目的:探索在多种脑肿瘤中应用甲硫腺苷磷酸化酶（methylthioadenosine phosphorylase，MTAP）与p16免疫组织化学染色预测CDKN2A基因状态的可行性。方法:收集2017年11月至2023年10月首都医科大学宣武医院118例IDH突变型星形细胞瘤、16例IDH野生型胶质母细胞瘤、17例多形性黄色星形细胞瘤（pleomorphic xanthoastrocytoma，PXA）及20例脑膜瘤标本（共171例标本）进行回顾性分析，采用荧光原位杂交及二代测序技术检测CDKN2A基因状态，免疫组织化学方法检测MTAP及p16蛋白的表达情况，统计分析MTAP及p16蛋白缺失与CDKN2A纯合性/杂合性缺失的一致性。结果:118例IDH突变型星形细胞瘤中13例存在CDKN2A纯合性缺失，同时，这13例MTAP表达均缺失，其中9例存在p16表达缺失；16例IDH野生型胶质母细胞瘤中6例存在CDKN2A纯合性缺失，这6例MTAP表达缺失，其中3例存在p16表达缺失；17例PXA中4例存在CDKN2A纯合性缺失，这4例MTAP及p16表达均缺失；20例脑膜瘤中4例存在CDKN2A纯合性缺失，这4例MTAP及p16表达均缺失。经统计分析，在4类脑肿瘤中，MTAP均与CDKN2A纯合性缺失显著相关（ P<0.05），灵敏度均达100%，但其与CDKN2A杂合性缺失仅在星形细胞瘤中显著相关（ P<0.001）。p16与CDKN2A纯合性缺失在IDH突变型星形细胞瘤及PXA中具有显著相关性（ P<0.001），与CDKN2A的杂合性缺失无相关性，但其灵敏度及特异度均不及MTAP。 结论:MTAP在成人型IDH突变型星形细胞瘤、PXA、成人型IDH野生型胶质母细胞瘤及脑膜瘤中能够作为CDKN2A纯合性缺失的预筛手段，而p16仅能在前两者肿瘤中作为预筛指标，且特异度及灵敏度均不及MTAP。

目的:探讨通过免疫细胞化学染色检测的几种标志物以及荧光原位杂交（FISH）检测CDKN2A基因缺失在浆膜腔积液间皮瘤诊断中的价值。方法:收集2019—2022年14例发生于胸腔及腹腔弥漫性间皮瘤的浆膜腔积液细胞学标本及活检组织学标本，应用免疫细胞/组织化学方法检测BRCA相关蛋白1（BAP1）和甲基硫腺苷磷酸化酶（MTAP），以及FISH检测CDKN2A的缺失。同时14例均检测了常规用于间皮瘤鉴别诊断的抗体组合，包括Calretinin、细胞角蛋白（CK）5/6、WT1、D2-40、上皮细胞膜抗原（EMA）、结蛋白、GLUT1。另收集20例良性间皮细胞反应性增生的浆膜腔积液作为阴性对照。结果:免疫细胞/组织化学染色结果显示，14例间皮瘤中9例显示BAP1蛋白表达缺失（9/14）；5例MTAP表达缺失（5/14）；12例表达EMA（12/14），11例表达GLUT1（11/14）；4例表达结蛋白（4/14），其中3例为局灶阳性；Ki-67阳性指数5%~40%（平均为20%）；FISH检测CDKN2A结果显示：1例（1/14）纯合性缺失，6例（6/14）杂合性缺失，7例（7/14）未见基因缺失。结论:免疫化学和FISH在细胞学及组织学标本检测结果中具有较好的一致性。通过免疫细胞化学检测几种标志物尤其是BAP1、MTAP蛋白的表达缺失以及FISH检测CDKN2A的缺失情况，有助于提高浆膜腔积液细胞学标本中间皮瘤的阳性诊断率，达到早诊断、早治疗的目的。

甲硫腺苷磷酸化酶（MTAP）是甲硫氨酸和嘌呤补救合成途径中的一个关键酶，与多胺代谢、腺嘌呤代谢和甲硫氨酸代谢密切相关。MTAP基因在恶性间皮瘤（MM）中频繁发生缺失，在恶性间皮瘤诊断与鉴别诊断中具有重要价值。同时，由于MTAP缺失引起代谢重编程，为MM带来了新的治疗策略。除此之外，MTAP基因也与MM的预后具有一定相关性，因此MTAP或可作为MM诊断、治疗和预后相关的重要生物标志物。

目的 探讨甲硫腺苷磷酸化酶(MTAP)、组蛋白赖氨酸三甲基转移酶(SETD2)蛋白在结直肠癌组织中的表达及临床意义.方法 将2018年11月至2019年11月在苏州市中西医结合医院进行手术治疗并经术后病理学检查证实的86例结直肠癌病人作为研究对象,并收集齐其癌组织标本以及对应的癌旁组织标本.采用免疫组织化学染色法检测所有标本MTAP、SETD2蛋白表达水平.采用χ2检验和多因素Cox回归法探讨MTAP、SETD2蛋白表达与结直肠癌病人临床病理特征、预后的关系.结果 结直肠癌组织中MTAP、SETD2阳性表达率(30.23%、27.91%)分别低于癌旁组织(58.14%、62.79%)(P<0.05).MTAP、SETD2阳性表达水平随着TNM分期越晚、分化程度越低、伴有淋巴结转移而降低(P<0.05).MTAP阳性3年生存率(73.08%)明显高于阴性(43.33%)(P=0.011);SETD2阳性3年生存率(70.83%)高于阴性(45.16%)(P=0.011).单因素、多因素分析得出,TNM Ⅲ～Ⅳ期、伴淋巴结转移、低分化、MTAP阴性、SETD2阴性表达均为影响结直肠癌预后的危险因素(P<0.05).结论 直肠癌组织中MTAP、SETD2蛋白均呈低表达,其表达水平可能参与疾病发展,可成为评估病人预后不良的有效生物学指标.

本研究利用TMT标记+LC-MS/MS技术来探明黄独低温离体保存微型块茎的差异蛋白.研究表明,所有肽段的mass error进行统计,大多数mass error ＜0.02 Da,且其分布均在0附近,MS数据比较精确,符合检测要求.大多数肽段的长度分布在8～16之间,符合tryptic酶切肽段的理论值,表明样本的前处理也符合要求.差异蛋白为106个,其中上调差异蛋白61个,下调差异蛋白45个.排名前10位差异蛋白分别为伸长因子3、6-磷酸葡萄糖酸脱氢酶、磷酸甘油酸激酶、蔗糖合成酶、光系统Ⅱ的贮藏蛋白质、未知蛋白、分子伴侣DNAK、α-淀粉酶、S-腺苷甲硫氨酸合成酶和淀粉磷酸化酶,其中伸长因子3、6-磷酸葡萄糖酸脱氢酶、磷酸甘油酸激酶、蔗糖合成酶、分子伴侣DNAK和S-腺苷甲硫氨酸合成酶为在4℃低温离体保存中上调的蛋白,而未知蛋白、α-淀粉酶、淀粉磷酸化酶为在4℃低温离体保存中下调的蛋白.经过wego分析后,所有检测到的蛋白主要聚集于代谢过程、细胞过程细胞、绑定、催化等GO terms.通过富集,晚期内体膜、钙离子结合、谷胱甘肽转移酶活性、蛋白定位到液泡、高尔基液泡运输、液泡运输、氨基末端肽结合空泡分选和披网格蛋白小泡膜等GO term富集显著.富集的KEGG pathway主要有乙醛酸盐代谢、光合作用、甲烷代谢、碳水化合物的消化和吸收、半胱氨酸和蛋氨酸代谢、淀粉和蔗糖代谢和碳代谢.黄独低温离体保存微型块茎差异蛋白的初步发现为进一步了解其低温离体保存的分子机制奠定了基础,也为低温离体保存黄独微型块茎的破除休眠以及其后续萌发提供了理论依据.

人类基因组包含上千种重复单元核小体,单个核小体由146bp的DNA序列和4种组蛋白(H1、H2、H3和H4)组成.这些组蛋白经常发生各种修饰,包括甲基化、乙酰化、磷酸化和泛素化等,进而调控基因表达,其中甲基化修饰占据重要地位[1].组蛋白甲基化修饰主要通过组蛋白甲基转移酶(histone methyltransferases,HMTs)来催化进行.HMTs是一个巨大的酶家族,它能够将1～3个S-腺苷甲硫胺酸(SAM)转移到组蛋白特殊位点的赖氨酸或精氨酸残基,催化其甲基化,从而控制转录、染色质形成及细胞分化[2].HMTs分为两大类:组蛋白赖氨酸甲基转移酶(histone lysine methyltransferases,HKMTs)和精氨酸甲基转移酶(protein arginine methyltransferases,PRMTs).目前哺乳动物体内已发现的HMTs有43种,其中HKMTs占据大多数.

目的 观察9p21染色体位点相关基因与冠心病病情发展相关性.方法 采用实时荧光PCR扩增法分别测定稳定型心绞痛患者(30例)、不稳定型心绞痛患者(30例)、急性心肌梗死患者(30例)、健康人群患者(30例)的外周血9p21染色体位点相关基因〔细胞周期依赖性激酶抑制基因(CDKN)2A、CDKN2B、甲硫腺苷磷酸化酶(MTAP)和INK4基因座中反义非编码RNA(ANRIL)〕表达水平,分析不同冠心病病情分期患者及健康人群外周血9p21染色体位点相关基因表达差异.结果 与健康人群组比较,稳定型心绞痛组、不稳定型心绞痛组和急性心肌梗死组患者外周血9p21染色体位点CDKN2A、CD-KN2B基因表达水平显著降低(均P<0.05),而MTAP基因表达水平显著提升(P<0.05),而ANRIL基因表达差异无统计学意义(P>0.05).同时稳定型心绞痛组、不稳定型心绞痛组和急性心肌梗死组患者外周血9p21染色体位点CDKN2A、CDKN2B、MTAP基因表达水平两两比较差异均有统计学意义(均P<0.05),ANRIL基因表达水平两两比较差异均无统计学意义(均P>0.05).结论 9p21染色体区域的CDKN2A、CDKN2B、MTAP基因与冠心病发生密切相关,且随着冠心病病情发展,9p21染色体区域的CDKN2A、CDKN2B、MTAP基因表达与正常健康人群差异越明显,9p21染色体位点CDKN2A、CDKN2B、MTAP基因表达水平可能是汉族冠心病人群临床诊治的潜在靶基因.

目的 探讨胚胎植入期膳食补充N.氨甲酰谷氨酸(NCG)在二硫化碳(CS2)致小鼠胚胎植入障碍中的预防作用及可能的分子机制.方法 分别于清洁级昆明种小鼠受孕后第3、4、5天单次腹腔染毒CS2构建胚胎植入障碍模型,并平行设围植入期增补NCG组和溶剂对照组,每组的每个观察终点有12只孕鼠.各组染毒CS2后24h收取子宫内膜组织进行Westem-blot和免疫组织化学染色分析,检测子宫内膜组织中AKT/AMPK及其磷酸化形式的蛋白表达水平,孕9d观察胚胎植入数目.结果 与单纯CS2染毒组比较,孕4dNCG+CS2组孕胚胎植入数目增加24.0％,差异有统计学意义(P＜0.05).NCG+CS2组pAKT蛋白表达量增加了46.5％,差异有统计学意义(P＜0.05);NCG+CS2组pAMPK蛋白表达水平降低28.0％,差异有统计学意义(P＜0.05).免疫组织化学定位结果显示,pAKT、pAMPK、AKT、AMPK蛋白主要表达于子宫内膜的腔上皮细胞、腺上皮细胞和基质细胞;与单纯CS2染毒组比较,孕4dNCG+CS2组pAKT蛋白染色加深(蛋白表达水平明显增加),pAMPK蛋白染色变浅(蛋白表达水平明显降低).结论 膳食补充NCG可能通过改变磷酸化AKT/AMPK分子总量干预CS:染毒导致的胚胎丢失作用.

目的 探讨丝氨酸羟甲基转移酶2 (SHMT2)诱导自噬促进结肠癌细胞化疗耐药的机制.方法 通过TCGA数据库、实时定量PCR检测结肠癌组织SHMT2 mRNA水平,免疫组织化学染色法检测结肠癌组织SHMT2的表达和分布,Western blot法检测SW480、SW620、HCT116、CACO2、RKO、HCT8、HT15和HT29结肠癌细胞中的SHMT2蛋白水平;在CACO2结肠癌细胞过表达SHMT2后,噻唑蓝(MTT)法检测细胞活性、异硫氰酸荧光素标记的膜联素V/碘化丙啶(annexin V-FITC/PI)双标记结合流式细胞术检测SHMT2对5-氟尿嘧啶(5-Fu)处理的结肠癌细胞的凋亡,透射电镜观察结肠癌细胞自噬小体,Western blot法检测自噬相关的信号通路微管相关蛋白1轻链3Ⅱ/Ⅰ (LC3Ⅱ/Ⅰ)、P62、裂解型多腺苷二磷酸核糖聚合酶(c-PARP)和裂解型胱天蛋白酶3(c-caspase-3)的蛋白水平,信号通路蛋白质磷酸化广谱筛选抗体芯片及Western blot法检测腺苷酸活化蛋白激酶/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(AMPK/mTOR)的磷酸化水平.结果 SHMT2在结肠癌组织及细胞中高表达;过表达SHMT2后,细胞活力显著增加,LC3Ⅱ/Ⅰ比值上升;过表达SHMT2后,AMPK磷酸化水平升高,mTOR磷酸化水平降低.结论 SHMT2可能通过促进AMPK磷酸化直接或间接抑制mTOR活性诱导自噬,抑制化疗诱导的细胞凋亡,降低化疗敏感性.

目的 探讨糖原合成激酶3β(GSK3β)的活性在肝细胞生长因子(HGF)信号通路中对改善心肌缺血再灌注损伤的作用及机制.方法 研究大鼠离体心肌细胞H9c2,用不同类型的GSK3β腺病毒[不表达GSK3β的重组腺病毒Ad-GFP;野生型GSK3β腺病毒GSK3β-Ad-wt;表达GSK3β不可磷酸化的组成型活性突变体,其第9位丝氨酸残基突变(Ser9)为丙氨酸,从而不能再被磷酸化失活而具有固有活性的GSK3β腺病毒GSK3β-Ad-S9A;表达催化失活的GSK3β复制缺陷型腺病毒载体,其第85位赖氨酸残基突变为甲硫氨酸,从而持续失活的GSK3β腺病毒GSK3β-Ad-K85A]感染细胞和HGF激活剂刺激细胞,分为对照组、缺血再灌注(I/R)组、I/R+ HGF组、I/R+ HGF+ Ad-GFP组、I/R+ HGF+ GSK3β-Ad-wt组、I/R+ HGF+ GSK3β-Ad-S9A组和I/R+ HGF+GSK3β-Ad-K85A组.Western blot检测GSK3β,下游通路蛋白肝激酶B1(LKB1),腺苷单磷酸激活蛋白激酶(AMPK),自噬相关蛋白Beclin-1、LC3Ⅱ及上游通路蛋白激酶B(Akt)的表达水平.结果 与对照组和I/R组比较,HGF激活剂能促进pGSK3β,下游通路蛋白LKB1、AMPK,自噬相关蛋白LC3Ⅱ、Beclin-1,上游蛋白pAkt的表达,差异有统计学意义(P＜0.05);而在HGF激活剂的作用下,GSK3β的失活(Adwt和Ad-K85A腺病毒感染组)使下游通路蛋白LKB1、AMPK和自噬相关蛋白Beclin-1、LC3Ⅱ的表达量明显升高,而在I/R+ HGF+ GSK3β-Ad-S9A组则明显降低,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 HGF通路通过激活磷脂酰肌醇3激酶(PI3 K)/Akt/GSK3β/AMPK信号通路促进细胞自噬并改善心肌细胞缺血再灌注损伤.