目的:总结β酮硫解酶缺乏症（BKTD）患儿的临床表型及基因变异特点。方法:回顾性分析2018年10月至2022年12月在重庆医科大学附属儿童医院诊断及随访的5例BKTD患儿的临床特征，血液生化指标、血和尿质谱检测结果及ACAT1基因变异数据。结果:5例BKTD患儿中男4例、女1例，首次发病年龄为9.7~28.0月龄。急性期均表现出严重代谢性酸中毒，pH值为6.9~7.1，血糖2.3~3.4 mmol/L，尿酮体阳性（+~++++）。血串联质谱分析提示甲基巴豆酰基肉碱、甲基丙二酰基肉碱与丙二酰基肉碱明显升高，分别为0.03~0.42、0.34~1.43及0.83~3.53 μmol/L，尿气相色谱质谱检测提示2-甲基-3羟基丁酸、3-羟基丁酸明显升高，伴甲基巴豆酰甘氨酸轻度升高，分别为22~202、4~6 066和0~29，但经过治疗后血和尿质谱代谢产物明显降低。5例患儿ACAT1基因错义变异比例8/9，发现4种未报道变异：c.678G>T（p.Trp226Cys）、c.302A>G（p.Gln101Arg）、c.627_629dupTGA（p.Asn209_Glu210insAsp）、c.316C>T（p.Gln106Ter），前2种变异经过SIFT、PolyPhen-2和Mutation Taster软件预测为有害，c.316C>T（p.Glu106Ter）为终止变异。结论:BKTD相对罕见，缺乏特异性临床表现，急性发病期常出现严重代谢性酸中毒、低血糖及酮症，ACAT1基因错义变异为BKTD的主要遗传学病因。

目的:探讨1个cisAB09亚型家系的ABO血型血清学特征与分子遗传学机制。方法:选取2022年2月2日于厦门大学附属中山医院输血科进行ABO血型鉴定的1个cisAB09亚型家系为研究对象。采用常规ABO血型血清学检测方法对先证者及其家系成员ABO血型进行鉴定，采用血浆A和B糖基转移酶活性测定方法测定先证者及其母亲血浆中A和B糖基转移酶活性强度，采用流式细胞术检测先证者红细胞表面A、B抗原表达情况。抽取先证者及其家系成员外周静脉血样，提取基因组DNA后，对 ABO基因第1~7外显子及其侧翼内含子进行测序，并对先证者及其母亲和大女儿 ABO基因第7外显子进行Sanger测序验证。 结果:常规ABO血型血清学检测结果提示，先证者及其母亲和大女儿ABO血型初步判断为A 2B表型，先证者妻子及其小女儿为O型。血浆A和B糖基转移酶活性测定结果提示，先证者及其母亲B糖基转移酶活性滴度分别为32、256，分别较A 1B表型阳性对照活性滴度(128)低与高。流式细胞术检测结果显示，先证者红细胞表面A抗原表达数量减少，B抗原表达数量未见异常。 ABO基因测序结果显示，先证者及其母亲和大女儿在 ABO*B.01等位基因基础上，第7外显子发生c.796A>G变异，导致B糖基转移酶第266位氨基酸由甲硫氨酸变为缬氨酸，符合 ABO*cisAB.09等位基因的特征。先证者及其大女儿 ABO基因型为 ABO*cisAB.09/ABO*O.01.01，先证者母亲为 ABO*cisAB.09/ABO*B.01，先证者妻子及其小女儿为 ABO*O.01.01/ABO*O.01.01。 结论:ABO*B.01等位基因c.796A>G变异导致B糖基转移酶第266位甲硫氨酸变为缬氨酸，是产生cisAB09亚型的分子遗传学基础， ABO*cisAB.09等位基因编码的糖基转移酶，可在红细胞表面合成正常水平B抗原和较低水平A抗原。

目的:探讨3例β-酮硫解酶缺乏症(BKTD)患儿的临床特征和基因变异。方法:回顾性分析河南省儿童医院2018年1月至2022年10月诊治的3例BKTD患儿的临床表现、实验室检查及基因检测资料，分析其临床和基因变异特点。结果:3例患儿均为男性，年龄为7 ～ 11个月，表现为外伤应激、感染后出现精神差、气促、呕吐、抽搐等，均存在重度代谢性酸中毒、血和尿中酮体升高、低血糖、血异戊烯酰肉碱和3-羟基异戊酰肉碱升高、尿2-甲基-3-羟基丁酸和甲基巴豆酰甘氨酸增多。基因检测提示患儿1的 ACAT1基因存在c.1183G>T杂合变异与1个涉及 ACAT1基因的大片段缺失(chr11：102980303_110501515)，患儿2的 ACAT1基因存在c.121-3C>G与c.826＋5_826＋9delGTGTT复合杂合变异，患儿3的 ACAT1基因存在c.928G>C与c.1142T>C复合杂合变异。患儿2与患儿3的4种变异均为已知的致病性或可能致病性变异。根据美国医学遗传学与基因组学学会变异相关指南，患儿1的c.1183G>T被评级为意义不明变异(PM2_Supporting＋PP3＋PP4)，11q22.3-11q23.1大片段缺失查询DGV正常人群拷贝数变异数据库未见收录，被评级为致病性拷贝数变异。 结论:ACAT1基因的变异考虑为3例BKTD患儿的遗传学病因。

目的 探讨育龄期女性亚甲基四氢叶酸还原酶(MTHFR)、蛋氨酸合成酶(MS)基因多态性与不良妊娠及子代出生缺陷的关系.方法 选取2014年9月至2016年9月本院收治的200例有不良妊娠结局病史妇女为研究对象,其中子代出生缺陷者52例,同期选取127例体检健康正常育龄期妇女作为对照,采集所有受试者外周血并提取DNA,利用限制性内切酶片段长度多态性PCR(PCR-RFLP)技术检测分析MTHFR、MS基因多态性,分析MTHFR基因C677T、A1298C多态性位点及MS基因A2756G多态性位点与不良妊娠及子代出生缺陷之间的关系.结果 不良妊娠组、出生缺陷组MTHFR C677T位点C/C型基因频率、C等位基因频率明显低于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05),C/T、T/T基因型频率及T等位基因频率明显高于对照组(P＜0.05);不良妊娠组、出生缺陷组MTHFR A1298C位点A/A型基因频率、A等位基因频率明显低于对照组(P＜0.05),A/C、C/C基因型频率及C等位基因频率明显高于对照组(P＜0.05);不良妊娠组、出生缺陷组CC/AA、CC/AC基因型频率明显低于对照组(P＜0.05),CT/AA、CT/CC、TT/AA、TT/AC基因型频率明显高于对照组(P＜0.05);不良妊娠组、出生缺陷组与对照组MS基因A2756G位点等位基因频率及基因型频率分布比较,差异无统计学意义(P＞0.05).结论 叶酸代谢酶MTHFR基因多态性与不良妊娠及子代出生缺陷关系密切,MS基因多态性与不良妊娠及子代出生缺陷无关.

目的 对1例罕见的ABO亚型进行鉴定并探讨其分子机制.方法 在标准血型血清学方法鉴定的基础上,应用PCR方法扩增患者ABO基因7个外显子和侧翼内含子及克隆测序等方法进行ABO亚型的基因分型和单倍型分析.结果 患者常规卡式法ABO正定型为B型,反定型有极弱的抗-B抗体,表现为正反定型不符;吸收放散实验证明患者红细胞表面不存在A抗原;ABO基因测序发现其第7外显子523位碱基发生G＞A突变,导致175位缬氨酸(Val)被甲硫氨酸(Met)替换;ABO基因扩增产物测序及克隆测序结果表明该患者ABO血型基因型为ABO* Bw14/O01.结论 分子生物学方法是鉴定疑难血型的必要方法.ABO基因的523G＞A突变可能是导致该Bw14亚型的B抗原表达减弱的分子遗传学基础之一.

目的 探讨甲硫氨酸腺苷转移酶缺陷导致的高甲硫氨酸血症患儿的临床表现和分子遗传学特点.方法 回顾分析3例因甲硫氨酸腺苷转移酶缺陷导致的高甲硫氨酸血症患儿的临床资料及相关基因分析,并进行核心家系分析.结果 3例患儿,男孩2例,女孩1例,年龄5个月～3岁,来自3个不相关的家系;均无阳性家族史.1例在新生儿筛查时被发现,1例于1个月时病理性黄疸发病,另1例于2岁时因手抖和生长发育落后而就诊.血氨基酸酯酰肉碱谱分析均显示甲硫氨酸显著增高,134.50～790.67μmol/L.患儿均为甲硫氨酸腺苷转移酶编码基因MAT1A突变;1例为复合杂合突变,第3外显子c.274T>C和第7外显子c.895C>T突变;1例为第6外显子c.757G>A纯合突变;另1例为第7外显子c.791G>A纯合突变.核心家系分析示患儿的突变均分别来自父母.结论 对于以神经系统损害为主要表现的患儿应考虑到甲硫氨酸代谢障碍性疾病,血氨基酸和基因分析是明确诊断的重要方法.新生儿筛查是发现此病的有效方法.

目的 检测甲氨蝶呤(MTX)诱导叶酸代谢障碍神经管畸形(NTDs)小鼠胚胎神经组织的基因组拷贝数变异(CNVs),探讨叶酸代谢障碍与NTDs发生的分子遗传学机制.方法 采用本实验室已建立的MTX诱导的叶酸代谢障碍NTDs C57BL/6J小鼠模型,于孕第7.5天采用MTX干预,收集孕鼠血清及NTDs小鼠胚胎神经组织;用NimbleGen高分辨率微阵列比较基因组杂交(array-CGH)芯片对NTDs小鼠胚胎神经组织进行全基因组CNVs分析,反转录(RT)-PCR验证新发现的CNVs;用液相色谱串联质谱法(LC-MS/MS)与酶学方法检测孕鼠血清中叶酸与其相关代谢产物水平及二氢叶酸还原酶(DHFR)活性.结果 array-CGH分析发现,NTD小鼠胚胎神经组织全基因组存在3个高可信度CNVs,分别位于XqE3、XqA1.1-qA2和XqA1.1染色体,RT-PCR验证了这3个CNVs的存在.与对照组相比,MTX干预后,NTDs孕鼠血清中5-甲基四氢叶酸、5-甲酰四氢叶酸、S-腺苷甲硫氨酸水平及DHFR活性明显降低,差异均有统计学意义(P均＜0.05).结论 MTX诱导的NTDs小鼠胚胎神经组织中存在明显的CNVs,叶酸代谢紊乱可通过CNVs导致小鼠胚胎神经管发育障碍.

目的 对1例未伴琥珀酰丙酮增高的酪氨酸血症Ⅰ型患儿进行临床及基因突变分析.方法 收集息儿的临床资料,用串联质谱法和气相色谱-质谱法分析息儿的血液及尿样.提取患儿及其父母的外周血基因组DNA,进行基因突变分析.结果 先证者为急性型,表现为肝脏肿大、黄疸、贫血、出血倾向,血串联质谱检测发现其酪氨酸(397.12μmol/L)、甲硫氨酸(896.16μmol/L)和苯丙氨酸(292.52μmol/L)的浓度均明显高于正常水平;尿气相色谱-质谱检测发现苯乳酸(17.4 μmol/L)和4-羟基苯乳酸(417.0 μmol/L)排出明显增多,但琥珀酰丙酮(0.0 μmol/L)排出正常.测序显示患儿携带FAH基因c.634delT(p.L212Wfs* 20)和c.455G＞A(p.W152X)的复合杂合突变,父亲携带c.634delT突变,母亲携带c.455G＞A突变,均为致病性突变.结论 酪氨酸血症Ⅰ型患儿尿气相质谱检测琥珀酰丙酮结果可能为阴性.对可疑患者进行确诊必须依靠基因检查或酶活性的分析.

针对赤峰市汉族和蒙古族孕期女性开展分子流行病学调查,研究叶酸代谢关键酶5,10-亚甲基四氢叶酸还原酶(5,10-methylenetetrahydrofolate reductase,MTHFR) C677T、A1298C以及甲硫氨酸合成酶还原酶(methionine synthase reductase,MTRR) A66G的基因多态性在该地区汉族及蒙古族中的分布.以孕期保健的853名女性为研究对象,其中汉族647人、蒙古族206人.采集口腔黏膜上皮脱落细胞,抽提基因组DNA,使用荧光定量PCR方法检测MTHFR C677T、A1298C和MTRR A66G的基因多态性,并进行统计学分析.结果 显示:1)入组对象的基因多态性分布符合遗传平衡;2)汉族和蒙古族孕期女性MTHFR C677T位点基因型CC、CT、TT的频率分别为15.61％、52.40％、31.99％与23.79％、50.97％、25.24％,差异具有统计学意义(P＜0.05).汉族和蒙古族孕期女性MTHFR A 1298C位点基因型AA、AC、CC的频率分别为76.04％、22.10％、1.86％与74.27％、23.30％、2.43％,差异无统计学意义(P＞0.05).汉族和蒙古族孕期女性MTRR A66G位点基因型AA、AG、GG的频率分别为58.42％、36.63％、4.95％与50.48％、40.78％、8.74％,差异具有统计学意义(P＜0.05);3)汉族和蒙古族孕期女性MTHFR C677T和A1298C两位点连锁有6种组合,频率最高的是CT/AA,之后依次是TT/AA、CT/AC、CC/AA、CC/AC、CC/CC,没有CT/CC、TT/AC和TT/CC组合.两位点间存在完全连锁不平衡.本研究获取的赤峰市汉族、蒙古族孕期女性MTHFR和MTRR基因多态性的群体遗传学特征,为指导科学增补叶酸营养、实施个性化孕期保健提供了依据.

目的 针对新余市汉族女性开展分子流行病学调查,研究叶酸代谢关键酶甲硫氨酸合成酶还原酶(MTRR)和5,10-亚甲基四氢叶酸还原酶(MTHFR)的基因多态性分布.方法 以孕期保健的521名汉族健康女性为研究对象,采集口腔黏膜上皮脱落细胞,提取基因组DNA,使用荧光定量PCR方法检测MTHFR C677T、A1298C和MTRR A66G基因多态性,进行统计分析.结果 (1)入组对象的基因多态性分布符合遗传平衡.(2)汉族女性MTHFR 677CC、CT、TT的基因型频率分别为38.6％、47.6％、13.8％,C、T等位基因频率分别为62.4％、37.6％;MTHFR 1298AA、AC、CC的基因型频率分别为65.1％、31.9％、3.07％,A、C等位基因频率分别为81.0％、19.0％;MTRR 66AA、AG、GG的基因型频率分别为60.3％、35.1％、4.61％,A、G等位基因频率分别为77.8％、22.2％.(3)汉族女性MTHFR C677T和A1298C两位点连锁有7种组合,频率最高的是CT/AA(30.5％),没有TT/AC和TT/CC组合.两位点间存在完全连锁不平衡(D'=1.0,r2=0.124).结论 获取新余市汉族女性MTHFR和MTRR基因多态性的群体遗传学特征,其中关键基因位点MTHFR C677T的高风险TT基因型比例为13.8％,低于已报道的山东淄博、河南新乡、辽宁沈阳等地,高于广东佛山市,说明叶酸利用能力中等,对于高风险人群还需加强孕期管理,同时本研究也为当地人群进行个体化增补叶酸提供理论依据.