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液相色谱-串联质谱法临床样品前处理专家共识
编辑人员丨5天前
液相色谱-串联质谱法(LC-MS/MS)集色谱技术的高分离能力和质谱技术的高选择性、高特异性及高灵敏性的优点于一体,成为临床检验领域最具有生命力的新技术之一,但其分析效果往往受待测样品特性制约。由于质谱仪的抗干扰能力有限,生物样本多需要进行合适的样品前处理才能有效提高检测性能,实现精准检测。前处理的主要作用是将目标分析物从生物基质中有选择性地分离出来,减少其他基质组分的干扰。同时,还可将目标分析物浓缩和富集,提高检测灵敏度。目前,临床样本前处理方法不仅种类多,个别方法耗时繁琐,给实验室人员在方法选择和开发及标准化操作等方面带来了困难。因此,本共识旨在为实验室方法建立提供指导,助力临床质谱检测方法的研发规范发展。
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编辑人员丨5天前
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2023年重庆市城市污水新冠病毒监测结果
编辑人员丨5天前
目的:为了弥补传统大规模人群监测的不足,在新冠疫情爆发初期提供预警信号,重庆市自2023年起开展城市污水新冠病毒监测工作。方法:新冠病毒"乙类乙管"后,选择了重庆主城4个区5个有自动样本采集设施的污水处理厂作为监测点,每周每个污水处理厂各采集2份污水,用铝盐沉淀法进行富集浓缩,应用多重实时荧光RT-PCR方法对新冠病毒进行检测和分析。结果:2023年1月16日至12月31日累计监测城市污水496份,其中新冠病毒核酸检测阳性285份,总检出率57.46%。第3~5周、18~21周、40~47周新冠病毒检出率均为100.00%。城市污水中新冠病毒核酸浓度在第18周达到高峰,随后开始下降,进入低水平、波动流行期,污水监测新冠病毒核酸日均浓度与传染病监测系统显示的每日新增新冠感染者数、发热门诊新冠阳性检出率的变化趋势基本吻合。结论:重庆市城市污水中新冠病毒的检出率较高,尤其是4~5月份,污水监测可以间接反映新冠病毒感染状况。
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编辑人员丨5天前
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线粒体核糖体蛋白五肽重复结构域3在前列腺癌中的表达及其临床意义
编辑人员丨5天前
目的:探讨五肽重复结构域3(PTCD3)在前列腺癌(PCa)中的表达及其临床意义。方法:下载癌症基因组图谱数据库PCa数据集,利用R语言包"ggsignif"、"survival"、"clusterProfiler"和"GSVA"分析PTCD3在PCa组织中的表达量及其与PCa患者临床特征和生存预后以及其发挥作用的相关机制;构建干扰PTCD3表达的PCa细胞株DU145,分别为空白组(DU145 si-NC)和干扰组(DU145 si-PTCD3),利用细胞增殖-毒性检测试剂盒、细胞体外侵袭实验和海马实验检测细胞的增殖、侵袭能力和线粒体功能。组间分析采用独立样本 t检验。 结果:PTCD3在PCa组织表达增多(PCa比良性前列腺为2.546±0.306比2.443±0.236, P<0.01)。PTCD3在PCa组织中的高表达与高Gleason评分(Gleason评分≥8分比Gleason评分<8分为2.631±0.324比2.485±0.277, P<0.01),肿瘤转移(转移比非转移为2.637±0.356比2.526±0.291, P<0.01)和高临床分期(≥T3A比
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编辑人员丨5天前
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污水中新型冠状病毒富集浓缩和核酸检测方法标准(WS/T 799-2022)
编辑人员丨5天前
新型冠状病毒肺炎疫情暴发以来,全球多个国家已建立基于污水流行病学的污水新冠病毒监测,而我国尚未建立污水中新型冠状病毒的标准检测方法。本标准给出了聚乙二醇沉淀法、铝盐混凝沉淀法和离心超滤法三种污水中新型冠状病毒富集浓缩方法,以用于生活污水、医疗机构污水中新型冠状病毒富集浓缩和核酸检测。本标准的制定对规范污水中新型冠状病毒检测、对保证污水中新型冠状病毒检测的科学性、有效性具有重要意义。
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编辑人员丨5天前
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2022—2023年福建省监测点环境污水中诺如病毒的检测和型别分布特征分析
编辑人员丨5天前
目的:了解福建省3个监测点环境污水中诺如病毒(norovirus, NoV)检出情况及型别分布特征,探索其应用于NoV监测的意义。方法:每月在代表性监测地区5个采样点采集污水,富集浓缩后,用逆转录半巢式-聚合酶链反应(reverse transcription-semi nested polymerase chain reaction, RT-snPCR)扩增NoV VP1部分基因片段,TA克隆后测序进行基因型别分析。结果:2022年7月至2023年6月共收集污水标本56份,GⅠ和GⅡ检出率分别为89.29%(50/56)和94.64%(53/56)。检出GⅠ组7种基因型和GⅡ组13种基因型,其中GⅠ.1、GⅠ.4、GⅡ.4和GⅡ.17为优势基因型。不同采样点检出基因型别不完全一致;2022年8~11月NoV检出率较低,且不同季节流行优势基因型不同,GⅠ.1和GⅡ.4在2022年8~11月呈高流行,但2022年12月到2023年6月分别被GⅠ.4和GⅡ.17取代。2023年1~6月相较2022年7~12月检出型别丰度更高。优势基因型GII.17具有多进化分支,发现了不同于2014/2015年流行株的新变异株。结论:环境污水NoV检出率高且基因型别多样,具备发现新变异病毒株的能力,环境污水监测可做为NoV病例监测的重要补充手段。
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编辑人员丨5天前
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两种方法在城市污水新型冠状病毒与多种腹泻病毒检测中的差异分析
编辑人员丨5天前
目的:研究两种浓缩方法在新型冠状病毒与多种腹泻病毒核酸检测中的差别,了解污水中不同病毒的流行趋势,为防控方案的制定提供理论依据。方法:使用聚乙二醇沉淀法和阴离子膜法对污水中新型冠状病毒、诺如病毒、轮状病毒、札如病毒、腺病毒、人类星状病毒进行富集浓缩和核酸检测,对其结果进行分析。结果:腺病毒阴离子膜法浓缩效果优于聚乙二醇沉淀法,诺如病毒、轮状病毒和札如病毒聚乙二醇沉淀法效果更好,人类星状病毒两种浓缩效果没有统计学差异。新型冠状病毒检出率随时间有波动,3月2日以后聚乙二醇沉淀法检出的ORF1ab基因和N基因的浓缩效果优于阴离子膜法。结论:两种方法对污水中不同病毒的富集浓缩效果不同,可根据工作需要选用合适的病毒浓缩方法。
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编辑人员丨5天前
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深圳市基于污水流行病学的新型冠状病毒奥密克戎变异株感染者来源追踪案例分析
编辑人员丨5天前
污水流行病学(WBE)是一门新兴学科,已被应用于药物滥用追踪和传染病病原体监测。在新型冠状病毒(简称新冠病毒)感染疫情期间,WBE被应用于监测疫情流行趋势和提供早期预警。为了及时发现隐匿的新冠病毒感染者,防止其在社区的传播,深圳市于2022年7月26日至11月30日在福田、南山、罗湖和盐田区的口岸地带、城中村、居民小区等重点场所布设369个污水采样点位,覆盖193万人口,开展污水监测新冠病毒的工作。每日在用水高峰时段进行3 h连续采样,采用聚乙二醇沉淀法和RT-qPCR进行污水病毒富集浓缩及新冠病毒核酸检测,并形成了阳性水样处置流程。本文旨在介绍深圳市基于城市污水开展新冠病毒感染者来源追踪的相关案例,在罗湖区洪湖水质净化厂污水监测有效发挥了早期预警作用并实现感染者来源追踪;在福田区福田南路阳性水样处置中获得监测点位布设的重要经验;在南山区南山村污水监测中揭示了隐匿感染者的存在。分享基于WBE的新冠病毒监测和感染者追踪,避免新冠病毒感染者在社区传播的经验,总结污水监测的优势和应用前景,为未来具有肠道排毒的新发或再发传染病病原体监测提供新的研究思路。
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编辑人员丨5天前
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三氯化铁-聚偏氟乙烯膜滤器富集噬菌体方法的建立和评价
编辑人员丨5天前
目的:建立和评价基于三氯化铁-聚偏氟乙烯(FeCl 3-PVDF)膜滤器富集自然水体中噬菌体的方法。 方法:基于絮凝浓缩原理,利用铁离子絮凝结合膜过滤器建立从水样中回收噬菌体的方法。利用琼脂双层法测定噬菌体滴度、噬菌体荧光染色观察和实时荧光PCR反应等方法检测噬菌体的回收效率。采集不同来源的水体标本进行模拟实验评价富集效果,同时以医院排出污水作为实际水样,利用临床常见的耐药菌作为宿主指示菌,进一步分析FeCl 3-PVDF膜滤器富集方法对自然实际水样中噬菌体的富集效果。 结果:建立了铁离子浓度50 mg/L,采用PVDF膜滤器富集自然水体中噬菌体的方法。该方法对噬菌体的回收率为93%~100%;在多功能显微镜下观察发现富集后水样的噬菌体明显增多,酶标仪测定富集后水样荧光值约为富集前的13倍;对医院外排水实际水样浓缩处理后,浓缩组和未浓缩组噬菌体的分离阳性率分别为23%和4%,浓缩组荧光值为未浓缩组的2~24倍。结论:FeCl 3-PVDF膜滤器方法可简便、高效快速地富集不同水体样本中噬菌体。
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编辑人员丨5天前
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不同腹膜转运特性患者腹膜透析滤出液外泌体miR-503表达差异及生物信息学分析
编辑人员丨5天前
目的:比较腹膜透析滤出液(PDE)外泌体微RNA(microRNA,miR)-503在不同腹膜转运特性患者中的表达差异,并预测miR-503的靶基因及其可能的生物学作用,为其在腹膜转运特性方面的研究提供生物信息学数据。方法:选取24例稳定维持性腹膜透析(PD)患者,根据腹膜平衡试验(PET)结果分为高转运(高/高平均转运组, n=12)和低转运(低/低平均转运组, n=12)两组。收集患者留腹过夜的PDE 500 ml,利用超滤杯进行浓缩后,超速离心法提取外泌体,重悬于磷酸盐缓冲液(PBS),通过透射电镜(TEM)、纳米粒子跟踪分析(NTA)、Western印迹和荧光染色鉴定外泌体的形态结构和功能。提取PDE外泌体miR,实时荧光定量PCR法检测两组PDE外泌体miR-503的表达水平,并分析miR-503的相对表达量与PET值和24 h超滤量的相关性。使用Targetscan和miRDB数据库预测miR-503的靶基因,运用富集分析工具DAVID(https://david.ncifcrf.gov/)进行基因本体(gene ontology,GO)功能富集和京都基因与基因组百科全书(Kyoto encyclopedia of genes and genomes,KEGG)信号通路分析。 结果:PDE中提取到的外泌体透射电镜下呈杯状,直径100 nm左右,表达特异性表面标志CD63、CD81和热休克蛋白-70(HSP-70),可被间皮细胞内化吞噬。与低转运组相比,高转运组PDE外泌体miR-503的相对表达量较高( P=0.002),且PDE外泌体miR-503的相对表达量与PET值呈正相关( r=0.547, P=0.006),但与24 h超滤量无相关性( r=-0.297, P=0.159)。miR-503共有156个靶基因可通过2个不同数据库同时预测出,156个靶基因的GO分析显示主要富集在与蛋白激酶结合、调节蛋白修饰和代谢过程以及调控上皮细胞增殖方面。KEGG通路则富集了许多肿瘤相关和经典的信号传导通路,包括转化生长因子-β(TGF-β)通路和血管内皮生长因子(VEGF)信号通路,同时血管内皮生长因子A(VEGFA)也是miR-503的直接靶基因,与许多纤维化机制中的蛋白相关。 结论:PDE外泌体miR-503在高转运组中明显升高,并与PET值呈正相关。生物信息学分析提示其可能通过靶向VEGFA调控腹膜血管新生。
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编辑人员丨5天前
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浓缩生长因子(CGF)的基础研究及临床应用进展
编辑人员丨2周前
浓缩生长因子(concentrated growth factors,CGF)是第 3 代血小板浓缩物,一种通过特定的离心程序从患者自身的全血中提取出来的血小板富集物,含有大量的生长因子和细胞因子.CGF可以促进伤口愈合、提高移植物的成活率、刺激组织再生等.近年来,CGF在口腔外科、整形外科、皮肤科等领域均得到了广泛的应用.现就CGF的成分、生物学效应和临床应用作一综述.
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编辑人员丨2周前
