目的 研究毛相思子Abrusmollis去除荚果后的干燥全草(毛鸡骨草)的化学成分及其体外抗炎活性.方法 综合运用硅胶、ODS反相柱色谱和半制备高效液相色谱等方法进行分离纯化,根据高分辨质谱,核磁共振波谱数据以及与文献对比进行结构鉴定,通过电子圆二色谱(electronic circular dichroism,ECD)数据分析确定化合物1和2的绝对构型.采用Griess法测定化合物对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的小鼠RAW264.7巨噬细胞产生一氧化氮(NO)的抑制活性.结果 从毛鸡骨草甲醇提取物中分离得到12个化合物,分别鉴定为(αR)-α,4,2',4'-四羟基-3-甲氧基二氢查耳酮(1)、(αR)-α,4,2',4'-tetrahydroxydihydrochalcone(2)、(+)-甘草素(3)、mucunoneC(4)、(+)-medicarpin(5)、abrusprecatin A(6)、7,4'-dihydroxy-8-methoxyisoflavone(7)、7,3'-dihydroxy-6,4'-dimethoxyisoflavone(8)、7,3'-dihydroxy-8,4'-dimethoxyisoflavone(9)、alopecuroides A(10)、hypaphorine(11)、7,8-二甲苯基蝶碇-2,4-(1 H,3H)-二酮(12).化合物 3、4、7 和 10 对 LPS 诱导的RAW264.7 细胞 NO 生成有抑制作用,半数抑制浓度(median inhibition concentration,IC50)值为 7.39～20.09 μmol/L,其中化合物7对NO生成的抑制活性相对较好,IC50值为7.39μmol/L.结论 化合物1为1个新的二氢查耳酮,命名为毛鸡骨草素;化合物2和10为首次从相思子属植物中分离得到.化合物3、4、7和10具有潜在的抗炎活性.

相思子毒素是目前已知毒性最强的植物毒素蛋白,受到国际《禁止化学武器公约》和《禁止生物及毒素武器公约》共同关注,亟须有效的检测和解毒对抗措施,以应对其对于人类健康和公共安全的潜在威胁.该文在文献聚类研判的基础上,结合对相思子毒素的多种亚型结构的认识,对其分析检测技术、毒性机制、解毒对抗措施进行了全面综述,最后阐述了该领域的难点及发展趋势.目前主要的相思子毒素分析检测技术包括亲和分析、理化分析以及活性检测技术三大类,亟须发展灵敏特异准确的结构与活性测定技术方法,以准确厘清毒素威胁.目前尚无有效解毒剂,治疗仅为对症治疗.研发中和抗体仍然是对抗其中毒最有潜力的手段.

目的:建立一种快速鉴别相思子及其混淆品的特异性聚合酶链式反应(PCR)方法.方法:通过比对相思子及其混淆品的ITS2、rbcL和psbA-trnH基因序列,寻找SNP位点并设计特异性引物;筛选并优化反应体系及反应条件;同时进行方法学考察和可行性验证.结果:在psbA-trnH的序列区域设计特异性引物,仅有相思子DNA基因组能扩增出约200～300 bp的目标条带,而在同样条件下,混淆品均无此条带.结论:该研究所建立的相思子特异性PCR方法可快速、准确地鉴别相思子及其混淆品,具有推广应用的价值.

目的 基于植物代谢组学分析鸡骨草药材的次生代谢产物,并结合多元统计学和网络药理学预测分析鸡骨草药材的质量标志物(Q-Marker).方法 建立UPLC-Q-TOF-MS分析方法,分析11批次鸡骨草药材的化学成分,确定其共有成分.通过聚类分析(HCA)、主成分分析(PCA)和偏最小二乘判别分析(OPLS-DA)确认造成11批次鸡骨草药材分类的主要差异成分,再运用网络药理学构建"核心成分-核心靶点-核心通路"网络,筛选预测鸡骨草药材的潜在Q-Marker,并进行分子对接验证其活性.结果 11批次鸡骨草药材中含有39个共有成分,主要为三萜皂苷类、黄酮类、生物碱类等.经聚类分析和主成分分析显示11批次鸡骨草药材分为4类,后经偏最小二乘判别分析发现其中9个化学成分在分类中起重要作用.网络药理学分析结果表明,以上9个成分为活性成分,作用于166个靶点,通过蛋白质互作(PPI)筛选得到29个核心靶点,其中4个化学成分相思子碱、下箴刺桐碱、大豆皂苷Ⅰ、精氨酸与核心靶点的关联度高,结合Q-Marker理念及分子对接结果,初步预测相思子碱和下箴刺桐碱为鸡骨草药材的Q-Marker.结论 利用植物代谢组学结合多元统计学和网络药理学预测分析鸡骨草药材的Q-Marker,为鸡骨草药材的质量控制与评价提供数据参考,为进一步科学开发鸡骨草药材提供研究思路.

目的 基于网络药理学和分子对接技术探究鸡骨草防治肝纤维化的分子机制.方法 通过TCMSP、ETCM、TCM Database@Taiwan数据库获取鸡骨草的主要化学成分,用SwissADME平台筛选出活性化合物,并用SwissTargetPrediction平台预测活性化合物的潜在靶点;通过GeneCards、OMIM数据库获取肝纤维化相关靶点,利用STRING数据库获得蛋白质互作(PPI)关系,用Cytoscape软件构建PPI网络.同时,用DAVID数据库进行基因本体(GO)、京都基因与基因百科全书(KEGG)基因富集分析,以便获得鸡骨草防治肝纤维化的潜在作用通路,并用Cytoscape软件构建成分-靶点-通路图;用AutodockTools、AutodockVina软件进行分子对接研究.结果 共筛选出鸡骨草活性化合物21种及其肝纤维化作用潜在靶点333个.富集分析显示:鸡骨草可通过多个通路对肝纤维化产生治疗作用.分子对接结果显示:核心成分可较好地与核心靶点结合.结论 鸡骨草通过5,7,8-三羟基-2-甲基-色酮、相思子皂醇F、紫铆素等多个主要活性成分作用于癌症信号通路、磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)-丝/苏氨酸蛋白激酶(Akt)信号通路、内分泌抗性等通路发挥治疗肝纤维化的作用.

目的:评价重组相思子毒素B链蛋白(rATB)免疫雌性BALB/c小鼠的免疫效果,并初步探讨其免疫机制.方法:以rATB为免疫原,腹腔免疫雌性BALB/c小鼠,间接ELISA方法检测小鼠血清中IgG、IgG1、IgG2a,流式细胞技术检测IFN-γ、IL-4,并进行天然毒素攻毒实验和体外中和实验.结果:血清IgG、IgG1效价达到1:106以上,且攻毒后产生二次免疫应答,与PBS对照组差别有统计学意义(P<0.05);而IgG2a的血清效价未发生明显变化.细胞因子检测结果表明IFN-γ的表达量与PBS组差异无统计学意义,而IL-4的表达量显著提高(P<0.05).小鼠攻毒保护实验和体外中和实验结果说明,腹腔注射rATB可以抵抗最高剂量为5×LD50的天然AT毒素中毒,保护率为100%.结论:rATB蛋白免疫小鼠后显示出良好的免疫原性,能诱导以IgG1为主的抗体和Th2优势应答,为候选疫苗的研制奠定基础.

目的 探讨重组相思子毒素B链蛋白(rATB)的冻干保存条件及其免疫雌性Balb/C小鼠后的免疫效果评价.方法 rATB分别与不同冻干保护剂配方混合进行真空冷冻干燥,复融后免疫小鼠4次.每次免疫后,间接ELISA方法检测小鼠血清中IgG效价,四免后采用相思子毒素(abrin toxin,AT)攻毒,并进行小鼠体外中和试验.结果 rATB与10 g/L的蔗糖混合保存所测浓度最高,纯度可达98％以上.四免后rATB组血清IgG效价与PBS对照组比较差异有统计学意义(P＜0.05).攻毒保护试验和体外中和试验结果说明,rATB可以抵抗5×LD50的天然AT攻毒.结论 rATB和10 g/L蔗糖混合冻干条件下所测定的浓度最高,且冻干蛋白复融后免疫小鼠后显示出良好的免疫原性.

[目的]探讨重组蓖麻毒素、相思子毒素B链蛋白(RTB-ATB)免疫Balb/C小鼠的免疫机制.[方法]雌性Balb/C小鼠随机分为两组:RTB-ATB组和PBS组,分别腹腔免疫4次,间隔1周;间接ELISA检测血清中IgG效价和抗体分型,流式细胞技术检测细胞因子IFN-γ、IL-4,并进行攻毒实验和体外中和实验.[结果]四免后RTB-ATB组血清IgG、IgG1的效价与PBS对照组差别有统计学意义(P＜0.05),而IgG2a未发生明显变化;IL-4的表达量RTB-ATB组与PBS组相比差别有显著性(P＜0.05),而IFN-γ未发生变化(P＞0.05).攻毒保护实验和体外中和实验结果说明,嵌合体蛋白RTB-ATB可以抵抗4×LD50的天然AT或RT攻毒.[结论]RTB-ATB诱导以IgG1为主的抗体和Th2优势应答且显示出良好的免疫原性,为二价疫苗的研制奠定基础.

目的:建立同时测定大鼠尿液中9种成分和胆汁中6种成分的HPLC-MS/MS法,并对鸡骨草与毛鸡骨草中夏佛塔苷、异夏佛塔苷、相思子碱、芒柄花素、木犀草素、维采宁-2、下箴刺桐碱、牡荆素、畀牡荆素在大鼠尿液和胆汁中的排泄动力学进行比较.方法:SD大鼠按一定剂量灌胃给予鸡骨草与毛鸡骨草提取物后,在24 h内收集胆汁,96 h内收集尿液.色谱分离采用ZORBAX SB-C18(4.6 mm×250 mm,5μm)柱,流动相为甲醇-0.05％乙酸水溶液,梯度洗脱,流速1.0 mL· min-1;质谱检测采用电喷雾离子化(ESI)源,正负离子切换,多反应监测(MRM)模式.结果:尿液的胆汁中各待测成分在测定浓度范围内呈良好的线性关系(r≥0.996 6),日内、日间精密度RSD均小于15％,准确度RE在-11.2％～14.0％,提取回收率均不低于85.9％,基质效应基质因子RSD均不大于15％,样品稀释效应RSD＜15％.实验结果表明,鸡骨草与毛鸡骨草中的多数成分在尿液中的排泄情况相似,但在胆汁中差异较大.结论:建立的HPLC-MS/MS方法简单、快速,灵敏度高.测定结果为鸡骨草与毛鸡骨草相互替代合理性的全面评价提供了一定的参考依据.

目的 明确鸡骨草抗炎作用的主要物质基础.方法 分别采用UV和HPLC法,测定10批不同产地鸡骨草中黄酮和相思子碱含量,选取4批黄酮和相思子碱含量显著差异的鸡骨草进行小鼠耳廓肿胀和大鼠肉芽肿实验,考察其抗炎药效的差异.结果 4个批次的鸡骨草均可显著抑制二甲苯诱导的小鼠耳廓肿胀,但是对于大鼠棉球肉芽肿实验,发挥药效的主要为相思子碱.结论 鸡骨草所含的相思子碱有可能是其治疗慢性炎症的主要物质之一.