随机选择4个行政村作为监测点,每个监测点随机选择5户家庭,共计300户进行问卷调查,调查内容包括基本情况(监测户的人口学资料、两周腹泻患病情况、饮用水类型、饮水习惯、卫生习惯等信息),厕所与粪便无害化情况(厕所类型、位置、厕室内情况、粪便处理方式等情况),生活垃圾情况(生活垃圾丢弃地点等情况),生活污水情况(生活污水排放方式、排放地点等情况),病媒生物情况(孳生地数量、有无鼠迹、苍蝇等情况).结果显示,农村居民两周腹泻患病率为3.3％(10/300).农村居民腹泻患病率在家庭厕所位置、厕室内卫生情况、家庭生活垃圾丢弃地点、家庭生活污水排放方式、房屋周围病媒生物孳生地情况、家庭饮水习惯、饭前便后洗手习惯方面比较,差异均有统计学意义(P＜0.05),其中,喝生水、饭前便后不洗手、厕所位置在室内、厕室内有蝇蛆、生活垃圾随意丢弃、生活污水随意排放的居民腹泻患病率均较高.房屋周围无垃圾投放点居民腹泻患病率高于有垃圾投放点,差异有统计学意义(P＜0.05).农村居民腹泻患病率在家庭饮用水类型、家庭厕所类型、粪便处理方式、家庭生活污水排放地点等方面比较,差异均无统计学意义(P＞0.05).提示加强卫生宣传,改善家庭环境卫生,建立良好卫生习惯是降低农村居民腹泻患病率的主要措施.