目的 筛选中药黄芩中血管紧张素转换酶2(ACE2)和二肽基肽酶4(DPP-4)抑制剂.方法 以ACE2和DPP-4作为靶蛋白,利用受体配体亲和超滤和液质联用技术,对黄芩中与ACE2和DPP-4亲和的化合物进行筛选和分析,以筛选具有同时抑制ACE2和DPP-4的化合物.结果 从黄芩中筛选出了 5,7,2',6'-4羟基黄酮、5,7,2',5'-4羟基.8,6'-二甲氧基黄酮、白杨素-7-O-葡萄糖醛酸苷、黄芩素-6-O-葡萄糖醛酸苷、千层纸素A-7-O-葡萄糖醛酸苷、汉黄芩苷、白杨素、千层纸素A,可以同时亲和抑制ACE2和DPP-4,具有潜在的抗新型冠状病毒的作用.结论 从黄芩中筛选出与新型冠状病毒肺炎有关的靶蛋白抑制剂,具备潜在开发价值.

目的:观察白杨素对缺血缺氧性脑病模型新生大鼠的脑保护作用，探讨其作用机制。方法:将大鼠按随机数字表法分为假手术组、模型组和白杨素低、高剂量组，每组12只。除假手术组外，其余各组大鼠制备缺血缺氧性脑病大鼠模型。模型制作完成后，白杨素低、高剂量组立刻腹腔注射白杨素30、60 mg/kg，假手术组和模型组腹腔注射等体积生理盐水，1次/d，连续给药4 d。采用HE染色观察各组大鼠脑组织病理学改变，生化测定脑组织SOD、CAT、MDA水平，采用Western blot法检测脑组织血红素加氧酶-1(heme oxygenase-1, HO-1)、转录因子NF-E2相关因子2(NF-E2-related factor 2, Nrf2)蛋白表达。结果:假手术组大鼠神经细胞排列规则有序，胞核圆形，核仁明显；模型组大鼠脑组织水肿，神经细胞排列松散；白杨素低、高剂量组神经细胞变性、坏死较模型组减轻。与模型组比较，白杨素低、高剂量组大鼠脑组织中SOD[(55.74±5.14)U/mg、(69.84±5.05)U/mg比(37.64±6.41)U/mg]、CAT[(2.44±0.22)U/mg、(2.59±0.42)U/mg比(2.08±0.37)U/mg]活性升高( P<0.05)，MDA[(3.74±0.05)mmol/mg、(2.60±0.18)mmol/mg比(4.35±0.24)mmol/mg]水平降低( P<0.05)；脑组织HO-1[(0.43±0.08)、(1.02±0.15)比(0.14±0.07)]、Nrf2[(0.48±0.07)、(0.79±0.09)比(0.26±0.08)]蛋白表达增加( P<0.05)。 结论:白杨素可减轻缺血缺氧性脑病大鼠神经损伤，其机制可能与上调HO-1、Nrf2蛋白表达有关。

目的 研究达立通颗粒主要活性成分在正常和功能性消化不良(FD)模型大鼠胃肠道组织中的分布差异.方法 采用夹尾刺激结合不规律饮食双因素干预方法建立FD模型.12只大鼠(对照、模型各6只)用于FD模型验证,进行胃、小肠排空实验,HE染色后进行胃肠组织病理学观察;36只大鼠(对照、模型各18只)用于胃肠道组织差异分布研究,禁食不禁水18 h,按22.4 g·kg-1剂量(8倍临床等效剂量)ig给予达立通颗粒1次,于给药后1、3、6h收集各组大鼠的胃、十二指肠、空肠、回肠和结肠.应用超高效液相色谱-串联四级杆/线性离子阱质谱(UPLC-QTRAP-MS/MS)法检测各组织牡荆素-4"-O-葡糖苷、原阿片碱、黄连碱、小檗碱、甜橙黄酮、川陈皮素、桔皮素、去甲基川陈皮素、木香烃内酯、去氢木香内酯、原儿茶酸、伞形花内酯、木犀草苷、橙皮苷、木犀草素、柚皮素、橙皮素、白杨素含量,采用ACQUITY HPLCTM HSS T3(50 mm×2.1 mm,1.8 μm)色谱柱,柱温为40 ℃,0.1％甲酸水-乙腈为流动相,梯度洗脱,体积流量为0.3 mL·min-1,进样量为2μL.结果 与对照组比较,模型组大鼠体质量显著降低(P＜0.001),胃、小肠排空率显著降低(P＜0.001),十二指肠肠黏膜的紧密连接被破坏,但未出现胃肠组织的器质性病变,符合FD的病理特征.建立的UPLC-QTRAP-MS/MS方法中,各化合物线性关系良好,R2R≥0.990 0.对建立的检测方法进行专属性、精密度与准确度、提取回收率、稳定性和基质效应等方面的考察,均符合要求.各成分在对照和模型组大鼠胃肠道组织中浓度差异明显,且在各组织中达到最高浓度的时间点差异较大,模型组出现达峰时间延后的现象;与对照组比较,模型组大鼠胃组织中化合物的暴露水平降低,可能与FD引起胃肠道蠕动减慢有关.橙皮苷、橙皮素、柚皮素、原儿茶酸、去氢木香内酯、川陈皮素、去甲基川陈皮素、小檗碱和桔皮素在胃、十二指肠、空肠、回肠和结肠中暴露水平较高,且在对照组和模型组中各时间点下的浓度差异较显著.结论 经方法学验证,所建立的UPLC-QTRAP-MS/MS法灵敏、专属性强、准确性高,适用于大鼠胃肠道组织中达立通颗粒主要活性成分的胃肠组织分布研究.达立通颗粒主要活性成分在正常和FD模型大鼠胃肠组织分布具有显著性差异.

目的:探究白杨素对非酒精性脂肪性肝炎(NASH)的治疗作用.方法:将8周龄C57BL/6雄性小鼠随机分为对照组、模型组和白杨素组.除对照组给予普通饲料外,其余各组给予蛋氨酸胆碱缺乏(MCD)饲料喂养.造模5周后灌胃,白杨素组给予白杨素(20 mg/kg),对照组和模型组给予同体积生理盐水,连续给药6周.实验期间观察小鼠状态;处死后观察小鼠肝脏形态;检测体质量和肝脏湿重;用生化分析仪检测血清中甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)含量、丙氨酸转氨酶(ALT)和天冬氨酸转氨酶(AST)水平;用试剂盒检测肝脏组织中TG和TC含量;采用苏木素-伊红(HE)染色和F4/80免疫组化染色探究白杨素对NASH中肝细胞损伤和炎症的影响;用油红O染色探究肝脏脂质沉积的程度;Masson和天狼星红染色检测肝纤维化;免疫组化法检测纤维化相关分子的表达水平.结果:与对照组比较,模型组小鼠体重和肝脏湿重明显下降,肝脏体积减小,呈黄色,可见黄色脂肪斑,边缘钝;血清TG、LDL-C、ALT和AST水平,以及肝组织TG和TC水平显著升高,HDL-C水平降低;病理染色结果显示有明显的炎症细胞浸润、脂质沉积及肝脏纤维化.与模型组相比,白杨素组小鼠体重和肝重均有升高,肝脏红润,表面相对光滑,肝缘锐利;血清TG、LDL-C、AST和ALT水平,以及肝组织TG水平显著降低;白杨素可抑制炎症细胞浸润、脂质沉积及肝组织纤维化.结论:白杨素可抑制肝脏脂肪变性、炎症及纤维化,有潜力成为治疗NASH的候选药物.

目的 建立同时测定蒺藜中槲皮素、山柰酚、异鼠李素、白杨素、蒺藜皂苷、蒺藜皂苷K、蒺藜皂苷D、蒺藜呋甾皂苷B、蒺藜苷元、海柯皂苷元、薯蓣皂苷元和替告皂苷元含量的方法,探索主成分分析(PCA)、正交偏最小二乘法-判别分析(OPLS-DA)及灰色关联度分析(GRA)模型在蒺藜质量差异评价中的应用.方法 采用HPLC法,以乙腈-0.05％磷酸为流动相,梯度洗脱;检测波长为360、203 nm;通过对多指标成分含量结果进行PCA、OPLS-DA分析,同时建立GRA模型,综合分析不同产地蒺藜质量差异.结果 方法学验证结果均符合《中国药典》要求;12种成分在各自范围内线性关系良好(r＞0.999),平均加样回收率(n=9)在96.92％～100.18％(RSD＜2.0％).PCA、OPLS-DA分析显示蒺藜苷元、异鼠李素、山柰酚和槲皮素是影响蒺藜产品质量的主要潜在标志物.GRA相对关联度0.3397～0.597 1,蒺藜质量存在一定产地差异.结论 HPLC同时测定蒺藜中12个成分,简便可靠,PCA、OPLS-DA和GRA可用于不同产地蒺藜质量差异分析.

'窄冠白杨1号'(Populus leucopyramidalis 1)是一种冠形窄、耐盐碱的优良白杨派无性系.由于缺乏其遗传转化体系,因此无法通过基因工程手段对其进行遗传改良.该研究以'窄冠白杨1号'为材料,建立了农杆菌介导的遗传转化体系,并获得了较高的遗传转化效率.首先将组培苗继代培养不同时间段(35、45、55、65 d),分别取其3种组织(叶片、叶柄、茎段)以对比分化能力的强弱,确定了继代45 d后的叶片具有最强的分化能力,其增殖倍数为8.77.随后,使用继代45 d后的叶片作为遗传转化的材料,研究不同侵染条件对转化率的影响,设立了菌液浓度、侵染时间和共培养时间各3个梯度的正交试验,对这3个因素进行最佳水平筛选,通过PCR检测和GUS染色鉴定转基因株系.结果表明'窄冠白杨1号'遗传转化体系的最佳组合为:菌液浓度OD600=0.4,侵染时间15 min,共培养时间2 d,在该组合下转化率最高可达54.23%.最后,利用该遗传转化体系获得了转Bt-Cry3Aa抗虫基因'窄冠白杨1号'株系,证明该体系可以做为'窄冠白杨1号'遗传改良的有效方法.

目的:探究白杨素对溃疡性结肠炎的作用及其机制.方法:60 只SD大鼠随机分为正常对照组、模型组、美沙拉嗪(200 mg/kg)组模型组及白杨素低(25 mg/kg)、中(50 mg/kg)、高(100 mg/kg)剂量组,每组 10 只.3%葡聚糖硫酸钠喂养 1 w 联合 2%冰醋酸直肠灌注一次制备UC大鼠模型.对各组大鼠进行DAI评分,HE染色观察结肠组织病理学变化,透射电镜观察结肠线粒体超微结构.ELISA法检测血清IL-1β、IL-6、TNF-α及结肠组织 4-HNE水平,比色法检测结肠组织MDA水平,Western Blot检测结肠组织IL-1β、IL-6、TNF-α、Bcl-2、Bax、cleaved Caspase-3、SIRT3、OGG1、p-IκBα、p-NF-κB P65 蛋白表达及NF-κB P65 核转移情况.体外培养结肠上皮细胞(NCM460),实验设正常对照组、白杨素(100 μmol/L)对照组、模型组及白杨素 1、10、100 μmol/L组.DCFH-DA荧光探针检测细胞ROS水平,比色法检测细胞 MDA 水平,Western Blot 和(或)免疫荧光法检测细胞 Bcl-2、Bax、cleaved Caspase-3、SIRT3、OGG1、p-IκBα、p-NF-κB P65 的蛋白表达及NF-κB P65 核转移情况.结果:体内实验中,与模型组比较,各给药组大鼠体质量显著升高,DAI评分显著降低(P<0.05 或P<0.01),结肠病理损伤明显缓解;血清IL-1β、IL-6、TNF-α水平与结肠组织IL-1β、IL-6、TNF-α蛋白表达显著降低,结肠组织Bcl-2蛋白表达显著升高,Bax、cleaved Caspase-3蛋白表达显著降低(P<0.05 或P<0.01);结肠线粒体损伤明显减轻,SIRT3、OGG1 蛋白表达显著升高,MDA、4-HNE水平显著降低,IκBα、NF-κB P65 磷酸化水平与NF-κB P65 核转移程度显著降低(P<0.05 或P<0.01).体外实验中,与模型组比较,白杨素各组ROS、MDA、4-HNE、IL-1β、IL-6、TNF-α水平显著降低,SIRT3、OGG1 蛋白表达显著升高,IκBα、NF-κB P65 磷酸化程度及NF-κB P65 核转移水平显著降低(P<0.05 或P<0.01),线粒体损伤减轻.结论:白杨素对UC具有一定的缓解作用,其机制可能与减轻线粒体氧化应激损伤,抑制NF-κB信号通路活化,降低炎症反应和细胞凋亡有关.

黄酮碳苷是一类广泛参与植物防御反应且有着广泛药理活性的天然产物,同时也是霍山石斛中一类重要活性成分.黄烷酮合酶Ⅱ已被证实是植物黄酮碳苷合成途径的关键酶,其催化产物 2-羟基黄烷酮是多数已报道黄酮碳苷合成的前体化合物.该研究基于已报道的黄烷酮合酶Ⅱ氨基酸序列,从构建的霍山石斛基因组本地化数据库中筛选并验证出一个黄烷酮合酶Ⅱ(DhuFNSⅡ)基因,验证其功能发现该酶可体外催化柚皮素和乔松素分别生成芹菜素和白杨素.DhuFNSⅡ的开放阅读框(ORF)为 1 644 bp,编码547 个氨基酸,亚细胞定位显示该蛋白定位在内质网上.RT-qPCR结果表明DhuFNSⅡ在茎中的表达量最高,其次是叶、根.霍山石斛经 4 种生长过程中常遇的非生物胁迫处理后,各组织中DhuFNSⅡ等目标基因的表达量均发生显著上调,但在各处理组中的上调程度却各不相同,其中干旱和冷胁迫对基因表达量影响更为显著.通过对DhuFNSⅡ的鉴定与功能分析,将有助于解析霍山石斛品质代谢物黄酮碳苷形成的分子机制,并为其品质形成及科学栽培提供参考.

[目的]探究芍药汤剂及颗粒剂成分的区别,以及对溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)的疗效差异.[方法]采用超高效液相色谱-四级杆-时间飞行质谱仪联用技术(ultra-high-performance liquid chromatography-quadrupole/time of flight mass spectrometry,UPLC-Q-TOF/MS)检测两种剂型芍药汤样品,以MassLynx 4.1软件结合UNIFI软件分析结果.建立UC小鼠模型,随机分组,灌胃给药后,计算体质量下降率、疾病活动状态(disease activity index,DAI),以苏木精-伊红(hematoxylin-eosin,HE)染色观察结肠病理变化,原位末端转移酶标记(terminal-deoxynucleoitidyl transferase mediated nick end labeling,TUNEL)检测细胞凋亡率,酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测血清肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细 胞介素-10(interleukin-10,IL-10)含量.[结果]芍药汤汤剂检出以小檗碱、芍药苷等为主的25种成分,颗粒剂检出以小檗碱、白杨黄素等为主的27种成分,两种剂型共同检出芍药苷、小檗碱等13种成分.与模型组比较,给药各组体质量下降率、DAI指数、病理学评分显著下降(P＜0.001);结肠上皮细胞凋亡率显著下降(P＜0.001,P＜0.01),血清TNF-α含量显著下降(P＜0.001),IL-10含量明显上升(P＜0.05).与颗粒剂比较,汤剂可明显降低体质量下降率(P＜0.05)o[结论]两种剂型芍药汤共同检出以芍药苷、小檗碱为主的13种成分,均对UC模型小鼠肠道炎症有明显改善作用;与颗粒剂相比,汤剂在改善小鼠体质量下降和保护结肠组织损伤方面疗效较好.

目的:探讨白杨素对高血压大鼠的降压作用及作用机制.方法:8只WKY大鼠为对照组,40只SHR大鼠随机分为模型组、卡托普利组和白杨素高、中、低剂量组,分别给予相应剂量药物治疗,每日1次,干预4周.实验期间观察各组大鼠收缩压(SBP)和舒张压(DBP)改善情况,酶联免疫吸附法(ELISA)检测大鼠动脉血清中一氧化氮合酶(eNOS)、一氧化氮(NO)、内皮素(ET-1)和血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)水平,马松染色(Masson)和苏木精-伊红染色法(HE)观察大鼠心肌组织病理变化.结果:治疗后,与模型组相比,对照组、卡托普利组和白杨素高、中、低剂量组SBP和DBP均明显下降,血清eNOS和NO显著上升,ET-1和AngⅡ明显下降,差异具有统计学意义(P＜0.05),其中白杨素高剂量组改善情况优于白杨素低、中剂量组(P＜0.05);心肌细胞相关病理损伤减轻,白杨素高剂量组改善情况优于白杨素中、低剂量组.结论:白杨素可能通过调节血管舒缩因子和肾素-血管紧张素-醛固酮系统降低血压,并改善心肌组织病理损伤.