目的 探讨细胞周期蛋白激酶9(cyclin-dependent kinase 9,CDK9)在卡波氏肉瘤相关疱疹病毒(Kaposi′s sarcoma-associated herpesvirus,KSHV)裂解复制周期中的作用.方法 分别应用CDK9特异性抑制剂FIT-039处理或CDK9小干扰RNA(siRNA)转染iSLK.219及TREx-K-Rta BCBL-1细胞,四环素(Dox)或佛波酯(TPA)和丁酸钠刺激48 h后,分别采用荧光显微镜和实时定量PCR(qPCR)方法观察红色荧光蛋白(RFP,病毒裂解复制)阳性细胞数目及KSHV相关基因的mRNA转录水平.染色质免疫沉淀(ChIP)试验检测KSHV PAN启动子上RNA PolⅡ及其磷酸化CTD-S2的富集含量.结果 FIT-039处理和CDK9-siRNA转染后,iSLK.219细胞RFP阳性率显著降低、TREx-K-Rta BCBL-1细胞中KSHV裂解复制周期相关基因ORF50、PAN及K2的mRNA转录水平明显下降.且FIT-039处理后,TREx-K-Rta BCBL-1细胞中KSHV PAN启动子上结合的RNA PolⅡ及其磷酸化CTD-S2含量显著下降.结论 CDK9可能通过磷酸化RNA PolⅡ丝氨酸调控KSHV病毒裂解复制.

[背景]猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)膜蛋白(M)在病毒粒子的组装、膜融合和病毒复制等方面具有重要的作用,但M蛋白与宿主细胞的互作机制尚不清楚.[目的]利用免疫沉淀技术和液质联用技术筛选细胞内与PEDV M蛋白相互作用的蛋白,为揭示M蛋白在病毒增殖过程中发挥的功能提供研究基础.[方法]将MOI=0.1的PEDV DR 13疫苗株接种于长成单层的Vero细胞,感染36h后,收集细胞并进行裂解.利用抗M的单克隆抗体沉淀与M相互作用蛋白复合物,通过液相色谱串联质谱(LC-MS/MS)进行鉴定并利用细胞功能富集分析(Gene ontology,GO)对感染组鉴定到的细胞蛋白进行分析,确定两个细胞内源性蛋白为候选蛋白,进行免疫共沉淀(Co-IP)验证和共定位分析.[结果]基于鉴定蛋白的肽段数的方法分析显示,感染组与对照组相比,鉴定了218个与M蛋白相互作用的细胞内源性蛋白,分别与蛋白质合成、代谢、细胞信号通路转导等密切相关,选择细胞分裂周期蛋白42 (Cell division cycle 42,CDC42)、真核翻译起始因子3亚基L蛋白(eIF3L)为候选蛋白进行Co-IP (Co-immunoprecipitation)验证和共定位分析,结果证买CDC42、eIF3L蛋白分别与M蛋白在细胞内存在相互作用.[结论]鉴定出PEDV M蛋白能够与宿主细胞CDC42和eIF3L蛋白相互作用,并鉴定出其他可能与M蛋白发生相互作用的宿主蛋白60个,为开展PEDV与宿主细胞蛋白相互作用研究提供了重要理论依据.

卡波西氏肉瘤相关疱疹病毒(Kaposi’s sarcoma-associated herpesvirus,KSHV)属于γ疱疹病毒亚科,与多种人类恶性肿瘤等疾病密切相关.KSHV存在潜伏和裂解两种复制周期,并能够编码在γ疱疹病毒中保守的复制转录激活因子(Replication and transcription activator,RTA)来控制自身的激活.但是,RTA发挥功能的机制尚不完全明确.近年来,人们发现KSHV的RTA具有泛素连接酶的活性,能够利用人体细胞内的泛素-蛋白酶体系统(Ubiquitin-proteasome system,UPS)降解多种细胞蛋白和病毒蛋白.本文对RTA操纵宿主细胞UPS调控KSHV复制与免疫逃逸机制的最新研究进展进行了综述.

一、目的和适用范围本指导原则 目的是针对慢性丙型肝炎(CHC),协助药物研发者和临床研究者进行针对慢性丙型肝炎病毒(HCV)的直接作用抗病毒药物(DAA)的临床研发,涵盖新药临床试验申请前(pre-IND)至新药上市申请(NDA)和上市后阶段.本指导原则中,针对HCV的DAA是指可通过与HCV基因组、多聚蛋白或其多聚蛋白裂解产物直接相互作用,从而干扰HCV复制周期中特定步骤的药物.

卡波氏肉瘤相关疱疹病毒(Kaposi's sarcoma-associated herpesvirus,KSHV)是已知的肿瘤病毒之一,其病毒和细胞因子之间的相互作用对病毒复制和宿主防御至关重要.DNA损伤反应(DNA damage response,DDR)是识别并招募修复因子到DNA损伤部位,引起细胞周期停滞直至损伤修复.DDR是维持基因组稳定的重要机制.未被正确修复的损伤有可能导致基因组不稳定并引起肿瘤发生.本文综述了 DDR在KSHV感染、潜伏及裂解期复制的影响的研究进展.

潜伏期相关核抗原(LANA)是卡波西肉瘤相关疱疹病毒(KSHV)关键致癌蛋白,在卡波西肉瘤(KS)的多种致病途径中发挥重要作用,包括参与KSHV与宿主基因共复制、协助建立KSHV基因组表观遗传修饰、调节KSHV潜伏和裂解生命周期、协助宿主细胞逃避免疫监视、促进肿瘤血管生成、调节宿主细胞代谢等,通过影响KSHV和宿主细胞重编程促进KS的发生发展.LANA不仅可作为临床检测KSHV感染的免疫组织化学标志物,更有作为治疗靶点的潜在价值,目前已开展多项靶向LANA的研究,其中利用CRISPR/Cas9技术靶向编码LANA的ORF73基因、以结构为基础筛选及合成的LANA结合位点小分子抑制剂和LANA调节因子抑制剂在相关细胞和动物实验中显示出对KSHV相关恶性肿瘤的治疗潜力,针对LANA的靶点干预可能为及KSHV相关恶性肿瘤抗病毒治疗的新策略.